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Reconocimiento de Proteinas

Coagulacion de Proteinas

Las protenas , debido al gran tamao de sus molculas, forman con el a


soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formacin
al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70:C o al ser tratadas c
soluciones salinas, cidos, alcohol, etc.
La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a su
desnaturalizacin por los agentes indicados, que al actuar sobre la pro
desordenan por la destruccin de su estructura terciaria y cuaternaria .

Para ver la coagulacin de las protenas se puede utilizar clara de huevo, para
conseguir ms volumen puede prepararse para toda la clase una dilucin de
clara de huevo en agua, de forma que quede una mezcla an espesa.
1. Colocar en un tubo de ensayo una pequea cantidad de clara de huevo.
2. Aadir 5 gotas de cido actico y calentar el tubo a la llama del
mechero.
Reacciones coloreadas
Reaccion Xantoproteica:
Es debida a la formacin de un compuesto aromtico nitrado de color amarillo,
cuando las protenas son tratadas con cido ntrico concentrado. La prueba da
resultado positivo en aquellas proteinas con aminocidos portadores de grupos
bencnicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la
prueba se neutraliza con un lcali vira a un color anaranjado oscuro.
Tecnicas
1. Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. de solucin problema (clara de
huevo ).
2. Aadir 1 cc. de HNO3 concentrado.
3. Calentar al bao mara a 100: C..

4. Enfriar en agua fra


5. Aadir gota a gota una disolucin de sosa al 40%.
Reaccion de Biuret
La producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ya que se
debe a la presencia del enlace peptdico (- CO- NH -)que se destruye al
liberarse los aminocidos.
Cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado, se forma
una sustancia compleja denominada biuret, de frmula:
que en contacto con una solucin de sulfato cprico diluda, da una coloracin
violeta caracterstica.
Tecnica
1. Tomar un tubo de ensayo y poner unos 3 cc. de albmina de huevo.
2. Aadir 2cc. de solucin de hidrxido sdico al 20%.
3. A continuacin 4 5 gotas de solucin de sulfato cprico diluida al 1%.
4. Debe aparecer una coloracin violeta-roscea caracterstica.
Reaccion de los aminoacidos azufrados
Se pone de manifiesto por la formacin de un precipitado negruzco de sulfuro
de plomo. Se basa esta reaccin en la separacin mediante un lcali, del azufre
de los aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin de acetato de plomo,
forma el sulfuro de plomo.
Tecnica
1. Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. de albmina de huevo (clara de
huevo).
2. Aadir 2 cc. de solucin de hidrxido sdico al 20%.
3. Aadir 10 gotas de solucin de acetato de plomo al 5%.
4. Calentar el tubo hasta ebullicin.
5. Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha
formado sulfuro de plomo, utilizndose el azufre de los aminocidos, lo
que nos sirve para identificar proteinas que tienen en su composicin
aminocidos con azufre.

Poner de manifiesto ciertas propiedades de los lpidos, algunas de las cuales


pueden servirnos para su identificacin.

Bao
Mara.
Mechero.
Gradillas
con tubos de
ensayo
Vaso de
precipitado
con agua
Aceite
vegetal
Solucin
de Sudn III
en frasco
cuentagotas
Tinta roja
en frasco
cuentagotas
Solucin
de Hidrxido
sdico al
20%.
ter o
cloroformo.

Las grasas reaccionan en caliente con el hidrxido sdico o potsico


descomponindose en los dos elementos que la forman: glicerina y los cidos
grasos. Estos se combinan con los iones sodio o potasio del hidrxido para dar

jabones, que son en definitiva las sales sdicas o potsicas de los cidos
grasos.
La reaccin es la siguiente:

Proceder de la siguiente forma:


1. Colocar en un
tubo de ensayo
2cc de aceite
vegetal y 2cc de
una solucin de
hidrxido sdico
al 20%.
2. Agitar
enrgicamente y
colocar el tubo al
bao Mara de 20
a 30 minutos.
3. Transcurrido este
tiempo, se puede
observar en el
tubo tres capas: la
inferior clara, que
contiene la
solucin de sosa
sobrante junto
con la glicerina
formada; la
superior amarilla
de aceite no
utilizado, y la

intermedia, de
aspecto grumoso,
que es el jabn
formado.
Nota: Cuando ya se ha visto como se forma el jabn, se puede ir echando en
un vaso de precipitado el contenido de los tubos de ensayo, se remueve bien y
se deja calentar hasta que se haga un buen trozo de jabn.

Las grasas se colorean en rojo anaranjado por el colorante denominado Sudan


III.

Proceder as:
1. Disponer en una gradilla dos tubos de ensayo, colocando en ambos 2cc
de aceite.
2. Aadir a uno, 4 o 5 gotas de solucin alcohlica de Sudn III. Al otro tubo
aadir 4-5 gotas de tinta roja. Agitar ambos tubos y dejar reposar.
3. Se observar en el tubo al que se le aadi Sudn, que todo el aceite
aparece teido. En cambio en el frasco al que se aadi tinta roja, la
tinta se habr ido al fondo y el aceita aparecer sin teir.

Las grasas son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se


dividen en pequesimas gotitas formando una "emulsin" de aspecto lechoso,
que es transitoria, pues desaparece en reposo, por reagrupacin de las gotitas
de grasa en una capa que por su menor densidad se sita sobre la de agua.
Por el contrario, las grasas son solubles en los llamados disolventes orgnicos
como el ter, benceno, xilol, cloroformo, etc.

Proceder de la siguiente manera:


1. Tomar dos tubos de ensayo y poner en cada uno de ellos 2-3 cc de agua
y en el otro 2-3cc de ter u otro disolvente orgnico.
2. Aadir a cada tubo 1cc de aceite y agitar fuertemente. Observar la
formacin de gotitas o micelas y dejar en reposo. Se ver como el aceite
se ha disuelto en el ter y en cambio no lo hace en el agua, y el aceite
subir debido a su menor densidad.

Reconocimiento de lpidos

MATERIALES

Tubos de ensayo

Gradilla

Varillas de vidrio

Mechero

Vasos de precipitados

Pipetas

Solucin de NaOH al 20%

Solucin de Sudn III

Tinta china roja

Eter, cloroformo o acetona

Aceite de oliva

1. SAPONIFICACIN
FUNDAMENTO
Las grasas reaccionan en caliente con el hidrxido sdico o potsico
descomponindose en los dos elementos que las integran: glicerina y cidos
grasos. stos se combinan con los iones sodio o potasio del hidrxido para

dar jabones, que son en consecuencia las sales sdicas o potsicas de los
cidos grasos. En los seres vivos, la hidrlisis de los triglicridos se realiza
mediante la accin de enzimas especficos (lipasas) que dan lugar a la
formacin de cidos grasos y glicerina.
TCNICA
. Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al 20%.
. Agitar enrgicamente y colocar el tubo al bao Mara de 20 a 30 minutos.
. Pasado este tiempo, se pueden observar en el tubo 3 fases: una inferior
clara que contiene la solucin de sosa sobrante junto con la glicerina
formada, otra intermedia semislida que es el jabn formado y una superior
lipdica de aceite inalterado.
2. TINCIN
FUNDAMENTO
Los lpidos se colorean selectivamente de rojo-anaranjado con el colorante
Sudn III.
TCNICA
1. Disponer en una gradilla 2 tubos de ensayo colocando en ambos 2ml
de aceite.
2. Aadir a uno de los tubos 4-5 gotas de solucin alcohlica de Sudn III.
3. Al otro tubo aadir 4-5 gotas de tinta roja.
4. Agitar ambos tubos y dejar reposar.
5. Observar los resultados: en el tubo con Sudn III todo el aceite tiene
que aparecer teido, mientras que en el tubo con tinta, sta se ir al
fondo y el aceite no estar teido.
3. SOLUBILIDAD
FUNDAMENTO
Los lpidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se
dividen en pequesimas gotas formando una emulsin de aspecto lechoso,
que es transitoria, pues desaparece en reposo por reagrupacin de las gotitas
de grasa en una capa que, por su menor densidad, se sita sobre el agua.
Por el contrario, las grasas son solubles en disolventes orgnicos, como el
ter, cloroformo, acetona, benceno, etc.
TCNICA

1. Poner 2ml de aceite en dos tubos de ensayo.


2. Aadir a uno de ellos 2ml de agua y al otro 2ml de ter u otro
disolvente orgnico,
3. Agitar fuertemente ambos tubos y dejar reposar.
4. Observar los resultados: Se ver cmo el aceite se ha disuelto en el
ter y, en cambio no lo hace en el agua y el aceite subir debido a su
menor densidad.
CUESTIONES
1. Qu son los jabones?
2. Cmo se pueden obtener los jabones?
3. Por qu en la saponificacin la glicerina aparece en la fase acuosa?
4. Qu enzima logra en el aparato digestivo la hidrlisis de las grasas?
5. Indica lo que ocurre con la mezcla aceite-Sudn III y aceite-tinta y
explica a qu se debe la diferencia entre ambos resultados.
6. Qu ocurre con la emulsin de agua en aceite transcurridos unos
minutos de reposo?Y con la de benceno y aceite?A qu se deben las
diferencias observadas entre ambas emulsiones?