INMUNOFLUORESENCIA INDIRECTA

Arturo Borja*, Julio Salom*, Oscar Baldovino*, Esteban Morales*.

*Estudiantes de cuarto semestre de medicina, universidad de Sucre, Colombia

RESUMEN
La inmunofluoresencia indirecta es una tcnica de doble capa en donde se aplica
el anticuerpo sin marcar directamente sobre el sustrato de tejido y se visualiza por
tratamiento con un suero anti-inmunoglobulina conjugado con fluorocromo, con el
fin de observar la presencia de anticuerpos especficos en un suero problema;
este informe se bas en la bsqueda de anticuerpos contra Leishmania, causante
de la leishmaniasis en humanos, en sueros extrados de muestras de sangre de
algunos de los estudiantes adscritos al curso de inmunologa bsica durante el
segundo semestre de 2015, para el presente informe no se obtuvieron datos que
apuntara a la presencia de inmunoglobulinas en las muestras usadas.

Palabras clave: Inmunofluoresencia, anticuerpo, inmunoglobulinas, fluorocromo.

INTRODUCCIN
La inmunofluoresencia indirecta es
una prueba para la deteccin de
anticuerpos especficos en la cual se
utiliza dos anticuerpos, el anticuerpo
primario no est conjugado, y para la
deteccin se utiliza un anticuerpo
secundario conjugado al fluorforo y
dirigido contra el anticuerpo primario,
Es una tcnica de doble capa en
donde se aplica el anticuerpo sin
marcar directamente sobre el sustrato
de tejido y se visualiza por
tratamiento con un suero antiinmunoglobulina
conjugado
con

fluorocromo, y es ms brillante que la

deteccin directa debido a que varias
anti-inmunoglobulinas fluorescentes
se pueden unir a cada una de las
molculas de Antgeno-anticuerpo
presentes en la primera capa,
adems dado que el proceso de
conjugacin es largo, se ahorra
tiempo cuando se estudian varios
sueros para la determinacin de
anticuerpo ya que slo es necesario
prepara un nico reactivo marcado
Javeriana.edu.co,. (2015).
En el presente informe se plante
como objetivo determinar la presencia

de
inmunoglobulinas
contra
Leishmania, el cual produce una
enfermedad
denominada
leishmaniasis que constituye un
espectro de enfermedades causadas
por especies del protozoo flagelado,
intracelular obligado del humano y
otros mamferos, que produce
lesiones
a
niveles
cutneo,
mucocutneo y visceral, Se transmite
a los humanos por la picadura de
flebtomos hembra infectados. En
Amrica, el vector es el mosquito
Lutzomyia, y en Europa, el gnero
Phlebotomus Rai K, Cuypers B,
Bhattarai NR, (2013).
MATERIALES Y MTODOS
En esta prctica de laboratorio
correspondiente
a
inmunofluoresencia indirecta (IFI),
inicialmente
se
agregaron
20
microlitros de los sueros problemas
pertenecientes a los 4 integrantes del
grupo ms un control positivo y uno
negativo a los pozos; cabe resaltar
que estos sueros fueron previamente
preparados siendo diluidos a 1/32 en
PBS 1X; luego, se incub en cmara
hmeda a 37C por 1 hora para
despus realizar 3 lavados de 5
minutos cada uno en jarra de Coplin
con una solucin de lavado (PBS 1X
+ tween 20 01) dejando secar a
temperatura
ambiente
para
a
continuacin agregar 20 microlitros
de conjugado 1/100 (mas azul de
Evans 0,04%) en cada pozo, se
incub por 1 hora a 37C en cmara
hmeda en oscuridad; luego, se
realizaron 3 lavados de 5 minutos
cada uno en oscuridad, dejando a
secar a temperatura ambiente en
oscuridad para por ultimo agregar 2

gotas de glicerina tamponada y leer

en microscopio con fluorescencia.

RESULTADOS Y ANLISIS
La Tabla 1 refleja los resultados
obtenidos durante la prctica, en el
control
positivo
se
observ
fluorescencia mientras que en el
control negativo no se observ
fluorescencia, lo cual corresponde
con lo esperado.
Tabla 1: Se muestran los resultados
obtenidos para
cada
muestra,
adems del control positivo y
negativo.
Muestra
Control +
Control
Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
Muestra 4

Resultado
Positivo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo

Se encontr que las cuatro muestras

son negativas para la presencias de
anticuerpos IgG contra Leishmania.
La IFI (inmunofluorescencia indirecta)
debido a su simplicidad, bajo costo y
a los buenos resultados en trminos
tanto de especificidad como de
sensibilidad es ampliamente usada
para el diagnstico de la enfermedad.
Esta tcnica se basa en el empleo de
fracciones
antignicas
semipurificadas
o
totales
de
epimastigotes
o
tripomastigotes
(Ramos y Ligonio). En la IFI se
utilizaron parsitos completos donde
los nicos antgenos que estn
disponibles para interactuar con los

anticuerpos del husped son los

antgenos de superficie (Monteon).
La interaccin se evidencia por medio
de un anticuerpo antiinmunoglobulina
humana, producido en conejo, cabra
o cobayo, dirigido contra las
fracciones constantes (Fc) de las
inmunoglobulinas IgG, IgA y/o IgM.
Este anticuerpo antiinmunoglobulina
humano est conjugado o acoplado a
un
fluorforo
(generalmente
isotiocianato de fluorescena [FITC]).
Los resultados del reconocimiento de
los antgenos por los autoanticuerpos
presentes en el suero, plasma o
cualquier otro lquido, se evalan en
un microscopio de epifluorescencia

REFERENCIAS
-

Ramos-Ligonio A, RamrezSnchez
ME,
GonzlezHernndez
JC,
RosalesEncina JL, Lpez-Monteon A.
Prevalencia de anticuerpos
contra Trypanosoma cruzi en
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Orizaba,
Veracruz,

Mxico. Salud Publica Mex

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Las
Amricas.
Recomendaciones para el
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Observation
Relapse after Treatment with
Miltefosine
for
Visceral
Leishmaniasis Is Associated
with Increased Infectivity of the
Infecting Leishmania donovani
Strain.
mBio
4:5
September/October 2013.