Deteccion Anticuerpos Irregulares

Ministerio de Salud
DOCUMENTOS TCNICOS PARA EL LABORATORIO CLNICO
RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIN

E IDENTIFICACIN DE ANTICUERPOS
IRREGULARES ERITROCITARIOS
DICIEMBRE, 2014
D E PA RTA M E N T O L A B O R AT O R I O B I O M D I C O N A C I O N A L Y D E R E F E R E N C I A
Instituto de
Salud Pblica
RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIN E IDENTIFICACIN

DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS
AUTOR:
TM. Mg. Cs. Andrs Aburto Almonacid.
Encargado rea de Inmunohematologa. Seccin de Hematologa e

Inmunohematologa. Departamento Laboratorio Biomdico Nacional y
de Referencia. Instituto de Salud Pblica de Chile.
REVISORES INSTITUTO DE SALUD PBLICA DE

CHILE:
TM. Mg. Mitzy Celis Morales.
Jefe Seccin Coordinacin de Redes de Laboratorios. Subdepartamento

Coordinacin Externa. Departamento Laboratorio Biomdico Nacional y
de Referencia. Instituto de Salud Pblica de Chile.
Dra. Vernica Ramrez Muoz.
Jefe Subdepartamento Coordinacin Externa. Departamento Laboratorio

Biomdico Nacional y de Referencia. Instituto de Salud Pblica de
Chile.
REVISORES EXTERNOS:
TM. Mg. Cs. Leonor Armanet Bernales.
Directora Escuela de Tecnologa Mdica. Universidad de Chile.
TM. Mg. Ped. Univ. Hugo Henrquez Bello.
Director Docente Escuela de Tecnologa Mdica. Universidad Mayor.
TM. Guillermo Herrera Calderon.
TM. Banco de Sangre Hospital Clnico de la Universidad Catlica de

Chile.
Dr. Federico Liendo Palma.
Jefe UMT/Banco de Sangre. Complejo Asistencial Barros Luco Trudeau.
Dra. Mara Cristina Martnez Valenzuela.

Directora Centro de Sangre Concepcin.
TM. Ramn Schifferli Salazar.
TM. Encargado de Calificacin Microbiolgica e Inmunohematolgica.

Centro de Sangre y Tejidos de Valparaso.
TM. Carolina Villalobos Urbina.
Jefe de Centro y Encargada de Calidad UMT/Banco de Sangre.

Complejo Asistencial Barros Luco Trudeau.
RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIN E

IDENTIFICACIN DE ANTICUERPOS IRREGULARES
ERITROCITARIOS
RESUMEN
Este documento presenta recomendaciones
para el procedimiento de deteccin e identificacin de anticuerpos irregulares, y est dirigido
a los Centros de Sangre, Unidades de Medicina
Transfusional, Bancos de Sangre y Laboratorios
Clnicos. Para su elaboracin se recogieron las
opiniones y sugerencias de los participantes del X
Taller Nacional para Centros de Sangre y Unidades
de Medicina Transfusional, realizado en mayo de
2013 en el Instituto de Salud Pblica de Chile, y
ha sido consensuado con el Comit de Expertos
PEEC del rea de Inmunohematologa.
Este documento entrega las directrices para la
realizacin de una correcta deteccin e identificacin de anticuerpos irregulares, a fin de contribuir
en asegurar la calidad de estos estudios inmunohematolgicos en cada institucin.
OBJETIVO
El objetivo de estas recomendaciones es disponer de una metodologa para la deteccin e identificacin de anticuerpos irregulares contra antgenos eritrocitarios que contribuya a la obtencin de
resultados confiables y reproducibles.
ALCANCE
Estas recomendaciones aplican a los Centros
de Sangre, Unidades de Medicina Transfusional,
Bancos de Sangre y Laboratorios Clnicos que
realizan deteccin con o sin identificacin de an-
ticuerpos irregulares eritrocitarios en la sangre de

donantes, pacientes y embarazadas.
INTRODUCCIN
Los anticuerpos irregulares corresponden a
aquellos anticuerpos distintos a los anticuerpos naturales del sistema ABO, que pueden aparecer en
respuesta a la exposicin a un antgeno eritrocitario
extrao (transfusin o trasplante), por incompatibilidad materno-fetal o sin un estmulo identificable. En algunos casos, su presencia se asocia a la
exposicin a antgenos ambientales, bacterianos
o virales de caractersticas bioqumicas similares
a los antgenos eritrocitarios. En nuestro pas, los
anticuerpos irregulares ms frecuentemente encontrados en donantes de sangre son: anti-Lea, anti-K y
anti-E, mientras que en pacientes son: anti-D, anti-E
y anti-K. Todos estos anticuerpos son capaces de
provocar hemlisis in vivo y acortamiento en la sobrevida normal de los glbulos rojos (Anexo 1).
La heterogeneidad de los anticuerpos, en cuanto
a su tipo, clase de inmunoglobulina, temperatura de
reaccin, tipo de hemlisis asociada, su capacidad
de activar complemento, entre otras caractersticas,
hacen que la pesquisa e identificacin de ellos, deba
hacerse de una manera estandarizada y controlada.
La deteccin e identificacin de anticuerpos irregulares habitualmente se realiza mediante tcnicas
de aglutinacin en tubo, en columna o en microplaca, con etapas a temperatura ambiente, 37C y
antiglobulina humana. En algunas ocasiones y de
acuerdo a condiciones observadas en cada laboratorio, se puede realizar anlisis a 4C frente a la
Departamento Laboratorio Biomdico Nacional y de Referencia.

Instituto de Salud Pblica de Chile.

sospecha de crioaglutininas.
Cuando se detecta la presencia de un aloanticuerpo, se debe determinar su especificidad mediante la identificacin y la consiguiente deduccin
de su significado clnico, empleando un enfoque
sistemtico descrito en el algoritmo (Anexo 2).
dores de reaccin (suero antiglobulina humana

poliespecfico y solucin LISS), que permiten
determinar la especificidad de anticuerpos nicos o algunas mezclas de anticuerpos.
DESARROLLO
DEFINICIONES Y ABREVIACIONES
a) Abreviaciones:

ACD: cido ctrico, citrato, dextrosa.
CE: Comunidad Europea
CI: Centrifugacin Inmediata
EDTA: cido Etilendiaminotetraactico.
FDA: Food and Drug Administration
GR: Glbulos Rojos
LISS: Solucin de Baja Fuerza Inica
NISS: Solucin Salina de fuerza inica normal
PA: Prueba Autloga
PBS: buffer fosfato salino pH 6.9 a 7.2
SAGH: Suero Antiglobulina Humana
TAD: Test Antiglobulina Humana Directa
TAI: Test Antiglobulina Humana Indirecta
b) Definicin de conceptos
- Aloanticuerpo: anticuerpo producido en un
individuo que est dirigido contra antgenos
eritrocitarios que l carece, presentes en otro
individuo de su misma especie.
- Autoanticuerpo: anticuerpo producido en un
individuo que est dirigido contra antgenos
que expresan sus propios eritrocitos.
I. DETECCIN DE ANTICUERPOS IRREGULARES

a) Muestras
Suero o plasma obtenido a partir de sangre total
sin o con anticoagulante (EDTA, ACD), respectivamente, de acuerdo a las especificaciones del fabricante del mtodo o reactivo que utiliza. El uso de
plasma podra impedir la deteccin de anticuerpos
irregulares que se revelan solamente por la presencia de complemento adherido a los eritrocitos. Para
estudios automatizados se requiere plasma y en tests
manuales es deseable el uso de suero. Las muestras
para estudio deben ser almacenadas a 4C y las pruebas deben ser realizadas en el menor tiempo posible,
no excediendo las 72 horas desde su obtencin.
b) Reactivos
- Clulas Panel para deteccin de anticuerpos
irregulares: sets comerciales de 2 o 3 frascos
y en concentracin adecuada para cada tipo
de tcnica. Ej. Tubo: 2-4%, Columna: 0,81%. Ests clulas deben tener certificacin de
fabricacin ISO 13485 o estar aprobadas por
organismos (FDA, CE), sobre su capacidad de
detectar anticuerpos clnicamente significativos, debiendo expresar al menos los siguientes
antgenos: D, C, E, c, e, M, N, S, s, P1, Lea, Leb,
K, k, Fya, Fyb, Jka y Jkb. El laboratorio debiese
disponer de reactivos con expresiones homocigotas para los antgenos D, C, E, S, s, Fya,
Fyb, Jka y Jkc .
-
- Identificacin bsica de anticuerpos irregulares: procedimiento del laboratorio de inmunohematologa que permite identificar la es-
pecificidad de la mayora de los anticuerpos
eritrocitarios de importancia clnica, detectados
en el TAI. Involucra el uso de clulas panel de
identificacin bsico y tcnicas con potencia-

En los sets de dos clulas, uno de los frascos

debe ser R1/R1 y el otro R2/R2, en los sets de
tres clulas, el tercero debe ser r/r.
Suero Antiglobulina Humana: tipo poliespecfico, apropiado para cada tipo de tcnica (incorporado en los sistemas de aglutinacin en columna o en presentaciones para su utilizacin
en tubos).

LISS: de acuerdo a la estandarizacin del reac- d) Procedimiento

tivo o a las recomendaciones del fabricante 1.- Identificar las muestras a estudiar y centri(incorporado en los sistemas de aglutinacin
fugarlas de acuerdo al tiempo estandarizaen columna o en presentaciones para su utilido en la centrfuga, para obtener suero o
zacin en tubos).
plasma.
- Suero AB inerte: plasma convertido en suero y 2.- Verificar que los reactivos estn vigentes y
calentado a 56C por 1 hora.
que tanto reactivos como equipos cumplan
con los parmetros definidos en el control
- Suero fisiolgico tamponado, PBS o solucin
de calidad del laboratorio de inmunohematodiluyente recomendada para la tcnica utilizada.
loga. Las clulas panel deben utilizarse a la
concentracin definida por el fabricante para
c) Tcnicas
realizar la tcnica.
Los mtodos de deteccin disponible son: hemaglutinacin en tubo, adhesin de eritrocitos en fase 3.- Para cada muestra a procesar se deben realizar
en forma independiente las siguientes reaccioslida (microplaca) y hemaglutinacin en columnas.
nes, utilizando volmenes de suero o plasma y
En los dos ltimos mtodos se dispone de sistemas
suspensin de glbulos rojos de acuerdo a la
semiautomatizados y automatizados, a diferencia del
tcnica empleada: ver tabla 1.
mtodo en tubo que corresponde a una tcnica manual.
-
Tabla 1
TUBO,
COLUMNA O
MICROPLACA
SUERO O PLASMA
GLBULOS ROJOS
UTILIDAD
Reaccin I
Muestra en estudio
Panel I (R1/R1), en concentracin

adecuada a la tcnica usada
Deteccin de anticuerpos irregulares

dirigidos hacia antgenos presentes en
el Panel I
Reaccin II
Muestra en estudio
Panel II (R2/R2) en concentracin


el Panel II
Reaccin III
Muestra en estudio
Panel III (r/r) en concentracin


el Panel III (opcional)
PA
Muestra en estudio
Muestra en estudio en
concentracin adecuada a la
tcnica usada
Determinacin de presencia de alo y/o

autoanticuerpo


4.- Mezclar y centrifugar de acuerdo a la calibra- -

cin para lectura de aglutinacin de la centrfuga, o a los tiempos y revoluciones establecidas
por el inserto de la tcnica utilizada.
5.- Observar en busca de aglutinacin y/o hemlisis, de acuerdo a la tcnica de lectura automatizada que recomiende el fabricante o tecnica
estandarizada en el laboratorio.
6.- Registrar los resultados obtenidos en intensi- -

dad de cruces, de acuerdo a la tabla de reaccin del Anexo 3.
7.- Dependiendo de la tcnica utilizada, el procedimiento debe asegurar que se cumplan las distintas etapas de lectura propias de la tcnica:
-
Tubo: Se recomienda realizar en medio de

LISS-Coombs por su mayor sensibilidad que
el medio NISS. La lectura se puede realizar en
tres etapas, permitiendo diferenciar anticuerpos
que actan en salino a temperatura ambiente,
en salino a 37C y con SAGH, permitiendo inferir la clase de inmunoglobulina (IgM y/o IgG)
y la temperatura ptima a la cual son activas.
Aglutinacin en columna: la lectura se

realiza en una etapa, permitiendo detectar principalmente los anticuerpos clnicamente significativos, pero no estableciendo la clase de
inmunoglobulina y la temperatura ptima a la
cual son activas. Tambin es posible detectar
anticuerpos de clase IgM que presentan amplio
rango trmico.
Adhesin de eritrocitos en fase slida:
uno de los componentes de la reaccin antgeno-anticuerpo es inmovilizado en pocillo (fase
slida) a la que se adiciona antgeno/anticuerpo libre (muestra) y el punto final de la reaccin
se evidencia por la adicin de eritrocitos que
pueden ser parte de la reaccin antgeno-anticuerpo o se pueden usar como clulas indicadoras.
e) Interpretacin
Ejemplos de reacciones que pueden observarse
en deteccin de anticuerpos irregulares y su complemento con otras metodologas se muestran en la
siguiente tabla: ver tabla 2.
Tabla 2
REACCIN
PANEL I
REACCIN
PANEL II
PA
TAD
RESULTADO DE
DETECCIN DE
ANTICUERPOS
INTERPRETACIN
Positivo
Aloanticuerpo
Positivo
Aloanticuerpo
Positivo
Aloanticuerpo
Negativo
Ausencia de Anticuerpos
+/0
Positivo
Autoanticuerpo + Aloanticuerpo
+/0
Positivo
Autoanticuerpo/Crioaglutinina
0 = No hay reaccin de aglutinacin

+ = Aglutinacin de cualquier intensidad (4+, 3+, 2+, 1+)

f) Informe de resultados
La denominacin recomendada para el informe
del resultado de este estudio es:
DETECCIN DE ANTICUERPOS
IRREGULARES: POSITIVO; NEGATIVO
(segn corresponda al paciente o donante estudiado).

En caso de ser positivo, se recomienda registrar
las alternativas posibles de especificidades de los
anticuerpos detectados de acuerdo al panel utilizado. Se adjunta en Anexo 4, propuesta de registro de
resultados.
II. IDENTIFICACIN BSICA DE ANTICUERPOS IRREGULARES
a) Muestras
La identificacin de anticuerpos irregulares debe
realizarse con muestras sanguneas con las mismas
caractersticas definidas en este documento para la
Deteccin de Anticuerpos Irregulares, en su punto I.a).
Para el estudio de mezclas de anticuerpos complejos
o mltiples, es fundamental disponer necesariamente
de los glbulos rojos de la muestra para realizar estudios de fenotipificacin, autocontrol o TAD.
La solicitud de examen que acompaa a la muestra debe incluir al menos la identificacin completa del paciente (nombre con dos apellidos), fecha,
procedencia, edad, sexo, pertenencia a alguna etnia, historial mdico con especial nfasis en historia transfusional reciente, embarazos, patologas
asociadas, consumo de algn medicamento, etc., lo
que ser de utilidad en el proceso de identificacin
de anticuerpos e interpretacin de resultados.
b) Reactivos
- Clulas Panel para identificacin de anticuerpos irregulares: El panel bsico de identificacin generalmente presenta entre 8 a 11
frascos de clulas con diferentes especificidades antignicas. Existen estos paneles de
clulas en presentaciones de hasta 16 tipos
de glbulos rojos de distintos donantes. La

eleccin del tipo de panel debe ser realizada en base a las caractersticas del laboratorio, el tipo de pacientes que atiende y las
estadsticas de los casos estudiados en el
curso de un ao, es deseable que el laboratorio construya tablas con la prevalencia de
las especificidades identificadas durante el
ao. El panel debe permitir que se identifiquen claramente las especificidades de los
aloanticuerpos ms prevalentes en la poblacin y de mayor importancia clnica (Anexo
1). Debe verificarse y considerarse las siguientes caractersticas bsicas del panel de
identificacin:
a) Presentar especificidades para los siguientes antgenos: D, C, E, c, e, M, N, S, s, P1,
Lea, Leb, K, k, Fya, Fyb, Jka y Jkb.
b) Poseer al menos dos clulas panel que
presenten y dos clulas panel que carezcan de los antgenos sealados en el punto
anterior. En la tabla de trabajo (Anexo 5)
se puede observar que los antgenos e y k
no cumplen esta regla, por lo que se debe
incorporar al anlisis, las clulas del panel
de deteccin de anticuerpos irregulares,
logrando as cumplir esta regla.
c) Disponer de clulas con doble dosis (homocigotas) especialmente de los antgenos Jka,
Jkb, S, s, Fya, y Fyb, ya que estos antgenos se
expresan ms dbilmente cuando los genes
involucrados estn en forma heterocigota.
d) Poseer clulas rr (cde/cde) en el panel y
que entre ellas expresen los antgenos K,
Fya, Fyb, Jka, Jkb, M, S, s, de preferencia
al estado homocigoto, de manera de poder evidenciar la presencia de ellos junto
al anti-D, dada la frecuencia de este anticuerpo.
e) Verificar que el inserto de especificacin
del reactivo y la tabla de trabajo que vienen con el panel, coincidan con el nmero de lote del reactivo. Este punto es muy
importante al momento de querer interpretar los resultados.


f) Las clulas panel no deben utilizarse ms d) Procedimiento

all de la fecha de expiracin indicada por 1.- Rotular la muestra a investigar y centrifugarla
el fabricante.
de acuerdo al tiempo estandarizado en la centrfuga para obtener suero o plasma.
g) Cada laboratorio de acuerdo a su realidad
(frecuencia de anticuerpos irregulares, ca- 2.- Verificar que los reactivos estn vigentes y que
ractersticas tnicas de la poblacin que
tanto reactivos como equipos cumplan con los
atiende, entre otras), debe definir al moparmetros definidos en el control de calidad del
mento de su compra, caractersticas espelaboratorio de inmunohematologa. Las clulas
ciales del panel a utilizar.
panel deben utilizarse a la concentracin definida
para la tcnica a realizar en el inserto del fabricante.
- Suero Antiglobulina Humana: Ver punto Ib) de
Deteccin de anticuerpos irregulares.
3.- Verificar que la hoja de trabajo del panel de
identificacin est disponible y su nmero de
- LISS: de acuerdo a la estandarizacin del reaclote corresponde al del reactivo que se utilizar.
tivo o a las recomendaciones del fabricante, en
caso de ser usado para esta metodologa (in- 4.- Para cada muestra a procesar, se deben efectuar
corporado en los sistemas de aglutinacin en
tantas reacciones de acuerdo al nmero de clulas
columna o en presentaciones para su utilizapanel bsico utilizado en el laboratorio: ver tabla 3.
cin en tubos).
5.- Mezclar y centrifugar de acuerdo a la calibracin
- Suero fisiolgico tamponado, PBS o solude la centrfuga para lectura, o a los tiempos y
cin diluyente recomendada para la tcnica
revoluciones establecidas por el fabricante.
utilizada.
6.- Observar en busca de aglutinacin y/o hemlisis, de acuerdo a la tcnica de lectura automac) Tcnicas
tizada o manual que recomiende el fabricante.
Existen tcnicas manuales, semiautomatizadas y 7.- Registrar los resultados obtenidos en intensidad de
automatizadas, en tubo, columna y microplaca.
cruces, de acuerdo a la tabla de reaccin del Anexo 3.
Tabla 3
TUBO,
COLUMNA O
MICROPLACA
SUERO O PLASMA
GLBULOS ROJOS
Reaccin 1
Muestra en estudio
Panel 1 en concentracin adecuada

a la tcnica usada
Detectar reaccin de acuerdo al

fenotipo del Panel 1
Reaccin 2
Muestra en estudio

a la tcnica usada

Reaccin 3
Muestra en estudio

a la tcnica usada

Reaccin n*
Muestra en estudio
Panel n en concentracin

fenotipo del Panel n
PA
Muestra en estudio
Muestra en estudio en
concentracin adecuada a la
tcnica usada
Determinacin de presencia de alo y/o

autoanticuerpo
*n: nmero de clulas del panel utilizadas en la identificacin.

UTILIDAD

8.- Dependiendo de la tcnica definida en sus pro- nes sealadas en la tabla de trabajo (Anexo 5). Es
tocolos, debe asegurarse de cumplir con las importante verificar que ella corresponda al lote de
distintas etapas de lectura que se requieren:
panel celular que se haya utilizado. A continuacin
- Tubo: la lectura realizada en las tres etapas, se seala un ejemplo de identificacin bsica de anpuede permitir diferenciar la deteccin de anticuerpos irregulares con especificidad anti-S:
ticuerpos que actan a temperatura ambiente, 1.- Identificar y registrar adecuadamente la intena 37C y con SAGH. Adems, la lectura y el
sidad de cruces para cada clula panel, lo cual
puede orientar a la especificidad del o los antiregistro de las intensidades en cruces puede
orientar a la especificidad de un solo anticuercuerpos en la muestra.
po o a una mezcla de ellos.
2.- Proceda a descartar aquellas especificidades de
- Aglutinacin en columna: la lectura se puede
anticuerpos para las cuales el estudio muestra
realizar en una etapa, permitiendo detectar los anun resultado negativo (descarte por reacciones
ticuerpos clnicamente significativos, pero no pernegativas) con clulas de expresin homocigomite establecer la clase y la temperatura a la cual
ta. En la figura se deben analizar las clulas 1,
ellos son activos. El anlisis de las intensidades
3, 8, 10 y 11. La clula 1 permite descartar las
en cruces puede orientar a la especificidad de un
especificidades D, C, e, M, s, k, P1, Leb y Jkb
solo anticuerpo o a una mezcla de ellos.
(tachado azul); la clula 3 permite descartar las
especificidades E, c, N, Lea, Fyb (tachado rojo);
la clula 8 no descarta especificidades adicioe.- Interpretacin
nales; la clula 10 descarta la especificidad Jka
(tachado verde); la clula 11 descarta la espeLa asignacin de la identificacin de anticuerpos
cificidad Fya (tachado negro). Este anlisis no
irregulares, debe realizarse a travs de la interpretapermiti excluir las especificidades S y K.
cin del registro de los resultados de las reaccio-
Cel
Rh
MNS
Kell
Lewis
Duffy
Kidd
P1
Lea
Leb
Fya
Fyb
Jka
Jkb
1 R1R1
2 R1R1
3 R2R2
4 rr
5 rr
6 rr
7 rr
8 R0r
9 rr
10 rr
11 R1R1
PA
Cel
Resultado
TA
37C
AHG
CC
2+
2+
2+
2+
2+
2+
10
11
PA


Cel
Rh
MNS
Kell
Lewis
Duffy
Kidd
P1
Lea
Leb
Fya
Fyb
Jka
Jkb
1 R1R1
2 R1R1
3 R2R2
4 rr
5 rr
6 rr
7 rr
8 R0r
9 rr
10 rr
11 R1R1
PA
Cel
Resultado
TA
37C
AHG
CC
2+
2+
2+
2+
2+
2+
10
11
PA
3.- Proceda a comparar el patrn de reacciones Aspectos a considerar en la identificacin

(positivas y negativas) de su columna de re- de anticuerpos
sultados con las columnas para la especifici- El suero o plasma del paciente debe ser anadad S y K. El patrn de reaccin en esta etapa
lizado por la misma tcnica que se us en la
permite descartar la especificidad K, ya que la
deteccin del anticuerpo. La inclusin de glclula 10 positiva para Kell presenta reaccin
bulos rojos del paciente puede ser til en el renegativa.
conocimiento de anticuerpos dirigidos contra
antgenos de alta frecuencia o la presencia de
4.- La especificidad probable del anticuerpo es
autoanticuerpos.
anti-S, lo cual se debe demostrar por la ausencia del antgeno S en el fenotipo de los La especificidad del anticuerpo slo se debe
globulos rojos.
asignar cuando es reactivo con al menos dos
clulas panel que tienen el antgeno y no reac5.- Cuando no es posible identificar los antitivo con al menos dos clulas panel que carecuerpos en una muestra a travs del panel
cen del antgeno. Siempre que sea posible, la
bsico, se deben utilizar tcnicas adicionapresencia de anti-Jka, -Jkb,-S, -s, -Fya, y Fyb
les (fenotipo eritrocitario, panel enzimtico,
debe excluirse usando clulas que tengan exelucin-adsorcin) o derivar a laboratorio
presiones homocigotas del antgeno relevante.
de Referencia para completar estudio.
Se debe utilizar un suero control anti-D dbil
( 0,1 UI / ml) para asegurar la eficacia del prof.- Informe de resultados
cedimiento, incluyendo la expresin antignica
La denominacin recomendada es:
sobre clulas panel.
IDENTIFICACIN DE ANTICUERPOS IRRE- Cuando una especificidad de anticuerpos ha
GULARES: anti-D, anti-K, anti-Fyb
sido identificada, es esencial que la presencia
(segn corresponda al paciente o donante estudiado).
de otros anticuerpos clnicamente significativos
10


no sean omitidos. Anticuerpos mltiples slo se b) Control de calidad de cada nuevo lote
pueden confirmar por la eleccin de las clulas
de reactivos: corresponde a la verificacin
panel negativas para la especificidad reconocipara asegurar la conformidad con los criterios
da, pero positivas para otros antgenos capaces
utilizados. Cualquier reactivo que no cumpla
de producir anticuerpos clnicamente significacon las especificacin requeridas para los test,
tivos. El conocimiento de los fenotipos del pano se debe utilizar.
ciente puede ayudar en la seleccin de clulas
Tomar al azar uno o dos frascos de reacpara el proceso de identificacin y exclusin.
tivos a verificar del nuevo lote como m Cuando se ha identificado un anticuerpo, los
nimo y examinarlos por inspeccin visual,
glbulos rojos del paciente deben ser fenotipaen cuanto a corroborar que el volumen y la
dos para establecer la ausencia del antgeno (s)
etiqueta sealan aspectos especficos del
correspondiente a la especificidad de los anreactivo, N de lote y fecha de vencimiento
ticuerpos identificados. Se deben utilizar concon un plazo adecuado a las necesidades
troles apropiados, es decir, antgeno positivo
del servicio. Adems verificar presencia
(heterocigoto) y antgeno negativo.
del inserto que especifica caractersticas,
modo de uso y control de calidad.
III. CONTROL DE CALIDAD

a) Control de Calidad Interno:
Seguir los procedimientos de control de calidad
recomendados por los fabricantes de reactivos y equipos. Cada laboratorio debe realizar control de calidad.
Control negativo: utilizar un suero AB inerte estandarizado, como muestra en estudio.
Debe dar un resultado negativo.
Control positivo: utilizar un suero con anticuerpos irregulares de clase IgG, como
muestra en estudio. Debe presentar una
intensidad de reaccin de 2+ (anti-D dbil
( 0,1 UI / ml)) con alguno de los glbulos rojos utilizados en el test. Este reactivo
control debe ser de origen humano y estandarizado por el encargado de calidad del
laboratorio.
Evaluar en el laboratorio de Inmunohematologa sus caractersticas en cuanto

a actividad, especificidad, sensibilidad y
potencia, segn corresponda. Si estos reactivos han sido evaluados por una
entidad de referencia, deben solicitarse los
resultados y verificar la coherencia con el
N de lote, marca y fecha de vencimiento
del reactivo en uso.
Los paneles de identificacin deben presentar para los anticuerpos simples por lo
menos dos tipos de clulas positivas y tres
negativas, o una positiva y siete negativas
para permitir identificar con un valor de p
de 0,05.
Se recomienda controlar al azar una o dos
expresiones antignicas heterocigotas (fenotipar) de las clulas de deteccin e identificacin.
Control de lavado o Clulas Control c) Con cada nueva tcnica o tecnologa:

adems de probar los reactivos como se descriCoombs (se usa slo en tcnicas en tubo
ben anteriormente, es conveniente realizar junto
y cuando el resultado de la deteccin en
a este nuevo mtodo, si es posible, en paralelo
la etapa AGH es negativa): corresponde a
con el mtodo que se estaba usando, de acuerGR sensibilizados con cantidades bajas de
do al protocolo de verificacin implementado en
IgG, de manera que ellos son capaces de
el laboratorio. Incluyendo al menos 10 muestra
revelar el suero AGH que queda libre, en
de sueros con anticuerpos irregulares positivos
aquellos test que muestran un resultado
(almacenadas en serotecas), para evaluar repronegativo. Este reactivo control debe dar un
ducibilidad y concordancia de los resultados.
resultado positivo.

11

Esa semana de prueba puede utilizarse tambin

como etapa de induccin y capacitacin del personal que utilizar la nueva tcnica o tecnologa.
En esta etapa es imprescindible la participacin
del proveedor para la entrega de informacin,
asesora y capacitacin. Esto deber asegurar
que el mtodo es apto para su uso rutinario.
b.- Sensibilidad:
No debe presentar hemlisis o aglutinacin despus de una incubacin con suero fresco inerte y
compatible, como en una prueba de compatibilidad,
usando las siguientes clulas no sensibilizadas: 2
clulas A, 2 clulas B, 2 clulas O.
Se deben obtener reacciones positivas con:
Glbulos rojos RhD positivos (preferiblemente

Especificaciones de los reactivos
R1r) sensibilizadas con un dbil anti-D (0,1 UI/
Suero Antiglobulina humana - poliespecfiml o 20 nanogramos/ml)
co (SAGH)
Glbulos rojos recubiertos con C3b y C3d.
Reacciones negativas se deben obtener
a.- Inspeccin visual
- Etiqueta con el nombre del producto, el n- Con las mismas clulas, pero no sensibilizadas
mero de lote (serie), la fecha de vencimiento,
con anti-D ni complemento.
las condiciones de almacenamiento y el nombre del fabricante o su logo.
- Inserto del producto debe aportar los mis- c.- Potencia:
Obtener el mismo ttulo o ms alto, sin prozomos detalles que los sealados en la etiqueta,
pero explicitando el mtodo recomendado para na, que el obtenido con una solucin de potencia
su uso, los controles de calidad a aplicar, los mnima o un AHG con licencia al da (FDA o CE),
diluyentes recomendados etc., que pueden ser usando glbulos rojos RhD positivos recubiertos
necesarios, adems de cualquier limitacin o con un anti-D de 0,1 UI/ml o 20 nanogramos/ml
advertencias en el uso de ese reactivo. Debe (reaccin de 2+ en SAGH).
Es til tener un pequeo panel de anticuerpos
incluir tambin detalles de la composicin del
reactivo, entregar las advertencias de biosegu- dbiles (1+ a 2+) de especificidad conocida por ej.
anti-Fya adems de un anti-D, para utilizar tanto en
ridad, y aportar detalles para su uso seguro.
Todos los reactivos no-celulares deben estar estudios de especificidad como potencia.
libres de hemlisis, precipitados, partculas o formacin de gel.
Salino
LISS
pH
6.6-6.8
6.6-6.8
Conductividad mS/cm
15-18
3.4-4.0
Osmolaridad mOsmol/kg
12

285-305

Solucin salina de baja fuerza inica (LISS) REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Aspecto; sin turbidez, ni partculas. No hemoli- American Association of Blood Banks. AABB
zar, ni causar aglutinacin de las clulas.
Standards for Blood Bank and Transfusion Services, 25th ed., Bethesda, Maryland, 2008.
Guidelines for the blood transfusion services in
El LISS se puede utilizar de dos maneras: susthe United Kingdom, 7th edition 2005.
pendiendo los glbulos rojos de prueba en LISS
(1,5 - 2%) o agregando un volumen igual de la so- Harmening DM, Modern Blood Banking and
Transfusion Practices, 6th ed., 2012.
lucin de LISS al suero y utilizando glbulos rojos
suspendidos en salino (3%). Las clulas suspendi- Ministerio de Salud de Chile. Orientaciones
das en LISS no se deben conservar ms de 24 horas
para Centros de Sangre y Unidades de Medipara ser usadas.
cina Transfusional, MINSAL, 2007.
b) Control de Calidad Externo:
Los Centros de Sangre, Unidades de Medicina
Transfusional, Bancos de Sangre y Laboratorios
Clnicos del pas que realizan esta determinacin
deben participar en algn programa de evaluacin
externa de la calidad, para que en conjunto con el
control de calidad interno, se asegure la calidad de
la deteccin e identificacin de anticuerpos irregulares eritrocitarios.
Roback JD, editor. AABB Technical Manual,

17th ed., Bethesda, Maryland, 2011.

13

ANEXO 1
Caractersticas de los anticuerpos irregulares de significancia clnica y sus frecuencias en donantes y pacientes en dos Servicios
de Sangre chilenos durante los aos 2011-2013.
Reactividad
Sistema
Sanguneo
Anticuerpo
Asociado a
Frecuencias
Donantes1
n
%
Pacientes2
n
%
Raro
Raro
S
S
S
27
4
4
1
7.9
1.2
1.2
0.3
13
1
10
3.4
0.3
2.6
No
Raro
0.6
0.5
Mayora
Mayora
Mayora
Mayora
Mayora
S
S
S
S
S
S
S
S
S
S
51
5
63
8
15.0
1.5
18.5
2.4
103
12
81
13
5
27.3
3.2
21.4
3.4
1.3
Mayora
Algunos
Mayora
Mayora
Raro
Leve
No
S
1
3
0.3
0.9
1.1
S
S
S
S
S
S
S
S
S
S
S
S
63
18.5
63
16.7
Algunos
Mayora
Mayora
Mayora
Mayora
Mayora
Mayora
0.5
Mayora
Mayora
No
No
Raro
No
83
7
24.4
2.1
42
2
11.1
0.5
Anti-Fya
Anti-Fyb
Mayora
Mayora
S
S
S
S
11
1
3.2
0.3
8
1
2.1
0.3
Kidd
Anti-Jka
Anti-Jkb
Mayora
Mayora
S
S
S
S
1.8
13
3
3.5
0.8
Diego
Anti-Dia
Anti-Di,
Mayora
Mayora
S
S
S
S
Yt
Anti-Yta
Anti-Ytb
Mayora
Mayora
No
No
S
No
Xg
Anti-Xga
Mayora
No
No
Scianna
Anti-Sc1
Anti-Sc2
Mayora
Mayora
No
No
No
No
Dombrock
Anti-Doa
Anti-Dob
Mayora
Mayora
No
No
S
S
Colton
Anti-Coa
Anti-Cob
Mayora
Mayora
S
S
S
S
340
100
378
100
4C
22C
MNS
Anti-M
Anti-N
Anti-S
Anti-s
Anti-U
Mayora
Mayora
Mayora
Mayora
Mayora
P1PK
Anti-P1
Mayora
Mayora
Rh
Anti-D
Anti-C
Anti-E
Anti-c
Anti-e
Algunos
Algunos
Algunos
Algunos
Algunos
Lutheran
Anti-Lua
Anti-Lub
Kell
Anti-K
Anti-k
Anti-Kpa
Anti-Kpb
Anti-Jsa
Anti-Jsb
Lewis
Anti-Lea
Anti-Leb
Duffy
Mayora
Mayora
Mayora
Mayora
Algunos
37C
Algunos
Algunos
Algunos
Algunos
Algunos
Mayora
Mayora
AGH
EHRN
RHT
Raro
Raro
Mayora
Mayora
Mayora
Raro
No
S
S
S
TOTAL
Fuente: Manual Tcnico AABB, 2011 (adaptado)

1 Datos obtenidos sobre un total de 142.812 donantes del Centro Metropolitano de Sangre y Tejidos, Santiago.
2 Datos obtenidos sobre un total de 45.584 pacientes del Hospital Guillermo Grant Benavente, Concepcin.
14


ANEXO 2
Algoritmo para la deteccin e identificacin de anticuerpos irregulares eritrocitarios.

15

ANEXO 3
Intensidades de Reaccin de acuerdo a las distintas tcnicas de aglutinacin.
AGLUTINACIN
TUBO/MICROPLACA
4+
Botn nico. Fondo claro. Sin

clulas libres.
Banda homognea de
aglutinados en la parte
superior de la columna.
La adherencia es fuerte, cubriendo

por completo la monocapa.
3+
Varios aglutinados de gran

tamao. Fondo claro. Sin
clulas libres.
Banda superior de aglutinado

y desplazamiento en la parte
superior de la columna.
El grado de adherencia es
moderado a fuerte, ligera
formacin de clulas en el centro
del pocillo.
2+
Muchos aglutinados de
mediano tamao. Fondo claro.
Sin clulas libres.
Aglutinados pequeos en la
columna y a lo largo de la
columna.
El grado de adherencia es
moderado, botn celular irregular
con agujero.
1+
Numerosos aglutinados
pequeos. Fondo turbio por GR
libres.
Algunos aglutinados
pequeos en la columna.
El grado de adherencia es ligero a

pequeo, botn celular difuso.
+/-
Apenas la aglutinacin es
visible. Fondo turbio por GR
libres.
Escasos aglutinados de
pequeo tamao en la
columna.
No aplica.
Ausencia de aglutinacin
Banda de GR al fondo de la
columna, resto de la columna
sin aglutinados.
No hay adherencia, botn celular

central bien definido.
16
AGLUTINACIN EN
COLUMNA
(GEL Y ESFERAS DE
VIDRIO)
INTENSIDAD
DE
REACCIN

AGLUTINACIN
MICROPLACA
(FASE SLIDA)

ANEXO 4
Elementos bsicos de un registro recomendado para anotar los resultados de la deteccin de anticuerpos irregulares eritrocitarios
Fecha:_______________ Tecnlogo Mdico responsable:_________________
Identificacin
paciente/
donante
Reaccin Panel Reaccin Panel

PA
I (intensidad de II (intensidad de (intensidad de
cruces)
cruces)
cruces)
CI
37C AGH
CI
37C AGH
CI
37C AGH
Resultado
Deteccin de Interpretacin
Posibles
Anticuerpos (Caractersticas especificidades
del o los
involucradas
Anticuerpos)
Ejemplos de
reacciones
Paciente XXXX
Negativo
Ausencia de
anticuerpos
Paciente XXXX
2+
Positivo
Aloanticuerpo
Anti-c; Anti-E;
anti-K..
Paciente XXXX
4+
4+
Positivo
Aloanticuerpo
Anti-D; ..
Paciente XXXX
2+
2+
2+
Positivo
Autoanticuerpo
fro
Paciente n.
Reactivo
Lote
N de serie
Marca
Fecha vencimiento
Panel celular
Columna (soporte)
AGH
LISS
Otro reactivo

17

ANEXO 5
Ejemplo de tabla de trabajo para la identificacin de anticuerpos irregulares.

Cel
Rh
MNS
Lewis
Duffy
Kidd
Cel
P1
Lea
Leb
Fya
Fyb
Jka
Jkb
1 R1R1
2 R1R1
3 R2R2
4 rr
5 rr
6 rr
7 rr
8 R0r
9 rr
10 rr
10
11 R1R1
11
PA
18
Kell

Resultado
TA
PA
37C AHG CC

Deteccion Anticuerpos Irregulares

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DOCUMENTOS TCNICOS PARA EL LABORATORIO CLNICO

RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIN

RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIN E IDENTIFICACIN

Encargado rea de Inmunohematologa. Seccin de Hematologa e

REVISORES INSTITUTO DE SALUD PBLICA DE

Jefe Seccin Coordinacin de Redes de Laboratorios. Subdepartamento

Dra. Vernica Ramrez Muoz.

Jefe Subdepartamento Coordinacin Externa. Departamento Laboratorio

Directora Escuela de Tecnologa Mdica. Universidad de Chile.

TM. Mg. Ped. Univ. Hugo Henrquez Bello.

Director Docente Escuela de Tecnologa Mdica. Universidad Mayor.

TM. Guillermo Herrera Calderon.

TM. Banco de Sangre Hospital Clnico de la Universidad Catlica de

Dr. Federico Liendo Palma.

Jefe UMT/Banco de Sangre. Complejo Asistencial Barros Luco Trudeau.

Dra. Mara Cristina Martnez Valenzuela.

TM. Ramn Schifferli Salazar.

TM. Encargado de Calificacin Microbiolgica e Inmunohematolgica.

TM. Carolina Villalobos Urbina.

Jefe de Centro y Encargada de Calidad UMT/Banco de Sangre.

RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIN E

ticuerpos irregulares eritrocitarios en la sangre de

Departamento Laboratorio Biomdico Nacional y de Referencia.

RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIN E IDENTIFICACIN

dores de reaccin (suero antiglobulina humana

ACD: cido ctrico, citrato, dextrosa.

CE: Comunidad Europea

CI: Centrifugacin Inmediata

EDTA: cido Etilendiaminotetraactico.

FDA: Food and Drug Administration

GR: Glbulos Rojos

LISS: Solucin de Baja Fuerza Inica

NISS: Solucin Salina de fuerza inica normal

PA: Prueba Autloga

PBS: buffer fosfato salino pH 6.9 a 7.2

SAGH: Suero Antiglobulina Humana

TAD: Test Antiglobulina Humana Directa

TAI: Test Antiglobulina Humana Indirecta

I. DETECCIN DE ANTICUERPOS IRREGULARES

Departamento Laboratorio Biomdico Nacional y de Referencia.

En los sets de dos clulas, uno de los frascos

RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIN E IDENTIFICACIN

LISS: de acuerdo a la estandarizacin del reac- d) Procedimiento

Panel I (R1/R1), en concentracin

Deteccin de anticuerpos irregulares

Panel II (R2/R2) en concentracin

Deteccin de anticuerpos irregulares

Panel III (r/r) en concentracin

Deteccin de anticuerpos irregulares

Determinacin de presencia de alo y/o

Departamento Laboratorio Biomdico Nacional y de Referencia.

RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIN E IDENTIFICACIN

4.- Mezclar y centrifugar de acuerdo a la calibra- -

6.- Registrar los resultados obtenidos en intensi- -

Tubo: Se recomienda realizar en medio de

Aglutinacin en columna: la lectura se

0 = No hay reaccin de aglutinacin

Departamento Laboratorio Biomdico Nacional y de Referencia.

(segn corresponda al paciente o donante estudiado).

de glbulos rojos de distintos donantes. La

Departamento Laboratorio Biomdico Nacional y de Referencia.

RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIN E IDENTIFICACIN

f) Las clulas panel no deben utilizarse ms d) Procedimiento

Fecha:_ Tecnlogo Mdico responsable:___