Prctica No.

11
Hidrlisis de una protena
ensayos
para
protenas
aminocidos

Acetato de Plomo

cido Clorhdrico

y
y

cido Ntrico

I- Hidrlisis de Grenetina (Solucin A)

Matraz baln 200 mL

Colocar 1g de grenetina, 10 mL de
cido clorhdrico concentrado y 10 mL
de agua destilada.

Identificacin 1) Reaccin Xantoproteca

Aadir cuerpos de ebullicin,

cido clorhdrico altamente
corrosivo

2 Tubo de ensayo, aadir

Tubo 1

Tubo 2

2mL de solucin hidrolizada (Solucin A)

2mL de solucin de Albmina (Solucin D)

Adaptar un refrigerante en posicin

de reflujo, calentar suavemente por
35 minutos
Hidrxido de Sodio

Aadir

Posteriormente 0.5g de carbn

activado, continuar calentando
por 2 minutos y filtrar

Agregar a cada tubo 5mL de cido ntrico

concentrado, de manera cuidadosa
Fenolftaleina

II. Solucin neutralizada de hidrolizado de grenetina (Solucin B)

Emplear papel pH

Tomar 5mL de solucin A y

neutralizarla con hidrxido de sodio
al 10%, posteriormente filtrar

Utilizar para efectuar la

cromatografa, prueba de
ninhidrina y la accin reguladora

Calentar suavemente a bao mara

y observar coloracin

Enfriar cada tubo de ensayo, agregando

gota a gota NaOH al 10% hasta pH bsico

III. Solucin de grenetina sin hidrolizar (Solucin C)

Ninhidrina
Vaso de precipitados de 100mL

Identificacin 2) Reaccin de precipitacin

3 tubos de ensayo

Colocar 0.5g de grenetina, 20mL

de agua destilada y agitar

Colocar en cada tubo 2mL de grenetina

hidrolizada (Solucin A), solucin
Albmina (Solucin D) y 2mL de agua
destilada, respectivamente

IV. Solucin de Albmina (Solucin D)

Clara de huevo

Agitar por 10 segundos, para

preparar la solucin de Albmina

Agregar 100mL de agua, agitar,

Nitrito de Sodio
Agregar a cada tubo 5mL de solucin de
NaOH al 10% y 1mL de acetato de plomo 10%
Rojo congo
Calentar a ebullicin con agitacin y observar resultados

Manta de cielo

Filtrar solucin

Utilizar filtrado para efectuar las

pruebas siguientes

Sulfato de cobre

Identificacin 3) Reaccin de Biuret

1 .0.5mL de agua destilada, 0.5mL de sol. De

hidrxido de sodio al 10% (testigo)

6 tubos de ensayo
Valina

2. 0.5mL de solucin de grenetina sin hidrolizar

(Sol.C)

Colocar las siguientes soluciones

3. 0.5mL de solucin de albmina

4.0.5mL de solucin de grenetina hidrolizada
sin neutralizar (Sol. A), 0.5mL de NaOH al 10%

Agregar a cada tubo 2mL de solucin

de sulfato de cobre al 2%

Glicina

5. 0.5mL de solucin de albmina, 0.5mL de

NaOH al 10%
1 .0.5mL de agua destilada

Agitar, observar y concluir

Alanina

2. 0.5mL de solucin de grenetina hidrolizada a

pH neutro (Solucin B)

Identificacin 4) Reaccin con Ninhidrina

5 tubos de ensayo

3. 0.5mL de solucin de grenetina sin hidrolizar

(Solucin C)

Colocar las siguientes soluciones

Fenilalanina

4. 0.5mL de solucin de albmina (Solucin D)

Agregar a cada tubo 0.5mL de solucin de

Ninhidrina al 3% y calentar a bao mara por 5
minutos, anotar observaciones

5. 0.5mL de solucin al 1% de un aminocido

Identificacin 5) Reaccin con cido Nitroso

1 .2mL de hidrolizado de grenetina (Sol.A)

2. 2mL de grenetina sin hidrolizar (Sol C)

En cuatro tubos de ensayo, colocar 3mL de

HCl concentrado y enseguida agregar

3. 2mL de solucin de albmina (Sol.D)

4. Tubo testigo sin protena

Enfriar y agregar 1mL de solucin acuosa de

nitrito de sodio al 5%, anotar observaciones.

Identificacin 6) Accin reguladora de aminocidos

En un tubo de ensaye colocar 2mL de grenetina

hidrolizada (sol.B), y en otro 2mL de agua destilada
Efectuar mismo ensayo empleando
fenolftalena 0.1% e hidrxido de sodio 0.1N
hasta cambio de coloracin

Agregar a cada tubo 0.3mL (6 gotas) de rojo

congo y HCl gota a gota, hasta un cambio de
coloracin, observar y concluir.
Identificacin 7) Cromatografa en placa fina
Cromatoplaca

Aplicar aminocidos patrn

Dejar secar e introducir en una

cmara cromatogrfica con una
mezcla de isopropanol-agua 7:3

Aplicar una pequea muestra de hidrolizado de

grenetina neutra (Sol.B)

Eluir el cromatograma, secar y

revelar con atomizador que contenga
ninhidrina

Identificar los aminocidos presentes

en el hidrolizado de grenetina,
determinando Rf