Diseo de una planta para la extraccin de Taninos a partir

de hojas del Almendro Maladar (Terminalia cattapa L.)

Ingeniera qumica

Autores:

Galdmez Barrientos Daniel Alberto

Lpez Villanueva Gishel
Prez Gonzlez Arturo

Tutor:
Abud Archila Miguel

Taller de investigacin 1

Tuxtla Gutirrez Chiapas, 1 de Junio de 2015

Contenido
I.Introduccin................................................................... 5
II. Justificacin.. 6
III. Planteamiento del problema. 6
IV. Antecedentes 7
IV.1 Almendro Malabar Terminalia cattapa L. ... 7
IV.I.I Caractersticas morfolgicas7
IV.I.II Caractersticas de hojas. 7
IV.I.III Usos de la Terminalia cattapa L. . 8
IV.II Taninos. 9
IV.II.I Clasificacin. 11
IV.II.I.I Taninos condensados ..12
IV.II.I.II Taninos hidrolizables ...12
IV.II.I.II.I Galotaninos...12
IV.II.I.II.II Elagitaninos13
IV.II.I.II.II.I Punicalagina y Punicalina...14
IV.II.II Mtodos de extraccin de taninos .15
IV.II.II.I Con solucin metanol-agua..15
IV.II.II.II Con solucin agua 16
2

IV.II.II.III Mtodo de extraccin en especies maderables.. 16

IV.II.II.IV Con solucin acetona-agua.16
IV.II.II.V Del tipo rural.17
IV.III Extraccin solido liquido de taninos18
IV.III.I Fundamentos18
IV.III.II Tipos de extraccin. ..19
IV.III.II.I Extraccin slido-lquido discontinua.19
IV.III.II.II.I Extraccin con equipo soxhlet.19
IV.III.III Avances en la extraccin de taninos 21
IV.III.III.I Extraccin slido-lquido Asistida por Ultrasonidos 21
V.

Objetivo general23

V.I

Objetivos especficos23

VI.

Metodologa23

VI.I Materia prima..23

VI.II Procesos para la extraccin de taninos.. .24
VI.II.I.I Anlisis cualitativo con solucin acuosa de gelatina y NaCl al 1% y al 10%
respectivamente.. 24
VI.II.I.II Anlisis cualitativo con cloruro frrico..25
VI.II.II Determinacin del porcentaje de taninos por el mtodo de Stiasny25

VI.III Diseo Experimental. .26

VI.III Diseo de planta..26
VII.

Cronograma de actividades 27

VIII.

Referencia bibliogrficas.28

I.

Introduccin

El Almendro Malabar (Terminalia catappa L.) es un rbol tropical de gran porte,

dentro la familia de las combretceas, es cultivado como un rbol ornamental
ampliamente en las regiones tropicales del planeta, siendo una de ellas el estado
de Chiapas de acuerdo a (). Entre la composicin qumica de sus hojas se
encuentran: flavonoides, taninos, saponinas y fitosteroles de los cuales
sobresalen los taninos.
Los taninos son compuestos que se han desarrollado en la industria a lo largo de
los aos en la elaboracin de productos qumicos , fijadores en la industria textil,
en la fabricacin de tintas, productos farmacuticos, como agente clarificador en la
elaboracin del vino, adems como antidiarreico, cicatrizante y otras aplicaciones
en la medicina por su fusin antioxidante. Cabe constatar que debido a la
presencia de dichos principios activos, lo vuelve ideal para su aprovechamiento en
la regin del estado de Chiapas.
En el presente trabajo se propuso una metodologa experimental completamente
al azar para la extraccin de taninos presentes en las hojas de la Terminalia
cattapa L. donde las variables de estudio son: la composicin del solvente, el
tamao de partcula, la proporcin slido-lquido y el tiempo de extraccin. As
mismo se plante la lnea de proceso para su posible aplicacin a nivel industrial.

II.

Justificacin

Los fenoles son metablitos secundarios ampliamente distribuidos en el reino

vegetal, estos compuestos poseen importantes bioactividades, tales como:
actividad

antioxidante,

propiedades

antiinflamatorias,

antialrgicas,

anticancergenas, antivirales y presentan proteccin contra enfermedades

degenerativas. Los compuestos que poseen tres o ms sub-unidades fenlicas se
denomina taninos los cuales tienen mayor actividad antioxidante que los fenoles
monomricos simples.
Debido al uso potencial que tiene la actividad antioxidante en el desarrollo de
frmacos y cosmticos, resulta de inters desarrollar una metodologa que logre el
mejor rendimiento en la extraccin de taninos, para ofrecer a la industria un
proceso rentable.
En la actualidad existe una variedad de metodologas para la extraccin de
taninos, debido a la diversidad de materias primas que los contienen, mas sin
embargo no se ha desarrollado un metodologa donde se use las hojas del
Almendro Malabar, la cual resulta viable por su fcil obtencin, por lo que
desarrollar un proceso de extraccin de taninos, cuya materia prima sea este
especie, ofrecer una alternativa a la industria farmacutica y de cosmtica.
III.

Planteamiento del problema

Ante la demanda del consumidor de productos antioxidantes en frmacos y

cosmticos, le surge a la industria la necesidad de encontrar una metodologa
capaz de obtener la mayor concentracin de taninos.
Dicha metodologa deber analizar las variables que intervengan en el proceso de
extraccin, tales como: tamao de partcula, concentracin de solvente y
proporcin solvente-materia. Resultar importante evaluar el efecto que tienen
dichas variables, adems de la interaccin que existe entre ellas para as
establecer un sistema de extraccin en el que se obtenga la mayor concentracin
de taninos

IV.

Antecedentes

IV.I Almendro Malabar Terminalia cattapa L.

Terminalia del latn terminalis-e, en los extremos, alude a que sus hojas crecen en
los extremos de las ramas. Catappa es el nombre popular malayo katappan.
Malabar es el nombre de una regin del sur de la India (Martnez, 2011).
La Terminalia catappa L. (Almendro de la India) es una especie que abunda en
Cuba y constituye un ejemplar de sumo valor porque sus hojas son ricas en
compuestos conocidos como taninos hidrolizables, los cuales poseen efectos
biolgicos comprobados que resultan de inters y se les atribuye una potente
accin antioxidante (Hernndez, 2003).
IV.I.I Caractersticas morfolgicas
rbol de hasta 40 m de alto, con tronco recto y corteza gris a caf grisceo,
superficialmente fisurada. Copa con forma de paraguas, ramas extendidas y
horizontales en capas, follaje durante algunos meses.
La madera es blanca, cscara lisa, roja por dentro. Hojas ovaladas como
esptulas cncavas, de 8 x 5 hasta 38 x 19 cm. Hojas grandes, nerviosas,
ovoides, algo angostadas por sus extremos y rematando en punta, verdes o
moraduzcas, verdes amarillosas por debajo y speras. Flores masculinas y
bisexuales blancas, diminutas, crecen en espigas de hasta 25 cm. Polinizado por
insectos. Fruto carnoso pero fibroso, comprimido lateralmente enrojece al madurar
con una sola semilla dura, de cubierta dura y acanalada. Fruto comestible aunque
poco cido.
IV.I.II Caractersticas de hojas
Los compuestos presentes en las hojas de la Terminalia catappa son
fundamentalmente taninos hidrolizables como: punicalagina, punicalina, cido
chebulgico, geranina, corilagina, 1-degaloil eugenina, granatina, tercataina,
terflavina, tergalagina (Martnez, 2011).
IV.I.III Usos de la Terminalia cattapa L.

La Terminalia catappa L. es una Combretaceae ampliamente distribuida en zonas

tropicales y subtropicales, las hojas de esta planta han sido empleadas en la
Medicina Tradicional para el tratamiento de la dermatitis y la hepatitis en Taiwan,
La India, Filipinas, Malasia e Indonesia.
Tiene efecto antioxidante probado, porque extractos acuosos obtenidos de las
hojas resultaron efectivos inhibiendo la peroxidacin lipdica producida por el
sistema FeCl2-cido ascrbico en homogenatos de hgado de ratas y, adems,
present actividad scavenger de radical superxido, lo que se comprob mediante
el uso de resonancia electrnica de espin y tcnicas de cambios de espn.
Tanto la punicalina como la punicalagina mostraron actividad antihepatotxica y
una fuerte accin antioxidante a dosis muy bajas en un modelo de dao heptico
inducido por tetracloruro de carbono (CCl4) en ratas, presentando tambin
actividad antiinflamatoria a dosis bajas en modelo de induccin de inflamacin por
carragenina en esta misma especie.
Un extracto acuoso de las hojas de la Terminalia catappa tiene efecto
anticlastognico in vitro e in vivo mediante la supresin de los microncleos
inducidos por mitomicina C en clulas CHO-K1 y por intubacin gstrica con el
extracto acuoso en ratones, respectivamente. Se obtuvo, adems, que inhibe de
forma dosis dependiente la peroxidacin lipdica in vitro y la formacin de perxido
de hidrgeno en leucocitos mononucleares humanos, inducida por el cido ptiobarbitrico (TPA). Los efectos anticlastognicos in vitro e in vivo se atribuyen a
su potencial oxidativo.
Al investigarse los mltiples efectos antioxidantes de los taninos presentes en la
Terminalia catappa L. se evalu: la habilidad de estos para prevenir la
peroxidacin lipdica, la formacin de radical anin superxido y la actividad
scavenger de radicales libres. Los resultados indicaron que todos estos
componentes mostraron una actividad antioxidante potente. Punicalina y
punicalagina fueron los compuestos

ms abundantes y exhibieron los efectos antioxidantes ms fuertes de este grupo

de taninos.
El cido elgico aislado a partir de extractos metanlicos de las hojas del
Almendro de la India mostr un actividad antioxidante fuerte en los sistemas de
ensayos siguientes: actividad scavenging radical difenil picril hidrazilo (DPPH),
oxidacin del cido linoleico y el ensayo oxidativo de muerte celular.
Punicalagina y extractos acuosos de las hojas de Terminalia catappa L. exhiben
efectos protectores sobre la genotoxicidad inducida por la bleomicina en cultivo de
clulas ovricas de hmster chinos, al suprimir la generacin intracelular de
radicales libres (superxidos y perxido de hidrgeno).
En investigaciones relacionadas con los taninos ms abundantes en las hojas de
Terminalia catappa, se comprob que estos poseen efectos sobre la replicacin
del VIH, porque inhiben la reverso transcriptasa VIH-124 y adems inhiben la
anhidrasa carbnica.
Utilizado como remedio para la disentera y la diarrea. Por sus propiedades de
antibitico natural es utilizado como infusin en los acuarios para prevenir
enfermedades y parsitos de peces (Betta, Castillo, Marin, Ortuno, Del Rio, 1997).
IV.II Taninos
Los taninos son compuestos polifenlicos de origen natural que se encuentran
presentes en diversas partes de las plantas vasculares as como tambin en
diversas frutas por ejemplo:
Granadas: Contienen una gran variedad de taninos, especialmente taninos
hidrolizables. El ms abundante se llama Punicalagina. Este compuesto es el
responsable de la accin antioxidante y beneficiosa para la salud.

Caquis: Algunos caquis son muy astringentes y no comestibles cuando no estn

muy maduros (en concreto los de Corea, Amrica y Japn).

Bayas: La mayora de las bayas, como los arndanos, las fresas y las
pacanas
(nueces
lisas),
condensados.

contienen

taninos

hidrolizables

Frutos secos: Los frutos de cscara que pueden ser consumidos crudos, como las
avellanas, las nueces, y las pacanas, contienen altas cantidades de taninos.

Estos compuestos se caracterizan por su capacidad para formar fuertes complejos

con macromolculas (protenas, celulosa y almidn, entre otros) y minerales,
causando su precipitacin. Por su interaccin con las protenas, los taninos se han
utilizado desde hace miles de aos para el curtido de pieles (Frutos y col., 2004;
Aguilar y col., 2007).
Estos compuestos polifenlicos son un grupo diverso de fitoqumicos que no se
identifican como nutrientes esenciales, pero se les atribuyen efectos positivos
sobre la salud de quienes los consumen habitualmente en la dieta, especialmente
por su actividad como antioxidantes.

El mecanismo de accin de estos compuestos ha sido tema de mltiples estudios y

debates, ya que poseen numerosos efectos biolgicos incluyendo regulacin de la
expresin de genes y actividad de diversas enzimas, entre otros. Sin embargo, sus

potenciales efectos biolgicos dependen de numerosos factores que an no son

bien comprendidos, como su absorcin o metabolismo, que a su vez depende de la
naturaleza qumica del compuesto (Beecher, 2003; Andrs et al., 2010).
En la medicina tradicional de China y Japn, los extractos vegetales ricos en
taninos han sido utilizados como agentes astringentes, antidiarreicos, diurticos,
antiinflamatorios, antispticos y antihemorrgicos. Por su capacidad para precipitar
metales pesados y algunos alcaloides, los taninos se pueden usar en el
tratamiento de envenenamiento causados por estas sustancias. Los principios
activos de las plantas medicinales suelen ser compuestos polifenlicos y en aos
recientes ha habido un gran inters cientfico sobre este grupo de compuestos por
su poder antioxidante y anticancergeno (Carretero-Accame, 2000; Khanbabaee y
Van Ree,
2001).
Los taninos son compuestos resistentes a la biodegradacin, por lo que se
consideran altamente contaminantes y se pueden convertir en un problema
ambiental al acumularse como en los efluentes de las curtiduras y los desechos de
la produccin de caf (Field y Lettinga, 1992; Bhat y col., 1998).
La presencia de taninos en la dieta de los rumiantes afecta su crecimiento y su
produccin de leche de diferentes maneras: al acomplejarse con macromolculas,
los taninos dificultan la digestin de ciertos nutrientes; los taninos pueden
interaccionar con las enzimas digestivas de la saliva y el rumen, impidiendo la
degradacin de los nutrientes; por ltimo, los taninos confieren un sabor amargo y
dan astringencia a los alimentos, lo cual reduce significativamente la ingesta por
parte del ganado.
IV.II.I Clasificacin
Los taninos son sustancias, presentes en gran nmero de plantas producto del
metabolismo secundario las cuales se clasifica en dos grandes grupos: Taninos
hidrolizables y Taninos Condensados (Haslam, 1989).

IV.II.I.I Taninos condensados

Los taninos condensados son una clase de flavonoides (sintetizados por las
plantas por la "va biosinttica de los flavonoides") que son los pigmentos
principales de muchas semillas, y tambin estn presentes en los tejidos
vegetativos de algunas plantas forrajeras.
Son polmeros formados por unidades de antocianidina (un flavonoide). Como
pueden ser hidrolizados en sus antocianidinas constituyentes si se los trata con
cidos fuertes, a veces son conocidos como proantocianidinas. En el caso del
tanino de pepita se libera cianidina, por lo que se denomina procianidina. En el
caso del tanino de hollejo se trata de una mezcla de procianidina y prodelfinidina.
El nombre genrico de proantocianidina se usa cuando se desconoce la
antocianidina formada. Qumicamente se trata de polmeros de flavanoles.
IV.II.I.II Taninos hidrolizables
Estos son polmeros heterogneos formados por cidos fenlicos, en particular
cido glico, y azcares simples. Son ms pequeos que los taninos
condensados y son hidrolizados con ms facilidad. Son esteres de cidos
fenlicos

(Glico

y Elgico), con una azcar (glucosa) o un polialcohol. Se

hidrolizan por cidos, cidos, lcalis y enzimas. Este grupo se subdivide en

Galotaninos y Elagitaninos, dependiendo del cido fenlico del que se constituya.
Los taninos hidrolizables estn presentes en un mayor nmero de especies del
reino vegetal y se han reportado en prcticamente todas las partes de la planta.
IV.II.I.II.I Galotaninos.
Los

Galotaninos

son

una

clase

de

molculas

que

pertenece

los taninos hidrolizables. Los polmeros de galotaninos se forman cuando el cido

Glico (figura 5.), un monmero polifenol, se esterifica y se une con el grupo
hidroxilo de un poliol de hidratos de carbono tales como glucosa,
unida
des de
cido glico por
medio de enlaces m-dipside.

Figura 5. Acido Glico

IV.II.I.II.II Elagitaninos.
Los elagitaninos son una clase diversa de taninos hidrolizables, un tipo
de polifenol formado principalmente de la unin oxidativa de grupos galoil (Acido
Glico), en glucosa 1,2,3,4,6-pentagalloyl o 1,2,3,4,6-pentagaloil-glucosa que es la
pentahidroxi cido glico un ster de glucosa. Este es el precursor comn de
los Galotaninos y los relacionados Elagitaninos.
Los Elagitaninos difieren de los Galotaninos, en que sus grupos galoil (Acido
Glico), estn vinculados a travs de enlaces C-C, mientras que los grupos galoil
en los galotaninos estn unidos por dpsidos (compuesto polifenlico que consta
de dos o ms unidades aromticas monocclicas unidas por un enlace ster).
La caracterstica de los elagitaninos son las unidades HHDP o cido
hexahidroxidifenico (figura 6.) que se acoplan en las posiciones 4-6 o la posicin
23 de la unidad D-glucopiranosa (glucosa), y tienen la conformacin (S), mientras
que el acoplamiento en las posiciones 3-6 conduce nicamente a la formacin (R)
de las unidades HHDP. Los acoplamientos en 1-6 son raros en la naturaleza (Lei.
y col.,
2002).

Figura 6. Acido Glico

Los elagitaninos se pueden clasificar de acuerdo al nmero de grupos HHDP en la

molcula debido a que, los monmeros de elagitaninos pueden ser oxidados en las
plantas y formar dmeros, trmeros y tetrmeros, oligmeros y polmeros, con pesos
moleculares de 4000 a 20000 Da (Carretero, 2000; Khanbabaee y Van Ree, 2001).
Cuando los elagitaninos son expuestos a cidos o bases, los enlaces ster son
hidrolizados y el grupo HHDP se libera, para tener estabilidad la molcula se
13

lactoniza de manera espontnea, para formar al cido elgico (figura 7.), esta es
una molcula de naturaleza fenlica que puede estar presente en forma libre en
algunas

14

especies vegetales como producto del metabolismo de las mismas, o bien puede
encontrarse a partir de sus precursores, los elagitaninos (Kaponen y Happonen,
2007).

Figura 7. Acido Glico

IV.II.I.II.II.I Punicalagina y Punicalina.

La

Punicalina

es

un

elagitanino.

Se

puede

encontrar

en

Punica

granatum Granada o en las hojas de Terminalia catappa, una planta usada para
tratar la dermatitis y la hepatitis. Tambin se encuentra en Combretum glutinosum,
las tres especies de Myrtales, las dos ltimas de la familia Combretaceae.
Es un muy activo inhibidor de la anhidrasa carbnica.
Punicalagina y punicalina fueron aisladas de las hojas de Terminalia catappa L.,
una planta Combretaceae distribuidos a lo largo playas tropicales y subtropicales,
que se utiliza para el tratamiento de la dermatitis y la hepatitis. Nuestros estudios
anteriores mostraron que ambos de estos compuestos ejercen actividad
antioxidante. En este estudio, se evalu la actividad antihepatotxica de
punicalagina y punicalina sobre la toxicidad inducida por paracetamol en el hgado
de rata. Despus de evaluar los cambios de varias funciones bioqumicas en suero,
los niveles de aspartato aminotransferasa y alanina aminotransferasa se
incrementaron por la administracin de acetaminofeno y reducidas por punicalagina
y punicalina. Los cambios histolgicos de todo el dao oxidativo y la vena central
de heptica inducida por acetaminofeno tambin se recuperaron por ambos
compuestos. Los datos muestran que tanto punicalagina y punicalina ejercen
actividad antihepatotxica, pero el tratamiento con dosis mayores mejoradas dao
heptico. Estos resultados sugieren que, incluso si punicalagina y punicalina tienen
actividad antioxidante en pequeas dosis, el tratamiento con dosis ms grandes
posiblemente inducir algunas toxicidades celulares.

Los taninos hidrolizables en los cuales despus de una hidrlisis cida se libera
cido glico o cido elgico. Se denominan galotaninos o elagitaninos
respectivamente. Los elagitaninos estn estructurados como molculas lineales de
glucosa enlazadas a las funciones carboxilo de los grupos hexahidroxidifnicos del
cido elgico, mientras que los galotaninos estn constituidos por ncleos de
glucosa en forma cclica que forman enlaces con la funcin cida del cido glico.
En ambos casos se trata de estructuras de una complejidad relativa
Los taninos hidrolizables se han convertido en un tema de inters cientfico debido
a su potencial nutraceutico. Tanto los galotatninos como los elagitaninos muestran
diversas propiedades bioqumicas que, dentro del individuo que las consume, se
traducen

en

diversos

beneficios

para

la

salud

(anti-diabticas,

anti-

mutagnica, antimicrobianas) asociados a su capacidad antioxidante.

IV.II.II Mtodos de extraccin de taninos
IV.II.II.I Con solucin metanol-agua
Se toma la materia prima de 0.50 cm de longitud y se somete a secado al vaco a
temperatura de 40C, por intervalos de 15 minutos. Se colocaron en un recipiente
de vidrio de 1L, 2.00 g de la muestra seca con 200 mL de una solucin 1:1 de
metanol-agua (100 mL de metanol + 100 mL de agua destilada). Todo el sistema
se dispone sobre un bao de hielo y se agita con un rodete de dos palas
accionado por un motor de hp por 3 horas. La mezcla resultante del proceso de
agitacin, se centrifuga por 40 minutos a 200rpm, obteniendo como producto de
esta operacin mecnica dos fases, en la cual la fase slida est conformada por
la muestra con menos contenido de polifenoles y la fase lquida est formada por
metanol, agua y taninos. Por ltimo se recolecta el sobrenadante en un recipiente
con tapa y se almacena en el refrigerador a 4C, hasta el instante previo de
su uso en la cuantificacin de taninos (fraccin metanlica).

IV.II.II.II Con solucin agua

Se toma 10 g materia prima de 0.50 cm de longitud y se someti a secado al
vaco a temperatura de 40C, por intervalos de 15 minutos. Se colocaron en un
recipiente de vidrio de 1L, 2.00 g de la muestra seca con 200 mL de agua. La
preparacin se agita por 15 minutos con un rodete de dos palas accionado por un
motor de hp. Una vez terminada la fase de agitacin de la muestra, sta se
coloca en la hornilla hasta ebullicin por 4 horas. Luego se dej reposar, dejando
que alcanzara la temperatura ambiente. Por ltimo, se filtra la muestra y se
recolecta el filtrado en un recipiente con tapa almacenndola en el refrigerador a
4C, hasta el instante previo de su uso en la cuantificacin de taninos (fraccin
acuosa) (Lastra y Rodrguez,
2004).
IV.II.II.III Mtodo de extraccin en especies maderables
Los taninos condensados extrables de la corteza seca de 11 especies de rboles
maderables de las regiones Norte y Central de Costa Rica. Realizando
extracciones por triplicado, a 25 g de cada una de las muestras molidas se les
adicionaron 200 mL de etanol al 95%, dicha mezcla se puso a reflujo a 70 C
durante dos horas, con agitacin continua. Al finalizar este periodo, las muestras
se filtraron en caliente, al vaco, utilizando un papel Whatman #54 para filtracin
rpida (tamao de
poro 22 mm).
Los extractos filtrados se concentraron en un evaporador rotatorio y se liofilizaron
en un equipo Labconco Freezone 2.5, dentro de un matraz previamente tarado,
para determinar por diferencia de masa la cantidad de material extrado de la
muestra (Soto,2001).
IV.II.II.IV Con solucin acetona-agua
Por su carcter polar, los taninos se han extrado generalmente con mezclas de
alcoholes con agua en diversas proporciones. Sin embargo la mezcla ms usada
es acetona-agua (70:30) o isopropanol-agua (65:35) utilizando ultrasonido en
cuatro extracciones.

Despus de eliminar el solvente orgnico por destilacin a presin reducida, es

costumbre hacer repeticin es costumbre hacer particin lquido lquido de la 5
fase acuosa en secuencia, ter etlico o diclorometano, acetato de etilo y nbutanol. Las fracciones de acetato de etilo, n-butanol y acuosa se someten
primero a cromatografa en columna sobre DIAION HP-20 con gradiente aguametanol (100:0 a 30:70), luego se hace separacin de las fracciones sobre
Toyopearl HW-40C y la purificacin final sobre MCI Gel CHP-20 y/o ODS. Cada
etapa de separacin se monitorea por espectrofotometra UV de 280 nm y por
HPLC-DAD. Las fracciones con perfiles cromatogrficos similares se juntan y se
someten a la siguiente etapa.
IV.II.II.V Del tipo rural
El procedimiento para extraer los taninos de las plantas comienza con la
molienda, tanto en que las partes de las plantas se muelen hasta formar astillas o
virutas. Luego se procede a la extraccin, que puede ser de tipo rural o industrial.
En la extraccin de tipo rural, se ponen las virutas en varias cubas grandes de
madera u ollas de barro cocido, y luego se le agrega agua a la primera hasta
cubrir por completo el material vegetal para evitar la oxidacin, al da siguiente se
transvasa el agua a la segunda y se vuelve a agregar agua caliente (no hirviendo)
a la primera, al tercer da se transvasa de la segunda a la tercera y de la primera a
la segunda, volvindose a agregar agua en la primera, y as se repite el
procedimiento durante unos 12 das, durante los cuales se va llenando un
depsito de reserva con el agua que ya se considera que extrajo la suficiente
cantidad de material. Para evitar que los taninos se estropeen

durante

el

proceso, el agua utilizada (llamada "jugo curtiente") no debe contener cal ni

hierro (debe ser "agua blanda"), normalmente es agua de lluvia o ro limpia, si es
necesario se filtra antes del proceso. Los instrumentos empleados deben ser de
barro, madera, cobre, latn o cestera, nunca de hierro pues el hierro reacciona
con los taninos formando cido ferroxlico.
IV.III Extraccin solido liquido de taninos.

La extraccin solido liquido es un proceso en el cual se extrae de un slido, uno o

varios constituyentes, mediante la utilizacin de un constituyente liquido.
Los

constituyentes que se desean extraer deben ser solubles en el solvente utilizado y

el resto del solido debe ser inerte al disolvente. Si se va a usar una materia prima
de origen vegetal se debe tener en consideracin que los compuestos de inters
se encuentran dentro de su clula, si las paredes celulares permanecen intactas
despues de la exposicin a un disolvente adecuado, entonces en la accin de
extraccin interviene la smosis del soluto a travs de las paredes celulares. Este
proceso puede ser lento, sin embargo, moler el material a un tamao de partcula
ms pequeo, ayuda a liberar el contenido de las clulas y en consecuencia,
reducir el tiempo de extraccin.
Esta operacin unitaria tiene como finalidad la separacin de uno o ms
componentes contenidos en una fase slida, mediante la utilizacin de una fase
lquida o disolvente. El componente o componentes que se transfieren de la fase
slida a la lquida reciben el nombre de soluto, mientras que el slido insoluble se
denomina inerte. Entre ms grande sea la superficie de contacto entre la parte
slida y el lquido que le atraviesa aumenta la eficiencia de la extraccin y para
que se d esto es necesario que la parte slida se le someta a un pre tratamiento
de secado y molienda.
IV.III.I Fundamentos
La separacin de un compuesto por extraccin se basa en la transferencia
selectiva del compuesto desde una mezcla slida o lquida con otros compuestos
hacia una fase lquida (normalmente un disolvente orgnico). El xito de la tcnica
depende bsicamente de la diferencia de solubilidad en el disolvente de extraccin
entre el compuesto deseado y los otros compuestos presentes en la mezcla inicial.

IV.III.II Tipos de extraccin.

IV.III.II.I Extraccin slido-lquido discontinua
La separacin de una mezcla de compuestos slidos tambin se puede llevar a
cabo aprovechando diferencias de solubilidad de los mismos en un determinado
disolvente. En el caso favorable de una mezcla de slidos en la cual uno de los
compuestos es soluble en un determinado disolvente (normalmente un disolvente
orgnico), mientras que los otros son insolubles, podemos hacer una extraccin
consistente en aadir este disolvente a la mezcla contenida en un vaso de
precipitados, un matraz o una cpsula de porcelana, en fro o en caliente, agitar o
triturar con ayuda de una varilla de vidrio y separar por filtracin la disolucin que
contiene el producto extrado y la fraccin insoluble que contiene las impurezas.
Si, al contrario, lo que se pretende es disolver las impurezas de la mezcla slida,
dejando el producto deseado como fraccin insoluble, el proceso, en lugar de
extraccin, se denomina lavado.
IV.III.II.II Extraccin slido-lquido continua.
La extraccin slido-lquido suele ser mucho ms eficiente cuando se hace de
manera continua con el disolvente de extraccin caliente en un sistema cerrado,
utilizando una metodologa similar a la comentada para la extraccin lquidolquido continua, basada en la maceracin con disolvente orgnico, previamente
vaporizado en un matraz y condensado en un refrigerante, de la mezcla slida a
extraer contenida dentro de un cartucho o bolsa de celulosa que se coloca en la
cmara de extraccin. El paso del disolvente orgnico con parte del producto
extrado al matraz inicial, permite que el mismo disolvente orgnico vuelva a ser
vaporizado, repitiendo un nuevo ciclo de extraccin, mientras que el producto
extrado, no voltil, se va concentrando en el matraz (Caldas, 2012).
IV.III.II.II.I Extraccin con equipo soxhlet
El equipo Soxhlet (figura 8.) tiene como funcin recircular los vapores
condensados con ayuda de un sifn a la fuente de disolvente que se encuentra en

evaporacin continua, arrastrando consigo los principios activos de la materia

prima contenido

en los cartuchos desechables. La capacidad aproximada en un equipo de

laboratorio es de 500 ml de volumen primario con una recirculacin de 100 ml
cadcinco minutos aproximadamente en estado estable. La velocidad de reflujo
depende directamente de la eficiencia y el tamao del condensador.
La sustancia slida se introduce en un cartucho poroso (generalmente hecho con
papel de filtro, que permite al solvente entrar y salir reteniendo al slido) que se
coloca dentro del recipiente (B). Se adosa un baln (C) a dicho recipiente donde
se coloca el volumen de solvente que se utilizar en la extraccin. Por el extremo
superior del recipiente (B), se coloca un condensador (D).
El solvente se calienta, los vapores ascienden por el tubo (E), condensan en el
refrigerante (D) y caen dentro del recipiente (B) impregnando al slido que se
encuentra en el cartucho (A). EL recipiente (B) se va llenando lentamente de
lquido hasta que llega al tope del tubo (F) y se descarga dentro del baln (C)
repite automticamente hasta que la extraccin se completa. El solvente de
extraccin se
evapora, recuperando as a la sustancia deseada.

Figura 8. Equipo Soxhlet

IV.III.III Avances en la extraccin de taninos

IV.III.III.I Extraccin
Ultrasonidos

slido-lquido

Asistida

por

Consiste en un sistema heterogneo fases inmiscibles, tales como lquidos o

lquido-lquido-slido. Ultrasonido alta cizalladura y fuerzas cavitacional mejoran
las tasas de disolucin de solutos significativamente hacia una extraccin ms
rpida y ms completa. Adems, este efecto puede utilizarse para reducir la
cantidad de solvente o cido utilizado. Como una tcnica probada, la extraccin
asistida por ultrasonido se utiliza cada vez ms debido a una demanda creciente
de tcnicas de extraccin respetuosa del medio ambiente con tiempo de
extraccin acortado y reducido consumo de disolventes orgnico.
Cuando las ondas del ultrasonido potente se juntan en un medio de extraccin
liquido, las ondas crean ciclos de presin variable, cuando son ciclos de baja
presin, pequeas burbujas emergen en el lquido; estas burbujas crecen en ciclos
de baja presin hasta que ya no pueden absorber ms energa, al pasar a un ciclo
de alta presin, estas burbujas explotan sbitamente y pasan a la etapa de
cavitacin ultrasnica, la cual consiste en ondas ultrasnicas de ultrasonido de
alta intensidad generan cavitacin en lquidos. Cavitacin provoca efectos
extremos localmente,

como

chorros

de

lquido

de

hasta

1000

km/h,

temperaturas de hasta
5000 Kelvin y presiones de hasta 2000atm.
IV.III.III.II extraccin Soxhlet ultrasnico
El ultrasonido aumenta a la transferencia de masa entre la muestra y solvente. De
este modo, uso de disolventes puede reducirse o evitarse completamente. La
duracin de la extraccin se acorta drsticamente para que los extractos no
queden expuestos al largo perodo de calefaccin. Esto significa que se puede
evitar la descomposicin del extracto.
El ultrasonido puede ser fcilmente integrado en una instalacin de extraccin

Soxhlet introduciendo el cuerno ultrasnico en la cmara Soxhlet (figura 9)

o

mediante sonicacin la cmara Soxhlet indirectamente a travs de la pared del

vaso. El extraccin Soxhlet ultrasnica los resultados en un mayores rendimientos
dentro de menor tiempo de extraccin bajo ms suave condiciones de extraccin.

Figura 9. Equipo Soxhlet

V.

Objetivo general

Disear una planta de extraccin de taninos presentes en las hojas del Almendro
Maladar terminalia cattapa L.
V.I

Objetivos especficos

Conocer los mtodos de extraccin de taninos que existen en la actualidad

para las diversas fuentes de obtencin de origen vegetal.

Investigar las propiedades fsicas y qumicas de los taninos que les

concede las propiedades que los caracterizan.

Evaluar las variables de experimentacin propuestas para optimizar la

extraccin de taninos.

Disear la lnea de operacin que pueda ser aplicada a nivel industrial en

la extraccin de taninos.

VI.

Metodologa

VI.I Materia prima

Las hojas de almendro Malabar Terminalia cattapa L. sern recolectadas en la
ciudad de Tuxtla Gutirrez cuyas coordenadas geogrficas son: 1638' y 1651'
de latitud norte; y 9302' y 9415' de longitud oeste, con una altitud de 522 metros
sobre el nivel del mar.
Para esto se podar a los especmenes adultos, cuyo dimetro sea superior a
20cm afn de que no se provoque daos a los Almendros, obteniendo de
ellos una cantidad de 30 kg de hojas estas debern poseer las siguientes
caractersticas; Color: verde oscuro o brillante
Tamao de: 10-14 cm de ancho y 15-25 cm de
largo.
Las

hojas obtenidas sern lavadas con agua corriente, para eliminar todo

contaminante adherido a la superficie de las hojas, colocndolas en bolsas con un

previo recubrimiento del papel peridico para evitar que estas se daen.

VI.II Procesos para la extraccin de taninos

El proceso de extraccin constara en evaluar la cantidad de taninos obtenidos,
considerando las siguientes variables:

Tiempo de extraccin; en el trascurso de [2,4,6] horas

Proporcin solido liquido; a 1:5,1:10 [P/V]

Tamao de partcula;.

La materia prima recolectada se colocara en una estufa de secado a una

temperatura de 50C hasta alcanzar una humedad del 15%, posteriormente se
pasara a un molino para alcanzar diferentes tamaos de partcula

[1.168,

0.833,
0.589] mm, la cual ser separa por tamizado en mallas de numero [14, 20,
28].

Se toma 10 gr muestra de tamao de partcula [1.168, 0.833, 0.589] mm, los

cuales se contendrn en un matraz con tapn de 250 ml con proporcin [1:5, 1:10]
de solvente etanol-agua [45, 70, 95] %. Se somatar a un calentamiento con
una

parrilla con agitador magntico 100 rpm y a temperatura constante de 70C,

durante un tiempo de [2, 4, 6] hr.
Se deja enfriar el extracto a una temperatura de 25C, posteriormente se filtra a
vacio. El filtrado obtenido se destila a 76 C

para recuperar el etanol. Se

evapora el agua restante para obtener como producto final, residuos adheridos en
el matraz erlenmeyer; estos sern sometidos a pruebas cuantitativas y cualitativas
de taninos.
VI.II.I.I Anlisis cualitativo con solucin acuosa de gelatina y NaCl al 1% y al
10%
respectivamente.
Se Coloca 5 ml de disolucin al 5% del extracto tnico en un tubo de ensayo. Se
aade 10 gotas de solucin acuosa de gelatina y

NaCl al 1% y al 10%

respectivamente. La obtencin de un precipitado indicara la presencia de taninos

en el extracto.
VI.II.I.II Anlisis cualitativo con cloruro frrico
Se coloca 5 ml de disolucin al 5% del extracto tnico en un tubo de ensayo. Se
aade 10 gotas de solucin de FeCl3 al 10%. Asumiendo que se form un
precipitado en el anlisis de la solucin acuosa de gelatina y NaCl al 1% y al 10%
respectivamente, la aparicin de una coloracin verde grisceo implica la
presencia de taninos del tipo condensados, mientras que la aparicin de una
coloracin azul grisceo implica la presencia de taninos del tipo hidrolizable, estos
ltimos son los de inters, por lo que si resulta un prueba positiva para taninos
hidrolizable, se prosigue con el anlisis cuantitativo.
VI.II.II Determinacin del porcentaje de taninos por el mtodo de
Stiasny.
Se disuelve una muestra de 1 grama de extracto tnico en 100ml de agua
desmineralizada, posteriormente se adiciona 10 ml de HCl a 10M y 20 ml de formaldehido
al 37%. Se calienta a reflujo por 30 minutos (figura 10.). Se filtra en caliente tarando
previamente el pale filtro. El precipitado se lava con agua desmineralizada caliente, hasta

acabar con el filtrado, se seca la muestra retenida por el papel filtro en una desecadora
con

CaCl2. Se pesa el producto obtenido para determinar el contenido tnico. El rendimiento

se expresa como porcentaje del peso del material inicial (Tezn, 2008).

Figura 10. Calentamiento a reflujo

VI.III Diseo Experimental

El desarrollo experimental se realizara de forma factorial, donde se investigaran
todas las posibles combinaciones de las condiciones en las variables en cada
rplica del experimento. El experimento factorial afecta a los diseos de
tratamientos, que se refiere a la eleccin de los variables a estudiar, sus
condiciones y la combinacin de ellos. De acuerdo a esto se tiene en cuenta que
las variables de estudio constan de diferentes condiciones, las cuales se
muestran en la Tabla
No.1.
Variable de Estudio
Tiempo de Extraccin
[hrs]
Tamao de Partcula
[mm]
Concentracin del
Solvente [%]
Proporcin SolidoLiquido [p/v]

Condicin
A

0,589

0,833

1,168

45

70

95

1:05

1:10

Tabla 1. Diseo experimental.

Por lo tanto este diseo experimental constara de 54 experimentos, las cuales

al realizarlos y analizarlos se podr conocer las condiciones ptimas en cuales
se lleva mayor proporcin de extraccin de taninos.
VI.III Diseo de planta

A continuacin se representa el primer diagrama de flujo del proceso de

extraccin de tanino, el cual ser modificado una vez que se tenga los resultados
de la parte

experimental de este proyecto. Sin embargo el orden preliminar del proceso

se muestra a continuacin:

1.

La trituradora vertical homogenizara la materia prima recolectada.

2.
El secador de bandeja secara la materia prima a un porcentaje de
humedad deseado.
3.

El molino de martillo reducir al tamao de partcula adecuado.

4.
En el extractor se realizara la mezcla y extraccin de taninos con
solvente etanol - agua en las proporciones adecuadas que sern determinadas
una vez finalice la etapa experimental.
5.
En la centrifuga discontinua, ser la operacin unitaria encargada
de separar el extracto tnico del la torta residual.
6.
En la torre de platos se realizara un proceso de destilacin para
recuperar al etanol, dejando un extracto tnico acuoso.
7.
En la separacin por aspersin se pretende separar el agua del
extracto tnico.

VII.

Cronograma de actividades

A continuacin se indican las actividades realizadas en el inicio del proyecto y a aquellas a ejecutar
para culminarlas.

Cronograma de Actividades
Fecha
Actividad

2015
6

2016
7

1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6
Revisin Bibliogrfica
Asesoras
Eleccin del Tema
Elaboracin de Objetivos y Justificacin
Formulacin de ndice
Elaboracin de Anteproyecto
Revisin de Anteproyecto
Experimentacin
Anlisis de Resultados
Diseo de la Planta
Elaboracin de Conclusiones
Titulacin
Actividades Realizadas
Actividades a Realizar

VIII.

Referencia bibliogrficas

Aguilar, C.N., Augur, C., Favela-Torres, E., & Vinegra-Gonzlez, G. (2001b). Production
of tannase by Aspergillus niger Aa-20 in submerged and solid-state fermentation: influence
of glucose and tannic acid. Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology 26 (5):
296 - 302.
ANDRS, C., Medina, A., Llorach, R., Urpi, M., Khan, N., Chiva, G., Zamora, R., Rotches,
M., Lamuela, R. 2010. Phenolic compounds: chemistry and ocurrance in fruits and
vegetables.
BEECHER, G. 2003. Overview of dietary flavonoids: Nomenclature, ocurrence and intake.
Journal of Nutrition 133:3248s-3254s.
Benavente Garca, O., Castillo, J., Marin, F.R., Ortuno, A., Del Rio, J.A., 1997, Uses and
properties of citrus flavonoids. Journal of Agricultural Food Chemistry, 45: 4505-4515.
Caldas, A. (2012). Optimizacin, escalamiento y diseo de una planta piloto de extraccin
slido lquido (Tesis). Escuela de ingeniera qumica, Universidad de la cuenca.
Carretero-Accame. M.E. (2000). Compuestos fenlicos: Taninos. Panorama Actual del
Medicamento 24 (235): 633 - 636.
Field, J.A. & Lettinga, G. (1992). Biodegradation of tannins. En: Metal Ions in Biological
Systems Volume 28. Degradation of environmental pollutants by microorganisms and their
metalloenzymes (Sigel, H. Ed.), Pp. 61 - 97. Marcel Dekker Inc, Nueva York.
Frutos, P., Hervs, G., Girldez, F.J. & Mantecn, A.R. (2004). Review. Tannins and
ruminant nutrition. Spanish Journal of Agricultural Research 2 (2): 191 - 202.

Hernndez, ngel. Almendro de la India: potencial biolgico valioso. Revista Cubana de

Investigaciones Biomdicas. 22(1): 1, ene/mar 2003.
Kaponen JM, AM Happonen. 2007. Contents of anthocyanins and ellagitannins in selected
foods consumed in Finland. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55:1612-1619.
Khanbabaee, K. & Van Ree, T. (2001). Tannins: classification and definition. Natural
Product Reports Articles 18 (6): 641 649.
MARTINEZ V. Botanical. Disponible en: http://www.botanical-online.com/almendro.htm.
Descargado en: 2011/09/30.
LASTRA, Valds Humberto, RODRGUEZ, Leyes Eduardo. Mtodo analtico para
cuantificacin de taninos en el extracto acuoso de romerillo.[24-Nov-2004] URL disponible
http://www.bvs.sld.cu/revistas/pla/vol5_1_00/ x#x.
Sanchez, Alberto. Disponible en: http://www.vidrafoc.com/inde.php?
main_page*product_info&path270_455_287_241&prod ucts_id-344. Descargado en:
2011/10/01.
Soto, R. (2001). Aislamiento, purificacin, caracterizacin y modificacin qumica de los
taninos aislados de la corteza de Pinus radiata D. Don para su aplicacin en la industria
de las resinas y adhesivos para madera (Tesis doctoral). Escuela de Graduados,
Universidad de Concepcin, Concepcin, Chile.
Tezn, P. (2008). Determinacin del contenido tnico en la corteza de cinco especies
forestales aprovechadas en el acerradero de la asociacin de cooperativas forestales de
petn (Tesis). Acultad de ingeniera, Guatemala.