FARMACIA Y BIOQUIMICA-UNSAAC

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO

ABAD DEL CUSCO

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS FISICAS MATEMATICAS

FARMACIA E INFORMATICA

FARMACIA Y BIOQUIMICA

LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA II
Protocolo de investigacin

Reconocimiento de metabolitos secundarios y extraccin de

flavonoides en las hojas de Piper aduncum (MATICO)

Docente: Q.F. Yanet Cuentas Romaa

Integrantes:
Edith F. Jalixto Checya
Antony Ortiz Arando
Catherin L. Sancho Huanca
Yandely Zamata Gomez

Cusco- Per

I.

INTRODUCCION

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Este proyecto est orientado a la investigacin de plantas medicinales propias

de nuestra regin Cusco,

en la que se lograra identificar los metabolitos

secundarios de las hojas de matico (Piper aduncum) siendo as una alternativa

emprendedora que pueden aprovechar los alumnos

de la asignatura de

farmacognosia II de la carrera de Farmacia y Bioqumica.

El reino vegetal en sus distintas formas ha sido factor decisivo en los diferentes
estudios que han llevado a cabo los fenmenos de la naturaleza. La
identificacin de algunas plantas tiles y otras dainas nos han permitido llegar
al conocimiento de productos qumicos naturales extrados de los vegetales.
En general las plantas con el pasar de los aos se han convertido en pequeos
laboratorios que han llegado a metabolizar compuestos tiles para s mismas y
para otras especies que convivimos con ellas en este basto planeta.
Pero tambin se han visto en la necesidad de elaborar metabolitos que les han
permitido combatir ciertas patologas que aquejan a la humanidad en este
caso este presente trabajo de investigacin ayudara a saber que metabolitos
secundarios se encuentran en la planta de Piper aduncum, determinndose
estos metabolitos mediante
extraccin

los diferentes procesos

metodolgicos de

y reconocimientos realizando anlisis fotoqumico cualitativo y

cuantitativo en la identificacin de estos metabolitos.

En la actualidad entre las innumerables plantas con propiedades medicinales
que se encuentran en nuestra regin Cusco. La planta de matico (Piper
aduncum) es una especie arbrea que crece en las partes bajas de
temperatura templada (todo el valle de la Convencin). El matico es una planta
cosmopolita de la familia de la pimienta (Piperaceae) de aproximadamente 3
metros de altura que crece en la costa, selva alta y baja y en los valles
interandinos de la sierra, crece hasta los 3.000 msnm
Este trabajo investigatorio es de mucha importancia porque nos ayudara a
conocer que molculas o metabolitos secundarios que se encuentran en el
Matico
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mediante la extraccin y reconocimiento de estos metabolitos;

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ayudndonos as de esta manera

contrarrestar ciertas enfermedades que

aquejan a la regin cusco y ayudando tambin a la investigacin de otras

plantas que tengan propiedades medicinales.
II. OBJETIVOS
Objetivo general:

Conocer e identificar los metabolitos secundarios que posee las hojas

Piper aduncum (matico) provenientes de la regin del Cusco.

Objetivos especficos:

Realizar los diversos mtodos para la extraccin de metabolitos

secundarios de las hojas Piper aduncum (matico).

Realizar los diferentes reconocimientos de identificacin de metabolitos

secundarios de las hojas de Piper aduncum (matico).

Extraccin y aislamiento de flavonoides de las hojas Piper aduncum
(matico).

III. METODOLOGIA
1.- MATERIAL DE ESTUDIO
Hojas de Piper aduncum (Matico) proveniente de la provincia de La Convencin,
ciudad de Quillabamba, departamento de Cusco.
2.- MATERIAL, EQUIPOS Y REACTIVOS

Materiales de Laboratorio

De uso comn en el laboratorio de Farmacognosia.

Equipos: De uso comn en el laboratorio de Farmacognosia

Reactivos y solventes:
Solventes: cido sulfrico 98% de pureza. Calidad Merck, Alcohol etlico de
70.
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Reactivos
Dragendorf
Mayer
Wagner
Hager

Metabolito

Ninhidrina
Baljet
Bomtrager
Liebermann-burchard
Rosenhein
Shinoda
Kedde
Cloruro frrico
Gelatina

aminoacidos
lactonas
Quinonas
Triterpenos esteroles
Antocianinas
Flavonoides
Glicosidos cardiotnicos
Polifenoles
Taninos

alcaloides

RECOLECCION: se recolectara hojas frescas y maduras de Piper aduncum

(matico) de la ciudad de Quillabamba. 1050 m.s.n.m 20C

SELECCIN: se seleccionara la materia vegetal con el objetivo de realizar
una separacin de las partes deterioradas y evitar la mezcla con otras
especies.
IDENTIFICACION TAXONOMICA: La planta medicinal seleccionada ser

llevada al herbario Vargas de la universidad nacional de san Antonio abad

del cusco para su identificacin taxonmica.
CLACIFICACION TAXONOMICA: la especie Sambucus peruviana, es

nativa de nuestro pas de acuerdo al sistema de clasificacin filogentica de

Adolph

Engler

publicada

en

la

XII

Edicin

del

syllabus

DER

PFLANNZENFAMILIEN del ao 1954-1964

DESECACION: las hojas seleccionadas se colocaran sobre papel kraft en

un lugar fresco y seco durante 24 horas. Luego sern pasadas a bolsas

hechas con papel kraft y se llevara a una estufa a una temperatura de 40C,
durante 48 horas.
MOLIENDA Y TAMIZACION: una vez desecado el material vegetal se

proceder a su molienda en un mortero de acero hasta el tamao de

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partcula adecuado 2mm se almacenara en frascos de color mbar en un

lugar sin humedad ni luz directa hasta su posterior utilizacin.

3.-PREPARACION DEL EXTRACTO FLUIDO DEL MATICO:

Pesar 250 gr de la muestra y proceder a humectar, separar en porciones
equivalentes a 125 gr, 75 gr y 50 gr de droga. Colocar la porcin de 125 en un pre
colador, macerar con alcohol de 70 por 48 horas se prosigue a percolar y recoge
50ml de extracto fluido las cuales se separan y se guardan en un frasco mbar. Se
sigue recibiendo 5 porciones sucesivas de percolado de 75 ml cada una
enumerndola en el orden que se recibe. Colocar la porcin equivalente a 75 gr de
extracto fluido en un pre colador y macerar con las porciones de75 ml por 48 horas
se percola hasta obtener 75 ml y se guarda en el frasco mbar se sigue percolado
5 porciones de 50 ml de extracto fluido, cada uno enumerado. Se coloca la tercera
porcin equivalente a 50 gr y se macera por 48 horas con las porciones del lote
anterior proceder a percolar hasta obtener 125 ml de extracto los cuales se pasan
a un frasco mbar, la cantidad final del extracto fluido debe ser de 250 ml.
4.-TAMIZAJE FITOQUIMICO DEL EXTRACTO FLUIDO:
Prueba de la gota evaporar el solvente del extracto fluido y el solvente disolver
con los solventes necesarios (diclorometano, etanol, agua y agua acida)
4.2.1.- EXTRACTO DICLOROMETANICO: identifica compuesto de muy
baja polaridad como esteroles y quinonas.
4.2.2.- EXTRACTO ETANOLICO: identifica compuestos d polaridad muy
variada como esteroides, alcaloides, flavonoides y taninos
4.2.3.-EXTRACTO ACUOSO ACIDO: identifica compuestos bsicos como
alcaloides
4.2.4.- EXTRACTO ACUOSO: Identifica compuestos de alta polaridad como
flavonoides, leucoantiosantinas, saponinas y taninos.
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5.-PROCEDIMIENTO PARA EL RECONOCIMENTO DE METABOLITOS

5.1.- RECONOCIMIENTO DE ALCALOIDES:
Colocar en dos tubos de ensayo aproximadamente 0.5 ml del filtrado cido,
Agregar a cada uno de los tubos previamente rotulados con el respectivo
Nombre del reactivo, 2 gotas de los reactivos de: Dragendorff, Mayer. Si se
Observa turbidez o precipitado en los dos tubos se considera que la muestra
Contiene alcaloides (Prueba presuntiva).

5.2.- RECONOCIMIENTO DE ESTEROIDES Y/O TRITERPENOIDES:

En un tubo de ensayo limpio y seco tomar 1 ml del filtrado orgnico y agregar por
la pared del tubo 1 ml de anhdrido actico y con precaucin 1-2 gotas de cido
sulfrico concentrado. La aparicin de coloraciones: verdes, azules, rojas o violeta
es prueba positiva (+) para esteroides y/o triterpenoides en la muestra.

5.3.- RECONOCIMIENTO DE SAPONINAS:

Tomar aproximadamente 5 g del material vegetal fresco y macerar en un mortero,
adicionar suficiente cantidad de agua que cubra la muestra, filtrar a travs de
gasa, pasar 4 ml del filtrado a un tubo de ensayo y agitar vigorosamente durante
un minuto, si se forma abundante espuma, estable aproximadamente 5 minutos es
prueba presuntiva de la presencia de saponinas en la muestra.

5.4.- RECONOCIMIENTO DE TANINOS:

Tomar 1 ml de la solucin acuosa en un tubo de ensayo y adicionar dos (2) gotas
de solucin de tricloruro frrico (FeCL al 1%). La aparicin de un color verde, azul
o negro es prueba positiva (+) para compuestos fenlicos; en un segundo tubo de
ensayo tomar otro mililitro del filtrado y agregar unas gotas de gelatina sal, si hay
turbidez o formacin de precipitado es prueba positiva para taninos en la muestra.
Las dos pruebas son necesarias para comprobar la presencia de taninos.
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5.5.- RECONOCIMIENTO DE QUINONAS:

Adicionar aproximadamente 1 ml de hidrxido de sodio al 5% en amonaco al
2%. Luego de agitar se obtiene un color rojo cereza en la capa acuosa, lo que
indica presencia de quinonas en la muestra.
5.6.- RECONOCIMIENTO DE FLAVONOIDES
Ensayo de Shinoda
Los flavonoides con el ncleo benzopirona (p. ej. flavonas, flavonoles,
flavanonas, etc.) producen coloraciones rojizas cuando a sus disoluciones
acuosas o alcohlicas se les adiciona magnesio seguido de HCl
concentrado. Aunque no se conoce el mecanismo de esta prueba, es muy
utilizada para reconocer esta clase de compuestos.
Ensayo con Zn/HCl
Al remplazar el Mg por el Zn en el procedimiento del ensayo de Shinoda,
solamente los dihidroflavonoles (o flavononoles) producen coloraciones
rojo-violetas. Las flavanonas y flavanoles no producen color o producen
coloraciones rosadas dbiles.
5.6.1.- HIDRLISIS DE FLAVONOIDES EXTRACCION:
Medir 20 mL del extracto fluido a un baln y llevar a reflujo con 20 mL de cido
sulfrico al 10 % durante dos horas. Para obtener los cristales purificados
5.6.2.- CUANTIFICACIN DE FLAVONOIDES:
La determinacin de flavonoides se llevara a cabo mediante una modificacin a la
tcnica reportada en la Farmacopea Herbolaria de los Estados Unidos Mexicanos,
empleando como referencia hesperidina.

Se utilizara 1.5 g de la materia vegetal pulverizada, para la obtencin de la

solucin madre, mediante 2 reflujos de 1 h cada uno con etanol al 60% y
aforando el extracto obtenido con etanol a 250 mL. Se preparara una
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disolucin de la referencia, utilizando 10 mg de hesperidina que se

disolver en metanol absoluto y se llevara a un aforo de 100 ml.

Posteriormente se preparara 4 disoluciones (aforando a volmenes finales

de 25 mL), la composicin de estas 4 disoluciones ser la siguiente:

Disolucin 1: 2 mL de la disolucin madre, 2 mL de una disolucin de

cloruro de aluminio al 2%, y se aforara con metanol.

Disolucin 2: 2 mL de la solucin madre, aforando con metanol.

Disolucin 3: 2 mL de la disolucin de referencia, 2 mL de una solucin de

cloruro de aluminio al 2% y aforando con metanol. Por ltimo, la disolucin
4, contendr 2 mL de la disolucin de referencia y se aforara con metanol.

Se medirn las absorbancias de las disoluciones 1 y 3, empleando un

espectrofotmetro Spectronic 20D+ modelo 333183, a una longitud de
onda de 394 nm. Se emplearan como blanco las disoluciones 2 y 4,
respectivamente.
La cantidad de flavonoides expresada en porcentaje se calculara de la

siguiente manera:
% de flavonoides expresados como:
hesperidina = (A1 x P2 xV1 x 100) / (A2 X P1 X V2)
Dnde:
A1: absorbancia disolucin
P1: peso de la muestra.
V1: aforo de la muestra.
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A2: absorbancia disolucin 3.

P2: peso del estndar.
V2: aforo de la referencia.
IV. BIBLIOGRAFIA:

Villar del fresno, A.M. farmacognosia general. Editorial sntesis, 1999.

Q.F. Yanet Cuentas Romaa, laboratorio de farmacognosia II. Farmacia y

Bioqumica, Fotocopias Mery, UNSAAC.

Q.F. Nancy Edith Mamani Quispe, Laboratorio de Farmacognosia I.

Farmacia y Bioqumica, fotocopias Mery, UNSAAC.

Trabajo de investigacin del trbol amarillo, laboratorio de farmacobotanica,
farmacia y bioqumica, UNSAAC.
Palacios Vaccaro, Julio: Plantas Medicinales Nativas del Per. Concytec.
1997.
Domnguez J. Mtodos de investigacin fitoqumica. Mxico: Editor Limusa
Wiley; 1973.