UNIVERSIDAD DE LA SABANA

FACULTAD DE INGENIERA
LABORATORIO DE QUIMICA III
PRCTICA No. X
CROMATOGRAFA EN COLUMNA
1.

OBJETIVOS
a) Conocer la tcnica de cromatografa en columna.
b) Realizar la separacin de dos o ms metabolitos utilizando la tcnica de
cromatografa en columna.
c) Verificar el nivel de pureza y separacin de dichos metabolitos, con
ayuda de la cromatografa en capa fina.

2.

ANTECEDENTES O MARCO TERICO

a) Cromatografa en Columna. Diferentes tipos de Cromatografa en

Columna. Ejemplos.
b) Cromatografa lquida de alta eficiencia (HPLC).
c) Cromatografa de gases (CG).
d) Caractersticas de fases estacionarias slidas y lquidas utilizadas en los
diferentes tipos de cromatografa en columna.
3.

MATERIALES Y REACTIVOS
Materiales por cada grupo:
- Slica para Cromatografa en Columna.
- Columna de vidrio para CC.
- Pipeta Pasteur.
- Probeta de 10 ml
- 2 Vasos de precipitados de 50 ml
- Agitador de vidrio
- 10 tubos de ensayo (para la recoleccin de las fracciones)
- Cromatoplacas de gel de slice de 0,2 mm
- Cmara de desarrollo
- Capilares de vidrio
Reactivos/disolventes:
- Cloroformo
- Metanol

- ter de Petrleo
- Acetona
- Tolueno
- Acetato de etilo
- SOLVENTE O FASE MVIL ESCOGIDO POR CADA GRUPO
SEGN LA CCF

4.

PROCEDIMIENTO:
Preparacin de la Columna:
Para rellenar la columna de vidrio con la fase estacionaria, tomar un
vaso de 50 ml con la slica asignada y preparar una suspensin de la
slica en la fase mvil a utilizar. Dicha fase mvil debe corresponder al
solvente o mezcla de solventes que present mejor separacin en
cromatografa en capa delgada.
Agregar la suspensin de la fase estacionaria lentamente dentro de la
columna de vidrio, evitando la formacin de burbujas.
NOTA: Al agregar la suspensin de slica en la columna de vidrio, el
solvente saldr por la parte de abajo de la columna, por tal razn es
importante mantener siempre la columna con solvente en la parte superior
para evitar que se seque la slica utilizada como fase estacionaria.
Suspensin

Solvente

Slica

Aplicacin de la muestra:
La aplicacin de la muestra de pigmentos debe realizarse en solucin, para
lo cual es necesario haber disuelto previamente dicha muestra en la menor
cantidad de solvente (el solvente para disolver la muestra debe ser el
mismo que se utiliz para preparar la suspensin de slica).
NOTA: Para poder aplicar dicha solucin de metabolitos, es necesario dejar
que el nivel de solvente o fase mvil en la columna llegue al nivel de la slica,
es decir, casi apunto de secarse la columna.
Con ayuda de la pipeta Pasteur, depositar lentamente la muestra de
metabolitos disueltos, por la parte superior de la columna. Una vez
terminada esta operacin, hay que dejar que toda la muestra aplicada
llegue al nivel de la slica antes de agregar nuevamente solvente.

Nivel de solvente

Muestra de
extracto

Nivel de
solvente

Slica

Desarrollo de la Columna:
Una vez aplicada la muestra de metabolitos sobre la columna, agregar
nuevamente solvente y mantener constante su nivel sobre la slica en la
columna, evitando que se seque la columna.
Los metabolitos comenzarn a separarse a lo largo de la columna, saliendo
de ella en el mismo orden de elusin que se observ en la cromatografa en
capa delgada, por tanto se deben recoger en diferentes fracciones
utilizando los tubos de ensayo.
Una vez terminada la columna, realizar un control de pureza y separacin
en cromatografa en capa delgada.

6.

BIBLIOGRAFA.
a) Moore J.A. and Dalrymple D.L. Experimental Methods in Organic
Chemistry. Second Edition, W.B. Saunders Co., Philadelphia, 1976.
b) Brewster R.Q., Vander Werf C.A., Mc Ewen W.E. Curso Prctico de
Qumica Orgnica 2a. Ed. Editorial Alhambra, S.A., Madrid, 1979.
c) Robert R.M., Gilbert J.C. and Rodewald L.B. Modern Experimental
Organic Chemistry. Third Edition, Holt, Rinehart and Winston, N.Y., 1979.