ESTUDIO SECUENCIAL DE LOS NIVELES DE FORMALDEHDO, COMO

INDICADORES DE RIESGO QUMICO, EN EL ANFITEATRO DE LA ESCUELA

DE CIENCIAS BSICAS DE LA UNIVERSIDAD DEL VALLE

RUBN DARO ROSAS OSPINA

UNIVERSIDAD DEL VALLE

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS
PROGRAMA ACADMICO DE QUMICA
SANTIAGO DE CALI
2011

ESTUDIO SECUENCIAL DE LOS NIVELES DE FORMALDEHDO, COMO

INDICADORES DE RIESGO QUMICO, EN EL ANFITEATRO DE LA ESCUELA
DE CIENCIAS BSICAS DE LA UNIVERSIDAD DEL VALLE

RUBN DARO ROSAS OSPINA

Proyecto presentado al comit de qumica como trabajo de grado para optar al
ttulo de Qumico

Director
Rubn Albeiro Snchez Andica, M. Sc.
Jefe del Laboratorio de Anlisis Industriales de la Universidad del Valle
Co-Director
Gladys Guerrero Nez, Qumica, Magister S.O.
Grupo Salud Ocupacional de la Universidad del Valle

UNIVERSIDAD DEL VALLE

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS
PROGRAMA ACADMICO DE QUMICA
SANTIAGO DE CALI
2011

UNIVERSIDAD DEL VALLE

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS
PROGRAMA ACADMICO DE QUMICA
SANTIAGO DE CALI
2011

AUTOR: RUBN D. ROSAS OSPINA, 1989

TTULO: ESTUDIO SECUENCIAL DE LOS NIVELES DE FORMALDEHDO,

COMO INDICADORES DE RIESGO QUMICO, EN EL ANFITEATRO DE LA
ESCUELA DE CIENCIAS BSICAS DE LA UNIVERSIDAD DEL VALLE.

Palabras claves: Formaldehdo, Cuantificacin de formaldehdo, Reactivo de

Nash, Salud ocupacional, Anfiteatro, Descomposicin cadavrica.

Nota de aprobacin

El trabajo de grado titulado Estudio secuencial de los niveles de formaldehdo,

como indicadores de riesgo qumico, en el anfiteatro de la escuela de ciencias
bsicas de la Universidad del Valle, presentado por el estudiante RUBN DARIO
ROSAS OSPINA, para optar al ttulo de qumico, fue revisado por el jurado y
califica como:

APROBADO:

_____________________

_____________________

Rubn A. Snchez Andica

Gladys Guerrero

Director

Co-Director

_____________________
Jurado

AGRADECIMIENTOS

A Dios, por guiarme en esta importante etapa de formacin para mi vida.

A mi padre Leonardo Rosas Bernal, por inspirarme a formarme como profesional y

ser un ejemplo de entrega frente a lo que amamos.

A mi madre Luz Day Ospina Gutirrez, por su incondicional amor y por siempre
estar a mi lado brindndome seguridad y apoyo en todo mi proceso de formacin.

A mi hermano Andrs Mauricio Rosas Ospina, por sus oportunos consejos y su

inmenso apoyo en la realizacin de mis metas profesionales.

A la Universidad del Valle por permitirme formarme como profesional.

Al profesor Rubn Snchez, por acogerme bajo su direccin y compartirme sus

conocimientos.

A la profesora Gladys Guerrero, por acogerme amable y clidamente en su grupo

de investigacin.

Al Doctor Carlos Osorio, por su respaldo en este proyecto y sus oportunas

sugerencias.

Al profesor William Lizcano, por confiar en m y brindarme mi primera oportunidad

de investigacin.

Al grupo de investigadores del laboratorio de Anlisis Industriales de la

Universidad del Valle, Jenny, Jhoana, Jimmy y Jose por acogerme clida y
amablemente, gracias por sus enseanzas.

A mis compaeros de investigacin, Johan y Bertha, por sus oportunos aportes y

buenos deseos.

A Angi Marcela Saavedra, por sus bendiciones.

A Paola Andrea Bentez por su incondicional colaboracin y compaa durante

todo mi proceso de investigacin.

A Michael Andrs Cortzar y Laura Marcela Arango por su incondicional apoyo y

deseos de xito.

TABLA DE CONTENIDO

Pg.
LISTA DE TABLAS

LISTA DE FIGURAS

II

RESUMEN

III

1. INTRODUCCIN

13

2. MARCO TERICO Y ANTECEDENTES

19

3. OBJETIVOS

24

3.1 OBJETIVO GENERAL

24

3.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

24

4. METODOLOGA

25

4.1 MTODOS ANALTICOS PARA LA CUANTIFICACIN

DE FORMALDEHDO EN AIRE

25

4.1.1 Mtodo del cido cromotrpico

25

4.1.2 Mtodo de la derivatizacin por 2,4-DNPH con anlisis por HPLC

26

4.1.3 Mtodo del reactivo de Nash

27

4.2 CRITERIOS DE COMPARACIN ESTADSTICA

28

4.2.1 Linealidad

28

4.2.2 Lmite de deteccin

29

4.2.3 Exactitud

30

4.2.4 Precisin

30

4.3 CRITERIOS DE VALIDACIN

31

4.3.1 Selectividad

32

4.3.2 Robustez

32

4.4 MUESTREO
5. RESULTADOS Y DISCUSIN
5.1 COMPARACIN DE LAS TRES METODOLOGAS

33
35
35

5.1.1 Linealidad

35

5.1.2 Lmite de deteccin

35

5.1.3 Exactitud

36

5.1.4 Precisin

37

5.2 VALIDACIN DEL MTODO ANALTICO PARA

DETERMINAR FORMALDEHDO POR EL REACTIVO DE NASH

42

5.2.1 Selectividad

43

5.2.2 Robustez

44

5.3 ANLISIS DEL COMPORTAMIENTO DEL FORMALDEHDO EN EL

AIRE DEL ANFITEATRO

48

5.3.1 Caractersticas del sitio de muestreo

49

5.3.2 Sesiones de muestreo

51

6. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

62

7. BIBLIOGRAFA

64

8. ANEXOS

68

LISTA DE TABLAS

Pg.
Tabla 1. Linealidad de los mtodos de cuantificacin de formaldehdo
en estudio.

35

Tabla 2. Lmite de deteccin de los mtodos de cuantificacin de

formaldehdo en estudio.

36

Tabla 3. Porcentaje de recuperacin para el anlisis de exactitud.

36

Tabla 4. Prueba t-student entre los criterios de aceptacin y los

resultados experimentales de cada mtodo.

38

Tabla 5. Parmetros de validacin del mtodo del reactivo de Nash para

cuantificacin de formaldehdo en solucin.

47

LISTA DE FIGURAS

Pg.
Figura 1. Estructura molecular del formaldehdo.

19

Figura 2. Puertas de ingreso a la sala de diseccin del anfiteatro de la

Escuela de Ciencias Bsicas de la Universidad del Valle.

50

Figura 3. Sala de diseccin del anfiteatro de la Escuela de Ciencias Bsicas

de la Universidad del Valle.

51

Figura 4. Serie de tiempo de las concentraciones de formaldehdo en el

aire del anfiteatro observadas entre el 22 de agosto al 02 de
septiembre del 2011.

53

Figura 5. Histograma de frecuencias de las concentraciones de

formaldehdo en el aire del anfiteatro observadas entre el 22 de
agosto al 02 de septiembre del 2011.

54

Figura 6. Comportamiento de las concentraciones de formaldehdo en el

anfiteatro a travs de los das de la semana muestreados.

55

Figura 7. Diagrama de cajas para las concentraciones de formaldehdo en

cada uno de los das de muestreo.

II

57

RESUMEN

Los anfiteatros de anatoma humana son ambientes laborales que pueden

presentar concentraciones de formaldehido en el aire perjudiciales para la salud.
Pese a esto, no hay una reglamentacin estndar a nivel nacional que indique los
procedimientos para determinar los niveles de formaldehdo en estos lugares ni los
riesgos qumicos generados por esta sustancia.

Con base en lo anterior, se seleccionaron 3 mtodos analticos comunes de

cuantificacin de formaldehdo, el mtodo del cido cromotrpico con anlisis por
UV-Visible, el mtodo de la derivatizacin por 2,4-dinitrofenilhidrazina con anlisis
por HPLC y el mtodo del reactivo de Nash con anlisis por UV-Visible, se
compararon estadsticamente en los parmetros de linealidad, exactitud, precisin
y lmite de deteccin, resultando con mejores caractersticas el mtodo de Nash.
Este mtodo se valid y se aplic para realizar un seguimiento en el tiempo de las
concentraciones de formaldehdo en el aire del anfiteatro de la Escuela de
Ciencias Bsicas de la Universidad del Valle. El seguimiento implic la obtencin
de muestras de formaldehdo durante 10 das laborales utilizando reactivo de
Nash como solucin adsorbente.

La concentracin promedio encontrada en el anfiteatro con una confiabilidad del

95 % fue de 1,4 0,7 ppb. Se encontr que estos niveles de formaldehdo no
superan los lmites de exposicin laboral establecidos por la organizacin
III

internacional ACGIH para esta sustancia. Tambin, que la tendencia general de

las concentraciones de formaldehdo es disminuir linealmente a travs de la
semana, as mismo, se demostr que estas concentraciones en el aire del
anfiteatro no se comportan normalmente.

Palabras claves: Formaldehdo, Cuantificacin de formaldehdo, Reactivo de

Nash, Salud ocupacional, Anfiteatro, Descomposicin cadavrica.

IV

1. INTRODUCCIN

Los anfiteatros de anatoma humana1 son considerados como laboratorios de

morfologa microscpica que cuentan con una sala de diseccin y demostracin
en donde se hace nfasis en la correlacin anatomo-clnica y anatmicoradiolgica sobre cadveres. Estos laboratorios se encuentran generalmente en
casi todos los hospitales, entidades de medicina forense y sitios especializados de
embalsamamiento.

Estos anfiteatros suelen ser zonas de rea relativamente extensa, de tal modo que
puedan distribuirse varias mesas de diseccin en el lugar. Adicionalmente, se
caracterizan por contener una o varias piscinas de conservacin cadavrica, en
donde reposan los cuerpos sumergidos en una solucin compuesta principalmente
de formaldehdo. Esta solucin, junto con otros agentes qumicos, embalsama el
cadver preservndolo de la putrefaccin.

En los anfiteatros, las personas encargadas de la labor de conservar el lugar y de

atender las disposiciones de embalsamamiento y diseccin, se les suele llamar
tanatlogos, debido a que emplean prcticas forenses en la bsqueda de una
explicacin a la muerte. De otro lado, los anfiteatros son lugares de bastante
concurrencia, sobre todo con fines acadmicos por parte de los estudiantes de
medicina, pues a pesar que la mayora de los cadveres son identificados, cerca
del 5 % quedan en las morgues y anfiteatros clasificados como N.N. porque no
13

tienen informacin para realizar comparaciones de identidad. En ese caso las

instituciones universitarias se responsabilizan de la custodia y conservacin del
cadver2.

En contraste, pese al servicio que brindan estos laboratorios de anatoma, los

anfiteatros pueden presentar diversos problemas de salud ocupacional, al parecer,
por no contar con una reglamentacin estricta y uniforme a nivel nacional que
dictamine y regule las condiciones laborales. No obstante, estos sitios representan
ambientes de trabajo, puesto que all se desempean labores profesionales y
tcnicas en pro de un servicio a la comunidad.

En este sentido, el Grupo Salud Ocupacional de la Universidad del Valle, presenta

un gran inters por conocer la situacin actual de los anfiteatros de la ciudad de
Santiago de Cali, con el nimo de recoger evidencias y poder promover normas y
procedimientos que regulen las actividades laborales de los anfiteatros. As pues,
como punto de partida se propone hacer un seguimiento de las concentraciones
de formaldehdo en el aire del anfiteatro de la Escuela de Ciencias Bsicas de la
Universidad del Valle, con el fin de correlacionar sus valores con la normatividad
internacional.

A nivel internacional, los niveles de salubridad permitidos de muchas sustancias

qumicas en el aire, han sido estipulados por muchas entidades de salud
ocupacional a nivel mundial, entre ellas, la ACGIH (American Conference of
14

Governmental Industrial Hygienists) quien rige principalmente en Estados Unidos,

tiene una amplia aceptacin a nivel mundial en cuanto a sus normativas y
reglamentaciones.

La ACGIH ha estipulado los valores lmites de concentracin de muchas

sustancias presentes en el aire denominados TLV (Threshold Limit Value). Los
TLVs se refieren a las concentraciones lmites de sustancias qumicas, que se
encuentran en los ambientes laborales, y representan condiciones por debajo de
la cual existe una razonable seguridad de que un trabajador podr desempear su
labor indefinidamente, cumpliendo una jornada de 8 horas diarias y 40 horas por
semana, durante toda su vida laboral, sin sufrir molestias ni dao a la salud. Estas
concentraciones deben ser utilizadas como guas en el control de los riesgos para
la salud y no deben ser considerados como lmites fijos entre concentraciones
seguras peligrosas3.

Sin embargo, debido a la susceptibilidad individual, puede ocurrir que algn

porcentaje de los trabajadores desarrolle alteraciones de salud, aunque el nivel de
exposicin sea realmente bajo. Por otro lado puede suceder, que se agraven
enfermedades de tipo comn, o profesionales, al exponerse a concentraciones
tericamente seguras. Existen tres tipos de TLV para cada sustancia:

15

-Media ponderada en el tiempo, TWA (Time Weighted Average):

Es la concentracin media ponderada en el tiempo, para una jornada normal de
ocho horas y una semana laboral de cuarenta horas, a la que pueden estar
expuesto casi todos los trabajadores repetidamente da tras da, sin efectos
adversos para su organismo. Este es el valor ms comnmente utilizado de los
tres.

- Exposicin a corto plazo, STEL (Short-term exposure limit):

Lmite de Exposicin de corta duracin, concentracin a la que los trabajadores
pueden estar expuestos de manera continua durante un corto periodo de tiempo
(15 minutos no ms de 4 veces por da, y con un periodo de por lo menos, 60
minutos entre exposiciones sucesivas a este valor), sin sufrir; i) irritacin, ii) daos
crnicos o irreversibles en los tejidos, iii) narcosis en grado suficiente para
aumentar la probabilidad de lesiones accidentales.

- De techo, Ceiling:
Valor techo, es la concentracin de una sustancia, la cual no puede ser excedida
en ningn momento en la jornada laboral.

Igualmente la ACGIH determina las consecuencias para la salud con respecto a si

la sustancia produce, o es sospechosa de producir cncer clasificando la
sustancia como:
A1: Carcinognico humano confirmado.
16

A2: Sospechoso como carcinognico humano: El agente es carcinognico en

animales de laboratorio sometidos a dosis, rutas de administracin, en sitios, de
tipos histolgicos, o por mecanismos considerados relevantes para exposicin
laboral. La informacin epidemiolgica disponible no es suficiente para confirmar
su carcinogenocidad en humanos.
A3: Confirmado carcingeno en animales, desconocimiento de su relevancia en
humanos.
A4: No clasificable como carcinognico humano.

Para el compuesto de inters de esta investigacin los TLV para formaldehdo

son:

TLV-TWA: 0,75 ppm

TLV-STEL: 2,0 ppm
TLV-C: 5,0 ppm
Actualmente, el formaldehdo es considerado A2 por la ACGIH.

En contraste, esta preocupacin por parte del campo de la salud ocupacional de

una latente contaminacin por formaldehdo en los anfiteatros, encuentra una
solucin en el campo de la qumica analtica, la cual se perfila como una
herramienta en la caracterizacin del problema medio ambiental. En este sentido,
el Laboratorio de Anlisis Industriales de la Universidad del Valle, se acoge a la
problemtica con el objetivo de establecer un mtodo analtico eficaz, confiable,
17

prctico y econmico que permita la cuantificacin de formaldehdo en el ambiente

de los anfiteatros.

De este modo, se presenta el mtodo del cido cromotrpico, el mtodo de la

derivatizacin por DNPH con anlisis por HPLC y el mtodo del reactivo de Nash,
como alternativas viables para la cuantificacin de formaldehdo en el aire de los
anfiteatros.

18

2. MARCO TERICO Y ANTECEDENTES

El formaldehdo es el aldehdo ms sencillo que existe y presenta la estructura de

la figura 1. Su bajo peso molecular (P.M 30.026 g/mol) y bajo punto de ebullicin
de -19.5 C, hacen que el formaldehdo sea una molcula muy voltil y estable en
fase gaseosa a temperatura ambiente4. Con una densidad de vapor de 1.067, lo
que indica que es, levemente, ms denso que el aire (1.000).

Figura 1. Estructura molecular del formaldehdo.

De otro lado, el formaldehido es comnmente el aldehdo ms abundante en el

aire y uno de los ms estudiados desde que se clasific en el Grupo 1
(carcinognico humano) por la Agencia Internacional para la Investigacin Sobre
el Cncer (IARC, por sus siglas en ingls)5,6. En el aire, la concentracin de
formaldehdo es comnmente observada en partes por billn7 (ppb, 10-9), mientras
tanto, en espacios con escasa ventilacin el panorama suele ser diferente.

Las fuentes de formaldehdo en espacios cerrados tpicos incluyen tableros de

madera, paneles de madera, muebles, elementos decorativos, humo de tabaco y
la combustin de gas8. Varios de estos espacios, donde no hay un uso directo y
19

habitual del formaldehdo, pueden presentar concentraciones del orden de las

partes por milln (ppm, 10-6). En adicin, algunos pases en desarrollo, como
China, las concentraciones de formaldehdo en los hogares pueden superar en
gran proporcin los 0.1 ppm. Y en casos especiales como en hospitales y fbricas
de ingeniera qumica los niveles de formaldehdo son mucho ms extremos9.

Adicionalmente, varios estudios efectuados principalmente en Europa y Estados

Unidos, han mostrado que en muchas bibliotecas los niveles ambientales de
formaldehdo y compuestos orgnicos voltiles (VOCs, por sus siglas en ingls)
sobrepasan los lmites estipulados por los organismos de salud ocupacional10, lo
cual es preocupante, puesto que son reas pblicas donde el uso directo de
formaldehdo es nulo.

En este sentido, es de esperar que las condiciones ambientales en los anfiteatros,

en donde se emplea formaldehdo en grandes cantidades, puedan indicar niveles
altos de este compuesto en la atmosfera laboral, y esta situacin parece ser
comprobada en cierta medida con algunos estudios realizados en los anfiteatros
del pas.

En la ciudad de Santiago de Cali, en el ao 2003, un estudio que pretenda

identificar las consecuencias respiratorias desencadenadas por exposicin al
formaldehdo en los tanatlogos vinculados a anfiteatros de la ciudad, concluy
que las personas relacionadas no conocan los riesgos del formol sobre su salud,
20

demostrando que no hay un control sobre el uso de este reactivo ni mucho menos
informacin sobre las condiciones laborales sobre las cuales debe manejarse11. El
mismo estudio revel que varios de los empleados presentaban complicaciones
respiratorias

afecciones

dermatolgicas,

propias

de

niveles

altos

de

formaldehdo.

Posteriormente, en el ao 2007 en la ciudad de Bogot, un estudio, cuyo objetivo

era determinar la concentracin mnima inhibitoria de formaldehdo capaz de
disminuir el crecimiento bacteriano de cepas obtenidas de conservacin
cadavrica, report que no hay un control estricto en las condiciones de
adecuacin de la infraestructura de los anfiteatros que garantice las condiciones
ptimas de trabajo12. De acuerdo con ello, la situacin ambiental en los anfiteatros
indica una falta de caracterizacin y control en las condiciones medio ambientales
de trabajo.

La situacin, adems, involucra poca claridad acerca de los procedimientos de

monitoreo de concentraciones de formaldehdo en estos lugares. Desde este
punto de vista, la qumica ofrece distintos procedimientos analticos que pueden
dar soporte a los objetivos de la salud ocupacional.

En trminos qumicos, la cuantificacin de formaldehdo en el aire se puede

desarrollar por diversos mtodos, todos basados en la toma de muestras, con un
fijador activo o por difusin, y su posterior anlisis13. El mtodo ms apropiado
21

depende, por consiguiente, del tipo de muestra, es decir, de la fuente de donde

provenga.

De este modo, la eleccin de un mtodo idneo plantea una problemtica, puesto

que muchos mtodos presentan ventajas y desventajas de acuerdo a las
condiciones en que se desarrollan.

Por ejemplo, entre los mtodos ms antiguos para cuantificar formaldehdo en

aire, se emplea la deteccin por UV-Vis del derivado del formaldehdo con el cido
cromotrpico14. Esta tcnica, aunque es econmica y relativamente rpida, puede
tener interferencias si trazas de SO2estn presentes en el lugar de muestreo15.

Por otro lado, las tcnicas cromatografas, lquida de alta resolucin (HPLC) y de
gases (GC), pueden variar drsticamente en trminos del lmite de deteccin, el
tratamiento previo que debe recibir la muestra y costos. As, mientras un anlisis
por GC-FID, para un derivado apropiado de formaldehdo, puede detectar entre
0,24 - 16 ppm de formladehdo16; un anlisis por HPLC con detector UV, para otro
derivado, tiene un rango de trabajo entre 0,012 2,0 ppm17. En este sentido, un
anlisis por GC podra ser ms adecuado si las concentraciones de formaldehdo
son muy elevadas. Sin embargo, el tratamiento de la muestra podra requerir un
costo mayor en comparacin con el de HPLC.

22

En contraste, entre los mtodos ms usados para cuantificar formaldehdo, la

derivatizacin por 2,4-dinitrofenilhidrazina (DNPH), presenta buenos resultados
puesto que puede determinar formaldehdo incluso en medio de otros aldehdos.
No obstante, si el medio de muestreo presenta trazas de ozono, los resultados
pierden confiabilidad18,19.

Finalmente, la bsqueda y eleccin del mtodo ms idneo para cuantificar

formaldehdo en los anfiteatros, debe contemplar las condiciones ambientales de
estos lugares, es decir, la composicin del aire circundante.

23

3. OBJETIVOS

3.1 OBJETIVO GENERAL

Comparar los mtodos de cuantificacin de formaldehdo en aire del cido

cromotrpico, la derivatizacin por DNPH con anlisis por HPLC y el reactivo de
Nash.

3.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

Validar el mejor mtodo analtico, de los anteriores, resultante de la

comparacin entre ellos.
Analizar el comportamiento en el tiempo de los niveles de formaldehdo en el
aire del anfiteatro de la Escuela de Ciencias Bsicas de la Universidad del
Valle.

Aportar herramientas al campo de la salud ocupacional que ayuden a

determinar normas laborales en los ambientes de los anfiteatros a nivel local.

24

4. METODOLOGA

El trabajo de investigacin se llev a cabo en las instalaciones del laboratorio de

Anlisis Industriales de la Facultad de Ciencias Naturales y Exactas de la
Universidad del Valle y las sesiones de muestreo se realizaron en el anfiteatro de
la Escuela de Ciencias Bsicas de la Facultad de Salud de la Universidad del
Valle.

La metodologa experimental consisti en la comparacin estadstica de tres

mtodos analticos propios para la cuantificacin de formaldehdo en aire. Estos se
escogieron debido a su amplia aceptacin a nivel mundial en la determinacin del
analito de inters y la disponibilidad de estudio en el laboratorio. La comparacin
entre estos mtodos pretende establecer cul de ellos es el ms adecuado para
cuantificar niveles de formaldehdo en aire teniendo en cuenta las condiciones
ambientales en un anfiteatro. Posteriormente, el mejor mtodo se valid para
evaluar los niveles de formaldehido en el ambiente del anfiteatro de estudio.

4.1 MTODOS ANALTICOS PARA LA CUANTIFICACIN DE FORMALDEHDO

EN AIRE

4.1.1 Mtodo del cido cromotrpico20: La identificacin de formaldehdo por este

mtodo tiene lugar debido a la formacin de un cromgeno catinico de coloracin
prpura que se genera por la reaccin del formaldehdo con cido cromotrpico en
25

cido sulfrico concentrado. Dicho cromgeno absorbe a una longitud de onda de

580 nm lo que permite su identificacin en un equipo de absorcin UV-Vis.

Para tratar muestras de formaldehdo por este mtodo, se prepar una solucin de
cido cromotrpico al 0.1 % (p/p) en cido sulfrico concentrado. De cada muestra
de formaldehdo a tratar se toma una alcuota de 0.5 mL y se deposita en un tubo
de ensayo graduado. Seguidamente, se diluye el contenido con la solucin de
cido cromotrpico hasta 5.0 mL. Se deja enfriar y se procede a leer a 580 nm en
una celda de cuarzo en un equipo UV-Vis Shimadzu UV-160A.

4.1.2 Mtodo de la derivatizacin por 2,4-DNPH con anlisis por HPLC21: En este
mtodo la reaccin de formaldehdo con 2,4-DNPH genera el derivado
formaldehdo 2,4-dinitrofenilhidrazona de coloracin amarilla el cual se puede
identificar mediante HPLC.

Para el tratamiento de muestras de formaldehdo por este mtodo se prepar una

solucin de 2,4-DNPH de aproximadamente 2000 ppm en cido orto-fosfrico y
etanol. Para cada muestra de formaldehdo se tomaron alcuotas de 1.0 mL y se
llevaron a balones aforados de 10 mL, seguido por la adicin de 2.0 mL de la
solucin de 2,4-DNPH. Finalmente se afora cada baln con acetonitrilo grado
HPLC y se analiza cada muestra a las siguientes condiciones cromatogrficas en
un equipo de HPLC Hewlett Packard Series 1100:

26

Columna: C18
Fase mvil: 45 % de acetonitrilo 55 % de agua
Caudal: 1,0 mL/min
Detector UV: 350 nm
Volumen de inyeccin: 20 L
Tiempo de anlisis: 6 min

4.1.3 Mtodo del reactivo de Nash22: En este mtodo, el formaldehdo reacciona

con el reactivo de Nash para producir diacetildihidrolutidina, un compuesto de
coloracin amarilla que puede ser cuantificado por absorcin UV-Vis a 412 nm. El
reactivo de Nash se prepar de la siguiente forma: en un baln aforado de 100 mL
se adicionan 30 g de acetato de amonio, 0.4 mL de acetil acetona, 0.6 mL de
cido actico y agua destilada hasta el aforo. Para su uso se deja reposar por 30
minutos.

Para el tratamiento de muestras de formaldehdo por este mtodo, se toman

alcuotas de 10.0 mL de cada muestra y se llevan a balones aforados de 100 mL,
seguidamente se adiciona 5.0 mL del reactivo de Nash y se afora con agua
destilada. Cada muestra tratada se deja reposar por 30 minutos antes de su
lectura a 412 nm en celdas de cuarzo en un equipo UV-Vis Shimadzu UV-160A.

27

4.2 CRITERIOS DE COMPARACIN ESTADSTICA

Para comparar estadsticamente los tres mtodos analticos y determinar cul de

ellos es estadsticamente mejor, se establecieron los siguientes parmetros de
comparacin: linealidad, lmite de deteccin, exactitud y precisin. A cada uno de
estos parmetros se le asign un criterio de aceptacin, el cual debe satisfacer el
mtodo que se desea implementar como evaluador de los niveles de formaldehdo
en el aire del anfiteatro a estudiar. Para cada parmetro de comparacin los
criterios de aceptacin son:

-Linealidad: coeficiente de correlacin lineal (r), no diferir significativamente de 1.

-Lmite de deteccin (L.D): Inferior a 0.075 ppm.
-Exactitud: porcentaje de recuperacin no diferir significativamente de 100 %.
-Precisin: el coeficiente de variacin (CV) obtenido de los datos experimentales
debe ser cercano al calculado por la ecuacin de Horwitz.

Cada parmetro de comparacin obtenido de los datos experimentales para cada

mtodo, se compar mediante una prueba t-student al 95 % de confiabilidad con
cada criterio de aceptacin para determinar estadsticamente la aceptacin o el
rechazo de un mtodo en un determinado parmetro.

4.2.1 Linealidad: Este parmetro se analiz mediante el coeficiente de correlacin

lineal (r) en todo el rango lineal de respuesta analtica para cada mtodo. El rango
28

lineal para cada mtodo se explor en un intervalo de concentraciones de

formaldehdo entre 0.01 20.0 ppm, en este rango de concentraciones se
prepararon soluciones patrn de formaldehdo a partir de una solucin de formol al
35 % (p/p) grado analtico, consecutivamente cada solucin se trat segn el
apartado 4.1 y se obtuvo la respuesta analtica para cada mtodo por triplicado. El
coeficiente de correlacin se hall por un anlisis de regresin lineal aplicado a los
datos obtenidos.

4.2.2 Lmite de deteccin: Para calcular el lmite de deteccin de formaldehdo

para cada mtodo se prepar por triplicado una curva de calibracin en un rango
de concentraciones por debajo de la curva de calibracin de trabajo. La curva de
calibracin de bajas concentraciones comprende los siguientes patrones de
formaldehdo: 0.010, 0.025 y 0.050 ppm, mientras que la curva de calibracin de
trabajo 0.5, 1.0, 1.5, 2.0 y 5.0 ppm. El lmite de deteccin se calcul a partir de la
siguiente ecuacin23:

En donde:
Es el intercepto en y de la curva de calibracin de concentraciones bajas.
Es la pendiente de la curva de calibracin normal.

29

4.2.3 Exactitud: Tanto para la exactitud como para la precisin se emple una
muestra control de formaldehdo, la cual se obtuvo al hacer burbujear una cantidad
de analito en estado gaseoso y caliente a travs de agua destilada. Las
condiciones se ajustaron para obtener una muestra control de concentracin de
10.0 ppm de formaldehdo.

Para determinar la exactitud en cada mtodo a estudiar, se tom por triplicado una
alcuota de muestra control y se dop con una cantidad conocida de patrn de
10.0 ppm de formaldehdo, para realizar un dopaje al 100 % segn el
procedimiento para cada mtodo descrito en el apartado 4.1. El porcentaje de
recuperacin se calcul con la siguiente ecuacin24:

En donde:
Incremento observado de las concentraciones por dopaje.
Valor terico para el incremento de las concentraciones por dopaje.

4.2.4 Precisin: Para evaluar la precisin de cada mtodo se tuvo en cuenta el

coeficiente de variacin para la muestra control terico, el cual se calcul con la
ecuacin de Horwitz25:

30

En donde:
Concentracin.

Para la muestra control de formaldehdo, una vez tratada la alcuota pertinente en

cada mtodo, el CV es 2. Este valor se compara con el CV experimental el cual se
calcula a partir de la siguiente ecuacin26:

En donde:
Desviacin estndar.
Valor promedio.

Para obtener un valor de CV experimental se trat por triplicado una alcuota de

muestra control segn los procedimientos para cada mtodo.

4.3 CRITERIOS DE VALIDACIN

Para validar el mejor mtodo resultante de la comparacin del apartado anterior,

se usaron los siguientes parmetros: rango lineal, selectividad, linealidad, lmite de
deteccin, exactitud, precisin y robustez. Los parmetros de rango lineal,
linealidad, lmite de deteccin, exactitud y precisin ya se han caracterizado y
explicado en el apartado 4.2.

31

4.3.1 Selectividad: La selectividad del mtodo consisti en verificar si la matriz de

las muestras a colectar generan interferencias positivas o negativas en la seal
analtica propia a la presencia de formaldehdo. Para esto, se tomaron 3 alcuotas
de 10 mL de muestra control (10 ppm de formaldehdo) y se desactiv el analito
con un exceso de carbonato de sodio en cada una de las alcuotas, el
procedimiento se hizo por triplicado con etapas de filtrado entre cada adicin de
carbonato. Posteriormente, un volumen de 5 mL de cada alcuota de muestra
control desactivada con carbonato se trata segn el procedimiento para el mejor
mtodo resultante de la comparacin estadstica (seccin 4.2), adicionando un
dopaje de 5 mL de un patrn de 10 ppm de formaldehdo.

Finalmente, se determin el porcentaje de recuperacin y se evalu si difera o no

estadsticamente del 100 % mediante una prueba t-student al 95 % de
confiabilidad.

4.3.2 Robustez: Para evaluar el grado de reproducibilidad del mtodo, se le solicit

a otro analista que desarrollar el mtodo por triplicado sobre tres muestras
control de formaldehdo. De este procedimiento, se obtuvo la desviacin estndar
para el conjunto de muestras y se compar con el obtenido en la precisin
(seccin 4.2.4) mediante una prueba F de Fischer. As mismo, se compararon las
medias obtenidas por ambos analistas mediante una prueba t-student.

32

4.4 MUESTREO

El mejor mtodo analtico seleccionado se emple para caracterizar el aire del

anfiteatro de la Escuela de Ciencias Bsicas de la Universidad del Valle en
trminos de los niveles de formaldehdo. Para ello, se aplic un muestreo segn la
norma general NTP 22 para la toma de muestras de contaminantes con soluciones
absorbentes del Instituto de Seguridad e Higiene en el Trabajo del Ministerio de
Trabajo Espaol27. El cual establece que la recoleccin de las muestras debe
hacerse segn las actividades regulares que desempea el personal. Teniendo en
cuenta que las actividades del anfiteatro consisten en la realizacin de disecciones
sobre los diferentes cadveres exhibidos en el anfiteatro, la labor de muestreo
consisti en recrear estas situaciones mediante el desplazamiento constante por
toda la sala con paradas regulares enfrente de los cadveres. Para determinar con
certeza las concentraciones de formaldehdo a la que son expuestos las personas
del lugar, el equipo de muestreo se situ lo ms cerca posible a la nariz. Se
determin que 5 muestras por da laboral en un lapso de una hora era una
muestra representativa de las concentraciones diarias de formaldehdo en el lugar.

Para recolectar las muestras de aire de la sala de diseccin del anfiteatro se us 5

mL de solucin captadora de formaldehdo, un impinger de vidrio graduado de 25
mL Standard Nozzle y una bomba de muestreo personal marca Sensidyne Gilian
Gilair 5PK. Las muestras se recolectaron a un caudal constante de1 L/min y un
tiempo de recoleccin de 10 minutos. El muestro se realiz por un periodo de diez
33

das con una frecuencia de cinco muestras por da. Todos los das de muestreo
fueron das laborales.

En el clculo de la concentracin de formaldehdo en el aire del anfiteatro indicada

por cada muestra colectada se debe tener en cuenta el caudal de muestreo, el
volumen de solucin adsorbente y el tiempo de recoleccin de cada muestra en el
procedimiento matemtico, lo que indica que concentraciones de formaldehdo en
el aire se puede determinar incluso por debajo del lmite de deteccin del mtodo
analtico empleado. Cabe aclarar que las condiciones de muestreo deben
garantizar que la muestra colectada albergue una concentracin de formaldehido
apta para las caractersticas del mtodo analtico a usar.

Finalmente, los datos obtenidos se analizaron por pruebas estadsticas de

regresin, histogramas y diagramas de cajas.

34

5. RESULTADOS Y DISCUSIN

5.1 COMPARACIN DE LAS TRES METODOLOGAS

A continuacin se presentara, a manera de informacin, los resultados

encontrados para cada mtodo en los parmetros de comparacin. Seguido a
esto, se proceder con el anlisis de la informacin encontrada.

5.1.1 Linealidad: Los datos de absorbancia y rea (HPLC) usados para las curvas
de calibracin empleadas en el clculo del coeficiente de correlacin lineal (r) y la
estimacin del rango lineal se encuentran tabulados en el anexo 1. Los valores
encontrados en cada mtodo para el rango lineal, el coeficiente de correlacin
promedio y la desviacin estndar para este ltimo, se encuentran en la tabla 1.

Tabla 1. Linealidad de los mtodos de cuantificacin de formaldehdo en estudio.

AC. CROMOTRPICO

HPLC

NASH

Rango Lineal

0,5 5,0 ppm

2,0 30,0 ppm

0,01 10,0 ppm

0,98326

0,99933

0,99959

0,0065

0,0001

0,0006

5.1.2 Lmite de deteccin: Los datos de absorbancia y rea (HPLC) usados para
las curvas de calibracin empleadas en el clculo del lmite de deteccin se

35

encuentran tabulados en el anexo 2. Los valores encontrados en cada mtodo

para el lmite de deteccin y su desviacin estndar, se encuentran en la tabla 2.

Tabla 2. Lmite de deteccin de los mtodos de cuantificacin de formaldehdo en

estudio.
AC. CROMOTRPICO

HPLC

NASH

LD

0,46 ppm

1,06 ppm

0,05 ppm

0,0269

0,0176

0,0044

5.1.3 Exactitud: Los datos de absorbancia y rea (HPLC) usados para calcular los
porcentajes de recuperacin se encuentran tabulados en el anexo 3. El porcentaje
de recuperacin promedio y su desviacin estndar, encontrado para cada
mtodo, se encuentran en la tabla 3.

Tabla 3. Porcentaje de recuperacin para el anlisis de exactitud.

AC. CROMOTRPICO

HPLC

NASH

% Recup.

178,3

56,6

99,1

31,1615

68,4608

7,8183

36

5.1.4 Precisin: Los datos de absorbancia y rea (HPLC) usados para calcular los
coeficientes de variacin (CV) se encuentran tabulados en el anexo 4. El
coeficiente de variacin encontrado para cada mtodo fue el siguiente:

- cido cromotrpico: 11,84

- HPLC: 35,76
- Nash: 2,23

La comparacin entre los resultados experimentales de cada mtodo y los criterios

de aceptacin para cada parmetro de comparacin (r, LD, %Recup. y CV) se
esquematiza en la tabla 4. En ella, se rene la informacin obtenida
experimentalmente de cada mtodo y se reporta el t calculado (tcalc) obtenido de la
siguiente ecuacin para una prueba t de dos colas28:

En donde:
: Es el nmero de repeticiones.
: Desviacin estndar del conjunto de repeticiones.

37

Tabla 4. Prueba t-student entre los criterios de aceptacin y los resultados

experimentales de cada mtodo.
CIDO CROMOTRPICO
Parmetro Promedio
r
%Recup.
LD
%CV

0,98326
178,3
0,46
11,84

Aceptacin

tcalc

tcritico* (2,95%)

0,0065
31,1615
0,0269

3
3
3

1
100
< 0,075
2

4,45
4,35
24,68

4,30
4,30
2,92

HPLC (2,4 DNPH)

Parmetro Promedio
r
%Recup.
LD
%CV

0,99933
56,6
1,06
35,76

Aceptacin

tcalc

tcritico (1,95%)

0,0001
68,4608
0,0176

2
2
2

1
100
< 0,075
2

15,12
0,90
79,47

12,71
12,71
6,31

NASH
Parmetro Promedio
r
%Recup.
LD
%CV

0,99959
99,1
0,05
2,23

Aceptacin

tcalc

tcritico (2,95%)

0,0006
7,8183
0,0044

3
3
3

1
100
< 0,075
2

1,12
0,21
-9,06

4,30
4,30
2,92

*Todos los t crticos tomados de Miller [29]

Adems, se indica el t crtico con una confiabilidad del 95 % y 2 grados de libertad

o 1 para el caso del mtodo de HPLC. De esta manera, un mtodo se aceptar en
un parmetro si el valor del t calculado es menor que el t crtico reportado para
dicho parmetro30.

38

Para el parmetro lmite de deteccin el t calculado se estima sin la condicin de

valor absoluto en la diferencia promedio aceptacin de la ecuacin 5, debido a
que la condicin de aceptacin obliga a que el lmite de deteccin sea menor a
0.075 ppm, la prueba t debe ser de una sola cola30.

En la tabla 4, tambin se reporta el valor experimental y de la ecuacin de Horwitz

para el coeficiente de variacin (seccin 4.2.4), un mtodo se aceptar si el CV
calculado es prximo al arrojado por la ecuacin de Horwitz, es decir a 2.

De acuerdo a la tabla 4, el mtodo del reactivo de Nash fue el nico mtodo

analtico, de los tres estudiados, que cumpli con todos los criterios de aceptacin
estipulados, ya que sus t calculados son inferiores a todos los te crticos y el CV es
cercano a 2. Destacando los parmetros de exactitud y precisin, el mtodo del
reactivo de Nash para cuantificacin de formaldehdo, report porcentajes de
recuperacin del 99,1 19,4 % a una confiabilidad del 95 % sin diferencias
significativas de un 100 % de recuperacin, as como coeficientes de variacin
experimentales cercanos a los esperados tericamente. De este modo, el mtodo
de Nash es preciso y exacto a una confiabilidad del 95 %.

En contraste, el mtodo del cido cromotrpico no fue preciso ni exacto para el

intervalo de concentraciones de formaldehdo estudiadas, del mismo modo, el
mtodo de la derivatizacin por 2,4-DNPH con anlisis por HPLC tampoco fue
preciso, y pese a que estadsticamente el criterio de aceptacin para el porcentaje
39

de recuperacin se satisfizo, se considera dudoso aceptar que el mtodo fue

exacto, ya que sus datos son muy dispersos debido a su elevado coeficiente de
variacin.

De otro lado, el lmite de deteccin (L.D) se escogi como un parmetro de

comparacin estadstica entre los 3 mtodos de estudio para garantizar que el
mtodo a implementar en el muestreo del anfiteatro pudiera indicar informacin
acerca de los lmites de exposicin laboral (TLVs). Para el formaldehdo el TLV de
menor concentracin es de 0,75 ppm segn la ACGIH31. De acuerdo a esto, se
estableci como criterio de aceptacin para el lmite de deteccin aquellos
mtodos que puedan detectar muestras a concentraciones menores que 0,075
ppm. La diferencia entre el TLV y el criterio de aceptacin permite que muestras
de formaldehdo colectadas a concentraciones muy cercanas a 0,75 ppm puedan
ser diluidas si algn mtodo de cuantificacin lo requiere. Como resultado, slo el
mtodo del reactivo de Nash obtuvo un L.D menor que 0,075 ppm, siendo este
igual a 0,05 0,01 ppm con una confiabilidad del 95 %. Cabe destacar que el bajo
lmite de deteccin del mtodo de Nash es una cualidad importante, ya que
permite estudiar concentraciones de formaldehdo en solucin a muy bajas
concentraciones.

El ltimo criterio que se tuvo en cuenta fue el parmetro de linealidad, con el cual
se exige que el mtodo tenga un comportamiento lineal entre las concentraciones
de formaldehdo y la seal analtica. Aunque todos los mtodo analticos
40

exhibieron comportamientos lineales, slo el mtodo de Nash albergo la exigencia

de aceptacin, la cual indica que el mtodo debe tener un coeficiente de
correlacin lineal (r) no diferente de 1 con una confiabilidad del 95 %. Para el
mtodo de Nash se encontr un r igual a 0,99959. Adicionalmente, otro parmetro
que se observ entre los mtodos de estudio, fue el rango lineal. Aunque no se
estableci un criterio de aceptacin para este, se destaca el amplio rango que se
encontr para el mtodo de HPLC, lo cual lo perfila como un buen mtodo para el
estudio de altas concentraciones de formaldehdo, no obstante el rango lineal del
mtodo de Nash, se consider suficiente para los objetivos perseguidos.

Explicaciones que justifiquen el comportamiento estadstico de los mtodos del

cido cromotrpico y 2,4-DNPH con anlisis por HPLC pueden encontrarse en el
procedimiento metodolgico y en las propiedades qumicas de los reactivos
implcitos. El mtodo del cido cromotrpico, por su parte, implica la generacin de
un cromgeno de color prpura por la reaccin entre el formaldehdo y el cido
cromotrpico en cido sulfrico concentrado, dicho producto requiere energa en
forma de calor para que se desarrolle, si bien, esta energa la puede otorgar la
reaccin exotrmica que se da entre sus precursores como afirma Altshuller32,
Kenedy33 sugieren que se debe proporcionar calor para que el cromgeno se
desarrolle completamente. No obstante, no es claro si el mtodo requiere de una
adicin de calor, sin embargo en caso de que as sea, el mtodo proporcionara
valores imprecisos con CV grandes.

41

En cuanto al mtodo de HPLC estudiado, el cual implica la preparacin de la 2,4dinitrofenilhidrazina en un medio cido y viscoso, la eficiencia de reaccin con el
formaldehdo, el cual proviene de un medio acuoso, puede verse disminuida por la
diferencia de viscosidades de ambos medios de reaccin, ocasionando que no
haya buena difusin entre ellos. Esto podra generar que pequeas proporciones
de analito permanezcan sin reaccionar, lo cual constituye un grave problema
cuando se requiere que un mtodo sea eficiente a bajas concentraciones de
analito ya que el mtodo no ser reproducible, exhibiendo grandes dispersin de
sus datos. En contraste, lo anterior no indica que el mtodo de la derivatizacin
por 2,4-DNPH no sea un mtodo til para la cuantificacin de formaldehdo, si
bien, se demostr que este no es reproducible a concentraciones bajas de
formaldehdo, no se pueden juzgar las caractersticas del mtodo a altas
concentraciones de formaldehdo con los resultados encontrados en esta
investigacin, an ms, teniendo en cuenta que el mtodo exhibi un
comportamiento lineal hasta 30,0 ppm de formaldehdo.

5.2

VALIDACIN

DEL

MTODO

ANALTICO

PARA

DETERMINAR

FORMALDEHDO POR EL REACTIVO DE NASH

Los resultados de los parmetros de validacin para el mtodo de Nash linealidad,

precisin, exactitud y lmite de deteccin, se presentaron en la seccin 5.1. Para
completar los parmetros de validacin del mtodo de Nash se presentarn los
resultados de selectividad y robustez.
42

5.2.1 Selectividad: Los datos de absorbancia usados en el clculo de los

porcentajes de recuperacin para analizar la selectividad del mtodo del reactivo
de Nash se encuentran tabulados en el anexo 5. El porcentaje de recuperacin
promedio obtenido para el tratamiento de las tres muestras descritas en la seccin
4.3.1 fue de 98,4 % con una desviacin estndar de 1,23. Este porcentaje se
compar con el 100 % mediante una prueba t de dos colas segn la ecuacin 5,
obteniendo un t calculado de 2,21.

El t crtico estipulado para esta comparacin con una confiabilidad del 95 % y 2

grados de libertad es de 4,30. Se tiene entonces que el t calculado es menor que
el t crtico, lo que indica que el porcentaje de recuperacin, obtenido al 95 % de
confiabilidad, no es estadsticamente diferente del 100 %. Esto verifica que la
seal analtica resultante proviene exclusivamente del dopaje realizado.

De otro lado, se concluye que la matriz en la cual se prepararon las muestras para
validar el mtodo no afecta el resultado de la seal analtica. Esto es, que la
produccin de diacetildihidrolutidina (seccin 4.1.3) no se afecta por el agua
destilada y sus posibles trazas de contaminantes que esta pueda presentar.
Adicionalmente, las cantidades de acetato de amonio, cido actico y acetil
acetona, empleadas en el reactivo de Nash, son adecuadas para que el derivado
de formaldehdo se genere.

43

Se concluye entonces, que el mtodo del reactivo de Nash es selectivo al

formaldehdo, y que la matriz en la cual se prepararon las muestras para validar el
mtodo no afect el resultado de la seal analtica.

5.2.2 Robustez: Los datos de absorbancia usados en el clculo de la desviacin

estndar del conjunto de muestras

para analizar la robustez del mtodo del

reactivo de Nash, se encuentran tabulados en el anexo 6. El promedio y la

desviacin estndar encontrado por ambos analistas en el tratamiento del conjunto
de muestras control fue de M1= 1,35 ppm s1= 0,0535 y M2= 1,36 ppm s2= 0,0512.

Para comparar ambas desviaciones se emple la siguiente ecuacin de la prueba

F de Fischer para determinar un F calculado34:

En donde:
: Es la desviacin estndar de mayor magnitud.
: Es la desviacin estndar de menor magnitud.

De este modo el F calculado para la pareja de desviaciones fue de 1,09. El F

crtico con una confiabilidad del 95 % para esta comparacin, teniendo en cuenta
que los grados de libertad para ambas desviaciones es 5, es de 7,15. Este

44

resultado indica que ambas desviaciones no son significativamente diferentes y

por consiguiente ambos procedimientos no difieren estadsticamente en precisin.

Para comparar ambas medias encontradas, se emple una prueba de t de dos

colas asumiendo que las desviaciones no son diferentes, descrita por la siguiente
ecuacin35:

En donde:
: Son las medias a comparar.
: El nmero de muestras.
: Es la desviacin estndar conjunta que se calcula con la ecuacin 8.

En donde:
: Son los grados de libertad para cada conjunto de muestras.
: Es la desviacin estndar de cada conjunto de muestras.

De este modo, el t calculado para la pareja de medias fue de -0,32. El t crtico con
una confiabilidad del 95 % para esta comparacin, teniendo en cuenta que los
grados de libertad son 16, es de 2,13. Este resultado indica que ambas medias no
45

son significativamente diferentes y por consiguiente ambos procedimientos no

difieren estadsticamente en reproducibilidad.

En conclusin estos resultados indican que el mtodo es tolerante ante los

cambios de analista, por lo tanto el mtodo es robusto en los aspectos analizados
con una confiabilidad del 95 %.

Finalmente, para complementar la validacin del mtodo de cuantificacin de

formaldehdo por el reactivo de Nash, se analiz el comportamiento de los datos
de precisin del anexo 4 mediante una anova de 1 factor, para observar la
reproducibilidad inter-da e intra-ensayo del mtodo. Los datos empleados en la
anova y los resultados de esta se encuentran en el anexo 7.

La anova report un F calculado de 0,071, y un F crtico con 95 % de confiabilidad

de 5,14, lo que indica que las variaciones entre ensayos y entre das no son
diferentes estadsticamente, por lo que el mtodo garantiza reproducibilidad y
repetitividad.

En la tabla 5 se resumen los resultados encontrados para cada uno de los

parmetros que se tuvieron en cuenta para validar el mtodo del reactivo de Nash
para cuantificacin de formaldehdo, cada uno de los resultados son confiables al
95 %.

46

Tabla 5. Parmetros de validacin del mtodo del reactivo de Nash para

cuantificacin de formaldehdo en solucin.

PARMETRO

RESULTADO

Rango lineal

0,01 10,0 ppm

Coeficiente de correlacin lineal

0,99959

Lmite de deteccin

0,05 0,01 ppm

Exactitud

Recuperacin: 99,1 % 19,4 %

Precisin

CV 2,23 (Horwitz CV=2)

El mtodo es selectivo a formaldehdo
en solucin
El mtodo es tolerante a cambios de
analista

Selectividad
Robustez

El mtodo del reactivo de Nash36 data de 1953, es relativamente un mtodo poco

comn y empleado generalmente para cuantificacin de formaldehdo en matrices
lquidas. Pese a que no est incluido como un mtodo de referencia para
determinar formaldehdo en aire por ninguna de las organizaciones internacionales
reguladoras de la calidad del aire ms comunes como son la ACGIH, la OSHA, el
ministerio de trabajo Espaol, la NIOSH, la ATDSR y HEALTH CANADA37,38,39.
Las caractersticas de este mtodo encontradas en esta investigacin, revelan que
el mtodo podra presentar algunas ventajas en comparacin con los mtodos de
referencia. Si bien es cierto que los mtodos del cido cromotrpico y la
derivatizacin por 2,4-DNPH con anlisis por HPLC son mtodos recomendados
por varias organizaciones como la OSHA, lo que indica que estos mtodos son
47

altamente confiables en cuanto a la cuantificacin de formaldehdo, las

comparaciones estadsticas con el mtodo de Nash revelaron que este ltimo es
estadsticamente mejor con una confiabilidad del 95 % en los parmetros de
linealidad, exactitud y precisin. Al menos en las condiciones del laboratorio.

De otro lado, en comparacin con los mtodos de cromatografa, lquida y de

gases, el mtodo del reactivo de Nash es ms econmico, dado que disminuye
consumo de solventes, adems de emplear tiempos de anlisis ms cortos. En
cuanto a la captura de muestras de aire, muchas de estas se realizan con
cartuchos especializados los cuales suelen ser ms costosos en comparacin con
el uso de soluciones adsorbentes. No obstante, estas ltimas pueden presentar
problemas de estabilidad y tiempos de vida ms cortos, sin embargo estas
desventajas no se presentaron en el reactivo de Nash, el cual presento estabilidad
en el compuesto diacetildihidrolutidina por un lapso de un mes, almacenando las
muestras en nevera a 20 C.

5.3 ANLISIS DEL COMPORTAMIENTO DEL FORMALDEHDO EN EL AIRE

DEL ANFITEATRO

El anlisis de esta seccin comprender inicialmente el reporte de los resultados

cualitativos encontrados en el anfiteatro, seguido por la discusin de los resultados
cuantitativos.

48

5.3.1 Caractersticas del sitio de muestreo: El anfiteatro de la Escuela de Ciencias

Bsicas de la Universidad del Valle se encuentra en el stano del edificio de dicha
escuela, est compuesto por tres zonas: un rea de museo, una sala de diseccin
y una sala de conservacin cadavrica. Estas tres zonas, aunque adyacentes, son
sitios independientes con entradas y salidas para el personal propias, as como
extractores y ventiladores propios para cada rea. No obstante, en cada uno de
estos sitios se presume hay presencia de formaldehdo en el aire debido a las
distintas actividades particulares que se realizan con esta sustancia en cada rea.
Sin embrago, slo se eligi como rea de muestreo la sala de diseccin, debido a
que es el lugar con mayor frecuencia de manipulacin de soluciones de
formaldehdo, adems de ser el rea de mayor flujo de personas.

La sala de diseccin es un rea de aproximadamente 125 m2 y el cielo raso

alcanza una altura mxima de aproximadamente 4 m. La sala cuenta con 4
ventiladores que ingresan constantemente aire desde el exterior al interior del
recinto, y 6 extractores que expulsan el aire hacia el exterior. Ambos, tanto los
ventiladores como los extractores, se encuentran ubicados en la parte superior del
lugar. Si bien hay instalaciones para situar extractores en la parte inferior de la
sala, no hay equipos de esta clase funcionando actualmente .De otro lado, la sala
de diseccin cuenta con un rea de lavado de manos, as como una ducha y
lavado de ojos para casos de emergencia. En el lugar, el uso de bolsas rojas,
como indicadores de desechos de riesgo biolgico, es preeminente.

49

El ingreso a la sala de diseccin se hace mediante un sistema de puertas de vidrio

mecnicas, las cuales se abren o cierran mediante la accin de un botn ubicado
en la pared, ver figura 2. La apertura de las puertas se hace desde el centro hacia
los lados, lo cual no genera ningn tipo de presin sobre el aire al interior de la
sala.

Figura 2. Puertas de ingreso a la sala de diseccin del anfiteatro de la Escuela de

Ciencias Bsicas de la Universidad del Valle.

Adicionalmente, la sala est equipada con 20 mesas de diseccin en las cuales

hay lugar para un cuerpo humano por mesa, ver figura 3. Cada cuerpo es abrigado
por dos cubiertas, la primera es una sbana blanca que envuelve todo el cadver
y la segunda es un tipo de lona plstica gruesa que cubre de forma superficial el
cadver envuelto sobre la mesa.

50

Figura 3. Sala de diseccin del anfiteatro de la Escuela de Ciencias Bsicas de la

Universidad del Valle.

5.3.2 Sesiones de muestreo: Dado que estadsticamente el mejor mtodo fue el

reactivo de Nash (seccin 5.1), el muestreo en el anfiteatro se realiz empleando
una solucin de Nash, tal como se especifica su preparacin en la seccin 4.1.3,
como solucin captadora de formaldehdo en el aire.

Las sesiones de muestreo se llevaron a cabo siempre en la jornada de la maana

entre las 9:30 am y las 12:00 m. Durante todas las fechas de muestreo se
conservaron 15 cadveres en el recinto, as como en ninguna de las sesiones se
super un mximo de 3 personas en el lugar.

51

El procedimiento de muestreo implic siempre despojar de sus dos cubiertas a

todos los cadveres, despus de 5 minutos de finalizada esta accin, se inicia con
la toma de la primera muestra, la cual tiene una duracin de diez minutos.
Posteriormente, se colectan otras cuatro muestras, cada una con una duracin de
diez minutos, y finalmente, se cubren todos los cadveres.

Para analizar el comportamiento del formaldehdo en el aire de la sala de

diseccin, se trataron en total 50 muestras de aire tomadas entre los das 22 de
agosto de 2011 al 02 de Septiembre de 2011, 5 muestras por da en un rango de
10 das de muestreo. La distribucin de las concentraciones promedio de
formaldehdo con respecto a los das de muestreo se observa en la figura 4. Los
valores de absorbancia obtenidos para cada muestra se encuentran consignados
en el anexo 8.

Adicionalmente, un conjunto de 3 muestras de aire del anfiteatro se tomaron

cuando en la sala de diseccin haban 23 personas realizando prcticas de
anatoma. La concentracin promedio de formaldehdo encontrada en ese
momento fue de 0,4 0,1 ppb con una confiabilidad del 95 %. Los valores de
absorbancia y su respectiva regresin lineal para determinar las concentraciones
de formaldehdo son reportadas en el anexo 9.

52

Concentracin de formaldehdo /
ppb

2,5
2,0
1,5
1,0
0,5
0,0
1

10

11

12

Das de muestreo

Figura 4. Serie de tiempo de las concentraciones de formaldehdo en el aire del

anfiteatro observadas entre el 22 de agosto al 02 de septiembre del 2011. La lnea
roja indica el periodo de fin de semana, en el cual no hubo muestreo ni actividad
laboral.

De acuerdo a los datos de la serie de tiempo de la figura 4, se calcul que la

concentracin promedio de formaldehdo en el aire del anfiteatro fue de 1,4 0,7
ppb con una confiabilidad del 95 %, esto indica que el anfiteatro cumple con la
norma laboral de no superar los lmites de exposicin TLVs estipulados para el
formaldehdo, los cuales son de 0,75 y 2 ppm para el TWA y el STEL
respectivamente. Cabe resaltar que en ningn da de muestreo los niveles de
formaldehdo superaron dichos TLVs.

De otro lado, las concentraciones de formaldehdo ms frecuentes encontradas en

el aire del anfiteatro fueron 1,7 y 0,7 ppb, como se observa en el histograma de la

53

figura 5, obtenido de los 50 datos de muestreo. Adicionalmente, el comportamiento

general de los niveles de formaldehdo durante los diez das de muestreo indica
que la concentracin ms alta fue de 2,8 ppb y la menor de 0,5 ppb encontrados
en los das 1 y 8, respectivamente. Esto indica que las concentraciones de
formaldehdo en el aire del anfiteatro presentan una tendencia general a disminuir
a travs del tiempo, lo cual se observa en la serie de la figura 4.

120%

Frecuencia

6
80%

5
4

60%

40%

Porcentaje acumulado

100%

20%

1
0

0%
Concentracin de formaldehdo / ppb

Figura 5. Histograma de frecuencias de las concentraciones de formaldehdo en el

aire del anfiteatro observadas en los 10 das de muestreo.

Si se analiza en detalle, la serie de tiempo obtenida en la figura 4, y teniendo en

cuenta que las semanas de muestreo van desde los das 1 - 5 y otra desde 8 -12,
se observa que hay un evidente patrn de comportamiento lineal de las
concentraciones de formaldehdo a travs de cada semana. Al graficar las

54

concentraciones de formaldehdo obtenidas por cada da con respecto a los das

de la semana, figura 6, y realizar regresiones lineales de mnimos cuadrados
sobre cada curva semanal, se encuentra una buena correlacin lineal de magnitud
0,9 entre los das de la semana y las concentraciones de formaldehdo en el aire

Concentracin de formaldehdo /
ppb

del anfiteatro.

3,0
2,5
2,0

r = -0,9624

1,5
1,0
0,5

r =- 0,9107

0,0
Lunes

Martes

Mircoles

Jueves

Viernes

Das de la semana muestreados

Figura 6. Comportamiento de las concentraciones de formaldehdo en el anfiteatro

a travs de los das de la semana muestreados. La lnea azul corresponde a la
semana entre 22 26 de Agosto y la rojo entre 29 de Agosto al 02 de Septiembre.
Tambin se grafican las tendencias lineales con sus respectivos coeficientes de
correlacin.

En la figura 6, los coeficientes de correlacin lineal poseen signos negativos

indicando que la correlacin es descendente y las concentraciones de
formaldehdo disminuyen desde el lunes hacia el viernes. Este comportamiento

55

concuerda con lo esperado ya que los cadveres de la sala de diseccin, los

cuales son la fuente de emisin de formaldehdo, pierden formaldehdo por medio
de la evaporacin, a su vez los vapores liberados son expulsados al exterior de la
sala por los extractores.

Adicionalmente, es congruente con las actividades realizadas en el anfiteatro que

el da Lunes los niveles de formaldehdo aumenten con respecto al Viernes
anterior (figura 4), ya que los das Viernes en la tarde, el tcnico operario del
anfiteatro realiza el mantenimiento sobre los cadveres, el cual consiste en baar
la

mayora

de

cadveres

con

un

preparado

especial

que

contiene

aproximadamente 10 % de formaldehdo. Los incrementos en los niveles de

formaldehdo que se producen cada Lunes no se pueden estimar con certeza ya
que ellos dependern de las cantidades de formol que emplee el operario, as
como la cantidad de cadveres que sean tratados.

Por otra parte, secciones de tiempo en donde las concentraciones de

formaldehdo permanecieron aproximadamente constantes en la serie de tiempo
de la figura 4, como las observadas entre los das 8 -10, pueden indicar que en
este periodo la mayora de los cadveres permanecieron abrigados por sus dos
cubiertas durante todo el da, evitando as liberaciones de formaldehdo. De forma
contraria, cadas bruscas de concentracin de formaldehdo en la serie de la figura
4, como se observa del da 10 al 11, indica que los cadveres estuvieron
despojados de sus dos cubiertas gran parte del da. Teniendo en cuenta lo
56

anterior, se cree que el comportamiento de los niveles de formaldehdo no se

puede caracterizar con total certeza pese incluso a las tendencias lineales
observadas en la figura 6. Para soportar esto, se realiz el diagrama de cajas de la
figura 7, el cual muestra la distribucin por percentiles de las muestras tomadas
cada da.

3,5

Concentracin de formaldehdo / ppb

3,0
2,5
2,0
1,5
1,0
0,5
0,0
1

10

11

12

Das de muestreo

Figura 7. Diagrama de cajas para las concentraciones de formaldehdo en cada

uno de los das de muestreo. La zona roja indica los percentiles 25 al 50, y la
verde indica los percentiles 50 al 75, el rango de concentraciones para cada da es
indicado por los brazos verticales de la caja.

57

El diagrama de cajas muestra que las concentraciones de formaldehdo en el aire

del anfiteatro no se comportan bajo una distribucin normal en cada da de
muestreo. De manera contraria, las cajas de la figura 7 se ubicaran en el centro
de los brazos de la caja y la divisin interna de cada caja (percentil 50)
correspondera con la mitad del ancho de caja, indicando que la mediana de las
concentraciones tomadas cada da corresponde con el promedio de concentracin
para cada da. Esto tambin puede indicar que la concentracin de formaldehdo
no es homognea en toda la sala de diseccin, lo cual es muy factible dado que
hay ventiladores y extractores que generan un flujo irregular de aire en el lugar,
adems cada cadver no libera la misma cantidad de formaldehdo.

De este modo, se concluye que a pesar de la tendencia lineal que exhibe la figura
6, el comportamiento de los niveles de formaldehdo puede variar drsticamente
de un da a otro sin un patrn de comportamiento, lo cual puede suceder porque
existen muchas variables que afectan la concentracin de formaldehdo en el aire
del anfiteatro, tales como: el tiempo que permanecen destapados los cadveres, la
cantidad de formaldehdo que se adiciona a los cadveres en cada mantenimiento
y el sistema de extraccin-ventilacin de aire.

Entre las implicaciones a la salud humana que pueden tener lugar por exposicin
al formaldehdo como los trastornos respiratorios y la irritacin ocular, se
encuentra tambin el cncer40. Si bien no es de aceptacin mundial que la
exposicin a formaldehdo puede desarrollar algn tipo de cncer en una persona,
58

la EPA ha establecido, con base en estudios con ratones, cules podran ser los
ndices de riego para desarrollar algn tipo de cncer por inhalacin de
formaldehdo incluso a concentraciones muy bajas41. La EPA, establece que hay
un riesgo de 1,3 10-5 de desarrollar cncer por cada 0,8 ppb de formaldehdo a
la que se est expuesto. En este sentido, y teniendo en cuenta que la
concentracin de formaldehdo promedio encontrada en la sala de diseccin fue
de 1,4 ppb, las personas que ingresen a este espacio sin proteccin respiratoria,
como mascarillas especiales, estn expuestos a un incremento en el nivel de riego
de cncer de 2,3 en cien mil. No obstante, el estudio de la EPA propone que el
nivel de riesgo de cncer mnimo es de 8 ppb de formaldehdo. Entre los das
muestreados, en ningn momento se sobrepas este umbral.

En adicin, a partir del muestreo que se realiz con 23 personas en la sala de

diseccin, el cual arroj una concentracin promedio de 0,4 ppb de formaldehdo,
y teniendo en cuenta que la concentracin promedio cuando no hay ms de 3
personas en el lugar es de 1,4 ppb, se calcula que la concentracin de
formaldehdo en el aire disminuye aproximadamente en un 71,4 % cuando hay
este grupo de personas en el lugar. Esto indica que gran parte de la cantidad de
formaldehdo liberada por los cadveres es absorbida por las personas presentes.
Sin embargo, no es adecuado pensar que la totalidad de la magnitud de
formaldehdo diferida es completamente inhalada por los pulmones del personal,
ya que parte puede resultar tan solo adherida a las prendas de vestir. Tambin se
debe tener en cuenta que el clculo no es muy riguroso, ya que slo se estableci
59

con un da de muestreo, no obstante resulta preocupante estimar que las

concentraciones de formaldehdo en el aire se disminuyen ms del 50 % de lo
normal cuando hay un grupo de personas relativamente grande, como son los
grupos de estudiantes de medicina que con frecuencia visitan el lugar para realizar
prcticas de diseccin.

De otro lado, aunque los niveles de formaldehdo en el aire del anfiteatro de la

Escuela de Ciencias Bsicas de la Universidad del Valle cumplen ampliamente
con las normas mnimas de control laboral para esta sustancia, lo cual indica que
el sistema de extraccin-ventilacin es eficiente y que el uso del formaldehdo es
regulado, se recomienda la instalacin de extractores de aire en la parte inferior
del recinto, ya que el formaldehdo es un gas ms denso que el aire, este tendr
una predisposicin a ubicarse en las reas cercanas al suelo, por lo que
extractores en esta zona generan una extraccin mucho ms eficiente de la
sustancia. Adicionalmente, el uso de filtros de carbn activado en los extractores
del lugar se recomienda como el mejor mtodo para purificar el lugar as como
tambin evitar que las emisiones de formaldehdo contaminen el ambiente
urbano exterior del anfiteatro.

Tambin se sugiere el uso obligatorio de mascarillas de proteccin nasal para todo

el personal visitante al anfiteatro, en lo posible equipados con filtros
especializados. La prctica de esta actividad evitar afecciones tracto respiratorias
que con frecuencia sufren las personas que asisten al anfiteatro. Adems, con ello
60

no slo se evita la inhalacin de gases de formaldehido, sino tambin de fenol,

reactivo que es tambin utilizado en el anfiteatro para la conservacin cadavrica.
De hecho, en el anfiteatro de la Escuela de Ciencias Bsicas de la Universidad del
Valle, el fenol es usado en mayor concentracin que el formaldehdo en el
mantenimiento de los cadveres, con seguridad las concentraciones en el aire del
primero son mayores que las del segundo, ya que al visitar el lugar es inminente el
olor a fenol, sin embargo, este no es considerado como cancergeno. En pero se
recomienda establecer un estudio para evaluar los niveles de fenol en el aire del
anfiteatro y verificar si cumple con los requerimientos mnimos laborales.

Finalmente, se propone el mtodo del reactivo de Nash como un procedimiento

analtico exacto, preciso, confiable y econmico para la determinacin de
formaldehdo en aire. Se recomienda, especialmente a las asegurados de riesgos
profesionales del pas, encargadas de evaluar profesionalmente los niveles de
formaldehdo en los distintos ambientes laborales, contemplar el empleo de este
mtodo como parte de sus procedimientos estndar.

61

6. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

- Se encontr que el mejor mtodo para la cuantificacin de formaldehdo en aire

entre el cido cromotrpico, la derivatizacin con 2,4-DNPH y el reactivo de Nash,
fue este ltimo, arrojando un coeficiente de correlacin lineal de 0,99959, un
porcentaje de recuperacin de 99,1 %, un lmite de deteccin de 0,05 ppm y un
coeficiente de variacin de 2,23.

- Se encontr que la concentracin promedio de formaldehdo en la sala de

diseccin del anfiteatro de la Escuela de Ciencias Bsicas de la Universidad del
Valle fue de 1,4 ppb indicando que el lugar respeta los lmites de exposicin
laboral para esta sustancia establecidos por la ACGIH.

- Se encontr que el comportamiento de las concentraciones de formaldehdo en

la sala de diseccin del anfiteatro de estudio a travs del tiempo no presentan una
distribucin normal y presentan una tendencia general a disminuir desde el Lunes
al Viernes.

- Se encontr que los niveles de formaldehdo disminuyen en ms del 50 % en el

aire cuando hay 23 personas en la sala de diseccin.

62

- Se estim que las personas que ingresen a la sala de diseccin sin proteccin
respiratoria, estn expuestos a un incremento en el nivel de riego de cncer de 2,3
en cien mil.

- Los resultados obtenidos en este trabajo de investigacin podran constituir la

base para la implementacin del mtodo del reactivo de Nash como un
procedimiento analtico estndar para la cuantificacin de formaldehdo en
ambientes laborales.

- Se recomienda el uso obligatorio de mascarillas de proteccin nasal para todo el

personal que visite el anfiteatro de la Escuela de Ciencias Bsicas de la
Universidad del Valle.

- Se recomienda la instalacin de extractores en las zonas cercanas al suelo en la

sala de diseccin del anfiteatro.

- Se recomiendo realizar un estudio para evaluar los niveles de fenol en el aire del
anfiteatro de la Escuela de Ciencias Bsicas de la Universidad del Valle y verificar
si cumple con los requerimientos mnimos laborales.

- Se recomienda realizar estudios en el tiempo de los niveles de formaldehdo en

otros anfiteatros de la ciudad para evaluar la situacin medio ambiental a nivel
local.
63

7. BIBLIOGRAFA

1. CASTAO L. El rostro de los N.N de la urbe digital. Facultad de

Comunicaciones, Universidad de Antioquia. 2003.
2. Ibd.
3. ACGIH,American Conference of Governmental Industrial Hygienist [Internet].
Disponible en: http://www.acgih.org/home.htm
4. HSE. Formaldehyde in air. 1994;(MDSH 78):1-4.
5. HANOUNE B, LeBris T, Allou L, Marchand C, Le Calv S. Formaldehyde
measurements in libraries: Comparison between infrared diode laser
spectroscopy and a DNPH-derivatization method. Atmospheric Environment.
2006;40(30):57685775.
6. IARC, International Agency for Research on Cancer. Overall Evaluation of
Carcinogenicity to Humans, Formaldehyde (50000), The IARC Monographs
Series, vol. 88. 2004.
7. JIAO Z, Luo P, Wu Y, Ding S, Zhang Z. Absorption of lean formaldehyde from
air with Na2SO3 solution. Journal of Hazardous Materials. 2006;134(1-3):176
182.
8. WINBERRY W, Op.Cit. P 472.
9. CAI L, Jin G, Meng J. Investigation of formaldehyde concentration in indoor air
and furnishings. J. Health Toxicol. 2002;16:48.

64

10. WHO. Air Quality Guideline for Europe. European Series No. 91. WHO
Regional Publications. 2000 [Internet]. Disponible en: http://www.who.dk/
eprise/main/ WHO/Information Sources/Publications/Catalogue/20010910_6
11. BEDOYA L, Castillo M, Estrada E, Flrez S, Milln J. Consecuencias
respiratorias desencadenadas por exposicin al formaldehdo en los
embalsamadores de Santiago de Cali. Revista Colombiana de Neumologa.
2003;15(3).
12. PULIDO J, Valderrama J. Determinacin de la concentracin mnima
inhibidora de formaldehdo capaz de disminuir el crecimiento bacteriano de
cepas obtenidas en piscinas de conservacin cadavrica. Tesis de pregrado,
Facultad de Ciencias. Pontificia Universidad Javeriana. 2007.
13. STELLMAN J, Op.Cit. P 44.20.
14. PRETTO A, Milani M, Cardoso A. Colorimetric determination of formaldehyde
in air using a hanging drop of chromotropic acid. J. Environ. Mon. 2000;2:566
570.
15. STELLMAN J, Op.Cit. P 44.20.
16. NIOSH Manual of Analitycal Methods. Formaldehyde by GC Method # 2541.
1994;(4):5
17. NIOSH Manual of Analitycal Methods. Formaldehyde Method # 2016.
2003;(4):7.
18. HAFKENSCHEID T, Van J. Results from inter-laboratory comparisons of
aldehyde-2,4dinitrophenylhydrazone analysis. Anal. Bioanal.
Chem. 2002;372:658663.
65

19. U.S. Environmental Protection Agency, Method TO-11A, EPA-625/R-96/010b,

Compendium of Methods for the Determination of Toxic Organic Compounds
in Ambient Air, USEPA, Research Triangle Park, NC. 1999.
20. TAFT R. Selected methods for the measurement of air pollutants. Ohio, USA:
U.S. Department of health, education and welfare; 1965. P H-1
21. NIOSH Manual of Analitycal Methods. Formaldehyde Method # 2016.
2003;(4):7.
22. NASH T. The colorimetric estimation of formaldehyde by means of the
Hantzsch reaction. Biochem. J. 1953:55:416-421
23. QUATTROCCHI O., De Andrizzi S., Laba R. Introduccin a la HPLC,
aplicacin y prctica. Buenos Aires: Argentina. Artes grficas farro S.A;1992. P
313
24. MILLER N, MIller J. C. Estadstica y Quimiometra para Qumica Analtica. 4
ed. Madrid: Pearson Educacin S. A., 2002.
25. HORWITZ W. Evaluation of analytical methods for regulation of foods and
drugs. Anal. Chem. 1982:54:67A-76A.
26. MILLER. Op. Cit.
27. INSHT. NTP 22: Toma de muestras de contaminantes con soluciones
absorbents. Norma general. [Internet]. Disponible en: http://www.insht.es
28. MILLER. Op. Cit.
29. MILLER. Op. Cit.
30. MILLER. Op. Cit.
31. ACGIH Op. Cit.
66

32. ALTSHULLER A, Miller D, Sleva S. Determination of formaldehyde in gas

mixtures by the chromotropic method. Anal. Chem. 1961:33:621.
33. KENEDY E. Formaldehyde by VIS Method 3500 NIOSH. NMAM. 1994:4.
34. MILLER. Op. Cit.
35. MILLER. Op. Cit.
36. NASH Op. Cit.
37. NIOSH. Formaldehyde. [Internet]. Disponible en: http://www.cdc.gov/NIOSH/
38. HEALTH CANADA. Formaldehyde. [Internet]. Disponible en: http://www.hcsc.gc.ca
39. ATSDR. Formaldehyde. [Internet]. Disponible en: http://www.atsdr.cdc.gov/
40. EPA Integrated Risk Information System, formaldehyde [Internet]. Disponible
en: http://www.epa.gov/iris/frn02-22-01.htm
41. Ibd.

67

8. ANEXOS

ANEXO 1.Datos de absorbancia y rea (HPLC) usados para las curvas de

calibracin empleadas en el clculo del coeficiente de correlacin lineal (r) y la
estimacin del rango lineal

-Mtodo del cido cromotrpico

PATRON (ppm)

ABS (UA)

ABS (UA)

ABS (UA)

Promedio

0,010
0,025
0,050
0,100
0,150
0,200
0,250
0,500
1,000
1,500
2,000
5,000
10,000
15,000
20,000

0,210
0,148
0,157
0,190
0,240
0,287
0,319
0,509
0,769
1,120
1,378
2,510
2,605
2,605
2,605

0,109
0,114
0,139
0,175
0,241
0,254
0,294
0,478
0,780
1,093
1,451
2,307
2,551
2,605
2,605

0,098
0,120
0,138
0,190
0,230
0,262
0,303
0,490
0,891
1,135
1,417
2,508
2,592
2,592
2,592

0,139
0,127
0,145
0,185
0,237
0,268
0,305
0,492
0,813
1,116
1,415
2,442
2,583
2,601
2,601

0,98962

0,97660

68

0,98357

0,98326

-Mtodo de la derivatizacin por 2,4-DNPH con anlisis por HPLC

PATRON (ppm) REA (mUA*s)

REA
(mUA*s)

Promedio

0,010
0,025
0,050
0,100
0,150
0,200
0,250
0,500
1,000
1,500
2,000
5,000
10,000
15,000
20,000
30,000

0,000
369,512
322,780
472,368
459,333
449,661
540,851
779,550
1259,913
1783,652
2398,629
5190,167
10692,500
14645,400
21255,000
29985,300

408,428
862,122
332,458
687,566
852,890
857,478
935,949
1304,863
1767,908
2326,138
2695,195
5618,151
9892,997
16021,300
20627,900
29608,400

204,214
615,817
327,619
579,967
656,112
653,570
738,400
1042,207
1513,911
2054,895
2546,912
5404,159
10292,749
15333,350
20941,450
29796,850

0,99929

0,99938

0,99933

69

-Mtodo del reactivo de Nash

PATRON (ppm)

ABS (UA)

ABS (UA)

ABS (UA)

Promedio

0,010
0,025
0,050
0,100
0,150
0,200
0,250
0,500
1,000
1,500
2,000
5,000
10,000
15,000
20,000

0,060
0,068
0,076
0,090
0,107
0,132
0,147
0,239
0,411
0,596
0,773
1,825
2,559
2,599
2,599

0,055
0,060
0,068
0,087
0,106
0,121
0,140
0,230
0,396
0,565
0,734
1,960
2,562
2,562
2,562

0,049
0,054
0,065
0,080
0,100
0,115
0,133
0,223
0,388
0,555
0,714
1,696
2,548
2,548
2,548

0,055
0,061
0,070
0,086
0,104
0,123
0,140
0,231
0,398
0,572
0,740
1,827
2,556
2,570
2,570

0,99997

0,99886

0,99994

0,99959

70

ANEXO 2. Datos de absorbancia y rea (HPLC) usados para las curvas de

calibracin empleadas en el clculo del lmite de deteccin.

-Mtodo del cido cromotrpico

Curva de bajas concentraciones
PATRON
(ppm)
0,010
0,025
0,050
m

ABS (UA)

ABS (UA)

ABS (UA)

Promedio

0,210
0,148
0,157

0,109
0,114
0,139

0,098
0,120
0,138

0,139
0,127
0,145
0,19796

0,062
0,018
0,011
-1,17624

0,13139

0,06352

(curva de
bajas)
Y=mX+b

Curva de calibracin normal de trabajo

PATRON (ppm)
0,500
1,000
1,500
2,000
5,000
m
b
L.Det (ppm)

ABS (UA)
0,509
0,769
1,120
1,378
2,510
0,43500
0,38720
0,44

ABS (UA)
0,478
0,780
1,093
1,451
2,307
0,39020
0,44140
0,49

ABS (UA)
0,490
0,891
1,135
1,417
2,508
0,42644
0,43532
0,45

71

Promedio
0,492
0,813
1,116
1,415
2,442
0,41721
0,42131
0,46

(curva de calibracin)
Y=mX+b

-Mtodo de la derivatizacin por 2,4-DNPH con anlisis por HPLC

Curva de bajas concentraciones
PATRON (ppm) REA (mUA*s)
0,010
0,025
0,050
m
b

0,000
369,512
322,780

REA (mUA*s)

Promedio

408,428
862,122
332,458

204,214
615,817
327,619
1593,990
337,387

235,803
432,512
189,184
-2039,734
343,625

(curva de bajas)
Y=mX+b

Curva de calibracin normal de trabajo

PATRON (ppm) REA (mUA*s)
0,500
1,000
1,500
2,000
5,000
m
b
L.Det (ppm)

REA (mUA*s)

Promedio

779,550
1259,913
1783,652
2398,629
5190,167
979,955
322,473

1304,863
1767,908
2326,138
2695,195
5618,151
957,294
827,862

1042,207
1513,911
2054,895
2546,912
5404,159
968,625
575,167

1,05

1,08

1,06

72

(curva de calibracin)
Y=mX+b

-Mtodo del reactivo de Nash

Curva de bajas concentraciones
PATRON (ppm)

ABS (UA)

ABS (UA)

ABS (UA)

Promedio

0,010
0,025
0,050
m

0,060
0,068
0,076

0,055
0,060
0,068

0,049
0,054
0,065

0,055
0,061
0,070
0,37347

0,0055
0,0070
0,0057
-0,00145

0,05109

0,00611

(curva de
bajas)
Y=mX+b

Curva de calibracin normal de trabajo

PATRON (ppm)
0,500
1,000
1,500
2,000
5,000
m
b
L.Det (ppm)

ABS (UA)
0,239
0,411
0,596
0,773
1,825
0,35260
0,06360
0,052

ABS (UA)
0,230
0,396
0,565
0,734
1,960
0,38852
-0,00004
0,047

ABS (UA)
0,223
0,388
0,555
0,714
1,696
0,32704
0,06112
0,056

73

Promedio
0,231
0,398
0,572
0,740
1,827
0,35605
0,04156
0,052

(curva de calibracin)
Y=mX+b

ANEXO 3. Datos de absorbancia y rea (HPLC) usados para calcular los

porcentajes de recuperacin.

-Mtodo del cido cromotrpico

PATRON (ppm)
0,500

ABS (UA)
0,492

1,000

0,813

1,500

1,116

2,000

1,415

5,000

2,442

M1

1,530

M2

1,600

M3

1,453

-Mtodo del reactivo de Nash

PATRON (ppm)

-Mtodo de la derivatizacin por 2,4DNPH con anlisis por HPLC

PATRON (ppm) REA (mUA*s)
1042,207
0,500
1,000

1513,911

1,500

2054,895

2,000

2546,912

5,000

5404,159

M1

2403,691

M2

1449,496

74

0,500

ABS (UA)
0,231

1,000

0,398

1,500

0,572

2,000

0,740

5,000

1,827

M1

0,779

M2

0,746

M3

0,715

ANEXO 4.Datos de absorbancia y rea (HPLC) usados para calcular los

coeficientes de variacin.
M1

1396,662

M2

1352,948

0,500

ABS (UA)
0,492

M3

1348,074

1,000

0,813

M4

1394,397

1,500

1,116

M5

2403,691

2,000

1,415

M6

1449,496

5,000

2,442

-Mtodo del cido cromotrpico

PATRON (ppm)

-Mtodo del reactivo de Nash

M1

0,791

M2

0,839

M3

0,939

M4

0,783

M5

0,747

M6

0,803

M7

0,755

M8

0,816

M9

0,841

PATRON (ppm)
0,500

ABS (UA)
0,231

1,000

0,398

1,500

0,572

2,000

0,740

5,000

1,827

M1

0,411

M2

0,411

M3

0,409

-Mtodo de la derivatizacin por 2,4-

M4

0,394

DNPH con anlisis por HPLC

M5

0,398

M6

0,400

M7

0,379

M8

0,379

M9

0,389

PATRON (ppm) REA (mUA*s)

1042,207
0,500
1,000

1513,911

1,500

2054,895

2,000

2546,912

5,000

5404,159

75

ANEXO 5.Datos de absorbancia usados en el clculo de los porcentajes de

recuperacin para analizar la selectividad del mtodo del reactivo de Nash.

PATRON (ppm)

ABS (UA)

0,25
0,50
1,00
1,50
2,00

0,152
0,242
0,431
0,605
0,791

M1
M2
M3
M4
M5
M6
M7
M8
M9

0,420
0,423
0,416
0,419
0,425
0,412
0,422
0,426
0,419

76

ANEXO 6. Datos de absorbancia usados en el clculo de la desviacin estndar

del conjunto de muestras para analizar la robustez del mtodo del reactivo de
Nash.
-Analista 1

-Analista 2

PATRON (ppm)

ABS (UA)

PATRON (ppm)

ABS (UA)

0,25
0,50
1,00
1,50
2,00

0,320
0,412
0,586
0,772
0,952

0,25
0,50
1,00
1,50
2,00

0,318
0,412
0,585
0,775
0,953

M1
M2
M3
M4
M5
M6
M7
M8
M9

0,696
0,710
0,739
0,696
0,711
0,738
0,695
0,708
0,736

M1
M2
M3
M4
M5
M6
M7
M8
M9

0,699
0,714
0,741
0,698
0,713
0,740
0,699
0,711
0,739

77

ANEXO 7. Anova de 1 factor para observar la reproducibilidad inter-da e intraensayo del mtodo de Nash.
Conc. (ppm)

Conc. (ppm) Conc. (ppm)

M1

0,985

1,014

0,972

M2

0,985

1,025

0,972

M3

2,029

1,920

1,999

-Resumen
Grupos
M1
M2
M3

Cuenta
3
3
3

Suma
2,97
2,98
2,99

Promedio
0,990
0,994
0,997

Varianza
0,00047
0,00075
0,00027

-Anlisis de varianza
Variaciones
Entre grupos
Dentro de los
grupos
Total

Suma
Cuadrados
7,016E-05

Promedio
F
Probabilidad F Crtico
Cuadrados
3,508E-05 0,070865 0,932355812 5,143253

2,970E-03

4,950E-04

3,040E-03

78

ANEXO 8.Valores de absorbancia obtenidos para cada muestra obtenida del

anfiteatro de la Escuela de Ciencias Bsicas de la Universidad del Valle.

-ANLISIS ANFITEATRO 22 - 26 AGO/ 2011

-Curva patrn
Patrn (ppm)

Abs (UA)

0,250
0,500
1,000
1,500
2,000

0,156
0,23
0,406
0,563
0,729

m
b
r

0,32893
0,07143
0,9998300

-Muestras
22-ago-11
M1 (5mL)
M2 (5mL)
M3 (5mL)
M4 (5mL)
M5 (5mL)

Abs (UA)
0,928
1,739
1,576
1,341
1,872

Abs (UA)
0,926
1,706
1,565
1,345
1,871

Abs (UA)
0,926
1,701
1,590
1,357
1,986

23-ago-11
M1 (5mL)
M2 (5mL)
M3 (5mL)
M4 (5mL)
M5 (5mL)

Abs (UA)
1,695
1,472
1,047
1,935
1,872

Abs (UA)
1,670
1,478
1,048
1,915
1,895

Abs (UA)
1,688
1,493
1,047
1,855
1,957

24-ago-11
M1 (5mL)
M2 (5mL)
M3 (5mL)
M4 (5mL)
M5 (5mL)

Abs (UA)
0,889
1,122
0,942
1,179
1,060

Abs (UA)
0,887
1,116
0,941
1,174
1,056

Abs (UA)
0,890
1,120
0,938
1,171
1,061

79

25-ago-11
M1 (5mL)
M2 (5mL)
M3 (5mL)
M4 (5mL)
M5 (5mL)

Abs (UA)
1,373
0,997
1,137
0,975
1,244

Abs (UA)
1,393
0,997
1,135
0,970
1,245

Abs (UA)
1,387
0,991
1,131
0,974
1,240

26-ago-11
M1 (5mL)
M2 (5mL)
M3 (5mL)
M4 (5mL)
M5 (5mL)

Abs (UA)
0,388
0,462
0,570
0,439
0,424

Abs (UA)
0,388
0,463
0,569
0,439
0,424

Abs (UA)
0,388
0,463
0,569
0,440
0,423

-ANLISIS ANFITEATRO 29 AGO - 2 SEP/ 2011

-Curva patrn
Patrn (ppm)

Abs (UA)

0,250
0,500
1,000
1,500
2,000

0,156
0,23
0,406
0,563
0,729

-Muestras
29-ago-11
M1 (5mL)
M2 (5mL)
M3 (5mL)
M4 (5mL)
M5 (5mL)

Abs (UA)
0,517
0,767
0,600
0,536
0,446

Abs (UA)
0,516
0,767
0,599
0,536
0,446

80

m
b
r

0,32893
0,07143
0,9998300

Abs (UA)
0,517
0,767
0,600
0,536
0,445

30-ago-11
M1 (5mL)
M2 (5mL)
M3 (5mL)
M4 (5mL)
M5 (5mL)

Abs (UA)
0,784
0,954
1,091
0,569
0,443

Abs (UA)
0,784
0,955
1,089
0,569
0,445

Abs (UA)
0,784
0,955
1,089
0,569
0,445

31-ago-11
M1 (5mL)
M2 (5mL)
M3 (5mL)
M4 (5mL)
M5 (5mL)

Abs (UA)
0,745
1,113
1,071
1,262
0,931

Abs (UA)
0,745
1,115
1,071
1,261
0,932

Abs (UA)
0,746
1,114
1,072
1,262
0,933

01-sep-11
M1 (5mL)
M2 (5mL)
M3 (5mL)
M4 (5mL)
M5 (5mL)

Abs (UA)
0,641
1,122
1,125
1,128
1,165

Abs (UA)
0,643
1,122
1,123
1,129
1,164

Abs (UA)
0,642
1,123
1,123
1,129
1,164

02-sep-11
M1 (5mL)
M2 (5mL)
M3 (5mL)
M4 (5mL)
M5 (5mL)

Abs (UA)
1,149
1,074
1,161
0,993
0,824

Abs (UA)
1,149
1,075
1,162
0,992
0,823

Abs (UA)
1,150
1,070
1,162
0,992
0,823

81

ANEXO 9. Valores de absorbancia para determinar las concentraciones de

formaldehdo cuando en la sala de diseccin haban 23 personas.

-Curva patrn
Patrn (ppm)

Abs (UA)

0,250
0,500
1,000
1,500
2,000

0,132
0,218
0,391
0,564
0,736

m
b
r

0,34534
0,04559
0,9999994

Abs (UA)
0,361
0,32
0,295

Abs (UA)
0,362
0,32
0,297

-Muestras

M1 (5mL)
M2 (5mL)
M3 (5mL)

Abs (UA)
0,362
0,320
0,294

82