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APUNTES DE ANALISIS DE MEDICAMENTOS

INTRODUCCIN

Definicin
Anlisis
Medicamento

Procedimientos
Mtodos
Tcnicas

Control
de
Calidad

Anlisis Qumico

Excipiente
Principio
Activo
Forma Farmacutica
Slidas
Semislidas
Lquidas

ANALISIS
DE
MEDICAMENTOS

Farmacopeas
A.O.A.C.
ASTM

Etiquetas
{Acondicionamiento}

Materias Primas

GMPs

Auditorias
Aseguramiento
{PNOs}
Frmula Maestra

GLPs
Bitcora
Mtodos validados
Instrumentos
calificados
Personal capacitado

Analizar: llevar a cabo una serie de procedimientos, tcnicas o mtodos para caracterizar algo.
Mtodo: serie de procedimientos lgico que nos puede llevar a un resultado.
Procedimiento: serie de pasos secuenciales lgicos (comprobados) que nos deben de llevar
a un resultado.
Tcnica: es la utilizacin de un procedimiento en el cual est inmiscuido un instrumento.
Medicamento: de acuerdo a la OMS es una forma farmacutica cuyas caractersticas
deben ser prevenir, diagnosticar y aliviar una enfermedad tanto en seres
humanos como en animales. Ejemplos: vacunas.
Forma Farmacutica: presentacin comercial de un medicamento formado por un
excipiente y un principio activo.
Excipiente: materia prima inerte, no tiene actividad farmacolgica y no da una respuesta
analtica.
Principio Activo: tienen efecto farmacolgico.
Formas Farmacuticas

Slidos

Comprimidos

Tabletas

Cpsulas

Parches

Capletas (cpsulas planas)

Tabletas masticables

Efervescentes

Polvos efervescentes

Grageas

Polvos para reconstituir

Implantes
Semislidos

Supositorios

vulos vaginales

Ungentos

Cremas

Pomadas

Lquidas

Jarabes

Suspensiones

Emulsiones

Inyectables

Oftlmicos

Oticos

Nasales

Elixir
Los medicamentos pueden clasificarse en:

Estriles y
No estriles

Asimismo las formas farmacuticas se pueden clasificar de acuerdo a su va de administracin.


Pruebas para slidos

Espesor
Tamao
Altura
Dimetro
Delimitacin (no grietas)
Forma

Son propiedades organolpticas para comprimidos.


Polvos

Grnulo del polvo

Olor

Color

Tamao
Cpsulas

Tamao

Color (gelatina blanda)


Prueba de friabilidad: (peso, dureza para comprimidos) tiene como objetivo que tan manipulables pueden ser al colocarlos en su
estuche; asimismo que tanto polvo se desprende.
Dureza: prueba de desintegracin y dilucin (manipulacin).
Peso: contiene la dosis requerida y es una medida de que tan bien estuvo hecha la tableta.
Prueba de desintegracin.
Contenido de Principio Activo.

Prueba de dilucin: establece el medicamento adecuado o no. Tiene que ver con la bioequivalencia y biodisponibilidad.

Semislidos.

Aspecto
Textura (cremas, ungentos, pomadas)
Dureza (vulos y supositorios)
Color
Olor
Apariencia

Gravedad especfica
Prueba de reblandecimiento
Densidad
Contenido de Principio Activo
Viscosidad y velocidad de sedimentacin
Tamao de partcula para emulsiones

La Prueba de Identidad es lo primero que se requiere.


Lquidos

Aspecto
Color
Gravedad especfica (lquido de referencia, el valor es adimensional)
Densidad (masa/volumen)
Viscosidad
Cantidad de azcar presente en jarabes
Elixir (cantidad de alcohol)
Prueba de esterilidad (en inyectables)
Prueba de pirogenicidad
Prueba de isotonicidad
pH
Contenido de Principio Activo
Prueba de Identidad previamente

Control de Calidad para Excipientes y Principio Activo


Se lleva a cabo mediante:
Proveedores certificados.
Reglamentacin adecuada (Farmacopeas como compendios oficiales que contienen mejores criterios de calidad).
NF control de excipientes o reactivos analticos.
Farmacopea (principios activos slidos y su forma farmacutica).
A.O.A.C. Organizacin Americana de Anlisis Qumicos.
ASTM American Society Test of Methods.
Aseguramiento o Auditoria de la Calidad (los proveedores satisfagan condiciones de certificado)
Procedimientos Estandarizados de Operacin PNOs verifican que todo se lleve a cabo adecuadamente desde la entrada de materia
prima. Se realiza verificacin cada cierto tiempo. Se tienen las Frmulas Maestras para cada medicamento.
CALIDAD: Tener o reunir los requisitos del cliente.

Etiquetas o Acondicionamiento del medicamento


Materia prima

Etiquetado y control adecuado.

Incluir informacin (nombre, cantidad, contenedores recibidos, nmero de lote). Cada bolsa debe de llevar su
propia etiqueta, la fecha de caducidad y las recomendaciones de almacenaje.

Responsable del anlisis con registro.

Medicamentos de Patente deben de llevar el nombre comercial y principio activo.

Medicamentos Magistrales deben de llevar el nombre del paciente, nombre del mdico y lo que contiene.
Las etiquetas generalmente son de color blanco con margen de color rojo.
Todas las pruebas se deben de realizar en medicamentos :
Al inicio.
A granel.
Y como producto terminal.

ANLISIS QUMICO
Uso de metodologa analtica.

Cualitativo (propiedades intensivas del sistema no depende de la cantidad)

Prueba de Identidad
Aluminio + EDTA . Formacin de un complejo utilizando como indicador a negro de eriocromo.
Na+ a la flama es de color anaranjado.
K+ color rosado violeta.
Fe+2 color verde.

Cuantitativo (se requiere de cantidad exactamente conocida)

Procedimiento.


Tcnica.

Mtodo
Se selecciona el mtodo, la tcnica a seguir y que procedimiento. En el compendio de Farmacopea se regulan los lmites de
dosificacin.
La calidad de los reactivos est a cargo de la American Chemical Society.
Validacin de Mtodos: se refiere a cualquier cambio de metodologa que impacte sobre los resultados. En la Farmacopea se
encuentran los mtodos validados o requerimientos especficos.

Anlisis adecuado

Muestra (debe ser homognea, representativa, tamao adecuado y aleatoria)


Mtodo.
Instrumento
Analista capacitado.

Aleatorizar: que cada elemento de la muestra tenga la misma probabilidad de ser seleccionado para llevar a cabo el anlisis.
METODO

Especfico (slo debe de cuantificar el analito de inters).


Validado

Preciso

Exacto

Reproducible

Repetible

Rpido y sencillo

Sensible

Lmite de deteccin

Lmite de cuantificacin

Validacin de un mtodo analtico aplicado al anlisis cuantitativo de medicamentos


La VALIDACIN de un mtodo analtico puede definirse como un paso crtico cuyo propsito es asegurar su calidad o validez. El objetivo
de la validacin no es comparar un mtodo con otro ya existente (mtodo de referencia) sino conocer mejor sus caractersticas.
La validacin corresponde a un estudio cientfico de los criterios de confiabilidad de esta tcnica. Estos corresponden a:

La exactitud
La precisin o fidelidad
La sensibilidad
El lmite de deteccin
La especificidad y selectividad
La linealidad
El rendimiento de extraccin

La apreciacin de las cualidades del mtodo se define en relacin a una molcula, un mtodo y un equipo dado.
Exactitud: representa la cualidad de concordancia entre un valor determinado y el valor real o convencionalmente verdadero.
Estadsticamente, la exactitud se aprecia por la diferencia entre una media observada (Xi) y un valor terico (X): (Xi X).
Precisin: la precisin o fidelidad de un mtodo, representa la cualidad de concordancia en una zona definida de valores para
determinar entre medidas repetidas, efectuadas en una misma muestra en condiciones constantes y determinadas.
Sensibilidad: se define por la variacin mnima que se debe imponer a la magnitud medida (por ejemplo, una concentracin), para
obtener una variacin significativa del resultado de la medicin (rea en cromatografa).
Lmite de deteccin: se trata de la menor cantidad que puede detectarse por un mtodo, con una probabilidad determinada de un
blanco realizado en las mismas condiciones.
Especificidad: caracteriza a un mtodo que responde a un compuesto nico y que no representa interferencia alguna.
Selectividad: refleja la posibilidad de que mediante un mtodo se determine simultneamente o por separado las cantidades de dos
entidades qumicas distintas.
Funcin analtica: relacin entre el resultado analtico y la seal propia de la medida C = f(x).
Funcin de calibracin: relacin inversa de la anterior entre la seal propia de la medida y el valor del patrn X = g(c).
Repetibilidad: expresin cuantitativa de la precisin, cuando el mismo tcnico aplica el mtodo a la misma muestra, en el mismo
laboratorio, con los mismos aparatos y los mismos reactivos, en el transcurso de la misma serie de anlisis.
Reproductibilidad: expresin de la precisin cuando el mtodo se aplica a muestras distintas en condiciones diversas que deben de
definirse.

VALIDACIN

Preciso
Exacto
Reproducible
Repetible
Lmite de deteccin
Lmite de cuantificacin
Robustez
Tolerancia

Muestra
Mtodo
Analista

Mtodo para evaluar la materia prima


ESTABILIDAD
Dependiendo del tipo de tcnica
ESTABLECER LMITES
Dependiendo de que mtodo
PRECISION, EXACTITUD
Lineamientos del mtodo
INDICA % DE ERROR

TIPOS DE ERROR

Sistemtico (determinados)

Aleatorio (indeterminados)
Craso
SISTEMATICO: se da independiente del aleatorio, ofrece valores abajo del valor real o verdadero, se da por el instrumento o material de
laboratorio. El analista los puede eliminar al ser cuidadoso. Se pueden minimizar no eliminar.
ALEATORIO: el equipo mismo los da, el analista no puede controlarlos. Se dan al azar inherente a los mtodos. Pueden provocar
valores que estn por arriba o por debajo de los valores promedio.
CRASO: errores graves que no tiene sentido llevar la metodologa. Ejemplo:
A + B
Reactivos
-

C + D
productos

Directa : valorar C o D.
Indirecta: producir C o D y determinar cuanto queda de A o B (reactivos en exceso).
Para el reactivo en exceso se emplea el indicador fenolftaleina con pH de

8 a 10 (incoloro a rosa).

PRECISION: se vincula con los errores aleatorios. Coeficiente de variacin o desviacin estndar, hace referencia a que tan cercano se
encuentran los valores por arriba o por abajo dentro de un valor medio. Ejemplo: valorar aspirina de 500 mg.
501.04 mg
498.60 mg
502.30 mg
497.30 mg
503.60 mg
2502.80 mg / 5 = 500.56 mg =
X
=

(Xi - n X)2
n - 1
i

Concordancia entre ellos y el valor de la


X.
Grado de variabilidad de datos con respecto al valor promedio.
COEFICIENTE DE VARIACIN

/ X

X 100

EXACTITUD: que tan cercano se encuentran los valores al valor verdadero o valor real (no conocido). Vinculada con errores
sistemticos.
REPRODUCIBILIDAD DEL METODO: reproduccin entre rachas, se manipula en diferentes perodos y en diferentes condiciones de
laboratorio.
REPETIBILIDAD DEL METODO: se determina la precisin dentro de rachas, dos personas trabajan en el mismo laboratorio, con el
mismo material y con los mismos reactivos.
LIMITE DE DETECCIN: cantidad de analito ms pequea que puede detectarse con un grado de confianza concreto. Est en funcin
del instrumento utilizado
LIMITE DE CUANTIFICACION: cantidad que se puede cuantificar con precisin y exactitud.
ROBUSTEZ: mtodo capaz de aceptar cambios en los laboratorios, reactivos, analistas.
TOLERANCIA
Distribucin de Gauss n > 50
valor medio de poblacin completa.
X estimacin del valor.

3 = 99 %
2 = 95 %
1 = 66 %
La ms elegible es la del 95 %.
En caso de diseos experimentales

Variables independientes
Controlar las variables

Disminuir los errores sistemticos. Si el nmero de determinaciones aumenta.


Si n aumenta -------- X --------
X = n Xi
i=1
n
LIMITES DE CONFIANZA
Establece que tanto el valor promedio de la muestra se va a encontrar dentro de la distribucin de Gauss y se va a acercar al valor real.
Intervalo de confianza: valor promedio cerca del valor real.
Lmites de confianza: valores hacia la izquierda o derecha.
1.96

< X < + 1.96


n

95 %
n

Grado de libertad: nmero de desviaciones independientes que se utilizan al calcular la desviacin estndar. A medida de que el
tamao de la muestra se hace ms pequeo s agranda la incertidumbre.
Ejemplo. Se determin el contenido de ion sodio en una muestra de orina utilizando electrodo selectivo de iones y se obtuvieron los
siguientes valores:
102, 97, 99, 98, 101, 106 m
Cules son los lmites de confianza al 95 % y 99% para la concentracin del ion sodio?
X = 100.5
Grado de libertad = 5
t= 2.57 a 95 %
t= 4.03 a 99 %
= 3.27
100.5 +/- 2.57 (3.27/ 6 ) = 97.1 ------ 103.9

100.5 +/- 4.03 (3.27/ 6 ) = 95.1 ------ 105.87 hay ms error


Ejemplo: se comprueba la escala de absorbancia de un espectrofotmetro a una longitud de onda concreta usando una desviacin
estndar. La lectura de la solucin estndar da una absorbancia de 0.47. Se hicieron 10 mediciones de la absorbancia con el
espectrofotmetro.
STD = 0.47 absorbancia
n = 10
x = 0.461

0.003
t = 2.26
Encuentre intervalo de confianza al 95 % y decida si existe un error sistemtico.

0.461 +/- 2.26 (0.003/ 10) = 0.459 ------- 0.463 hay error sistemtico
t = 3.25 a 99%

0.461 +/- 3.25 (0.003/ 10) = 0.458 ------- 0.464 hay error sistemtico
Empleo de lmites de confianza
-

No necesito muestras demasiado grandes.


Eliminar resultados anmalos.

CURVAS DE CALIBRACION
Requiere de un estndar primario o estndar de referencia con las siguientes caractersticas:

Pureza conocida y alta.

Peso molecular de acuerdo a lo que se desea valorar.

Estable.

Poco higroscpico.

Barato.
Se pesa la mnima cantidad con precisin en balanza digital. La exactitud y precisin est dada por la estabilidad de la sustancia.
Cada concentracin se realiza por triplicado (15).
Cada valoracin requiere de cinco concentraciones.

Respuesta proporcional entre seal analtica y respuesta analtica.


Proporcin aritmtica.
La ordenada al origen sea estadsticamente cero.

Anlisis de regresin r > 0.98 (coeficiente de correlacin)


b=0
m=1

Estimacin sobre la lnea que ya hizo la regresin.


Cmo se hace?
Verificar pureza del estndar.
Coeficiente de absortividad 1% a un paso de haz de luz de 1 cm y la concentracin de 1 % ese valor de absorbancia es el que
dara.
Deformacin del espectro
Concentracin.
pH
Medio de disolucin (alcohol, cloroformo, agua).
Seleccionar longitud de onda de mxima absorcin.
A concentraciones de 0.01 M y 0.1 M el es bajo.
A concentraciones bajas el es alto.
Las dos longitudes de onda a seleccionar se debe hacer conforme a pequeos cambios de longitud de onda para una absorbancia
constante.
Para el comportamiento de una meseta se parte de:

Primera solucin STOCK o solucin madre, la cual es la de mxima concentracin (una nica
pesada, una nica concentracin, volumen exacto y concentracin conocida).
De la solucin stock se realizan CINCO SOLUCIONES ESTANDAR, cada una por triplicado.
Se procede a aleatorizar (prepararlas para leerlas indistintamente y con el mismo procedimiento).

PRUEBAS DE SIGNIFICANCIA

Compara media experimental con media verdadera


Comparar las x de dos muestras (x - x ).
Comparar prueba t por parejas.
Prueba de significancia de 1 y de 2 colas.
Prueba F para la comparacin de pruebas estndar.
Anlisis de valores anmalos (1 o 2 valores).
Prueba Q de Dickson.

Hacer un anlisis de varianza (2 varianzas) ANOVA.


Anlisis de varias medias.
Para cualquier anlisis establecer hiptesis nula.
Hiptesis nula: aquella mediante la cual un mtodo no se encuentra sujeto a errores sistemticos; al realizar una prueba de
significancia se comprueba la veracidad de una hiptesis. Se llama nula para indicar que no hay ms diferencia entre lo observado y el
valor conocido que la que puede atribuirse a la variacin aleatoria.
Establecer hiptesis nula verdadera o falsa.
Hiptesis verdadera: calcular probabilidad de que la diferencia observada entre la media muestral x y el valor verdadero se debe
solamente a un error aleatorio.
Establecer nivel de significancia 0.05 0.01
0.05: quiere decir que se pueden tomar como valores verdaderos 5 de cada 100 mediciones que se hagan, 1 de 20.

0.01: tomar como valor verdadero 1 de cada 100.


INTERPRETACION DE LA PRUEBA

Si se acepta la hiptesis nula no significa que se haya probado que sea verdadera, slo que no se
ha demostrado que sea falsa.
Para decidir si la diferencia entre y el valor promedio entonces
y x

x +/- (t n
)
t = ( x - n
/

El valor crtico (t) si el valor de t es mayor que el crtico entonces se rechaza la hiptesis nula.
Ejemplo: en un mtodo para determinar mercurio por absorcin atmica de vapor fro se obtienen los siguientes resultados para material
de referencia: 38.9, 37.4, 37.1 %. Un valor de referencia conocido dio 38.9 % . Hay alguna evidencia de error sistemtico?


Grados de libertad = 2
t = 0.05 ----- 4.3
x = 37.8
0.9644
t = (37.8 38.9)

3/ 0.9644 = 1.9756

Ho = no hay evidencia de error sistemtico.


No se rechaza la hiptesis nula, es decir no hay evidencia de error sistemtico.
PRUEBA DE Q DE DIXON
PRUEBA DE VALORES ANOMALOS
Distribucin normal.
Uno o dos valores anmalos (errores de tipo humano).
Ms de 3 valores.
Impacto sobre y C.V. , precisin y exactitud.
Determinar si un valor es anmalo o no.
Ejemplo: determinar la concentracin de nitrito en mg/l
0.403, 0.41, 0.401, 0.380 ------- Q = 0.831
Q = [ valor sospechoso valor ms cercano ] / (valor ms grande valor ms pequeo)
Q = [ 0.380 0.401 ] / (0.41 0.380) = 0.7 se acepta el valor
Ejemplo: 0.403, 0.41, 0.401, 0.380, 0.4, 0.413, 0.411
n = 7 ------ Q = 0.57
Q = [ 0.380 0.4 ] / (0.413 0.380) = 0.606 valor anmalo
Si Q terico es mayor al resultado se acepta el valor .
Si Q terico es menor que el valor obtenido se rechaza el dato anmalo
Ejemplo: se quiere determinar 2.1, 2.0, 2.1, 2.3, Cuando hay dos valores anmalos.
2.9, 2.3, 3.1, 2.2, 2.0, 2.3.
n = 10 ------ Q = 0.464
Q = [ 2.9 3.1 ] / (3.1 2.0 ) = 0.18 no son anmalos y por lo tanto se consideran
Ejemplo: 10.4, 10.1, 10.05, 9.8, 10.5, 10.0

n = 6 ------ Q = 0.621
Q = [ 9.8 10.0 ] / (10.5 9.8) = 0.285
Q = [ 10.4 10.5 ] / (10.5 9.8) = 0.1428
Q = [10.5 10.4 ] / (10.5 9.8) = 0.1428
Q = [ 10.5 10.0 ] / (10.5 9.8) = 0.07

los valores en todos los casos se aceptan.

GRASAS

Molculas de cidos grasos.


Acidos carboxlicos R-COOH (12,18, 22, 24 tomos de carbono constituyen a R)
Valor de pKa = 4.0 son cidos dbiles.
Poco solubles en agua y muy solubles en solventes orgnicos.
Configuracin C-C-C, C=C, C=C
cis/trans
POLIMORFOS misma frmula condensada, mismo peso molecular, propiedades fisicoqumicas
diferentes de solubilizacin.

Densidad menor a la del agua por tener peso molecular elevado. Es una propiedad INTENSIVA
del sistema porque no depende la cantidad.


g/ ml = 1g / cm 4 C referencia con agua.

Gravedad Especfica

G.E. = muestra

g/ml / lquido g/ml


La GRASA es un ster RCOOR proviene de la condensacin de un alcohol y de un cido carboxlico.
ROH + RCOOH -------- RCOOR + H2O GRAVEDAD ESPECFICA O INDICE DE ACIDEZ
El glicerol presenta de 1, 2, 3 cidos grasos en su molcula.

H-C-OH
H-C-OH
H-C-OH
H

O
H-C-O-C-R1
MONOGLICERIDO
3 RCOOH --------------------- H-C-O-C-R2
DIGLICERIDO
H-C-O-C-R3 TRIGLICERIDO
H
O
ESTER

PRUEBAS

Identidad gravedad especfica o


Indice de acidez evala una medida de la hidrlisis de la sustancia.

I.A = (mg KOH/g) necesarios para neutralizar cidos grasos libres.


I.A = ml NaOH 0.1 N / 10 g muestra
1.
2.
3.

Pesar muestra en balanza analtica (peso exacto) y colocarlo en un matraz erlenmeyer de 250 ml.
Adicionar mezcla alcohol-ter (1:1) previamente neutralizado a la fenoftaleina.
Valorar con NaOH 1N solucin valorada usando fenoftalena como indicador, despus de 30
minutos neutralizada en color rosa. Incoloro si y solo si hay cidos grasos libres.

El ndice de saponificacin no se ve influenciado por la hidrlisis de la muestra.


Isap = mg KOH /g necesarios para saponificar steres y cidos grasos libres en 1 g de
muestra
La hidrlisis alcalina de cidos grasos libres y steres para formar jabn:

1. Pesar exactamente la muestra en un matraz de bola de fondo plano.


2. Adicionar KOH 0.5 N con pipeta volumtrica.
3. Hacer un blanco (mismo volumen de KOH 0.5 N).
Poner a reflujo a condiciones suaves.
5. Valorar el exceso de KOH con HCl 0.5 N (solucin valorada a la fenoftaleina). Si los
matraces estn incoloros ya no sirve la prueba..
Isap = (Vol blanco Vol mtra) N valorante X 56.11 / peso mtra (g)
Isap = meq X 56.11 mg KOH / 1 meq KOH = mg KOH / g
RCOOH + ROH -------- RCOOR + H2O
Los cidos grasos saturados son an ms insolubles en agua.
No existen los ismeros (cadena rgida).

Los cidos grasos insaturados presentan ismeros CIS y TRANS predominando el cis.
Dependiendo de la posicin de la doble ligadura se van a encontrar los ISOMEROS DE
OPOSICION.
Los polimorfos (diferentes formas cristalinas) son de importancia por la diferencia de sus
propiedades como solubilidad, punto de fusin, difraccin de rayos X, etc.

IDENTIFICACION DE ACIDOS CARBOXILICOS

Porcin hidroflica.
Porcin hidrofbica.
Reaccin de hidrogenacin (cuantas dobles ligaduras se encuentran).
Cromatografa en placa fina teniendo un estndar.
Absorcin cercano al infrarrojo.

SATURADOS
No de Carbonos

Nombre

P de fusin

Frmula

12
16
24

cido larico
Acido palmtico
Acido lignosrico

44.2 C
63.1 C
86.0 C

CH3(CH2)10COOH
CH3(CH2)14COOH
CH3(CH2)22COOH

A temperatura ambiente son slidos y conforme aumenta el nmero de carbonos aumenta el punto de fusin.
INSATURADOS
No de Carbonos

Nombre

Punto de fusin

16

Acido palmitoleico

-0.5 C

18

Acido oleico, linoleico, linolenico

-13.4 C

20

Acido araquidnico

-49.5 C

ESTERES

Grasas o aceites.
Las grasas se presentan en forma slida y los aceites en forma lquida.

Evaluacin:
-

Indice de acidez es la descomposicin del ster en alcohol y cido. Medida de la hidrlisis de una
sustancia.
Empleo de un desecante o cidos fuertes y bases fuertes en solucin (hidrlisis cida o alcalina).
Evitar humedad del medio ambiente.

10

RCOOH + NaOH ---------- RCOONa + H2O


0.1 N
(alcohol / ter solubilizar al ster neutralizado a la fenoftaleina)
I.A = (Vmta) VNaOH X 56.11 / mta (g) = mg KOH / g
Cantidad de mg de KOH para neutralizar los cidos grasos libres de la muestra.
Cantidad de ml de NaOH para neutralizar los cidos grasos libres en 10 g de muestra.
1.6 g ----- 3.6 ml de NaOH 0.0984 N
Determinar mg de KOH /g y ml de NaOH / 10 g de muestra.
FACTOR DE CORRECCION

FC = N EXP / N teorico X ml

Ejemplo:

gastados

FC = 0.0984 N / 0.1 N = 0.984 N X 3.6 ml = 3.54 ml


1.6 g --------- 3.54 ml
10 g --------x
x = 22.14 ml
I.A = ml NaOH x meq NaOH / ml NaOH x 1 meq KOH / 1 meq NaOH x 56.11 meq KOH /
1 meq KOH
_______________________________________________________________________
g de muestra
I.A = 56.11 meq KOH (3.6 ml) (0.0984) / 1.6 g = 12.42 mg KOH
INDICE DE SAPONIFICACION
Isap = mg de KOH / g
O
O
O
R-C-O-R + KOH --------- R-C-OR -------- R-C-OH + ROH
OH
O
R-C-OK
Jabn

Alcalis de Na+ y K+ solubilizan la muestra.


Ms un exceso conocido de KOH alcohlico 0.5 N
HCl 0.5 N solucin valorada con fenoftaleina.
Realizar un blanco.

ISAP = (V BLANCO V MTA) V HCl X 56.11 / (g) muestra


Ejemplo: 1.532 g de muestra reflujo con 25 ml de KOH 0.5235 N. Se utilizaron 15.7 ml de HCl 0.51 N para la titulacin. Se corri un
blanco de KOH gastndose al final 26 ml del mismo cido. Calcule el ndice de saponificacin de la muestra.
Isap = (26 ml 15.7 ml) (0.51 N) 56.11 / 1.532 g = 192.39 mg KOH / g
13.0875 meq --------- 25 ml (0.5235 N) KOH
8.007 meq --------- 15.7 ml (0.51 N) HCl
13.0875 meq - 8.007 meq = 5.0805 meq gastados para saponificar.
Isap = 5.0805 meq X 56.11 / 1.532 g = 186.07 mg KOH /g
Valoracin de tipo residual exceso por retroceso. El blanco tambin corrige las condiciones de reaccin, error de pipeta, valorante
aadido.
25 ml KOH x 0.5235 meq KOH / ml KOH = 13 .08 meq KOH

11

15.7 ml HCl x 0.5 meq HCl / ml HCl = 8.007 meq HCl


P.M. = 722 g / mol
Isap terico

722 -------- 3 (56.11)


1 g -------x

x = 0.2331

ADULTERANTES
Como los terpenos (colesterol y
Materias primas no saponificables, no llevan a cabo hidrlisis .
lanosterol).
Ejemplo: mezcla que contenga 33.4% Isap = 80 y 66.6 % Isap = 118
0.334 (80) + (0.666) (118) = 105.308
Qu cantidad se coloca de cada una de ellas?
Isap = 93
x (80) + y (118) = 93 ............... Ec. 1
x + y = 1 ............................... Ec. 2
x = 1- y
1- y (80) + 118 y = 93
80 80 y + 118 y = 93
38 y = 93 80
y = 93 80 / 38 = 0.3421
0.3421 (118) + 0.6579 (80) = 92.9998 %
X % = 65.79 ------ ISAP = 80
Y % = 34.21 ------ ISAP = 118
IESTER = mg KOH / g
IESTER = ISAP - IACIDEZ mg necesarios de KOH para esterificar 1 g de muestra.
IESTER = ISAP cuando IACIDEZ = 0
IYODO = g Yodo / 100 g de muestra

Pesar la muestra en funcin del ndice de yodo


esperado.

Procedimiento:

Adicionar cloroformo o CCl4, CHCl3 para ayudar a que solubilice la muestra.


Agregar reactivo de Hannus (solucin Yodo-Bromo) o reactivo de Wijs (solucin Yodo-Cloro)
con cido actico que favorece la ionizacin; son anhidras y se agregan en exceso para la
presencia mayor de dobles ligaduras. Se lleva a cabo una reaccin de adicin caracterstica por
dobles enlaces o una halogenacin.
Reposar 30 minutos protegido de la luz. Adicionar en exceso KI (TS).
Realizar un blanco.
Valorar el exceso de reactivo con Na2S2O3 0.1 N (SV).
Usar como indicador el almidn que es un indicador interno.
ICl IBr el I+2 se oxida con la luz, es muy estable, buen agente halogenante, pero el ICl
IBr son muy reactivos y disminuyen el tiempo de anlisis.

ICl ------------- I+ + Cl
R-CH = CH2 + I + --------- R-CH-CH2 + ClCl H
I+ ----------------- R-C-C-H
I
ICl + KI --------- KCl + I2
I2 + 2 Na2S2O3 --------- 2 NaI + Na2S4O6
Por cada doble ligadura se adicionar dos veces el peso del Yodo.

12

P.M. Yodo 126.9

Ejemplo: P.M. Acido oleico 282.5 tiene una doble ligadura.

IYODO TEORICO 282.5 --------- 2 (126.9)


100 g --------x

x = 89.84 g / 100 g mta

IYODO EXPERIMENTAL
IYODO = (VBCO VMTA) N 0.1 N
IYODO = (VBCO 0.1 N V MTA 0.1 N) 1.26 g / g de muestra
Blanco 44.6 0.1035 N
Na2S2O3
-------- Ejemplo: muestra de cido oleico con mtodo de Wijs se pesaron 0.59 g de muestra.
46.16
ml corregidos
Muestra 28.34 ml de
Na2S2O3 ----------29.33
FC = 0.1035 N / 0.1 N = 1.035
IYODO = (46.16 29.32) 1.269 / 0.259 = 82.45 g I / 100 g mtra.
El adulterante con doble ligadura aumenta el IYODO.
El IA en el ISAP no influye.
Otros ndices son el IPEROXIDO y el IACETILO.
INDICE DE HIDROXILO
IOH = mg / KOH
mg de KOH equivalentes al contenido de hidroxilos presentes en 1 g de muestra.
1.
2.

3.
4.
5.
6.
7.

Pesar la muestra y disolverla en tolueno.


Correr un blanco.
Aadir un volumen conocido exactamente de reactivo de acetilacin. Como reactivo limitante o
reactivo en exceso son la piridina (Py), anhdrido actico y piridina ms cloruro de acetilo.
Se coloca muestra y blanco en reflujo suave aproximadamente por una hora.
Adicionar una cantidad conocida de agua y se coloca en reflujo nuevamente durante 2 minutos
ms.
Adicionar 20 ml de alcohol butlico previamente neutralizado a la fenoftaleina. Alcohol cido
incoloro neutralizar (KOH 0.5 N) solucin valorada
Valorar el exceso de cido formado con KOH 0.5 N solucin valorada utilizando nuevamente
fenoftaleina.

RCOOH + ROH --------- RCOOR + H2O


Los alcoholes de cadena larga tambin pueden cuantificarse.

CH3C-Cl

---------

] + Cl-

agente Nu:

acil piridinio
+

H+

O
CH3C-OR +
ster
cadena corta

ROH

+ HCl
de

no interfiere en la reaccin, formacin de HCl in situ

13

O
1. CH3C-Cl
cloruro de
acetilo
CH3COOH

H2O ----------- CH3COOH


+ HCl
cido actico

+ KOH ------------ CH3COOK

2. anhdro actico
O
CH3 C-O + H2O -----------CH3-C
O

+ H2O

2 CH3COOH

Los agentes acetilantes mejores son el anhdrido actico y el cloruro de acetilo debido a que tienen cadena corta y no hay impedimento
estrico por ataque del hidroxilo que el mismo cido actico.

El ndice de hidroxilo es para los grupos:


Fenoles sin sustituyentes.
Alcoholes aromticos.
Aminas.
IOH aparente = (VBCO V MTA) N KOH

0.5 N

X 56.11 / g de muestra = mg KOH / g mta

IOH real = IOH + IACIDEZ = mg KOH / g de mta


Ejemplo: se pesaron 9.6533 g del aceite para determinar el IOH en la valoracn se gastaron 9.6 ml y en el blanco 21 ml de KOH 0.5326 N.
IOH = (21- 9.6) 0.5326 X 56.11 / 9.6533 = 35.29 mg KOH / g mta
Ejemplo: Etanol CH3CH2OH
OH

P.M. 46 g/ mol
P.M 17 g/ mol

Determinar mg de KOH equivalentes OH/g de muestra.


IOH = 46 g/mol ------- 17 g/mol
1g
------x

x = 0.3696 g OH

Metanol P.M. 32 g/mol


Glicerol P.M. 92 g/mol
(3) 1 OH/ 46 g/mol [0.0217 eq OH]x [1 eq KOH /1 eq OH]x [56.11 g KOH/ 1 eq KOH] x [1000 mg / 1g KOH] = 1217.587 mg KOH / g mta.
1 eq OH ---------- 17.0
x
---------- 0.3695

x = 0.0217

Peq = PM / No. de partculas intercambiadas


1/ Peq = glicerol (3) 1 OH/ 46 g/mol
92 g/mol ---------- (17 g/mol ) 3
1g
---------x

x = 0.5543 g

1 eq OH --------x
---------

x = 0.0326 eq OH

17.0
0.5543 g

0.0326 eq OH [1 eq KOH /1 eq OH] x [56.11 g KOH/1 eq KOH]x [1000 mg/ 1 g KOH]


= 1829.6739 mg
Se debe controlar la materia de acuerdo a sus ndices obtenidos.
Dan identidad a los steres de la materia prima. Tambin la gravedad especfica porque da propiedad al sistema.
La cromatografa tambin proporciona identidad.

14

El enranciamiento se debe a :

Perxidos.
Radicales libres.

Debido a grupos de aldehdos y cetonas por oxidacin. La luz puede ser un catalizador, por eso se debe de proteger.
ANALISIS DE AGUA
Determinacin de contenido de sustancias orgnicas e inorgnicas del agua, control microbiolgico es el ANALISIS DE AGUA.
El agua como impureza es la DETERMINACION CUANTITATIVA DE AGUA.
Diferentes formas de agua:

Agua no enlazada
Higroscpica
Ocluida

Agua enlazada
Hidratacin
Constitucin

HIGROSCOPICA: Se encuentra en la superficie del slido y puede ser eliminada por el calor.
OCLUIDA: Agua que se queda dentro de los cristales cuando se forma el slido, se considera
una impureza.
HIDRATACION: Forma parte de la molcula (hidratos) unida al compuesto mediante enlaces
covalentes.
CONSTITUCION: Agua que se encuentra presente en la muestra aunque se considera
deshidratada (bicarbonato de sodio).
2 NaHCO3 ----------- NaCO3 + H2O + CO2
Mtodos para la determinacin de agua:

DIRECTOS

Volumtricos (Reactivo de Karl Fischer) determina p.p.m., valora agua enlazada y no enlazada,
se emplea en la industris farmacutica y alimenticia; es preciso, exacto, sensible y es el mtodo
primario por excelencia.

Azetropos parte del vehculo de una muestra.


Destilacin

INDIRECTOS

Secado trmico se lleva a cabo a presin normal y a presin reducida, valora agua higroscpica y
de hidratacin.
Desecacin se lleva a cabo a presin normal y a presin reducida.

REACTIVO DE KARL FISCHER

Es un reactivo lquido con yodo, dixido de azufre, metanol y una base (piridina).
Presenta un color mbar (caoba) rojizo-amarillento.
El yodo le proporciona caractersticas oxidantes; ya que el par yodo/yoduro se oxidan y puede
realizarse una determinacin amperomtrica.
En el metanol son solubles los componentes.
Se emplea dimetilformamida y triclorotrifluroetano para los compuestos polares y no polares al
ayudar a la solubilidad de la muestra.
I2 y SO2 presentan reacciones secundarias que hacen que se degrade, se debe por lo tanto
controlar la luz y la temperatura.

DETERMINACION
CH3OH + I2 + SO2 + H2O -------- 2 HI + H2SO4 + BASE

15

BASE H+ I- + BASE H+ CH3SO4Complejos de transferencia de carga


INCONVENIENTES
-

Muestra con agua.

Muestra reaccionando con I2 y SO2


El peso molecular del agua es bajo por lo que los errores son grandes.

TITULO DEL REACTIVO es la capacidad para determinar H2O por ml de reactivo


Ttulo (mg H2O / ml RKF) presenta dos mtodos:

Cantidades conocidas de agua ultrapura, smosis inversa, agua tridestilada.


Utilizando sales hidratadas (tartrato de sodio dihidratado).

Existen tres mtodos para determinar valoracin final:

Visual
Fotomtrica (500- 550 nm)
Electromtrica (amperomtrica y voltamtrica)

PROCEDIMIENTO
1.
2.
3.

4.
5.
6.

La bureta debe de esta seca protegida de la humedad, se controla la temperatura porque vara la
densidad del metanol.
Cuando hay agua se torna incoloro.
Cuando no hay agua est de color caoba.
El CH3OH anhidro es el medio de disolucin.
Se coloca una cantidad conocida de agua, se determina el volumen gastado del RKF y se calcula
el ttulo del reactivo.
Se decolora nuevamente agregando un exceso del reactivo para obtener el color original.

EL tartrato de sodio tiene 15.61 % de H 2O, puede contener agua ocluida; tambin se puede agregar carga pesada en lugar del agua
conocida y realizar lo mismo con el reactivo de Karl Fischer.
COULOMBIMETRIA
Mide la cantidad de corriente que se usa para oxidar in situ yoduros en yodo que reacciona con el agua presente. Un exceso de yodo en
el nodo indica el fin de la valoracin.
Desventajas:

Reacciones secundarias o colaterales con algunos grupos que pueden reaccionar con los componentes del reactivo como aldehdos
y cetonas con metanol formando acetales y cetales ms agua.
Los steres reaccionan con el agua formando metanol y cidos carboxlicos.
Acidos carboxlicos con metanol forman steres y agua.
Otros grupos son aminas, mercaptanos, silanoles, percidos, perxidos, nitritos, sales de estao, sales frricas, sulfitos y tiosulfatos.
Sales de cobre, selenito, telurito, sales de zinc, hidracina y derivados.

Solventes:

Metanol 100%, cloroformo 70% (muestras con aceites), decaol, hexanol, dodecanol al 50 % ayudan a la solubilidad para esencias,
pomadas y cremas. Formamida de 30 50 % en mermeladas, pastas, productos con almidn y azcar.
Ejemplo: se disolvieron 0.5404 g de agua en 50 ml de metanol, se tomaron 5 ml de esta solucin y se aadieron a un matraz erlenmeyer
que contena 20 ml ms de metanol. En la valoracin se consumieron 10 ml del reactivo de Karl Fischer, se corri un blanco de 20 ml del
mismo metanol los cuales requirieron 0.6 ml del reactivo antes mencionado. Calcular el ttulo del reactivo.
20 ml ---------- 0.6 ml
25 ml ---------- x

x = 0.75 ml de RKF

Vol. Corregido de mta = 10 0.75 ml = 9.25 ml RKF

16

0.5404 mg H2O / 50 ml metanol x 5 ml metanol con agua = 0.05404 g H2O


Ttulo = 54.04 mg H2O / 9.25 ml RKF = 5.84 mg H2O / ml RKF
b) Granulado por va hmeda 5 % agua
500 mg granulado -------- matraz erlenmeyer que contena 25 ml de metanol se valoraron con RKF
gastndose 3.8 ml del reactivo.
Qu porcentaje de agua tiene el granulado?
5.84 mg H2O ----------- 1ml RKF
x
----------- 3.05 ml RKF
500 mg ---------- 100 %
17.81 mg -------- x

x = 17.81 mg H2O
x = 3.56 % de H2O

c) Granulado hay 5% y tomamos 1 g de mta. Cuntos ml del RKF utilizara para valorar el H2O?
5g
x

---------------------

100 g
1g

x = 0.05 g

5.84 mg H2O ----------- 1 ml RKF


50 mg
----------x

x = 8.56 ml

d) Est dentro de especificaciones?


Si porque el lmite es de 5% y el granulado presenta 3.56 %.
SECADO TERMICO
Se emplea en muestras slidas que no se descompongan con el calor, no voltiles ni aceites esenciales.
Los agentes desecantes que se utilizan son pentxido de fsforo, sulfato de sodio, cido sulfrico, slica gel.

Controlar pesafiltro a 110 C toda la noche, tarar a peso constante.


Calentar por dos horas, enfriar en el desecador a temperatura ambiente .
Pesar en balanza.
Llevar a peso constante, la diferencia entre ellos debe ser menor a 0.5 mg.
Determinar peso final de muestra seca.
Determina la cantidad de agua en porcentaje.

Ejemplo: muestra 1.0 g


muestra seca 0.9550 g
1- 0.9550 = 0-045 g
1 g -------- 100 %
0.045 g ------ x

x = 4.5 % de agua

Sustancias a las que se les quiere determinar agua y que se descomponen a 100 o 105 C.
Considerar condiciones del desecante (si contiene agua y la muestra est seca, se combina la humedad y el crisol gana agua).
Las caractersticas del desecante son:

Muy estables.
Reversibles.
Inertes.

PERDIDA POR SECADO

Igual al procedimiento de secado trmico.


Salida de agua ms otros componentes voltiles.

TERMOBALANZAS

Pesafiltro a peso constante.

17

Se tiene la balanza con rayos infrarrojos y se determina watts para calentar la muestra.
Se colocan 10g de muestra
Se pueden determinar cantidades de agua y otros componentes que son voltiles a la temperatura de infrarrojo.

AZEOTROPOS

Utilidad en mas del 50% de agua presente en la muestra


Util para cosmetologa y emulsiones.
Azetropo: mezcla de dos o ms componentes que ebullen a temperatura constante como si se tratara de un solo
componente.
El azetropo que se ocupa es el formado de tolueno y agua que ebulle a 86C.

FUNDAMENTO: formacin del azetropo.


VENTAJAS: Ebulle a menor temperatura que el agua, formacin del azetropo inmiscible en agua que permite su separacin.
Otros mtodos:

Cromatografa de gases
Resonancia magntica nuclear
U.V
Infrarrojo

PROPIEDADES INTENSIVAS Y EXTENSIVAS


Las propiedades que dependen de la cantidad de materia que se est midiendo son propiedades extensivas; ejemplos son la masa, la
longitud y el volumen.
Las propiedades que no dependen de la cantidad de materia que se est midiendo son propiedades intensivas. Son importantes por que
dependen de la naturaleza del material; ejemplos son la densidad y la temperatura.
EQUILIBRIO QUIMICO
VALORACIONES ACIDO-BASE
aA + bB -------- cC + dD
Keq = [ C]c [ D ]d / [ A]a [B ]b
El equilibrio qumico est regido por la actividad y la estequiometra de la sustancia. Se considera la ley de accin de masas.
Base fuerte ------ cido conjugado dbil
Acido dbil ------ base conjugada fuerte
CAPACIDAD DE ACIDEZ O BASICIDAD
Va a depender de:
- H2O comportamiento ANFOTERO (cido y/o base)
2H2O ------- H3O + + OHion
capacidad cida y bsica del agua respectivamente.
hidronio
- pKw = 14 es la constante de autoprotlisis
- Ks = constante de solvlisis (autodestruccin de algn solvente que no sea agua).
CH3COOH ------------

CH3COO - + H +

CH3OH -----------------

CH3O- + H +
Ion metxido

HNO3 + HCl ------------ Cl- + NO3- + 2 H3O+


El agua tiene la capacidad de disociarse con cidos fuertes; ya que se producen iones hidronio los cuales dan el valor de pH.
Cuando se utilizan otros solventes el valor de pH depende de los protones.
CONSTANTE DIELECTRICA DEL MEDIO DE DISOLUCION
I = q . q2 / d

18

Distancia crtica: es la distancia mnima necesaria para que existan los pares inicos.
H2O = 79
Ki

CH3COOH ---------- CH3COO- H+ -------- CH3COO- + H+


2 CH3COOH ---------- CH3COO- CH3COOH2
ION LIATO
ION LIONIO
PAR IONICO
El ion lionio procedente de agua es el ion hidronio.

CH3OH ------------- CH3O- + CH3OH2+


ION METOXIDO

La reaccin Acido- Base depende de:

Fuerza de las sustancias.


Grupos funcionales que contenga la molcula
Capacidad del medio de disolucin de interactuar con el agua (capacidad anfotrica).

TEORIA DE BROWSTER Y LOWRY


ACIDO es el donador de protones.
BASE es el aceptor de electrones.
Hay un cambio del medio de disolucin debido a:

Estabilidad.
Fuerza cido - base.

2 HCl + 4 H2O ----------- OH+ + 3 H3O+ + 2 ClBASE


3 NaOH + H2O ---------- H3O + OH- + 2 Na+
ACIDO
HCl + NaOH ------------- NaCl + H2O
H3O+ + OHCLASIFICACION DE SOLVENTES DE ACUERDO A CARACTERISTICAS ACIDO BASE

SOLVENTES PROTOGENICOS (cidos que forman protn).


ANFOTEROS (agua, OH-, donadores o aceptores).
PROTOFILICOS (aceptores de protones, bases como piridina, etilendiamina, dimetilformamida).
APROTICOS O INERTES (benceno, hexano, compuestos orgnicos). Ayudan a la solubilidad de la muestra.

CLASIFICACION DE SOLUTOS DE ACUERDO A SU CAPACIDAD DE FORMAR O NO IONES

IONOFONOS (HCl ).
IONOGENOS (NaCl).

CH3COOH + RNH2 --------------ACIDO


BASE
DEBIL
DEBIL

RNH3+ + CH3COO+
ACIDO Y BASE MAS FUERTES

Se permite la solubilidad de la amina en cido actico porque favorece las propiedades bsicas de la amina el cido actico.

19

Se valora el acetato CH3COO- por ser el cido actico el que se encuentre en exceso.
CH3COO- + H+ ClO4 -------------- CH3COOH + RNH3ClO4
ACIDO
PERCLORICO
NaOH + HCl -----------------------(H2O)

NaCl + H2O

RNH2 + HClO4 ---------------------(CH3COOH)

RNH3COO4 + CH3COOH

EFECTOS QUE REALIZA EL AGUA

Efecto nivelador: hace que las sustancias que se encuentren dentro de ella (cidos y bases fuertes) se disocien completamente.
Efecto diferenciador: establece una diferencia al valorar a distintas especies.

VALORES DE

Para > a 50 se encuentran iones libres.


De 30 < < 50 pares ionicos/ iones libres.
Para pares ionicos.

SELECCIN DE INDICADORES
-

Para cidos y bases fuertes es la fenoftalena con pH de vire de 8- 10.


Deben de tener una fuerza menor al analito que se desea cuantificar.
Se coloca gran cantidad para un exceso.
Los colores de vire no deben ser parecidos.

Se prefiere valoracin potenciomtrica en lugar de colorida cuando no existe indicador para la base de la valoracin. En Ka menores
a 10-4 por ser cidos dbiles.

Acido fuerte- base dbil, la sal formada es fuerte.


Base fuerte cido dbil, la sal formada es fuerte.

Base dbil cido dbil, la sal formada es dbil. El pH lo impone los valores de pKa no la sal.

pH = pKa1 + pKa2
Diferencias con la valoracin cido base:
-

Se encuentran iones libres en lugar de pares inicos.


Limitadas por la del medio de disolucin.

MOLECULAS BASICAS
Ejercicio: Metronidazol P.M. 171.2
El grupo Imidazol es bsico y se valora con un cido.
Acidos en medio no acuoso:
-

p-toluensulfnico.

HClO4 / cido actico anhidro o glacial 0.1 N y 0.5 N (soluciones valoradas, volumtricas o tituladas).

Indicadores ms comunes:
-

p-naftol-bencena en cido actico glacial.


Cristal violeta.
Verde de malaquita.

20

Estndares primarios:
-

Biftalato de potasio.
Piridina.

La piridina solo se protona en presencia de un cido

Medios de disolucin ms usados:


-

Acido actico.
Anhdrido actico.
Mezcla de ambos.

MOLECULAS ACIDAS
Valorantes cidos:
-

Metxido de sodio.
Metxido de litio.
En soluciones anhidras, se preparan en alcohol y benceno.

Estndar primario:
-

Acido benzoico.

Indicadores ms comunes.
-

Fenoftalena.
Timolftalena.

Solventes:
-

Dimetilformamida.
Piridina.

Ejercicio: se disolvieron 150 mg aproximadamente pesados en 30 ml de cido actico glacial, se calent suavemente la disolucin y se
adicionaron 3 gotas de verde de malaquita (SI). Se titul con HClO4 0.1 N, se gastaron 8.8 ml y se corri un blanco el cual gast 0.05 ml.
Cul es la pureza de la muestra?

21

CH3COO- + HCLO4

CH3COOH

CLO4-

Correccin de volumen (volumen gastado menos el blanco) = 8.8 ml 0.05 ml= 8.75 ml de HClO4
8.75 ml HClO4 x [0.1 meq de HClO4 / 1 ml HClO4 0.1 N] = 0.875 meq HClO4
Peso equivalente = 171 .2 g/mol
171.2 mg ------------- 1 meq
x
------------- 0.875 meq

x = 149.8 mg

149.8 mg /150 mg x 100 = 99.86 %


Ejercicio: se disuelven 250 mg de diazepam, CH3COOH anhidrido actico, 0.3 ml azul de metileno.
HClO4 0.0999 N, el blanco gast 0.02 ml y la muestra 8.8 ml.
P.M. = 284.7 g/mol

a)
8.8 ml 0.02 ml = 8.78 ml
8.78 ml HClO4 x [0.0999 meq HClO4 / 1 ML HClO4 0.0999 N] = 0.8771 meq HClO4
284.7 mg ---------- 1 meq
x
---------- 0.8771 meq
x = 249.7166 mg
249.7166 mg /250 mg x 100 = 99.8867 %
b) Marbete 10 mg de diazepam /tableta. Se pesan 40 tabletas y e pso promedio es de 132.1 mg por
tableta. Tomar la cantidad equivalente de 150 mg de diazepam 0.1084 N, se gastaron 4.52 ml de
HClO4 y el blanco de 0.07 ml. Cunto diazepam hay por tableta?
Especificacin de la USP [98.5 100.5 %]
132.1 mg --------- 10 mg
x
--------- 150 mg

x = 1981.5 mg

1.9815 g

Fc = 0.1084 N / 0.1 N x 4.45 ml = 4.8238 ml


1 ml 0.1 N --------- 28.47 mg
4.8238 ml --------x

x = 137.33 mg

137.33 mg diazepam ------------ 1981.5 mg polvo de tableta


x
------------ 132.1 mg tableta

x = 9.155 mg diazepam

9.155 mg diazepam / 10 mg x 100 = 91.55 % por debajo de especificacin


Otra forma de calcular el inciso a es considerando que cada ml de solucin 0.1 N es equivalente a 28.47 mg.
Fc = 0.0999 N / 0.1 N x 8.78 ml = 8.77 ml
1 ml

------------ 28.47 mg

22

8.77 ml ----------

x = 249.7166 mg

No se puede determinar pureza en forma farmacutica, se calcula el contenido de principio activo.


El ensayo de pureza se hace por triplicado.
El ensayo de contenido es con 20 muestras y al menos se hace por triplicado.
a. (CH3COO)2 Hg + 2 BH+ X- ---------- 2 CH3COO- BH+ + HgX2
2CH3COO- BH+ + 2 HClO4 --------- 2 CH3COOH + 2 BH+ ClO4
Mtodo de Piffer y Woolisch determinacin de bases que provienen de cidos halogenados (cidos fuertes).
HCl
+
b. B + HB ---------------- BH+ + HCl exceso
a. Exceso de acetato mercrico nivela la base. Los bromohidratos y clorhidratos pueden actuar como
bases. Es una valoracin directa.
b. El HCl en exceso se libra y la base tambin. Es una valoracin indirecta.
Ejemplo: fosfato de sodio dibsico Na2HPO4.
Na2HPO4 + HCl exceso -------- H3PO4 + HCl exceso + NaOH --------- Na2HPO4
cido
fosfrico
VALORACION EN MEDIOS NO ACUOSOS
Ejercicio: Trimetroprim, 300 mg de muestra en base hmeda se adicionaron a un matraz cnico que contena 60 ml de cido actico
glacial y 3 gotas de verde de malaquita. Se titul con solucin 0.1045 de HClO4 en cido actico utilizando para ello 10.8 ml del
valorante. Se corri un blanco y se utilizaron 0.07 ml de HClO 4 / CH3COOH. Se determin adems que contena un porcentaje de
humedad de 0.35 % por el mtodo de Karl Fischer.
Cul es la pureza de la muestra en base anhidra?

Correccin de volumen = 10.8 ml 0.07 ml = 10.73 ml


% de humedad

350 mg H2O ---------- 100 g de muestra

350 mg H2O ------------ 100 000 mg de muestra


x1
------------ 300 mg de muestra

x1 = 1.05 mg H2O

300 mg 1.05 mg = 298.95 mg de muestra en base anhidra


Fc = 0.1045 N / 0.1 N = 1.045 N (10.73 ml) = 11.213 ml de HClO4 0.1 N
1 ml 0.1 N HClO4 ------------- 290.32 mg trimetroprim
1 ml 0.1 N HClO4 ----------- 290.32 mg
11.213 ml
----------x

x = 325.54 mg

325.54 mg / 298.95 mg x 100 = 108.89 %


Se valor ms de lo que haba, donde el error se adjudica a:
-

El analista.
Normalidad del valorante.
Deteccin del mtodo (coloracin del indicador).
Trabajar con base hmeda cuando ya estaba en base seca.

23

Ejercicio: se determin el peso promedio de las tabletas que contenan sulfametoxazol y trimetroprim y fue de 565.6 mg. Se tom una
cantidad equivalente de muestra que contena 300 mg de trimetroprim. Se valoraron con HClO 4 / CH3COOH 0.1080 N y se gastaron
10.4 ml y un blanco gast 0.1 ml.
Qu cantidad se tom del polvo equivalente o de muestra?
Qu cantidad de trimetroprim hay en la tableta?
Si segn el marbete el contenido de trimetroprim por tableta es de 300 mg, decir cul es el % de variacin en el contenido?
565.6 mg ----------- 300 mg
x
----------- 300 mg

x = 565.6 mg

10.4 ml 0.1 ml = 10.3 ml


Fc = 0.1080 N / 0.1 N = 1.08 N (10.3 ml) = 11.124 ml
1 ml ----------- 29.032 mg
11.124 ml ------x

x = 322.9519 mg

Otra manera es 10.3 ml x 0.1080 meq /ml = 1.1124 meq


1.1124 meq x 290.32 mg / 1 meq = 322.9519 mg
10.3 ml x 0.1080 meq /ml = x1 = 0.1 meq /ml
x1 = 10.3 x 0.1080 / 0.1 meq = Fc
322.95 mg /300 mg x 100 = 107.65 % el porcentaje de error en el contenido es de 7.65 %
300 mg ----------- 100
22.95 mg -------x

x = 7.65 %

Si el intervalo es de 95 105 % esta fuera de la especificacin.


Ejercicio: Fenitona sdica pKa = 8.3
Se pesaron 200 mg de fenitona sdica, se disolvieron en 25 ml de cido actico glacial y se adicionaron 3 gotas de p-naftolbencena. Se
titul con HClO4 0.1 N y se gastaron 7.3 ml.
Qu pureza tiene en porcentaje?

P.M. = 274.3 g/mol


(7.3 ml x 0.1) = 0.73 meq x 274.3 / 1 meq = 200.239 mg
200.239
(ml

muestra

mg / 200 mg x 100 = 100.1195 %


ml blanco) x N x PM x 100 / peso muestra

Ejercicio: 30 tabletas con peso promedio de 180 mg se reducieron a un polvo fino y se tom el peso de una tableta, se coloc en un
matraz erlenmeyer y se adicionaron 40 ml de cido actico. Se agreg indicador p-naftolbencena y se titul con HClO4 0.0994 N. La
muestra gast 3.7 ml y para el blanco 0.02 ml.
Cul es el porcentaje de fenitona en la tableta?
Volumen corregido = 3.7 ml 0.02 ml = 3.68 ml
Fc = 0.0984 N / 0.1 N = 0.984 (3.68 ml) = 3.6211 ml
1 ml 0.1 N ------------ 27.43 mg
3.6211 ml -----------x

x = 99.327 mg /tableta de fenitona

99.327 mg / 180 mg x 100 = 55.18 %


Ejercicio: se mezclaron 100 ml de H2SO4 0.08 M con 50 ml de NaOH 0.04 M.

24

Cul es el pH de la solucin?
H2SO4
+
98
784 mg

2 NaOH
2(40)
80 mg

---------------

Na2SO4

2 H2O

100 ml [0.08 mmol/ml] = 8 mmol x 98 mg / 1 mmol = 784 mg


50 ml [0.04 mmol/ml] = 2 mmol x 40 mg / 1 mmol = 80 mg
(784 mg 98 mg) = 686 mg exceso
pH = - log [H30+]
686 mg [1 mmol/ 98 mg H2SO4] = 7 mmol / 150 ml = 0.047 M
pH = -log (0.047 M) = 1.33
Considerando normalidad
8 meq 2 meq = 6 meq
6 meq x (98 mg H2SO4 / 2 meq) = 294 mg H2SO4
294 mg H2SO4 x (1 mmol / 98 mg H2SO4) = 3 mmoles / 150 ml= 0.02 M
8 meq x (98 mg H2SO4 / 2 meq) = 392 mg H2SO4
392 mg H2SO4 x (1 mmol / 98 mg H2SO4) = 3 mmol / 150 ml = 0.02 M
pH = -log [0.02] = 1.698
METODOS BIOLOGICOS
Se clasifican en:

METODOS MICROBIOLOGICOS determina que hace el microorganismo y cmo se puede evaluar.

VALORACION DE ANTIBIOTICOS (control microiolgic)


CUENTAS MICROBIOLOGICAS (control microbiolgico)
PRUEBA DE ESTERILIDAD (control microbiolgico)

METODOS MACROBIOLOGICOS usan medicamento en cuanto a toxicidad.

Se requiere de un estndar microbiolgico para la inhibicin; se expone el cultivo en diferentes condiciones para ver si hay un
microorganismo patgeno; se controla el proceso de esterilizacin para buscar la presencia de microorganismos (bacterias, virus,
levaduras).
En el caso de Microbiologa:

Controlar medio de cultivo. Se realiza prueba de promocin de crecimiento en los nutrientes (selectivos y no selectivos) y en el
pH.
En el microorganismo (se requiere de un estndar perfectamente reconocible cepario ATCC).

VALORACION DE ANTIBIOTICOS
Se controla el pH y la viscosidad del medio. Los mtodos por los que se puede realizar son.

Por difusin: se utiliza cuando el antibitico es puro o difunde bien en un medio de cultivo slido.
Turbidimtrico: se realiza en medio de cultivo lquido.

DIFUSION
Es el mismo principio de los antibiogramas. Los factores que lo afectan son:
-

Gradiente de concentracin.
Temperatura.
Viscosidad.
Presin.

25

pH.
Tamao de la molcula.
Potencial.
Grosor del agar.

La potencia del antibitico es en UI o mcg/ mg muestra. El reservorio es un disco de fibra de vidrio estril que lleva cilindros huecos con
un volumen constante llamados PENICILINDROS.
Se realiza la incubacin y se mide el dimetro del halo de inhibicin que vaa depnder de la potencia del antibitico para inhibir el
crecimiento del microorganismo.
De acuerdo a la Regulacin del Cdigo Federal CFR marca que el ensayo sea Ensayo en placa pequea por interpolacin
mediante una curva estndar que contenga al menos 5 puntos por triplicado, el microorganismo estandarizado y el antibitico estndar.
Se realiza la regresin lineal para conocer la interpolacin de la concentracin y no se permiten las extrapolaciones.

MODELO
ln Co inicial = ln C mnima +

y2 / 4 Dto
ln Co

= 1 / 4

Dto

ln C mnima
Y2

Donde:
D = coeficiente de difusin del
to = tiempo crtico, tiempo mnimo

antibitico (mm/hr)
de inhibicin.

La concentracin de inhibicin
mnima en mcg/ml debe ser igual a la
concentracin de referencia del
estndar 3.
A partir de la concentracin mnima y potencia del estndar se prepara la concentracin.
A cada una de las placas se les coloca tres penicilindros con la concentracin de referencia CR y tres penicilindros con la concentracin
del estndar respectiva.
PREPARACION DEL MICROORGANISMO
-

Cepa pura es liofilizada y se reconstituye con caldo lactosado, el sembrado es en tubo inclinado mediante estra, se incuba 24 horas
antes de usarse.
Suspensin del microorganismo se realiza en agua, solucin buffer o solucin isotnica, se agita el tubo y se lee en la celda
espectrofotomtrica a 530 nm de transmitancia .

Por cada 100 ml de cultivo ------------ es 1 ml de suspensin del microorganismo


-

CAPA BASE es la primera capa que se coloca en la caja de Petri con 20 ml de agar aproximadamente, esta capa no contiene al
microorganismo.
CAPA SIEMBRA es la segunda capa y es la que contiene al microorganismo, se colocan aproximadamente 4 ml.

X Ref = X ref / n

es la media de las medias de referencia.

26

Fc = X ref X ref (cada uno) = +/ln Co muestra -------- e C muestra

el dimetro corregido es igual a la suma algebraica del valor


promedio del halo de inhibicin y el factor de correccin.
--------- C muestra en UI / ml mcg / ml, despus se hacen
las diluciones correspondientes para
conocer lo que hay por cpsula.

Ejercicio:
C1
0.178

CR
0.534

C2
0.356

CR
0.534

C4
0.801

CR
0.534

C5
1.335

CR
0.534

CMTA

[mcg/ml]

CR
0.534

o (mm)

127.8

142.8

133.5

140.1

149.2

142.1

184.5

141

139.3

141.1

14.2

15.87

14.83

15.57

16.58

15.79

17.17

15.67

15.48

15.68

Fc

-0.154

0.146

-0.074

0.046

0.036

Xc

14.046

14.976

16.506

17.216

15.516

XREF = 15.87 + 15.57 + 15.79 + 15.67 + 15.68 / 5 = 15.716

Fc = 15.716 15.87 = -0.154


15.716 15.57 = 0.146
15.716 15.79 = - 0.074
15.716 15.67 = 0.046
15.716 - 15 68 = 0.036

Xc (mm)
14.046
14.976
15.716 ------ Xref
16.506
17.216
r2 = 0.9951
b = -10.33
m = 0.6162

[mcg / ml]
0.178
0.356
0.534
0.801
1.335

ln Co
-1.7259
-1.0328
-0.6274
-0.2219
0.2889

y = mx + b
y = 0.6162 (15.516) + (-10.33) = -0.77
e-0.77= 0.462 mcg / ml

0.462 mcg / ml X [vol. mta ml / alcuota ml ] X [vol. ml / alicuota ml] X [vol. ml /peso mta] =
mcg de principio activo / ml de muestra

mcg de principio activo / mg de peso mta

METODO EN TUBO POR TURBIDIMETRIA


-

Se requiere de medio de cultivo lquido inoculado con el microorganismo.


La curva de calibracin es al menos con 5 puntos por triplicado.
Se toma 1 ml de cada concentracin y se coloca por triplicado (al menos 15 tubos empleados).
Se incuban de 2 a 3 hrs.
Se colocan los tubos en bao de congelacin para detener el crecimiento.
Adicionar 2 ml de formaldehdo a cada tubo.
Leer la turbidez en transmitancia.
Elaborar curva de calibracin (transmitancia VS concentracin).
Interpolar para conocer la concentracin y posteriormente calcular con diluciones.

Todo el cultivo antes de usarse debe tener promocin de crecimiento.


Para la prueba se realizan 3 tubos como blanco, debe de considerarse la misma temperatura y tiempo; asimismo se necesita el mismo
tubo, del mismo vidrio, color, etc.

27

Los tres tubos proporcionan:


-

Estabilidad.
Crecimiento.
Blanco.

Para las mezclas de antibiticos se deja un antibitico activo y otros se inactivan con enzimas o mediante dilucin, filtracin o extraccin
como mtodos qumicos.
METODOS MICROBIOLOGICOS
-

Control microbiolgico.
Esterilidad.
Cuentas microbiolgicas.

CUENTAS MICROBIOLOGICAS

Reglamentacin y asepsia para productos biolgicos y alimentos.


Calidad microbiolgica.
Util para productos no estriles como jarabes, geles, pomadas, etc.
Se determina la presencia de microorganismos.
Para las materias primas se requiere conocer en que son solubles, naturaleza qumica (densidad y viscosidad).

METODOS
NMP (nmero ms probable).
Cuenta en placa.
Los dos van a depender de la naturaleza qumica .
CUENTA EN PLACA
Se requiere de un medio de cultivo altamente nutritivo, el medio requiere anteriormente promocin de crecimiento. Se hace una dilucin
1/ 100 ml de agua, solucin salina fisiolgica o agua peptonada previamente estriles.
Se utilizan al menos tres cajas para cada muestra con 20 ml cada una, antes de que el medio solidifique se coloca 1 ml de la muestra, se
agita y la muestra queda inmersa MTODO DE INMERSION.
Se toma una caja como blanco, las dems se incuban a 34 C por 72 horas al menos. Se dejan 3 cajas como blanco a temperatura
ambiente de 20 25 C durante 5 das.
Si el blanco se contamina la prueba no sirve y se tiene que volver a repetir. Se cuentan las unidades formadoras de colonias (UFC)
en un cuenta colonias que tiene 10 cm3, se saca el promedio de 10 y se multiplica por 64 cuadritos. Otras pruebas se hacen en campana
con 1000 ml3 de aire.
Las bacterias no permisibles para la cuenta microbiolgica son: Enterobacterias, E.coli, Pseudomona aeruginosa, Salmonella, Candida
albicans y Staphylococcus aureus.
Los microorganismos se aislan y se siembran en agar soya tripticasena, se colocan en cajas con medios selectivos; por ejemplo: E. coli
en verde brillante o McConkey, Staphylococcus aureus en sales manitol, etc. Posteriormente se hacen las pruebas bioqumicas.
El anlisis se hace en materia prima, producto subterminado y producto terminado.
CUENTA EN TUBO

Util para muestras que no dan turbidez.


Se realiza mediante el mtodo de NMP para estimar la cantidad de microrganismo.
Se toma 1 ml o 1 g de muestra.
Hacer dilucin 1/ 10 con 9 mililitros de medio de agar soya tripticasena estriles y 1ml de buffer, solucin salina fisiolgica o agua
peptonada; posteriormente hacer una dilucin 1/ 100 y por ltimo una dilucin 1/ 1000. Para cada dilucin se toman 4 tubos y se
considera 1 tubo como blanco.
Se toman los 12 tubos y se incuban a 37 C de 24 48 horas.
Se observa en cual hay crecimiento, turbidez o cambio de color.
Si el blanco se contamina no sirve la prueba y se tiene que volver a repetir.

TABLAS DE NMP

28

1 / 10
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3

1 / 100
3
3
3
3
2
2
2
2
1
1
1
1
0
0
0
0

1 / 1000
3
2
1
0
3
2
1
0
3
2
1
0
3
2
1
0

NMP

PRUEBA DE ESTERILIDAD
Se realiza en productos ticos, oftlmicos e inyectables que se aplican por va intramuscular e intravenosa.
Los dos mtodos son:

Prueba directa
Prueba indirecta

PRUEBA DIRECTA
Se consideran el medio fluido de tioglicolato para microorganismos anaerobios y el medio fluido
microorganismos aerobios. Los medios selectivos con indicador redox o pH.
La prueba tambin se aplica para gasas y material quirrgico previamente estril.

de soya tripticasena para

PRUEBA INDIRECTA
Se utilizan los mismos medios de cultivo, se considera para la muestra:
-

Nmero de unidades de lote.


Volumen de las unidades.
Proceso de esterilizacin.

Cmo se hace la prueba?


Se emplean esterites y membrana de 0.42 o 0.45 micras; se lava la membrana 3 veces con agua peptonada, buffer o solucin salina
fisiolgica.
Es necesario saber si l muestra es oleosa u acuosa. La prueba se repite por triplicado para ver si hay crecimiento de bacterias y hongos;
el blanco se observa y se siembra la membrana de la siguiente manera:
-

3 mitades de membrana en medio tioglicolato a 37 C.


3 mitades de membrana en medio soya tripticasena a temperatura ambiente.

Se esperan 7 das para 37 C y 14 das para 25 C con su respectivo blanco.


La membrana debe de pasar prueba de integridad de membrana con 0.22 micras de porosidad, se genera incertidumbre porque la
prueba se realiza en una membrana diferente a la que se va a utilizar.
A los medios se les realiza la prueba de promocin de crecimiento en base a:
Prueba de control positivo.
Prueba de control negativo.
Muestra.
La prueba de inhibicin de bacteriostticos o bactericidas no se realiza.
PRUEBA DE PIROGENOS
Los dos mtodos mediante los cuales se realiza son:

29

In vivo.
In vitro.

In vivo
Se emplean conejos; ya que la dosis umbral de pirgenos para producir reaccin febril es la misma para conejos que para humanos.
Una de las ventajas es que puede detectar cualquier tipo de pirgenos.
PIROGENOS: cualquier producto del metabolismo microbiano que al ser administrada por va
intramuscular e intravenosa produce reaccin febril tanto en conejos como en
el hombre.
La seal analtica es la fiebre en el conejo, el pirgeno en sangre hace que se libere histamina la cual desencadena la reaccin.
La respuesta es la reaccin febril con temperatura > 0.6 C.
La ruptura de la pared de los Gram (-) est formada por el lipopolisacrido que da lugar a la reaccin febril, el (LPS) es la endotoxina.
Los conejos detectan cualquier sustancia, incluyendo partculas como metales, vidrio, pelusas o la qumica.
La eleccin de los conejos se debe a:
-

Ser una raza sensible.


No produzcan tolerancia.
Mantenerse en condiciones de salud adecuadas.

De acuerdo a la USP los conejos deben de cumplir las siguientes especificaciones:


-

Albinos de Nueva Zelanda.


1.5 kg o ms.
Cualquier sexo.
Buena alimentacin.
Temperatura de 20 C.
Antes de la prueba se retira el alimento, el agua no.

Cuando se realiza la prueba por primera vez se seleccionan 5 conejos, se les toma la temperatura basal al menos 90 minutos antes de la
prueba en intervalos de 30 minutos con termopares que contienen sensor de temperatura para el recto con +/- 0.1 C.
Se registran las temperaturas para saber si es constante, no debe haber un incremento de 0.6 C; el medicamento se administra por la
vena marginal de la oreja del conejo de acuerdo a la USP son 10 ml/ Kg de peso respecto al agua. El tiempo de administracin debe
ser menor a 10 minutos. La duracin de la prueba es de 5 horas y el material a utilizar es apirognico.
En caso de que los animales sean nuevos los pirgenos pueden casar tolerancia; de acuerdo a la USP se deben de mantener a las
mismas condiciones y se realiza una prueba en blanco que consiste en someterlos una noche anterior sin alimento, se registra la
temperatura durante 3 horas y lo que no se realiza es la inyeccin.
Para inyectables, estriles y apirognicos si no se aproxima 5 unidades de endotoxinas por peso no hay reaccin febril. Despus de
tener la temperatura se realiza la interpretacin de la prueba de la siguiente manera:
-

Cuando hay un incremento de 0.6 C la prueba es pirognia.


Cuando no hay un incremento de la temperatura la prueba es apirognica.

In vitro
De acuerdo a la USP es una prueba para endotoxinas, contaminacin de grmenes Gram (-). Es un mtodo relativamente nuevo pero su
desventaja es que solo detecta endotoxinas. En un principio se realiz para el agua pero ya se aplica tambin para materia prima,
medicamentos e instrumental.
La prueba se realiza mediante el LAL (lisado de amebocitos de Limulus poliphemus), se extrae el amebocito y el lisado contiene el
pptido y una enzima que se llama procoagulasa.
LAL (coagulgeno) + [ endotoxinas] + [ Ca+2] ----------- procoagulasa -------- GEL
Se controla la temperatura a 37 C y pH de 7 por 1 hora. El lisado se realiza en tubos apirgenos a los cuales se les adiciona la
muestra, se colocan en bao de agua, se sacan y la GEL debe de formarse intacta.
-

Si se forma GEL la prueba es positiva.


Si no hay formacin de GEL la prueba es negativa.

30

Se realiza una curva de calibracin para encontrar la mnima cantidad de formacin de GEL y es por triplicado. Se hace un control
negativo con agua apirognica y un control positivo con la concentracin mnima que forma la endotoxina.
PRUEBAS MISCELANEAS
Se emplean para:
Verificar la va de administracin.
Forma farmacutica.
TOXICIDAD AGUDA
Es exclusiva para antibiticos y se realiza en ratones que no sean utilizados anteriormente, recin nacidos con 17 g de peso; se utilizan
al menos 15 ratones. La observacin se hace despus de 24 y 48 horas. Si un ratn se muere antes de 48 horas se repite la prueba con
15 ratones nuevos pero ahora con un peso de 19 g de peso. La solucin se administra por la cola de los ratones.
IRRITABILIDAD

EN OJO

Se realiza para productos oftlmicos como pomada de terramicina, gotas y productos que por accidente caen en los ojos como tintes,
shampoo, acondicionadores, spray para el cabello, maquillaje, etc. Se utilizan 5 conejos y la cantidad demuestra que se coloca si es
slido son 100 mg, si es lquido 0.1 ml o 100 L ; se aplica en el saco conjuntival en un ojo, el otro ojo sirve de blanco.
Despus de la aplicacin se vigila a los conejos durante 10 das. Se observa dao leve como irritacin hasta un dao en la pupila o
crnea. Se clasifican desde 0 hasta 3 dependiendo del grado e irritabilidad.

EN PIEL

Para productos utilizados en piel daada por cortaduras o quemaduras. La prueba se realiza en ratas o conejos. Se lacera la piel y se
aplica el medicamento, se coloca un parche y se observa si hay una irritacin o lesin ms grave.

SENSIILIDAD EN PIEL

Se realiza para protectores solares, desodorantes, piel, talco, jabn y aceite de bebs. La prueba se determina en conejos y ratas sin
estrato crneo de la piel, se les coloca el parche y se observa durante tres veces al da. La respuesta es desde enrojecimiento a
hinchazn o prurito.

PRUEBA DE IRRITABILIDAD EN VENAS

Se realiza para todos los intravenosos en perros a los cuales se les extrae muestra de la yugular. La muestra se les administra en la
pata. Como resultado se observa si la formulacin no causo lisis y que le sucedi a la vena con el producto como hinchazn, eritema,
inflamacin, enrojecimiento, etc.

SUPOSITORIOS Y OVULOS

Se realiza en conejos y ratas a los cuales se les aplica el producto en el recto y se sutura, despus se sacrifica al animal y se observa si
hay inflamacin, enrojecimiento, acumulacin de lquidos o necrosis.

GLANDULAS MAMARIAS

La prueba se realiza en ratas lactando a las que se les aplica el frmaco en las glndulas considerando unas como control. Se les retira
a las cras un da antes de la prueba; se aplica de la muestra 0.1 g 1 g con diferentes dosis requirindose para cada dosis 10 animales.
Se observa a las 24, 48 y 72 horas. Se sacrifican y se observa si la glndula presenta hinchazn, necrosis e irritacin.
CROMATOGRAFIA
Es una tcnica de separacin, identificacin y cuantificacin en la cual se requiere de una sustancia de referencia (patrn interno o
externo).
El sistema cromatogrfico est formado por 3 partes:
-

Fase estacionaria.
Fase mvil.
Muestra.

De acuerdo al fenmeno que se realiza cuando se lleva a cabo l separacin se clasifica en:

31

Fenmeno de adsorcin (superficie).


Particin (equilibrio entre dos lquidos).
Por intercambio inico (carga del analito).
Por exclusin molecular (tamao).

De acuerdo a la tcnica se clasifica en:


-

Cromatografa en capa fina (CCF).


Cromatografa en columna.
Cromatografa en papel.
Cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC o CLAR).
Cromatografa de gases.

Forma de elucin en la que se separan:

Isocrtica se presenta una nica fase mvil.


Por gradiente se cambian las proporciones de la mezcla.

Respecto a la fase estacionaria y fase mvil:

Slido / lquido fase estacionaria y fase mvil respectivamente.


Lquido / lquido.
DEFINICION
Por diferencia de afinidad con respecto a la fase estacionaria y la fase mvil; actualmente es una tcnica mediante la cual existe una
separacin de afinidad del analito de la fase estacionaria y fase mvil.
La afinidad de separacin depende de:
-

Solubilidad.
Polaridad.
Tamao.
Carga.

Qu propiedades se deben de analizar?


FASE ESTACIONARIA

Tamao de partcula para cromatografa de capa fina y columna.


Tamao del poro.
Geometra esfrica por ser simtrica y tener mayor rea superficial expuesta.
Empaque debe ser homogneo.

CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA


Se emplean slica gel, almina, tierra silicia y poliamidas.
Fase normal: la fase estacionaria es polar. La fase mvil es no polar.
Fase reversa: la fase estacionaria es no polar. La fase mvil es polar.
Cambio de fases: se modifica por la adicin de carbonos con cadenas hidrocarbonadas saturadas y no
saturadas. C18, C12, C8, C6, C4.
En la fase reversa los que permanecen ms tiempo son los no polares; ya que los polares son los que salen primero por no tener
afinidad.
Para el revelado se utiliza un indicador de luz UV o de fluorescencia.
CROMATOGRAFIA DE EXCLUSION MOLECULAR
La fase estacionaria es una matriz o red donde pasan las molculas dependiendo del tamao del poro, los ms empleados son:
-

CEFADEX matriz de dextrano.


CEFACRIL matriz de poliacrilamida.
BIOGEL matriz de agarosa.

32

FASE MOVIL

Constante dielctrica (interacciones con muestra, ionizacin).


Particin de solutos en la fase mvil.
Pureza elevada.

Libres de cualquier partcula y gases disueltos para las cromatografas de columna.

METODOS PARA LA ELIMINACION DE GASES


-

Sonicacin: se lleva a la fase mvil al ultrasonido.


Burbujeando helio en la fase mvil.
Colocando barra magntica en fase mvil y agitando lentamente.

Se debe de cumplir las siguientes indicaciones:


-

Estabilidad qumica.
No interaccione con la fase estacionaria (lquido/ lquido).
El analito o la muestra debe de estar soluble en la fase mvil. Debe de cumplirse que la muestra permanezca mucho ms tiempo en
la fase mvil que en la fase estacionaria.
Polaridad y solubilidad depende de la muestra y tipo de cromatografa.

CAPACIDAD ELUITROPICA: referida a la constante dielctrica, consiste en la capacidad de eludir.


MUESTRA

Alta pureza.
Solubilidad para la eleccin de la fase mvil y fase estacionaria.
Deteccin de la muestra (que propiedades se le pueden medir, cmo se puede revelar; propiedades espectrofotomtricas, de
fluorescencia).

ESTANDARES

Muy puro.
Poco higroscpico.
Estable (que no reaccione con otros componentes).

Se requieren de estndares internos y externos.


TEORIA DE LOS PLATOS Y TEORIA CINETICA
-

Explican el proceso cromatogrfico.


Explica como se da la separacin.

Se denomina COLEO al pico cromatogrfico no simtrico que se desva a la derecha e izquierda y se debe a la alta concentracin de la
muestra.
El tiempo de retencin es igual par la misma velocidad de flujo, muestra y fase mvil.
El ancho de la banda (w) depende de la teora cintica de la cromatografa con la ecuacin de Van Deemter.
Durante el proceso se llega a un equilibrio que depende del coeficiente de particin influenciado por la temperatura, pH, fuerza inica,
constante dielctrica del solvente y otras. Se lleva a cabo de forma contable surgiendo la teora del plato terico.
PLATO TEORICO (N): es el espacio en el cual se lleva a cabo el equilibrio, determina la
eficiencia del sistema (a mayor N mayor eficiencia).
ALTURA EQUIVALENTE DEL PLATO TEORICO (H = AEPT): se refiere al grosor o altura de la interfase (a menor altura mayor
eficiencia).
AMBOS DETERMINAN EFICIENCIA DE LA EXTRACCION.
En una extraccin hay la interaccin entre la fase acuosa y la fase orgnica (entre mayor interaccin hay mayor separacin). El proceso
es discontinuo y contable.
TEORIA CINETICA

33

Por qu hay ensanchamiento de la banda cromatogrfica?


De acuerdo a la ecuacin de Van Deemter, la cromatografa es un proceso continuo.

Difusin en remolino. Se disminuye con tamao homogneo e partcula, geometra y fase estacionaria. Se mantiene constante por
una baja concentracin, lo que permite una interaccin mejor que conlleva a una separacin ms rpida y mejor.
Difusin longitudinal.
Transferencia de masa.

H = A + B / U + Cu
Donde:
A = constante
B = difusin longitudinal.
C = transferencia de masa
U = velocidad de flujo de fase mvil.
DIFUSION LONGITUDINAL (B)
B = 2 D
M
= factor de obstruccin de 0.5 a 0.9
DM = coeficiente de difusin del soluto
Cuando asciende la separacin difunden en primer plano las partculas que estn hasta el frente y son las que forman el pico de avance.
Depende del contacto de la fase mvil por el soluto y de la afinidad del soluto por la fase mvil y estacionaria, caractersticas del soluto y
la velocidad de la fase mvil.
Se debe de:
-

Controlar la velocidad de flujo.


Mantener el entre 0.5 y 0.9

El es el impedimento que pone la fase estacionaria para que pase el soluto, le opone cierta resistencia que depende del empaque y
tamao de la partcula.
A mayor velocidad de flujo menor efecto de difusin longitudinal. Son inversamente proporcionales.
TRANSFERENCIA DE MASA (C)
Se habla de pseudoequilibrios porque es poco el tiempo que permanece la fase mvil con la muestra en la fase estacionaria.
A mayor velocidad de flujo mayor altura.
Velocidad de flujo ptimo:
-

Menor altura.
Mejor efecto de masa.
Menor efecto longitudinal.

N = 16 (tR / w)2 platos tericos


H=L/ N

altura

Donde:
tR = tiempo de retencin, tiempo de soluto en columna.
w = ancho de banda.
L = longitud de fase estacionaria.
Resolucin: dos picos perfectamente delimitados y separados. RS > 1.5
Cuando la resolucin es igual a 1 se dice que hay separacin pero no hay resolucin.
El fenmeno de adsorcin se da porque tanta muestra se coloca para la separacin; se forma una estela o bolero cuando hay mucha
muestra.
El fenmeno de particin se da cuando la fase mvil y estacionaria son lquidas; si depende de la concentracin se comporta de
diferente manera por lo que tiene que ser independiente.
La cromatografa es lineal cuando no depende la particin de la concentracin y cuando hay bajas concentraciones.
ISOTERMAS: arriba de la cromatografa lineal son cncavas y convexas y saturan el sistema.

34

Rs = 2 (tR B tR A) / wA + wB
Eficiencia del sistema cromatogrfico se debe a:

H (es la mejor)
N
RS

CROMATOGRAFIA PLANA
-

En papel se da el fenmeno de particin.


En capa fina el fenmeno de adsorcin en la fase normal y fase reversa por cambio de polaridad en la fase estacionaria.

La cromatografa en capa fina puede ser:

Ascendente.

Descendente.
La fase mvil migra por gravedad la fase estacionaria migra por capilaridad.

Monodimensional (en un solo plano).


Bidimensional (en dos planos donde hay una mejor separacin).

En el fenmeno de adsorcin lo importante es la polaridad de la fase normal; ya que lo menos polar es lo primero que sale, lo ms polar
tiene mayor afinidad por la fase mvil.
La activacin consiste en meter a la placa a cierta temperatura para la salida del solvente con agua. En la desactivacin es con etanol o
metanol.
La fase mvil se selecciona por la fuerza eluitrpica, la polaridad de la muestra y la fase mvil.
Factor de retardo
Rf = distancia que recorre la muestra / distancia que recorre fase mvil
El factor de retardo debe ser menor a 1. Cuando es igual a cero no hay migracin y cuando es igual a uno se dice que la muestra migr
con el frente de solvente.
CUANTIFICACION
-

La muestra es cuantitativa.

Se realiza por densitometra (se realiza un scanner de todas las muestras leyndose en nanolitros, se procede a la curva de
calibracin de estndares a diferentes concentraciones para determinar cuanto hay y que hay). Es un mtodo empleado en la
HPTLC (cromatografa en capa fina de alta resolucin).

REVELADO
Los tipos de reveladores que se utilizan son:

Qumicos (yodo, sulfato srico en cido sulfrico, ninhidrina, permanganato de potasio).


Fsicos (UV, indicadores de fluorescencia).

CROMATOGRAFIA DE PARTICION
Para la cromatografa en columna, la ms usada es la reversa.
K = CS / Cm
Donde:
K = constante de particin.
CS = concentracin de soluto en fase estacionaria.
Cm = concentracin de soluto en fase mvil.
-

Se considera del analito la solubilidad.


Se puede aumentar la temperatura para interaccin de fase mvil y fase estacionaria y la transferencia de masa.

Cromatografa de tipo isocrtico y gradiente.

FACTOR DE SELECTIVIDAD

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= tR B / tR A
Donde:
factor de selectividad, debe ser menor a 1; ya que indica si es factible la separacin.
FACTOR DE CAPACIDAD (K)
Indica que tan factible es que se lleve a cabo la separacin. Hay diferentes maneras para calcularlo.
K (Vol. de fase estacionaria) / (Vol. de fase mvil)
tR t0 / t0

(t0 es tiempo muerto e indica el tiempo que permanece un compuesto no retenido en la


columna).

Q E / QM

QE = cantidad de analito en la fase estacionaria.


QM = cantidad de analito en la fase mvil.

En la fase estacionaria se colocan C18, C12, C8, C6, C4 que depende de la solubilidad de la muestra.
Se determina:
-

H
N
Rs
Area bajo la curva mediante el mtodo de los trapecios y formando un tringulo issceles.

CROMATOGRAFIA DE IONIZACION
Mediante la ionizacin se controla el pH de la muestra.
CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO
Se usan resinas de intercambio inico fuertemente cidas y no fuertemente cidas (grupos tipo cido carboxlico); resinas fuertemente
bsicas contienen derivados de sales cuaternarias de amonio y grupos amino de fuerza moderada.
CROMATOGRAFIA DE EXCLUSION MOLECULAR
Interviene el tamao o peso molecular de las molculas, la separacin se debe al radio de Stokes. Se usa una matriz que es un gel; por
ejemplo los biogeles que son poliacrilamidas, superdex agarosa con dextrano, geles de celulosa, etc; que consisten en partculas
huecas cuya superficie es una red o malla de tamao controlado.
Se da un entrecruzamiento de malla donde las partculas grandes salen por fuera y las pequeas por el hueco. Primero salen las de
mayor tamao y las ms pequeas son las ltimas. Ocurre un hinchado de la gel o de la malla porque las partculas esfricas huecas
van a la superficie.
Ejercicio: Se ha encontrado que la sustancia A y B tienen un tiempo de resolucin de retencin de 16.4 y 17.63 minutos en una columna
de longitud de 30 cm. Un compuesto no retenido de 1.3 minutos. Los anchos de pico fueron de 1.11 y 1.21 mm.
Calcular:
Nmero medio de platos tericos en columna.
Altura promedio del plato terico.
Resolucin de los 2 picos.
Cul sera la longitud de la columna necesaria para una resolucin de 1.5?
17.63 1.3 = 16.33
16.4 1.3 = 15.1
N = 16 (15.1 / 1.11)2 = 2960.93
N = 16 (16.33 / 1.21)2 = 2914.22
N = 2960.93 + 2914.22 = 5875.15 / 2 = 2937.57
H = 30 / 2937.57 = 0.0102 cm
Rs = 2 (17.63 16.4) / 1.11 + 1.21 = 1.060
N1 / N2 = (Rs1)2 / (Rs2)2 = (1.06)2 / (1.5)2
2937.57 / N2 = (1.06)2 / (1.5)2
N2 = 2937.57 (1.5)2 / (1.06)2 = 5882.46

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H=L/N

L = HN

L = 0.0102 x 5882.46 = 60.04 cm

Tiempo necesario para la elucin de la sustancia B en el lugar ms grande


tR1 / tR2 = (Rs1)2 / (Rs2)2
16.33 / tR2 = (1.06)2 / (1.5)2
tR2 = 16.33 (1.5)2 / (1.06)2 = 32.70 minutos
CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA RESOLUCION (HPLC o CLAR)
SOLVENTE ------------- BOMBA ------ PROGRAMADOR DE SOLVENTE --------- COLUMNA
TRAMPA DE
BOMBA
BURBUJA

INYECTOR

COLUMNA ----------- DETECTOR --------- INTEGRADOR ----------- PC


El flujo debe de ser de 0.1 a 10 ml por minuto. El tipo de bombas que se utilizan son neumticas y/o mecnicas las cuales mantienen el
flujo continuo.
Para la elucin isocrtica se requiere de una sola bomba, mientras que para la elucin por gradiente se requieren de dos bombas.
COLUMNAS Y FASE ESTACIONARIA
-

Ninguna obstruccin de partculas.


Variacin de caractersticas de retencin del compuesto.
No golpear la columna, se fractura la fase estacionaria.

FLUORESCENCIA
Los mtodos analticos quimioluminicentes son:

Fosforescencia.
Fluorescencia abarca espectro de absorcin y espectro de emisin.

La molcula en estado basal absorbe energa y pasa al estado de excitacin con diferentes niveles.
ABSORCION = de estado basal a singulete excitado (S*).
EMISION = de singulete excitado a estado basal.
La fluorescencia es de singulete excitado a estado normal.
La absorcin presenta longitudes de onda pequeas. Se emplea la ecuacin:
E=hC/
Donde:

E = energa
h = constante de Planck

FOSFORESCENCIA
El singulete normal de molculas se excitan pero no llega a singulete excitado sino a triplete excitado (T *). La fosforescencia es
de triplete excitado a singulete normal.
El T* es un nivel ms bajo que el S*.
De S* a T* es un paso no permitido; se permite nicamente si se lleva a cabo por un fenmeno diferente a la emisin de luz; por ejemplo:
calor.
La fluorescencia es de 10-4 y 10-8 segundos y no se ve a simple vista ya que se absorbe suficiente energa. La fosforescencia no depende
de la fuente de energa, se observa a simple vista y puede durar hasta varios das.
RENDIMIENTO CUANTICO DE FLUORESCENCIA
= cantidad de fotones emitidos / cantidad de fotones absorbidos
Tiende a 1 pero nunca va a ser igual. A > < energa; en emisin hay menor energa que en absorcin.
FENOMENO DE FLUORESCENCIA
F = IF = Io 2.3 E l C
------ K -----

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Donde:
Io = intensidad de luz para que absorba.
E = coeficiente de absortividad.
IF = intensidad de fluorescencia.
l = longitud de paso de luz.
IF = K C
y = mx + b
Es lineal a bajas concentraciones (10-4 M). El fenmeno depende de Io para que suban a un estado de excitacin y emitan. A bajas
concentraciones hay pocas molculas, la luz impacta sobre todas por lo que se excitan y florecen. Se detectan cantidades pequeas
porque no todas fluorecen. Es selectivo y ms sensible que UV, al depender de la luz sensibilizan ms.
Impacta el medio de disolucin y pH mientras que la temperatura ayuda a la fluorescencia.
Es til para muestras con grupos heterocclicos, molculas planas y molculas con dobles ligaduras.
El espectrofluormetro al incidir la luz tiene un filtro donde detecta nicamente la luz emitida a un ngulo de 90 con lo cual lee la luz
transmitida en otra posicn.
Para la deteccin fluoromtrica se requiere estandarizar con sulfato de quinina 0.2 M en cido sulfrico o rodamina.
Se valora la calidad del espectrofotmetro con:
-

Dicromato de potasio.
Permanganato con alta pureza.
Osmio.
Benceno.

Ejercicios: Cromatografa de lquidos en fase inversa para el propanolol con un P.M. 259.35. Utilizando protiptilina como estndar interno
y un detector de fluorescencia.
Fase estacionaria C18.
Fase mvil: metanol / H2O / cido fosfrico
Velocidad de flujo 1 ml / min.
Detector de fluorescencia de excitacin o absorcin 293 nm.
de emisin 375 nm
Preparacin de la muestra: despus de una serie de extracciones con una mezcla de hexano y alcohol isoamlico a 1 ml de plasma
aadido de 20 L de estndar interno de una cncetracin de 1 mg / ml, el extracto obtenido se evapor a sequedad y se reconstituy
con 20 L de metanol, de stos 10 L se inyectaron en el cromatograma.
Preparacin del estndar: a 1 ml de plasma limpio (sin frmaco) se le agregaron 20 L del estndar de concentracin de 1 mg / ml ms
9.25 g / ml de un estndar de propanolol. Se trata de la misma forma que la muestra.
Calcular la concentracin de propanolol en la muestra de suero. Resolver por alturas.
Cromatograma de solucin muestra: propanolol 1.5 cm
A 11 cm.
Cromatograma de solucin estndar: popanolol 9.5 cm
B 11 cm.
9.25 g ----------- 1 ml ------ 10 L
x
---------- 20 L

x = 4.625 g propanolol

g propanolol -------- 9.5 cm


x
-------- 1.5 cm

x = 0.7303 g propanolol

x = (0.7303 g) x 2 = 1.46 g propanolol


1.46 g / ml x (1000 ml / L) x ( 1 mg / 1000 g) x (1 g / 1000 mg) = 1.46 X 10-3 g / L plasma
Por qu hay diferencia entre la longitud de onda de absorcin y de emisin?
Porque las molculas al excitarse, no todas regresan por el mismo lugar por lo cual hay prdida de energa; ya que a mayor longitud de
onda menor energa.

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Ejercicio: Griseofulvina P.M. 352.77


Se cuantific metabolito en orina (desmetilgriseofulvina) P.M. 338.77 g / mol por cromatografa de lquidos.
Tratamiento de la muestra: 3 ml de orina durante las 2 primeras horas subsecuentes a la administracin VT 200 ml se extrajeron con 10
ml de butanol benceno, el extracto se evapor a sequedad y el residuo se reconstituy con 0.4 ml de una solucin metanlica de
estndar interno (4-m-hidroxifenil-1-isopropil-7-metil-2H-quinazolinona) de una concentracin de 0.25 mg / ml. Se tomaron 5 L y se
inyectaron al cromatografo.
Solucin estndar se prepar una solucin metanlica conteniendo 0.25 mg / ml del estndar interno y 0.5 mg / ml del estndar de
desmetilgriseofulvina. Se inyectaron 5 L al comatograma.
Fase estacionaria: slica
Fase mvil: heptano en bomba A
metanol en bomba B
a) Calcular la concentracin de desmetilgriseofulvina por ml de orina.
b) Calcular cantidad total del metabolito en 200 ml de orina.
c) En qu consiste el sistema cromatogrfico de gradiente?
Resolver por altura de picos.
Primer cromatograma: A 12.2 cm.
B 13.8 cm

Segundo cromatograma: A 13.8 cm.


B 15 cm.
C 4.2 cm.

A estndar interno.
B metabolito (desmetilgriseofulvina).
C griseofulvina.
a)
0.5 mg / ml x (1000 g / 1 mg) x (1 ml / 1000 L) = 0.5 g / L
0.5 g / L x 5 L = 2.5 g
g ------------ 13.8 cm
x ------------ 15 cm

x = 2.72 g

2.72 g / 3 ml = 0.906 g / ml
b)
0.906 g ------------ 1 ml
x
----------- 200 ml

x = 181.33 g / 200 ml orina

c)
Aquel en el cual la fase mvil cambia de composicin y de proporcin; desde 100 % de A y 0 % de B hasta 0 % de A y 100 % de B. Se
necesitan 2 bombas necesariamente.
Ejercicio:
tR
1=3
2=5
3=8
4 = 10.5
5 =14
6 = 18

W
1 = 0.5
2 = 0.5
3 = 0.7
4 = 0.8
5 = 1.1
6 = 1.4

Calcular N para 3, 4 y 5.
N = 16 (8 / 0.7)2 = 2089.79
N = 16 (10.5 / 0.8)2 = 2756.25
N = 16 (14 / 1.1)2= 2591.73
Calcular la resolucin entre 3, 4 y 4, 5.
Rs = 2 (10.5 8 ) / 0.8 + 0.7 = 3.33
Rs = 2 (14 10.5) / 1.1 + 0.8 = 3.88
Ambas presentan una resolucin excelente por ser arriba de 1.5

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Segundo estndar 4 y 5 50 g / ml ---------- 30 L


4= rea bajo la curva 13.2 --------- 1.5 g
5= rea bajo la curva 12.8 --------- 1.5 g
X = 4 = 11.8
Y = 5 = 12.1
Qu cantidad hay del compuesto X y qu cantidad hay de Y?
(50 g / ml) x ( 1 ml / 1000 L) x 30 L = 1.5 g del compuesto 4.
1.5 g ----------- 13.2
x
----------- 11.8

x = 1.340 g

1.5 g ----------- 12.8


x ----------- 12.1

x = 1.42 g

Ejercicio: se valor clorhidrato de tiamina (que fluoresce) P.M. 337.27 g / mol. Contenido en tabletas disolviendo el equivalente del peso
medio en 200 ml de HCl 0.2 N.
Se filtr la solucin y se tom 1 ml, se llev a un aforo de 50, se tom 1 ml y se afor a 25 ml. Se prepar el estndar de clorhidrato de
tiamina a 0.23 g / ml. En 2 tubos marcados como estndar y problema se colocaron 5 ml, 3 ml de agente oxidante (ferricianuro de
potasio) y despus se le adicionaron 20 ml de alcohol isobutlico. Se agita la muestra y se mide fluorescencia en capa orgnica en
celdilla de 1 cm.
Lecturas STD 0.980 UF
Problema 0.93 UF

Blanco STD 0.005 UF


Blanco Problema 0.035 UF

STD 0.980 0.005 = 0.975


Problema 0.93 0.035 = 0.895
0.975 --------- 0.23 g / ml
0.895 --------x

x = 0.2111 g / ml

0.2111 g / ml x (5 ml) = 1.0556 g


1.0556 g ----------- 5 ml
x
---------- 25 ml

x = 5.278 g

5.278 g ----------- 1 ml
x
----------- 50 ml

x = 263.9 g

263.9 g ----------- 1 ml
x
----------- 200 ml

x = 52780 g / tableta 52.75 mg / tableta

Ejercicio: se desea saber que cantidad de pesticida hay en una fruta. Cromatografa en placa y fluorescencia. Pesar 0.5 g de fruta, lavar
para disolver pesticida, el solvente del lavado se lleva a sequedad, el soluto que queda se redisuelve en 1 ml de solvente. Del ml se
toman 100 L se colocan en placa cromatogrfica, se corre la muestra y lo que hay en la mancha se redisuelve en 100 ml de etanol. Se
lleva al fluormetro con 47.5 UF y un blanco lee 3 UF. Un estndar de 5 g de pesticida bajo las mismas condiciones da una lectura de
87 UF.
Calcule cantidad de pesticida por p.p.m.
5 g / 1 ml x ( 1 ml / 1000 L) x (100 L) = 0.5 g
0.5 g ---------- 87
x
--------- 44.5

x = 0.255 g

0.255 g x 10 = 2.55 g
2.55 g --------- 0.5 g
x
-------- 1 g

x = 5.1 g / g 5.1 p.p.m.

Ejercicio: determinar selenio en una muestra e leche. Se toma leche en polvo 755.4 mg leche se diluyen 10 ml (Sol. A). Se le adiciona a
la solucin 2, 3-diaminonaftaleno para formar complejo fluorescente; da 27.8 UF.

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1 ml de solucin estndar de selenio cuya concentracin es de 0.5 g / ml se diluyeron en 10 ml (Sol. B). Se le adicion 2, 3diaminonaftaleno y se form el complejo fluorescente. Da una lectura de 66.4 UF.
Calcule contenido de selenio por cada 100 g de leche.
0.5 g --------- 66.4
x
--------- 27.8

x = 0.2093 g

0.2093 g --------- 0.7554 g leche


x
--------- 100 g
x = 27.71 g / 100 g leche
Ejercicio: la concentracin de quinina se determin en una muestra de orina, se coloca muestra de 2 ml en tubo de centrifuga se ajusta
pH entre 9 y 10, se extrajo muestra con 10 ml de cloroformo.
Al extracto cloroformico se le adicionaron 2 ml de cido sulfrico 0.1 N. Se separ capa cida leda en espectrofluormetro dando lectura
de 0.35 UF.
Se corri curva estndar de quinina en:
g / ml
X

UF
Y

0.5

r2 = 0.9703
b = 0.1667
m = 2.9462

0.2
0.4
0.8

0.1
0.2

0.4

1.6
2.4

0.8

Cul es la concentracin de quinina en la orina?


0.35 UF ----------- 0.062 g / ml
(0.062 g / ml) x 2 ml = 0.124 g
0.124 g ---------- 2 ml de orina
x
---------- 1 ml

x = 0.062 g

REFRACTOMETRIA
Es una medicin en forma de luz. Su base es en el fenmeno de refraccin donde se mide el ngulo que se forma debido a la refraccin
de la luz al hacer incidir un rayo de luz y pasar de un medio a otro medio.
El ndice de refraccin sirve para:
-

Pureza.
Identidad.

ISOTROPICAS: un nico ngulo.


ANISOTROPICAS: ms de un ngulo.
Es una propiedad intensiva del sistema. El ndice de refraccin experimental est influenciado por la temperatura, pH; es til para
aceites esenciales, joyera y perfumes.
POLARIMETRIA
Saber si la sustancia tiene molcula dextro o levo rotatoria, se discrimina a los enantimeros. Se fundamenta en rayo de luz polarizado
que incide en muestra.
La luz se comporta como onda o como partcula, generando en un plano campo elctrico y en plano perpendicular un campo magntico.
Se alinea a la luz en un plano nicamente. Se polariza a la luz en un solo plano con los polarizadores existentes como los prismas y
polarizador donde se busca un ngulo para poder medir.
Las mezclas racmicas estn formadas en un 50 % por molculas dextro y en otro 50 % por molculas levo; estas mezclas no
desvan la luz.

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