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FelipeMoraRestrepo
femorare@unal.edu.co
Biologa
BrandomCamiloMosqueraCadena
bcmosquera@unal.edu.co
Biologa
UNIVERSIDADNACIONALDECOLOMBIA
Bogot14deSeptiembredel2015
1.Hiptesis
Se llevarn a cabo procesos para determinar la actividad enzimtica en funcin del pH, la
concentracin de la enzima, la concentracin del sustrato y respecto a la presencia de
inhibidores, por tanto se espera obtener datos que correspondan con lo esperado segnla
literatura.
2.DatosyResultados
Setrabajaronlossiguientesreactivosconsusrespectivasconcentraciones:
ConcentracindeKMnO4:
0,005M
ConcentracindeH2O2:
0,05M
ConcentracindeNaCN:
0,05nM
Tabla#1.EfectodelpHsobrelaactividadenzimtica
Tubo
KMnO4
gastados
(mL)
H2O2
mL
Micromoles
deKMnO4
gastados
Micromoles
H2O2
iniciales
Micromoles
H2O2
Residuales
Micromoles
H2O2
descompuestas
Micromoles
descompuestas/
min/mLenzima
5,90
2,0
30
100
75
25
10,0
8,50
2,0
42
100
105
7,50
2,0
38
100
95
2,0
7,40
2,0
37
100
92
3,2
8,05
2,0
40
100
100
0,0
7,50
2,0
38
100
95
2,0
6,50
2,0
32
100
80
20
5,0
8,10
2,0
40
100
100
0,0
7,00
2,0
35
100
88
12
4,8
Grfica#1.ActividadenzimticaenfuncindelpH
Tabla#2.Efectodelaconcentracindelsustrato
Tubo
KMnO4
gastados
(mL)
Micromol
esde
KMnO4
gastados
H2O2
mL
Micromole
sH2O2
iniciales
Micromoles
H2O2
Residuales
Micromoles
H2O2
descompuesta
s
Micromoles
descompuesta
s/min/mL
enzima
2,10
10,50
0,5
25
26
4,65
23,25
1,0
50
58
6,70
33,50
1,5
75
84
7,30
36,50
2,0
100
91
0,9
Tabla#3.Efectodelaconcentracindelaenzima(Datostomadosdelgrupo12)
Tubo
KMnO4
gastados
(mL)
Micromoles
deKMnO4
gastados
H2O2
ml
Micromol
esH2O2
iniciales
Micromoles
H2O2
Residuales
Micromoles
H2O2
descompues
tas
Micromoles
descompuesta
s/min/mL
enzima
1,75
8,75
2,0
100
22
78
31,2
1,25
6,25
2,0
100
16
84
16,8
1,50
7,50
2,0
100
19
81
10,8
1,25
6,25
2,0
100
16
84
8,4
8,25
41,25
2,0
100
103
Grfica#2.Actividadenzimticaenfuncindelaconcentracindelaenzima
Tabla#4.Efectodeinhibidoressobrelaactividadenzimtica(Datostomadosdel
grupo2)
Tubo
KMnO4
gastados
(mL)
Micromoles
deKMnO4
gastados
H2O2
ml
Micromoles
H2O2
iniciales
Micromoles
H2O2
Residuales
Micromoles
H2O2
descompuestas
Micromoles
descompuestas
/min/mLenzima
1,70
2,0
100
20
80
8,0
1,00
2,0
100
12
88
8,8
2,70
14
2,0
100
35
65
6,5
Grfica#3.Actividadenzimticaenfuncindelacantidaddeinhibidor
3.Clculos
Muestradeclculos:
ConversindemLdereactivoamicromoles:
((CantidaddelreactivomL)*(1L/1000mL))*(concentracindereactivoM(moles/L))=
molesdereactivo
molesdereactivo*(micromol/1*10^6moles)=micromolesdereactivo
Ejemplo:
(KMnO4gastados(mL)*
(1L/1000mL)))
*
ConcentracindeKMnO4=molesdeKMnO4
molesdeKMnO4*(1micromol/1*10^6moles)=micromolesdeKMnO4
(5,90mLKMnO4*1L/1000mL)*0,005M=3*10^5mol
3*10^5molKMnO4*(1/1*10^6)=30micromolKMnO4
HallarlacantidaddeH2O2residual
Teniendoencuentaquelareaccinquesellevaacaboenlatitulacines:
PorlocualparacalcularcuntasmicromolesdeH2O2sedescompusieron,serealizael
siguienteclculo
MicromolesdeKMnO4gastados*(5*10^6micromolesdeH2O2/2*10^6micromolesde
KMno4)=MicromolesdeH2O2
Ejemplo:
30micromolKMnO4*(
5*10^6micromolesdeH2O2/2*10^6micromolesdeKMno4)=75
HallarlacantidaddeH2O2descompuesto
CantidadinicialdeH2O2CantidadresidualdeH2O2=cantidaddeH2O2decompuesto
Ejemplo:
100micromolKMnO475micromolKMnO4=25micromolKMnO4
Hallar
Micromolesdescompuestas/min/mLenzima
(Micromolesdescompuestas/tiempotranscurrido)/mLdeenzima=
Micromoles
descompuestas/min/mL
Ejemplo:
(25micromolH2O2/5minutos)/0,5mLenzima=10micromol/(minmL)
4.Discusinderesultados
[3]
5.Cuestionario
Latemperaturaylapresenciadecofactoresenzimticos.
Las temperaturas extremasafectanlavelocidaddelareaccindebidoalanaturalezadelas
protenas, aunque se puede hablar de temperaturas donde la actividad de la enzima es
mxima.
El H2SO4 se utiliza para desnaturalizar la enzima alterando el sitio activo de la enzima.
EstoselograbajandoelpHporaccindelcidosulfrico.
[4]
Si se podra sustituir ya que generalmente las enzimas se desnaturalizan a pH extremos,
por lo cual al agregar NaOH, el pH aumentara drsticamente logrando desnaturalizar la
enzimahaciendoquedetengasuactividadenzimtica.
[5]
6.Conclusiones
7.Bibliografa