Mekanisme efek anti hiperurisemik dari Phyllanthus niruri dan

lignan yang konstituen

Latar Belakang
Hiperurisemia adalah salah satu kelainan biokimia yang biasa ditemui
dalam praktek klinis dan telah dilaporkan mempengaruhi sekitar 10% dari orang
dewasa secara global (Dincer et al., 2002). Modifikasi gaya hidup seperti
penurunan berat badan, penurunan konsumsi alkohol dan diet asupan purin dapat
membantu untuk menurunkan asam urat darah tetapi banyak pasien masih akan
memerlukan obat-obatan untuk mengontrol hiperurisemia mereka (Wright dan
Pinto, 2003;. Kong et al, 2004). Sejumlah obat yang saat ini digunakan dalam
praktek klinis dan mereka milik dua kelas yaitu inhibitor oksidase xanthin
misalnya allopurinol, dan agen urikosurik misalnya probenesid dan
benzbromarone. Allopurinol secara luas diresepkan untuk pengobatan
hiperurisemia dan asam urat. Namun, telah sering dikaitkan dengan merugikan
efek yang diwujudkan sebagai ruam, hipersensitivitas, hepatotoksisitas, gangguan
pencernaan, hepatitis dan demam. Kemudian probenesid umumnya tidak efektif
pada pasien dengan gangguan ginjal, sedangkan benzbromarone efektif pada
pasien dengan insufisiensi ginjal tetapi memiliki risiko hepatotoksisitas berat.
Dengan demikian, banyak dicari terapi baru yang efektif untuk penurun agen
asam urat.
Produk alami yang berasal dari tumbuhan telah lama digunakan dalam
obat tradisional untuk pengobatan hiperurisemia dan gout. Dalam penelitian yang
sedang berlangsung untuk agen anti hiperurisemik baru dari tanaman obat lokal,
ekstrak metanol dan konstituen lignan dari Phyllanthus niruriLinn.
(Euphorbiaceae) ditemukan untuk menurunkan asam urat plasma tikus
hyperuricemic (Murugaiyah dan Chan, 2006) . Meniran dapat ditemukan di
daerah tropis dan subtropis dan memiliki khasiat sebagai obat demam, diare, kolik
dan masalah ginjal, sebagai diuretik dan ekspektoran, juga telah digunakan
sebagai obat rakyat untuk mengobati kelebihan asam urat.Penelitian ini dilakukan
untuk menyelidiki mekanisme efek anti hiperurisemik dari meniran dan
konstituen lignannya dengan menggunakan uji xantin oksidase dan studi
urikosurik kalium oxonate- dan asam urat yang diinduksikan ke tikus
hiperurisemik.

Bahan dan Metode

a. Bahan dan reagen
-Asam urat dan kalium oxonate
-Probenesid, benzbromarone, pirazinamid, xantin oksidase (dari
buttermilk), xanthine, albumin serum sapi dan reagen Bradford
-Phyllanthus niruriLinn. (Euphorbiaceae)
b. Metode
- Ekstraksi,fraksinasi,isolasi,lignan
Pertama, bubuk kering dari daun Phyllanthus niruri disoxhlet lalu
diekstraksi berulang kali dengan metanol segar selama 5 hari. Ekstrak
yang dikumpulkan setelah penguapan pelarut metanol, menghasilkan
residu kehijauan yang kemudian dimuat ke kolom resin, dan
selanjutnya dielusi oleh peningkatan persentase bertahap metanol
dalam air. Eluat dari air, 30%, 50% dan 80-100% metanol dalam air
dikumpulkan secara terpisah sebagai pecahan 1, 2, 3 dan 4. Fraksi 4
menjadi bioaktif yang dipartisi dengan n-heksana, kloroform dan nbutanol untuk menghasilkan sub-fraksinya. 4 lignan seperti
phyllanthin, hypophyllanthin, phyltetralin dan niranthin diisolasi dari
n-heksana sub-fraksi, fraksi 4 dan kemudian strukturnya dikonfirmasi
oleh resonansi magnetik nuklir, spektrometer massa, ultraviolet dan
spektrum inframerah.
-

Hewan
Tikus jantan Sprague-Dawley umur 12-16 minggu, dengan bb awal
sekitar 180-280g, dipertahankan pada siklus gelap cahaya selama 12
jam, pada suhu kamar dari 25C dengan pemberian makanan pelet
standar dan air keran yang ditempatkan didalam kandang. Hewanhewan itu diisolasi untuk setidaknya 1 minggu sebelum awal
percobaan. Hewan dibagi ke dalam masing-masing 6 kelompok dan
ditempatkan secara individual selama periode percobaan. Penanganan
dan penggunaan hewan adalah sesuai dengan pedoman kelembagaan.
Urine tikus, dikumpulkan dalam tabung dengan asupan air yang diukur
selama 5 jam setelah perawatan diberikan. Sampel darah diambil pada
akhir studi oleh tusukan jantung. Hewan-hewan tersebut dibius dengan
dietil eter di dalam ruang dan ditempatkan ke punggungnya. Plasma
diperoleh setelah sentrifugasi pada 3000 g selama 15 menit. Plasma
dan urin sampel disimpan pada-20 C sebelum analisis kromatografi
cair kinerja tinggi (HPLC). Konsentrasi asam urat urin ditentukan oleh
sistem HPLC.

Pengujian oksidasi xantin secara In vitro

Efek penghambatan dari ekstrak Phyllanthus niruri dan lignan yang
pada aktivitas xantin oksidase ditentukan setelah metode
spektrofotometri. Sampel uji dilarutkan dalam dimetil sulfoksida

(DMSO) dan kemudian diencerkan dengan dapar fosfat (pH 7,8)

dengan konsentrasi akhir yang mengandung 1-5% DMSO. Pada
konsentrasi ini, DMSO ditemukan memiliki tidak ada penghambatan
xantin oksidase.
Pengujian oksidasi xantin In vivo
Setelah 5 jam administrasi ekstrak metanol, fraksi, sub-fraksi dan
lignan dari Phyllanthus niruri, tikus dibius dengan dietil eter dan hati
mereka dipotong dan diproses untuk mendapatkan fraksi perfusi sitosol
dengan 50 mL es dingin + 0,25 mol / L sukrosa dalam 100 mmol / L
larutan fosfat pH 7,8. Kemudian sekitar 3 g hati tersebut dipotong dan
dihomogenkan dalam homogenizer. Homogenat itu disentrifugasi
dalam Eppendorf centrifuge 5403 Untuk 10 menit pada 4 C.
Supernatan yang dihasilkan disaring dan selanjutnya disentrifugasi
pada 14.100 g selama 20 menit. Supernatan yang dihasilkan
disentrifugasi lagi selama 20 menit pada 4C. Lalu konsentrasi asam
urat dalam supernatan ditentukan pada 292 nm spektrofotometer
Lambda 45.
Analisi statistik
Hasilnya disajikan sebagai mean standard error (S.E.M.) dari 6
hewan. Signifikansi perbedaan statistik dievaluasi dengan analisis
varians (ANOVA) dilanjutkan oleh post hoctest Tukey.

Hasil penelitian
Pengobatan dengan ekstrak Phyllanthus niruri dengan methanol, fraksinya, subfraksi fraksi 4 (n-heksana, kloroform dan n-butanol) atau lignan disebabkan
perubahan signifikan dalam asupan air dan pengeluaran urin tikus hiperurisemik.
Hanya tikus hiperurisemik, diobati dengan Phyllanthin pada 10 mg / kg
menunjukkan peningkatan yang signifikan dalam pengeluaran urin. Induksi
hiperurisemia oleh pemberian tunggal kalium oxonate intraperitoneal (200 mg /
kg) dan asam urat per oral (1 gm / kg) menyebabkan peningkatan signifikan
dalam ekskresi asam urat dibandingkan dengan tikus kontrol normal. Sebaliknya,
tikus hiperurisemik diperlakukan dengan ekstrak Phyllanthus niruri methanol
memiliki perbedaan masing-masing lebih tinggi di ekskresi asam urat urin
dibandingkan hewan kontrol normal dan hiperurisemia. Antara fraksinya, fraksi 4
memiliki perbedaan lebih tinggi ekskresi asam urat dibandingkan kontrol normal
dan hiperurisemia. Pengobatan dengan benzbromarone (10 mg / kg), probenesid
(50 mg / kg) dan lignan, phyllanthin, hypophyllanthin dan phyltetralin pada 10 mg
/ kg juga diproduksi dan ekskresi urin masing-masing lebih tinggi dari asam urat
dibandingkan tikus normal bila dibandingkan dengan hewan kontrol
hiperurisemik. Mirip dengan hasil yang diperoleh untuk ekskresi asam urat,
administrasi benzbromarone, probenesid dan lignan menyebabkan lebih tinggi
asam urat, dibandingkan dengan kontrol hiperurisemik yang masing-masing
hanya diamati pada hewan yang diberi benzbromarone (10 mg / kg) dan
phyllanthin (10 mg / kg). Administrasi dari phyllanthin juga menghasilkan

peningkatan tergantung dosis clearance asam urat dari masing-masing uji jika
dibandingkan dengan yang kontrol hiperurisemik.

Kesimpulan
Berdasarkan temuan dari penelitian ini, tampak jelas bahwa peningkatan progresif
dalam ekskresi urin asam urat yang ditampilkan dari fraksi Phyllanthus niruri,
sub-fraksi dan lignan adalah sejajar. Efek anti hiperurisemik berbeda dengan studi
penghambatan dari xantin oksidase. Oleh karena itu, tampaknya sangat mungkin
bahwa efek anti hiperurisemik Ekstrak methanol niruri mungkin terutama
disebabkan untuk aksi urikosurik dan sebagian melalui penghambatan oksidase
xanthine. Sedangkan efek anti hiperurisemik dari lignan ini disebabkan oleh
tindakan urikosuriknya.