Tesis Validacion de Limpieza HPLC

UNIVERSIDAD SIMN BOLVAR
DECANATO DE ESTUDIOS PROFESIONALES

COORDINACIN DE INGENIERA QUMICA
VALIDACIN DEL PROCEDIMIENTO DE LIMPIEZA DEL PROCESO DE

MANUFACTURA DE CARAMELOS DE LABORATORIOS ELMOR, S.A.
Por:
MARA LAURA MORALES HENRIQUEZ
INFORME DE PASANTA
Presentado ante la Ilustre Universidad Simn Bolvar
como requisito parcial para optar al ttulo de
Ingeniero Qumico
Sartenejas, Enero de 2010

COORDINACIN DE INGENIERA QUMICA
VALIDACIN DEL PROCEDIMIENTO DE LIMPIEZA DEL PROCESO DE

MANUFACTURA DE CARAMELOS DE LABORATORIOS ELMOR, S.A.
Por:
MARA LAURA MORALES HENRIQUEZ
Realizado con la asesora de:

Tutor Acadmico: Prof. Yamilet Snchez Montero
Tutor Industrial: Ing. Laura Kraemer
INFORME DE PASANTA
Presentado ante la Ilustre Universidad Simn Bolvar
como requisito parcial para optar al ttulo de
Ingeniero Qumico
Sartenejas, Enero de 2010

COORDINACIN DE INGENIERIA QUMICA
ACTA DE EVALUACIN DEL PROYECTO DE GRADO
CDIGO DE LA ASIGNATURA: EP
FECHA:___/___/______
ESTUDIANTE:
CARNET:
TTULO DEL TRABAJO:
TUTOR: Prof.
JURADO: Profs.
APROBADO:
OBSERVACIONES:
CO-TUTOR: Prof.
REPROBADO:
El Jurado considera por unanimidad que el trabajo es EXCEPCIONALMENTE BUENO:

SI:
NO:
En caso positivo, justificar razonadamente:
Jurado
Jurado
Tutor Acadmico
Co-Tutor
Jurado
Nota: Colocar los sellos de los respectivos Departamentos. Para jurados externos, usar sello de la
Coordinacin
RESUMEN
En la industria farmacutica, la validacin juega un papel importante, debido a que es la

garanta documentada de que los equipos, sistemas y procesos sean correctamente instalados y
operen como se esperaba. La validacin de limpieza provee un alto grado de seguridad de los
procedimientos de limpieza utilizados en la planta remueven correctamente y efectivamente los
residuos de principio activo, detergentes y contaminacin microbiolgica. ste trabajo describe la
validacin del mtodo analtico para la cuantificacin de Cloruro de Cetilpiridinio, para ser
utilizado en la validacin de limpieza en la etapa de toma de muestras. La ejecucin de dicho
mtodo incluye los requisitos exigidos por la USP como: especificidad, lmite de cuantificacin,
linealidad del sistema y mtodo, precisin, exactitud, expresada en sus dos maneras: repetitividad
y reproducibilidad.
Adems se realiz la validacin de limpieza del rea de manufactura de caramelos, para de
sta forma garantizar que el procedimiento de limpieza es efectivo y que el detergente utilizado
en la limpieza es efectivo a la hora de remover el principio activo.
Las actividades realizadas incluyeron redaccin de protocolos de validacin, as como
protocolos de calificaciones de los equipos del rea involucrada, para as verificar que los equipos
cumplan correctamente con los requisitos de validacin del proceso completo.
Luego de la realizacin de las calificaciones, validaciones de mtodo y limpieza, se determin
que los procedimientos de limpieza del rea involucrada son efectivos y cumplen su objetivo
principal, adems de garantizar que los equipos del rea estn calificados tanto para la
instalacin, operacin y desempeo.
Palabras claves: Protocolo de validacin de limpieza, cloruro de cetilpiridinio, validacin,

mtodo analtico, calificaciones, caramelos.
iv
AGRADECIMIENTOS
Este trabajo especial de grado, se lo dedico a mi mami Mary, mi mejor amiga, mi compaera y
mi confidente, por su gran apoyo en todo lo que me propongo, por ensearme que no hay nada
imposible en la vida. Por ti, por nosotras logr este objetivo. Te amo!
A mi pap, desde donde ests s que ests orgulloso de mi, lo logramos papi! Un Ingeniero
ms en la familia! por ser mi ejemplo a seguir, por ser mi pilar sin presencia, por ser mi
inspiracin.
A mi novio Freddy por su apoyo incondicional, su amor brindado en estos aos, gracias por
siempre estar all apoyndome, dndome siempre una palabra de aliento. Por siempre ayudarme a
levantar cuando pens que no poda ms. Gracias!
A mi familia, a mi hermano Pedro, mi lala, mi abuelito Esteban, mis tos, tas, primos y
primas, a Mamapepa por siempre brindarme y apoyarme en todos mis proyectos, mis sobrinos
Valentina y Rogelio Enrique por siempre dibujarme una sonrisa aunque el da haya sido muy
difcil, a mi mana del alma Soraya, por apoyarme siempre y darme nimos. Al Sr. Freddy, la Sra.
Omaira, Paola y Rogelio por hacerme sentir como en casa luego de una larga noche de estudio.
A la profesora Yamilet, por tener la paciencia necesaria para corregirme este libro.
A toda la gente de Elmor, por brindarme esta oportunidad de pasar estas ltimas semanas de
mi carrera con ustedes, por hacerme sentir como en casa en momentos difciles, en especial a
Ninozka, Miguel, Mariely, Jean Carlos, Laura, Elieser, Gregorio, Gaby y Milton y a todo el
departamento de aseguramiento de la calidad por ayudarme tanto a lograr este objetivo.
A mis amigos por demostrarme que en la universidad todava existen amigos para toda la vida,
Muriel, Carlitos, Ale, Manuel, Tico, Dany, El negro, a mis manas del alma, por entenderme
durante todos estos 5 aos, Geysel, Mariam y la Chapo, que a pesar de no poder vernos todos los
das, cuando las necesit estaban siempre all! Las adoro!.
NDICE GENERAL
RESUMEN .................................................................................................................................... iv
AGRADECIMIENTOS................................................................................................................. v
NDICE GENERAL ..................................................................................................................... vi
INDICE DE TABLAS ................................................................................................................viii
INDICE DE FIGURAS ................................................................................................................ ix
LISTA DE SIMBOLOS Y ABREVIATURAS............................................................................ x
INTRODUCCION ......................................................................................................................... 1
CAPITULO 1: Descripcin de la Empresa ................................................................................. 3
CAPITULO 2: Marco terico ....................................................................................................... 6
2.1. Buenas Prcticas de Manufactura ..................................................................................... 6
2.2. Validacin ......................................................................................................................... 8
2.2.1. Plan Maestro de Validacin (PMV)........................................................................... 8
2.2.1.1. Calificacin de equipos, sistemas crticos e instalacin ..................................... 8
2.2.1.2. Validacin de Mtodo analtico........................................................................ 11
2.2.1.3. Validacin de limpieza ..................................................................................... 16
2.2.1.4. Validacin de Procesos..................................................................................... 24
CAPITULO 3: Descripcin del Proceso de Manufactura de Caramelos ............................... 26
CAPITULO 4: Desarrollo de la metodologa de Validacin de Procesos............................... 29
4.1. Validacin del mtodo analtico, anlisis de trazas de limpieza ..................................... 29
4.1.1. Lmite de Cuantificacin: ........................................................................................ 32
4.1.2. Especificidad:........................................................................................................... 33
4.1.3. Linealidad del Sistema:............................................................................................ 33
4.1.4. Precisin del Sistema: .............................................................................................. 33
4.1.5. Linealidad del Mtodo: ............................................................................................ 33
4.1.6. Precisin y exactitud del mtodo: ............................................................................ 34
4.1.7. Robustez................................................................................................................... 34
4.2. Validacin de limpieza.................................................................................................... 34
4.2.1. Pre-requisitos ........................................................................................................... 34
4.2.2. Seleccin de producto peor caso ........................................................................ 34
4.2.3. Seleccin de equipo peor caso y puntos de muestreo......................................... 35
4.2.4. Clculo de lmite de aceptacin ............................................................................... 35
4.2.5. Validacin final........................................................................................................ 35
4.3. Calificacin de instalacin, operacin y desempeo ...................................................... 36
CAPITULO 5: Resultados y anlisis de resultados .................................................................. 38
5.1. Validacin del mtodo analtico...................................................................................... 38
5.1.1. Resultados Limite de Cuantificacin ....................................................................... 38
5.1.2. Resultados de Especificidad .................................................................................... 40
5.1.3. Resultados de Linealidad del Sistema: .................................................................... 41
5.1.4. Resultados de Precisin del Sistema:....................................................................... 45
5.1.5. Resultados de Linealidad del Mtodo:..................................................................... 46
5.1.6. Resultados de Precisin, Exactitud y Robustez del Mtodo.................................... 50
5.2. Validacin de limpieza.................................................................................................... 56
5.2.1. Pre-requisitos ........................................................................................................... 57
5.2.2. Seleccin de producto peor caso .......................................................................... 58
5.2.3. Seleccin de puntos de muestreo ............................................................................. 59
5.2.4. Clculo de lmites de aceptacin permisibles .......................................................... 59
vi
5.2.5. Validacin Final....................................................................................................... 60

5.3. Calificacin de instalacin, operacin y desempeo ...................................................... 63
5.3.1. Calificacin de Instalacin....................................................................................... 64
5.3.2. Calificacin de Operacin y Desempeo: ............................................................... 65
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES......................................................................... 67
REFERENCIAS........................................................................................................................... 68
APENDICE A............................................................................................................................... 69
APENDICE B ............................................................................................................................... 71
APENDICE C............................................................................................................................... 72
APENDICE D............................................................................................................................... 73
APENDICE E ............................................................................................................................... 84
APENDICE F ............................................................................................................................... 86
APENDICE G .............................................................................................................................. 87
APENDICE H .............................................................................................................................. 88
vii
INDICE DE TABLAS
Tabla 3.1: Carcter txico (7) ........................................................................................................ 17
Tabla 3.2: Caractersticas bsicas de los materiales ms comunes en los equipos farmacuticos. 21
Tabla 3.3: Tipos de hisopos utilizados en la industria farmacutica ............................................. 23
Tabla 4.1: Condiciones cromatogrficas ....................................................................................... 31
Tabla 5.1: Limites de aceptacin de principio activo .................................................................... 38
Tabla 5.2: Resultados para el lmite de cuantificacin. ................................................................. 39
Tabla 5.3: Resultados Especificidad .............................................................................................. 41
Tabla 5.4: Resultados de Linealidad del sistema ........................................................................... 44
Tabla 5.5: Tabla de resultados de Linealidad del mtodo ............................................................. 45
Tabla 5.6: Resultados de la precisin del sistema ......................................................................... 46
Tabla 5.7: Parmetro evaluados de precisin del sistema.............................................................. 46
Tabla 5.8: Datos de Linealidad del mtodo ................................................................................... 49
Tabla 5.9: Datos de Analista 1....................................................................................................... 53
Tabla 5.10: Resultados de analista 1.............................................................................................. 53
Tabla 5.11: Datos de analista 2...................................................................................................... 55
Tabla 5.12: Resultados de analista 2.............................................................................................. 55
Tabla 5.13: Recopilacin de resultados robustez........................................................................... 56
Tabla 5.14: Resultados Finales de Robustez ................................................................................. 56
Tabla 5.15: Toxicidad de componentes ......................................................................................... 58
Tabla 5.16: Matriz de seleccin de producto peor caso ............................................................. 59
Tabla 5.17: Lmites de aceptacin permisibles en la Validacin de Limpieza.............................. 59
Tabla 5.18: Resultados Finales de Validacin de Limpieza .......................................................... 62
viii
INDICE DE FIGURAS
Figura 1.1 Organigrama de la Empresa .......................................................................................... 4
Figura 2.1 Proceso de fabricacin de la industria farmacutica (4)................................................ 7
Figura 2.3: Esquema de un cromatgrafo lquido de alta resolucin. ........................................... 12
Figura 2.4: Cromatograma de ejemplo. ......................................................................................... 13
Figura 4.1: Esquema de Validacin de Proceso ............................................................................ 29
Figura 4.2: Esquema de Validacin Final de Limpieza................................................................. 36
Figura 5.1: Cromatograma de lmite de Cuantificacin................................................................. 39
Figura 5.2: Cromatograma de solucin estndar ........................................................................... 39
Figura 5.3: Cromatograma de Especificidad ................................................................................. 40
Figura 5.4: Cromatograma de solucin estndar ........................................................................... 41
Figura 5.5: Cromatograma de Solucin 50%:................................................................................ 42
Figura 5.6: Cromatograma de Solucin 75%:................................................................................ 42
Figura 5.7: Cromatograma de Solucin 100%:.............................................................................. 42
Figura 5.8: Cromatograma de Solucin 150%:.............................................................................. 43
Figura 5.9: Cromatograma de Solucin 200%:............................................................................. 43
Figura 5.10: Cromatograma de Solucin estndar......................................................................... 43
Figura 5.11: Linealidad de absorbancia vs. Concentracin terica. .............................................. 44
Figura 5.12: Cromatograma de Precisin del Sistema................................................................... 45
Figura 5.13: Cromatograma de Solucin 65%............................................................................... 46
Figura 5.15: Cromatograma de Solucin 100%............................................................................. 47
Figura 5.18: Cromatograma de Solucin Estndar ........................................................................ 48
Figura 5.19: Concentracin terica del analito vs. Absorbancia ................................................... 48
Figura 5.20: Cromatograma y tabla para hisopos de rayn ........................................................... 50
Figura 5.21: Cromatograma y tabla para hisopos de dacrn ......................................................... 51
Figura 5.30: Cromatograma Lote 1 (Puntos 1-22 y 27-29) ........................................................... 60
Figura 5.31: Cromatograma Lote 1 (Puntos 23-26 y 30-32) ......................................................... 60
Figura 5.32: Cromatograma de Solucin Estndar Lote 1............................................................. 61
ix
LISTA DE SIMBOLOS Y ABREVIATURAS

BPM: Buenas Prcticas de Manufactura
FDA: Administracin de Alimentos y Frmacos de los Estados Unidos (Food
and Drug Administration)
IQ: Calificacin de Instalacin
OQ: Calificacin de Operacin
PQ: Calificacin de Desempeo
CCP: Cloruro de Cetilpiridinio
USP: Farmacopea de los Estados Unidos
SACOP: Solicitud de accin correctiva o preventiva
HPLC: Cromatografa lquida de alta resolucin
INTRODUCCION
La industria farmacutica es un sector dedicado a la fabricacin y preparacin de productos
qumicos medicinales para la prevencin o tratamiento de las enfermedades (1). El sistema del
aseguramiento de la calidad adecuado para la fabricacin de medicamentos tiene como funciones
principales asegurar que los medicamentos se disean de forma que se tenga en cuenta lo
requerido por las Buenas Prcticas de Manufactura, adems dicho sistema se encarga de realizar
todos los controles necesarios de los productos intermedios, validaciones etc., entre otras
disposiciones generales del sistema del aseguramiento es la autoinspeccin y/o auditoria de
calidad que evala peridicamente la efectividad y aplicabilidad del sistema de garanta de
calidad (2)
Actualmente la validacin en Laboratorios Elmor es una herramienta fundamental para el
sistema del aseguramiento de la calidad, sta consiste en establecer una evidencia documentada
que provea un alto grado de garanta de que un proceso especfico producir, de forma
consistente, un producto que cumpla con sus especificaciones predeterminadas y atributos de
calidad.
Por la exigencia de las BPM, la validacin de limpieza de cada una de las reas es fundamental
para la calidad final de producto, es por ello que se procedi a realizar la validacin de limpieza
del rea de caramelos para as obtener evidencia documentada que provea un alto grado de
seguridad que los procedimientos de limpieza utilizados en la planta de manufactura,
especficamente en el rea de caramelos, pueden remover efectivamente los residuos que afecten
la calidad del producto final.
El alcance principal de ste informe se presenta a continuacin:
Objetivo General:
1. Validar los procedimientos de limpieza de los equipos involucrados en el proceso de
manufactura de caramelos de Laboratorios Elmor S.A.
Objetivos Especficos:
1. Estudiar acerca de las Normas de BPM y Validacin Farmacutica
2. Evaluar el procedimiento de limpieza de los equipos del rea de manufactura de
caramelos.
2
3. Elaborar el protocolo de validacin de limpieza correspondiente al rea de manufactura de
caramelos.
4. Realizar los pasos necesarios para la ejecucin del protocolo de validacin de limpieza del
rea de manufactura de caramelos.
Para poder lograr los objetivos anteriormente planteados, surgi la necesidad de la validacin
de un mtodo analtico que permitiera analizar las trazas de limpieza para dicha rea, por lo que
con la aprobacin del departamento de calidad se plantearon los siguientes objetivos:
1. Validar el mtodo analtico de trazas de limpieza del producto peor caso en el proceso
de manufactura de caramelos de Laboratorios Elmor S.A.
2. Elaborar el protocolo de validacin de mtodo analtico de trazas correspondiente al
producto peor caso del rea de manufactura de caramelos.
3. Realizar los pasos necesarios para la ejecucin del protocolo de validacin del mtodo
analtico de trazas de limpieza del producto peor caso en el proceso de manufactura de
caramelos.
Adicionalmente al objetivo principal, se realizaron la recalificaciones de instalacin, operacin
y desempeo de los equipos involucrados del rea de manufactura y empaque primario de
caramelos.
CAPITULO 1
DESCRIPCIN DE LA EMPRESA
Laboratorios Elmor, S.A. inici actividades en 1959, cuando dos empresarios con visin
futurista fundaron en la ciudad de Caracas, una empresa farmacutica de representaciones y
manufactura denominada Elmor, S.A.
Cinco aos ms tarde, en 1964, Elmor realiza un importante aporte al tratamiento de las
enfermedades respiratorias con el lanzamiento de PEREBRON primer y nico antitusgeno que
acta sobre la causa que produce la tos. En 1967 se lanza TANTUM, que desde su aparicin ha
desempeado un papel fundamental en el prestigio de la organizacin.
En la dcada de los 60s se realiza el lanzamiento de TACHIPIRIN, que en la actualidad es
uno de los productos ms vendidos en el mercado farmacutico popular venezolano.
DOBETIN, presentado en los aos 70, es la primera vitamina B12 en altas concentraciones
disponible entre los venezolanos.
En 1979 fue construida la planta farmacutica, la cual est ubicada en Guacara. En estos
momentos es una de las plantas de manufactura farmacutica ms grande y moderna del pas.
Posee capacidad para fabricar la mayora de las formas farmacuticas: lquidos, tabletas,
cpsulas, polvos, ungentos, cremas,
caramelos y supositorios. El rea construida es de
aproximadamente 10.000 m2, adems de 8.000 m2 de almacn y terrenos suficientes para futuras
ampliaciones.
A principios del ao 2000 Corporacin IVAX, una compaa farmacutica multinacional,
complet la adquisicin de cuatro compaas farmacuticas latinoamericanas cuidadosamente
seleccionadas a travs de un anlisis de capacidades de produccin y comercializacin,
estrategias de crecimiento y solidez financiera. Una de ellas fue Laboratorios Elmor, S.A.
Laboratorios Elmor S.A., se caracteriza por su eficiencia y productividad, cumpliendo con los
ms estrictos controles de calidad basados en las normas mundiales y superiores a los exigidos
4
por nuestras autoridades sanitarias.
Laboratorios Elmor S.A., tiene como visin llegar a ser lder en el mercado nacional, centro
Amrica y del Caribe orientando sus recursos econmicos y humanos a la investigacin y
desarrollo de nuevos productos farmacuticos con la tecnologa venezolana.
La misin de LABORATORIOS ELMOR S.A. es fabricar productos farmacuticos de alta
calidad, ofreciendo avances tecnolgicos y cientficos a precios razonables que permitan
satisfacer al cliente y a la organizacin, con la finalidad de contribuir en una forma activa con el
mejoramiento de la salud y siempre proponiendo el servicio a la comunidad.
Cabe destacar que uno de sus valores es proporcionar el mejor servicio a la poblacin
venezolana en el sector salud, mediante mejores productos, presentaciones, posologas y
precios accesibles y garantizando a sus trabajadores un ambiente sano, con posibilidades de
formacin empresarial.
Laboratorios Elmor S.A., tiene una serie de polticas y objetivos entre los cuales est mantener
la excelencia de los productos, mediante la implantacin de tcnicas adecuadas, tomando en
cuenta los objetivos fijados, mantener una escala promedio de salario favorable para el personal y
un buen funcionamiento del sistema organizacional para obtener una mayor rentabilidad en la
organizacin y hacer los productos competitivos en el mercado, tanto en calidad como en precios;
para alcanzar la satisfaccin total de los clientes, asegurar la prosperidad y el bienestar de los
empleados, accionistas y clientes de la empresa (3).
El organigrama de la empresa se muestra en la figura 1.1.
DIRECCION
GENERAL
DIRECCION
DE CALIDAD
LIBERACION DE
PRODUCTOS
ASEGURAMIENTO
DE LA CALIDAD
DIRECCION
DE PLANTA
ASIS. DIRECCION
CALIDAD
PLANIFICACION
CONTROL DE
CALIDAD
PROCESOS
MANTENIMIENTO
COSTOS
CONTRALORIA
DOCUMENTACION
COMPRAS
VALIDACION
MANUFACTURA
Figura 1.1 Organigrama de la Empresa
5
El sistema del aseguramiento de la calidad adecuado para la fabricacin de medicamentos
tiene como funciones principales asegurar que los medicamentos se disean de forma que se
tenga en cuenta lo requerido por las Buenas Prcticas de Manufactura, adems dicho sistema se
encarga de realizar todos los controles necesarios de los productos intermedios, validaciones etc.,
entre otras disposiciones generales del sistema del aseguramiento es la autoinspeccin y/o
auditoria de calidad que evala peridicamente la efectividad y aplicabilidad del sistema de
garanta de calidad.
En el siguiente captulo se mostrarn los fundamentos tericos para poder cumplir con el
objetivo general.
CAPITULO 2
MARCO TEORICO
La industria farmacutica es un sector dedicado a la fabricacin y preparacin de productos

qumicos medicinales para la prevencin o tratamiento de las enfermedades. Dentro de las
operaciones de fabricacin farmacutica se puede distinguir la produccin bsica del principio
activo a granel y la fabricacin farmacutica de formas galnicas conocida con el nombre de
medicamentos. Un medicamento es un frmaco integrado en una forma farmacutica y destinado
a su utilizacin en las personas o en los animales, dotado de propiedades para prevenir,
diagnosticar, tratar, aliviar o curar enfermedades o dolencias o para afectar a funciones corporales
o al estado mental, todo ello por la va de administracin adecuada, y con la dosificacin de
frmaco prevista (4).
Durante la fabricacin farmacutica de estos medicamentos se combinan principios activos y
materiales inertes para producir diferentes formas galnicas (p. ej., Comprimidos, cpsulas,
lquidos, polvos, cremas y caramelos) (4). En la figura 2.1 se esquematiza el proceso de
fabricacin de un medicamento. Los componentes que presenta un medicamento para la
administracin de la misma son: los principios activos y los excipientes.
2.1. Buenas Prcticas de Manufactura

Se refieren a un sistema integral de Control Gerencial incluyente de un conjunto de
lineamientos y principios mnimos (mtodos, locales y controles empleados en la manufactura,
empaque, almacenamiento, distribucin, etc.) los cuales estn destinados a garantizar que los
productos farmaceuticos son consistentemente producidos y controlados a los estndares de
calidad apropiados para su uso y de acuerdo a lo sealado en las especificaciones del producto.
Las Buenas Prcticas de Manufactura son parte esencial del aseguramiento de la calidad, la
cual garantiza que los productos sean consistentemente producidos y controlados segn los
estndares de calidad apropiados. Las BPM tienen como objetivo principal disminuir riesgos
7
asociados a produccin de medicamentos tales como: contaminacin cruzada y confusin o
equivocaciones. Las BPM agrupa factores como:
Todos los procesos de manufactura estn claramente definidos, revisados y
constantemente fabricados bajo las mismas condiciones.
Calificacin y validacin realizadas.
Todos los recursos necesarios que incluyen: personal calificado y entrenado,
espacios adecuados, equipos y servicios ptimos, materiales y etiquetas
apropiadas, instrucciones y procedimientos aprobados y personal, laboratorios y
equipamiento de control adecuados.
Instrucciones y procedimientos deben ser escritos en un lenguaje claro y preciso.
Los operadores deben ser entrenados en base a las instrucciones y procedimientos.
Figura 2.1 Proceso de fabricacin de la industria farmacutica (4)
8
2.2. Validacin
El concepto de validacin surgi cuando la FDA (Food and Drug Administration) revis las
normas relativas al control de la fabricacin de los productos farmacuticos, estas normas son las
conocidas como las BPM. En 1978, la palabra validacin apareci por primera vez, aos despus
en un documento de la FDA se defina la validacin de forma sencilla: es el acto documentado de
probar que cualquier procedimiento, proceso, equipo, material, actividad o sistema conduce
realmente al resultado esperado (5); en los aos posteriores se han aadido ideas que pudieron
parecer novedosas, en las que se pueden destacar la necesidad de documentar el proceso de
validacin, es decir disponer de todo por escrito, la necesidad de que provea un alto grado de
seguridad de proceso y la necesidad de que el proceso producir repetidamente productos aptos,
es decir que cumplan con especificaciones. Finalmente, el programa de validacin queda
formalizado con la documentacin que demuestra que las pruebas realizadas dan una uniformidad
entre lotes y stos cumplen los criterios de calidad.
Un trmino ligado a los estudios de la validacin es aplicar la filosofa del peor caso, este
estudio proporciona los intervalos seguros para el proceso, es decir aquellos que aseguran que
siempre se obtendr producto correcto. El peor caso es un conjunto de condiciones que abarcan
circunstancias y lmites de proceso superiores e inferiores, incluyendo aquellos dentro de
procedimientos operacionales estndar, que plantean la mayor oportunidad de fallo de proceso o
producto en comparacin con condiciones ideales.
2.2.1. Plan Maestro de Validacin (PMV)
El Plan de validacin es un documento que atae al establecimiento en su totalidad y en que

describe que equipos, mtodos y procedimientos habrn de validarse y cuando lo sern. En el
documento deber especificarse la forma de presentacin necesaria para cada documento de
validacin, e indicar el tipo de informacin deber reflejarse en cada documento.
El Plan de Validacin incluye los siguientes puntos:
2.2.1.1. Calificacin de equipos, sistemas crticos e instalacin
Un programa de validacin debe comenzar con la calificacin de los equipos. Calificacin se
entiende como la ejecucin de pruebas realizadas para demostrar que estos equipos, sistemas o
instalaciones se encuentran dentro de las especificaciones pre-establecidas y que sus variables
9
crticas se encuentran controladas.
Calificacin de Instalacin (IQ)

El alcance de esta calificacin es verificar que el equipo, sistema o instalacin cumple
con el criterio de diseo original aprobado y que ha sido instalado de acuerdo a sus
especificaciones. Asimismo, verificar que se cuenta con toda la documentacin apropiada
(manuales, planos, certificados, etc.)
El protocolo de Calificacin de Instalacin incluye lo siguiente:
Descripcin del equipo, sistema o la instalacin y los elementos que lo
componen.
Verificacin de la aprobacin del Archivo de Ingeniera (para sistemas o
instalaciones nuevos; no aplicable para equipos)
Verificacin de planos, tanto de diseo como finales respecto a la instalacin
fsica
Verificacin de que los materiales en contacto con producto cumplan con las
BPM
Verificacin de que los servicios conectados al equipo, sistema o instalacin
cumplen con lo especificado en el diseo.
Verificacin de la calibracin de los instrumentos crticos instalados.
Verificacin de la documentacin del equipo/sistema/instalacin (orden de
compra, manuales, lista de repuestos, certificados, etc.)
Verificacin de la informacin de los componentes principales que conforman
el equipo/sistema/instalacin segn el Archivo de Ingeniera y/o manuales.
En el caso de equipos o sistemas crticos que involucren sistemas
computarizados,
se
incluye
la
verificacin
del
software
(versin,
establecimiento de niveles de seguridad y contraseas, pantallas, entradas y

salidas, entre otros).
Calificacin de Operacin (OQ)

El alcance de la Calificacin de Operacin (OQ) es probar de forma documentada que
10
los componentes del equipo, sistema o instalacin funcionan de acuerdo con los rangos
definidos en las especificaciones tcnicas. Las actividades de Calificacin de operacin
para equipos o sistemas crticos consisten en:
Verificacin de la culminacin de la ejecucin del Protocolo de IQ sin

desviaciones crticas.
Verificacin de la calibracin de los instrumentos requeridos para realizar las
pruebas de operacin.
Verificacin de los procedimientos estndar de operacin correspondientes al
equipo o sistema, los cuales deben estar redactados al menos en su versin
inicial.
Verificacin de la correcta operacin de:
Pruebas de encendido y apagado normales de cada componente.
Pruebas de encendido y apagado de emergencia de cada componente.
Pruebas bajo condiciones lmites de operacin del equipo/sistema y dentro de los

rangos de operacin normal.
Pruebas de alarmas.
Pruebas de falla de alimentacin de servicios.
Funciones de monitoreo y control
En el caso de equipo o sistemas crticos que involucren sistemas computarizados, se

incluye la verificacin de respaldo de la informacin almacenada por alteracin en
la comunicacin.
Calificacin de Desempeo (PQ)

La calificacin de desempeo es la evidencia documentada que un equipo o sistema
crtico puede operar de manera reproducible dentro de unos lmites establecidos tomando
en cuenta las variaciones normales de las condiciones externas. Las actividades de
Calificacin de Desempeo para Equipos / Sistemas Crticos consisten en:
Verificacin de la culminacin de la ejecucin del Protocolo de OQ sin
11
desviaciones crticas.
Verificacin de la calibracin de los instrumentos requeridos para realizar las
pruebas de desempeo.
Sistemas Crticos: verificacin de los parmetros crticos de calidad del aire,
agua, etc. por un perodo de tiempo prolongado con la finalidad de demostrar la
reproducibilidad de su comportamiento.
Equipos: comportamiento del equipo cuando est cargado con producto.
Evaluacin de operacin y alarmas.
2.2.1.2. Validacin de Mtodo analtico

El mtodo analtico se define como la adaptacin especfica de una tcnica analtica para un
propsito de medicin seleccionado, el mtodo analtico se valida cuando: la medicin analtica
es importante (costo, salud, remediacin, legal, etc.), por la obligacin profesional del analista, el
cliente espera confiar en los resultados informados y generalmente los cuestiona cuando aparece
algn conflicto (aqu el analista debe demostrar que ha informado la respuesta correcta para la
parte analtica del problema del cliente, por la confianza con que el cliente necesita tomar
decisiones en base a los resultados analticos, la toma de muestras: si el laboratorio no puede
tomar la muestra o no tiene influencia sobre ello, los resultados deben informarse sobre la base de
las muestras como fueron recibidas y destacar este hecho en el informe.
Un mtodo analtico debe validarse cuando se necesita verificar que sus parmetros de aptitud
son adecuados para usar para un problema analtico particular. Por ejemplo, cuando se desarrolla
un mtodo nuevo, cuando se revisa un mtodo ya establecido para mejorar o extender a un nuevo
problema, cuando el control de calidad indica que el mtodo en uso est cambiando con el
tiempo, cuando se usa un mtodo ya establecido en un laboratorio diferente o con diferente
analista o con diferente instrumental y para demostrar la equivalencia entre 2 mtodos, por
ejemplo, un mtodo nuevo y una norma.
El mtodo a validar se realizar a travs de la Cromatografa lquida de alta resolucin.
Cromatografa Lquida de alta resolucin (HPLC)

La cromatografa es un mtodo, usado primariamente para la separacin de los
componentes de una muestra, en la cual los componentes se distribuyen en dos fases, una
12
de las cuales es estacionaria, mientras que la otra es mvil (19).
En la figura 2.3, se observa los componentes bsicos de un cromatgrafo lquido de alta
resolucin:
Figura 2.3: Esquema de un cromatgrafo lquido de alta resolucin.

Las propiedades cromatogrficas la clasificaremos segn los siguientes parmetros:
Fase mvil
Se debe tener en cuenta que no todos los solventes son adecuados para trabajar en el
HPLC, ya que la condicin de estado lquido no es suficiente por s misma para que una
sustancia se pueda emplear como fase mvil. Un solvente apropiado para el HPLC debe
cumplir como los que se muestran a continuacin:
Alto poder solubilizante de las muestras
Baja reactividad
Compatibilidad con el detector utilizado
Adecuado punto de ebullicin
Baja viscosidad
13
Seguridad
Alto grado de pureza
Columna cromatogrfica
La cromatografa en fase normal puede efectuarse sobre partculas totalmente porosas
de slice, almina o materiales de fase ligada cuyo comportamiento responde a esta
modalidad, es decir, dado que la polaridad de los rellenos de fase ligada no es tan alta
como la de silicagel o la de almina, es posible utilizar una columna de grupos ciano
fases mviles de polaridad menor al de grupo CN con lo cual el comportamiento ser el
de la fase mvil normal (20).
Cromatograma
Seal que produce un detector cuando responde a la presencia de un analito. Consiste
en la serie de picos, los cuales indican la cantidad de componentes separados. A partir de
dicho cromatograma se obtienen parmetros analticos cualitativos y cuantitativos.
Figura 2.4: Cromatograma de ejemplo.

Algunas de las definiciones representativas en un cromatograma son las siguientes:
Pico: seal del detector cuando se eluye un compuesto. Si la separacin es
incorrecta aparecen picos solapados.
Lnea Base: seal cuando por la columna slo pasa fase mvil
Tiempo de Retencin (Tr): tiempo que tarda en aparecer el mximo de un pico.
Tiempo que tarda un compuesto en salir de la columna.
Tiempo muerto (Tm): tiempo de retencin de una sustancia no retenida
Tiempo de retencin reducido (Tr): tiempo de retencin menos el tiempo
14
muerto.
El procedimiento para establecer por medio de estudios de laboratorio una base de datos que
demuestren cientficamente que un mtodo analtico tiene las caractersticas de desempeo que
son adecuadas para cumplir los requerimientos de las aplicaciones analticas pretendidas. Implica
la demostracin de la determinacin de las fuentes de variabilidad y del error sistemtico y al zar
de un procedimiento, no solo dentro de la calibracin sino en el anlisis de muestras reales. (6)
Para validar el mtodo analtico, deben realizarse una serie de pruebas para evaluar su
desempeo, tales como: (3)
Especificidad:
Habilidad de evaluar inequvocamente el analito en presencia de componentes que se
puede esperar que estn presentes. Tpicamente stos pueden incluir impurezas, productos
de degradacin, el solvente de recobro, placebo, etc.
Lmite de Cuantificacin:
Cantidad ms pequea del analito en una muestra que puede ser cuantitativamente
determinada con exactitud aceptable. Es un parmetro del anlisis cuantitativo para niveles
bajos de compuestos en matrices de muestra y se usa particularmente para impurezas y
productos de degradacin. Se expresa como concentracin del analito.
Precisin del sistema:

Expresa la cercana entre el valor que es aceptado, sea como un valor convencional
verdadero (material de referencia interno de la firma), sea como un valor de referencia

aceptado (material de referencia certificado o estndar de una farmacopea) y el valor
encontrado (valor promedio) obtenido al aplicar el procedimiento de anlisis un cierto
nmero de veces.
Linealidad del sistema:

mbito entre la menor y la mayor concentracin de analito en la muestra (incluyendo
stas concentraciones) para las cuales se ha demostrado que el procedimiento analtico tiene
el nivel adecuado de precisin, exactitud y linealidad.
Precisin del mtodo:

Expresa la cercana de coincidencia (grado de dispersin) entre una serie de mediciones
obtenidas de mltiples muestreos de una misma muestra homognea bajo condiciones
15
establecidas. Puede considerarse a tres niveles: repetibilidad, precisin intermedia y
reproducibilidad. Debe determinarse utilizando muestras originales y homogneas. Sin
embargo, si no es posible obtener una muestra homognea puede ser determinada usando
muestras separadas o una disolucin de la muestra.
Linealidad del mtodo:

Habilidad (dentro de un mbito dado) del procedimiento analtico de obtener resultados
de prueba que sean directamente proporcionales a la concentracin de analito en la muestra.
Precisin (repetibilidad) y exactitud del mtodo:

Precisin obtenida bajo las mismas condiciones de operacin en un intervalo corto de
tiempo (mismo da), por un mismo analista, en la misma muestra homognea y en el mismo
equipo.
Expresa
la
precisin
entre
laboratorios
como
resultado
de
estudios
interlaboratoriales diseados para estandarizar la metodologa
Robustez:
Medida de la capacidad de un procedimiento analtico de permanecer inafectado por
pequeas pero deliberadas variaciones en los parmetros del mtodo, tales como: cambio
de analista, cambio de equipo, condiciones ambientales, etc. y provee una indicacin de su
fiabilidad en condiciones de uso normales.
Clculo de lmites de aceptacin de contaminante:

Limite en el producto:
L1 =
0,001.D min
A .1000
max
DB
Donde:
L1= Lmite de presencia del producto A en el B (ppm)
D Amin = Dosis mnima diaria del producto A (mg/da)
D Bmax = Dosis
mxima diaria del producto B (mg/da)
1000 = Factor de conversin para convertir unidades de mg a g. (1000mg/g)

Lmite por superficie:
(3.1)
16
L2 =
L1 .TB
S compartida
(3.2)
Donde:
L2 = Lmite por superficie (mg/cm2)
L1 =Lmite de presencia del producto A en el B (ppm)
TB=Tamao del lote del producto B (mg)
Scompartida = Superficie compartida de equipos (cm2) (ver apndice D)
Lmite de la muestra a analizar:
L3 =
L 2 .A hisopada
Vsolvente
(3.3)
Donde:
L3 = Lmite en la muestra a analizar (mg/ml)
Ahisopada = rea superficial a muestrar con hisopo 25 cm2
Vsolvente = Volumen de solvente de recobro 10 ml
2.2.1.3. Validacin de limpieza
Segn Sanz (8), la validacin de limpieza es el proceso por el que se establece una evidencia
documental de que, un determinado proceso de limpieza reduce de manera constante los residuos
en la superficie del equipo, a un nivel pre-establecido.
Algunas de los conceptos bsicos en la validacin de limpieza se definen a continuacin:
Dosis Letal:
La dosis letal, tambin conocida por sus siglas en ingls LD (lethal dose), es una forma
de expresar el grado de toxicidad de una sustancia o radiacin. Como la resistencia a una
sustancia o una radiacin puede variar de un sujeto a otro, se expresa como la dosis tal a la
que de una poblacin de muestra dada, un porcentaje dado muere.
Como norma general se utiliza la dosis semi-letal o LD50 que indica en toxicologa los
miligramos de una sustancia necesarios por kilogramo de peso de un animal para matar al
17
50% de la poblacin.
Dosis letal mediana para la toxicidad aguda por ingestin es la dosis nica obtenida
estadsticamente de una sustancia de la que cabe esperar que, administrada por va oral,
cause la muerte de la mitad de un grupo de ratas albinas adultas jvenes en el plazo de 14
das. El valor de la LD50 se expresa en trminos de masa de la sustancia suministrada por
peso de animal sometido al ensayo (mg/kg).
Los valores de LD50 dependen de varios factores: el sistema biolgico o animal, la raza,
sexo, edad, dieta, etc.
En la siguiente tabla se presenta el carcter txico:
Tabla 3.1: Carcter txico (7)
DL50 Rata
DL50 Conejo
Posibilidad dosis letal
(mg/kg)
(mg/kg)
humano
Extremadamente
50 mg
Altamente
1-50
5-50
4 ml
Moderadamente
50-500
50-350
30 g
Ligeramente
500-5000
350-3000
250 g
Atxico
5000-15000
3000-25000
1l
Inocuo
> 15000
> 25000
>1l
Peor caso
Un conjunto de condiciones que abarcan circunstancias y lmites de proceso superiores e

inferiores, incluyendo aquellos dentro de procedimientos operacionales estndar, que
plantean la mayor oportunidad de fallo de proceso o producto en comparacin con
condiciones ideales.
En 2005, Sanz (7) seala que una vez elegido el contaminante a buscar, se tiene que
sealar por dnde circula y realizar un mapa detallado de proceso que indique claramente
por qu equipos, mquinas, tuberas, vlvulas, juntas y dems partes recorre el
contaminante. Una vez que se ha trazado por dnde pasa el contaminante, y por lo tanto las
superficies en contacto con el producto, se debe elegir, como puntos de muestreo, aquellos
que por su ubicacin, difcil accesibilidad, tipo de material (acero inoxidable, tefln, vidrio,
18
silicona, caucho) o carcter adsorbente del mismo son los puntos ms difciles de limpiar
(Hot Spots). Especial atencin se debe tomar a las ramas ciegas, grietas, juntas, filtros y
desages inferiores, que son zonas potencialmente albergadoras de los Hot Spots.
Cualquier combinacin de dos materiales es probablemente ms difcil de limpiar que
una capa de un solo material. Otro ejemplo puede ser la superficie inferior del borde de la
tapa de un recipiente. Un segundo mtodo para seleccionar estos puntos es la experiencia
previa. Esta experiencia previa puede ser anecdtica. La experiencia puede incluir tambin
la informacin derivada de estudios de precalificacin que hayan dado lugar a una falla o
que fueron diseados para identificar los sitios donde es ms probable encontrar fallas.
Si el muestreo se disea para identificar residuos potenciales en las superficies limpias
del equipo que se pudieron transferir al siguiente lote de manufactura, entonces es necesario
seleccionar sitios de muestreo que realmente den esa informacin. De manera general se
puede considerar que hay cinco tipos de puntos de muestreo que pueden considerarse en los
protocolos de validacin de limpieza. Estos son:
a) El lugar ms difcil de limpiar:
ste es un tipo del peor de los casos. Ciertos lugares del equipo de fabricacin pueden
ser ms difciles de limpiar, y por lo tanto es ms probable encontrar residuos del producto
anterior. Por ejemplo, si se utilizara una concentracin del agente de limpieza ms baja que
la especificada, cierto lugar puede estar aceptablemente limpio, pero puede haber otros
lugares (los lugares ms difciles de limpiar) donde haya residuos en niveles inaceptables.
Los Puntos ideales para el muestreo son las siguientes: Lneas de Transferencias, Vlvulas,
Aspas, Sellos, Drenajes y Diferente Material de Construccin.
b) Puntos de muestreo que son probables de producir una contaminacin no
uniforme en el siguiente lote:
Esto se considera tambin como el peor de los casos. La falta de uniformidad es la

contaminacin del equipo de proceso antes de la limpieza; existe la posibilidad de que en
ciertas superficies del equipo, los residuos puedan transferirse a una porcin limitada del
siguiente lote. Esto ocurre en partes del equipo tales como canales inclinados de las agujas
de llenado y de la descarga.
c) Puntos de muestreo representativos:
19
stos no se consideran necesariamente como el peor de los casos. Sin embargo, es
recomendable seleccionar puntos "representativos" para el muestreo del equipo. Estos
pueden incluir, por ejemplo, bordes de recipientes,
tapas o bases de los recipientes,
puertos, vlvulas, y aspas de los agitadores. Se debe considerar al menos en el muestreo un

punto de cada uno de estos lugares elegidos como representativos. Esto puede ser
particularmente provechoso para detectar o prevenir una falla en la validacin de limpieza.
d) Materiales de construccin representativos:
Esto no se considera necesariamente como el peor de los casos. Sin embargo, es

apropiado seleccionar diversos materiales que sean representativos del equipo, tales como
acero inoxidable, cristal, y/o los varios plsticos o elastmeros. En la Tabla 3.2 se observa
algunas caractersticas bsicas de los materiales ms comunes en los equipos farmacuticos.
En 2006, Sanz (8) seala que: el acero inoxidable y el vidrio son los ms fcilmente
limpiables, mientras que el tefln y silicotas puede absorber compuestos, principalmente
colorantes y otras sustancias.
e) Puntos susceptibles de recontaminacin:
En el 2006, Sanz (8) seala que este criterio solamente se aplica a los estudios de
validacin de limpieza para equipos en espera de ser utilizados. En el muestreo de equipos
despus de su "almacenamiento" o "en espera de uso", debe considerarse la manera cmo
el equipo puede recontaminarse, y donde es ms probable encontrar esa contaminacin.
stos sitios no son necesariamente los ms difciles de limpiar (como se discuti en el caso
a).
Se Observa que en muchos casos ciertas categoras pueden traslaparse. Muchos equipos
pueden representar dos casos, el del lugar ms difcil de limpiar y el de los puntos de
muestreo representativos.
Clculo de lmites de aceptacin de contaminacin:
Principio activo:
a) Enfoque de la menor dosis teraputica (LTD):
Para determinar la mxima cantidad permisible de principio activo residual por hisopo
20
(MC) para una pieza especfica de equipo debera emplearse la siguiente ecuacin:
MC =
LTD Wb Ss
R
1000 D Wt Se
(3.4)
Donde:
LTD: Menor Dosis Teraputica del producto A (mg)
D: Mayor dosis diaria del producto B (nmero de unidades)
Wb: Menor tamao de lote de producto B (g)
Wt: Mayor peso de dosis unitaria del producto B (g)
Ss: rea de hisopado (cm2)
Se: rea superficial del equipo en contacto con producto (cm2)
R: factor de recuperacin del activo para el producto A con la solubilidad ms baja
El lmite estar basado en la dosis teraputica ms baja (LTD) y un factor de seguridad
de 1000.
b) Enfoque de los 10 ppm:
La mxima cantidad permisible de principio activo residual por hisopo (MC) para una
pieza especfica de equipo debera emplearse la siguiente ecuacin:
MC =
Wb 10ppm
Ss 1000
Se
(3.5)
Donde:
Agentes de Limpieza. Enfoque LD50
Para determinar la mxima cantidad permisible de agentes de limpieza por hisopo
(MC) para una pieza especfica de equipo debera emplearse la siguiente ecuacin:
21
MC =
LD50 Wb Ss
R 50
1000 D Wt Se
(3.6)
Donde:
LD50: Dosis Letal para el 50% de los animales estudiados (mg/kg)
50: Peso corporal humano promedio (kg)
Tabla 3.2: Caractersticas bsicas de los materiales ms comunes en los equipos farmacuticos.
Material
Caractersticas
Acero Inoxidable
Fe+Cr+Ni+ Carbono
Resistente a la corrosin y oxidacin
No poroso, fcil de limpiar
Tefln
Polmero tetrafluoroetileno
Resistente hasta 250C
Resistente a todos los cidos y bases
Siliconas
Composicin: Polmero organosiloxano

Resistentes al calor hasta 250C
Resistentes a cidos y bases
Solubles en disolventes orgnicos
Vidrio
Estado amorfo de slice, sosa, cal y xidos

metlicos.
Solo atacable por HF y lcalis calientes
concentrados
No poroso, fcilmente limpiable
Plsticos
Composicin: PP, PE, PVC

Estables frente cidos y bases
Poco resistentes al calor: 70C a 120C
Poco resistentes a disolventes orgnicos
Fuente: Sanz (8)
22
Seleccin del Mtodo de Muestreo
Existen dos tipos de mtodo de muestreo, los cuales son:

a) Muestreo por enjuague
Este mtodo puede utilizarse para obtener data de reas de muestreo que son inaccesibles
como mangueras, boquillas. ste mtodo est basado en la determinacin analtica de una
muestra del ltimo enjuague con el solvente usado en el procedimiento de limpieza. El
volumen del solvente utilizado debe ser conocido para poder realizar la determinacin
cuantitativa del contaminante. Sus ventajas y desventajas principales son las siguientes:
Ventajas
Permite llegar a puntos inaccesibles
Especialmente indicado para tuberas, dosificadores y piezas largas
Fcil manejo
Permite hacer mtodo de recuperacin de residuos
Desventajas
No arrastra residuos adheridos fuertemente a la superficie de los equipos
Se produce fcilmente el efecto dilucin, si usamos una gran cantidad de volumen
de enjuague, corremos el riesgo de diluir la cantidad de residuo arrastrado hasta

partes inferiores al lmite de deteccin del aparato analtico a utilizar.
Posibles prdidas del lquido de enjuague.
b) Muestreo por hisopado
El mtodo de hisopado est basado en la remocin fsica del residuo de producto o

agente de limpieza dejado en una pieza del equipo despus que sta ha sido limpiada y
secada. Un hisopo humedecido con un solvente especfico es frotado sobre un rea de
muestra previamente determinada para remover cualquier residuo potencial de producto y/o
agente de limpieza. El hisopo es entonces colocado dentro de un volumen conocido de
solvente en el cual el contaminante es soluble. La cantidad de contaminante por hisopo se
determina por medio de un mtodo analtico de sensibilidad adecuada. Los hisopos
seleccionados deberan ser caractersticos para determinar si son adecuados y debera
realizarse un ensayo de recuperacin previa a la validacin de limpieza. Entre sus ventajas
23
y desventajas tenemos:
Ventajas
Toma la muestra directamente del punto definido como crtico
No se interfiere con la toma de muestra de otros puntos
Se muestrea una superficie fija y estandarizada: 25 cm2
El Test de recuperacin es ms sencillo y controlable.
Desventajas
Es necesario que el personal tenga la experiencia apropiada para barrer de forma
adecuada los 25 cm2

Existe la posibilidad de que la composicin del hisopo interaccione con los
residuos y quede adsorbido dentro de su estructura.

Tipos de Hisopos
Existen distintos tipos de hisopos utilizados para el muestreo de trazas de detergente y
principio activo, los cuales se describen a continuacin:
Tabla 3.3: Tipos de hisopos utilizados en la industria farmacutica

Tipo de hisopo
Caractersticas
Ventajas
Desventajas
Algodn
Es una forma pura de

celulosa de alta
cristalinidad. Es la fibra
de la semilla el
algodonero.
Flexible, no acumula
electricidad esttica.
Tiene alta resistencia al
rasgado y al frote, gran
poder absorbente.
Desprende partculas.
Rayn
Su materia prima es la
celulosa de la madera
del abeto, la cual se
mezcla con cidos como
ntrico o sulfrico.
-Absorcin de la
humedad
-Estabilidad
-Tacto sedoso
Baja resistencia en
hmedo, arden con
facilidad, se cargan de
electricidad esttica.
Dacrn
El Politereftalato de
etileno es un polmero
que se obtiene mediante
una reaccin de
policondensacin.
Resistente. Fcil de
teir, secado rpido,
resistente a la mayora
de los productos
qumicos, al abrasin.
Su gran densidad
encarece su coste.
Fuente: Marletta (17)
24
2.2.1.4. Validacin de Procesos
El propsito de la validacin de un proceso productivo es demostrar que ste produce

consistentemente un producto que cumple sus especificaciones de calidad predeterminadas. En la
Poltica y Norma "Validacin de Procesos de Manufactura", norma interna de Laboratorios
Elmor, se definen los lineamientos para llevar a cabo este tipo de validacin.
La validacin de un proceso productivo requiere asegurar formalmente que las siguientes
operaciones y procedimientos han sido terminados satisfactoriamente:
Se
dispone
de
todos
los
Procedimientos
aprobados
de
operacin,
mantenimiento, limpieza, entre otros correspondientes a los equipos y sistemas

en contacto con el producto.
Las instalaciones, equipos, y sistemas crticos con los cuales ser realizar el
proceso de validacin han sido debidamente calificados (IQ, OQ y PQ).

Los mtodos analticos a utilizar han sido validados.
Los procedimientos de limpieza han sido validados.
La Instruccin de Manufactura del producto ha sido aprobada.
Los operadores y supervisores que ejecutarn y controlarn el proceso tienen la
formacin y entrenamiento adecuado.
Tipos de Validacin de procesos
Existen bsicamente tres tipos de validacin para un proceso de fabricacin: validacin

retrospectiva, validacin prospectiva y validacin concurrente.
Validacin retrospectiva: estudio para demostrar y establecer una evidencia
documentada de que un proceso hace lo que estaba previsto sobre la base de una revisin y
anlisis de informacin histrica. Para que un producto sea considerado para validacin
retrospectiva debe tratarse de un proceso relativamente estable, esto es, uno en el cual el
mtodo de manufactura ha permanecido esencialmente intacto por un perodo de tiempo. El
nmero de lotes a analizar para validacin retrospectiva ser aproximadamente de 20
consecutivos. Un lote que presente una no conformidad atribuible a un evento nico
(ejemplo error del operador) podra ser descartado justificadamente.
Validacin prospectiva: estudio para demostrar y establecer una evidencia
25
documentada de que un proceso hace lo que est previsto basado en un protocolo
planificado. Este tipo de validacin se lleva a cabo para productos nuevos o productos
existentes que han sufrido cambios en la frmula, sitio de manufactura, tamao de lote o
equipos. Los principios bsicos son los siguientes:
Tres lotes consecutivos exitosos.
El protocolo debe incluir uniformidad de dosis, anlisis de los parmetros
fsicos y qumicos del producto terminado en suficientes porciones de los lotes

para demostrar uniformidad.
Los lmites de control, calculados de un anlisis estadstico de los resultados,
deben estar dentro de los lmites de especificacin del producto.

Validacin concurrente: estudio para demostrar y establecer evidencia documentada de
que un proceso hace lo que debe hacer basado en informacin generada durante una
implementacin real del proceso. En esta situacin, los lotes de validacin individuales
podran ser liberados al mercado como son producidos y no ser retenidos hasta la
culminacin de la validacin. Este tipo de validacin puede llevarse a cabo cuando no sea
viable manufacturar los 3 lotes de validacin de forma continua y sea necesario esperar un
tiempo entre un lote y otro (los principios bsicos restantes son iguales a los de la
validacin prospectiva). Cuando se emplea el enfoque de validacin concurrente, el reporte
de avance de validacin de procesos debe ser firmado y aprobado antes de liberar cada lote
para uso comercial.
En la prctica adems de realizar revalidaciones, en funcin de los cambios que se hayan
realizado en el proceso, los cambios que obligan a revalidar son: cambios en componentes
crticos como calidad de materia prima, proveedores, cambios o sustituciones de piezas del
equipo, cambios en la planta o instalaciones aumento o disminucin del lote y si existen
grandes cambios entre varios lotes secunciales que no cumplen especificaciones.
En el siguiente captulo se presentar la descripcin del proceso de manufactura de
caramelos de Laboratorios Elmor S.A.
CAPITULO 3
DESCRIPCIN DEL PROCESO DE MANUFACTURA DE CARAMELOS
El producto estudiado, A , cuenta con las siguientes especificaciones:

Composicin: Cada caramelo contiene: Cloruro de cetilpiridinio 2 mg; Clorhidrato de
lidocaina 1,5 mg.
Indicaciones: Por su accin bactericida y analgsica est indicado en el alivio temporal de las
irritaciones
bucofarngeas
los
dolores
leves
asociados
la
faringitis.
Posologa: Disolver lentamente un caramelo en la boca, cada 3 4 horas. No tomar ms de 8

caramelos en 24 horas.
Presentacin: Estuche con 16 caramelos.
El Sistema de manufactura de caramelos est compuesto por un conjunto de equipos colocados
en serie, constituidos en orden por: Bastonadora Hamac Hansella 22906, Troqueladora Hamac
Hansel 85-A, Enfriadora Hamac Hansel 71 E, Egalizadora Automtica Hamac Hansella y la
Seleccionadora Sortomat, los cuales constituyen el proceso completo para la formacin del
caramelo. Finalmente, el empaque primario es realizado por la Foliadora OMAG.
La Bastonadora Hamac Hansella 22906 consta de cuatro rodillos cnicos donde se coloca la
masa del caramelo para la disminucin de su dimetro, el cual es entregado a la egalizadora
automtica.
El avance de la masa lo da la inclinacin adecuada de la artesa, mediante un tablero de control
con dos botones de pulsacin para el ascenso/descenso del equipo. Debido a que la bastonadora
est unida a la egalizadora automtica, se debe tener en cuenta que la seccin del bastn a la
salida de la bastonadora debe ser de acuerdo al primer par de rodillos de la egalizadora.
Adems, el equipo posee un sistema de calefaccin a vapor con una presin de servicio
mxima de 10 atm, este calentamiento se lleva a cabo para facilitar la formacin del bastn de
azcar con los rodillos, debido a que el calor suministrado suaviza la masa de azcar. Tambin
cuenta con un sistema de conexin para condensacin.
27
Seguidamente, en la egalizadora automtica tipo 165 A se adelgaza el bastn de azcar
proveniente de la bastonadora con la ayuda de los cuatro (4) pares de rodillos egalizadores,
siendo sta la seccin previa a la operacin de la mquina troqueladora, se debe asegurar que la
velocidad de entrega del bastn de azcar de la egalizadora est adaptada a la velocidad de
operacin de la mquina troqueladora, segn los requerimientos del caramelo en proceso.
Los rodillos egalizadores poseen un sistema de calefaccin que se regula mediante resistencias
intercaladas de la maquina egalizadora.
Con la Troqueladora de caramelos Hamac Hansella tipo 85 A se obtienen caramelos duros de
forma bien definida, sin costuras ni rebadas. El equipo presenta una conexin para aire de
refrigeracin con el fin de evitar un excesivo recalentamiento del molde y trabajar sin pausa.
Para el perfecto manejo de la mquina se debe tener en cuenta que el peso del caramelo slo
puede ser influenciado por la regulacin y el tamao de los rollos de egalizacin, pero nunca
alterando la presin de troquelado.
La enfriadora de tres bandas 71 E es una mquina robusta y econmica con sistema de
ventilacin abierto, sin circulacin forzada de aire. Los caramelos se enfran en tres bandas
transportadoras
hasta
presentar
la
temperatura
ideal
para
su
envoltura.
El equipo se emplea para el enfriamiento de caramelos duros con y sin relleno. Adems
presenta un cajetn o tablero de control con dos botones de pulsacin para el encendido/apagado
del equipo, de color negro y rojo respectivamente.
Todos los mdulos funcionales descansan sobre un robusto bastidor. El aire refrigerante es
impulsado un ventilador de 130 m3/min. de rendimiento a una presin de 70 mm de columna de
agua, penetra en la mquina por un conducto y sale de toberas situadas lateralmente a lo largo de
las bandas transportadoras. Las toberas soplan el aire desde arriba, en sentido contrario al
desplazamiento de los caramelos. La banda superior angosta tiene un sistema de enfriamiento
adicional desde abajo.
Los caramelos que salen de la mquina troqueladora pasan a la banda superior angosta de la
mquina enfriadora, que recibe su movimiento de la troqueladora. Al final de la primera banda
transportadora, un distribuidor de movimiento vaivn reparte los caramelos con cuidado sobre la
segunda banda. Luego pasan los caramelos a la tercera y ltima banda. Todas las bandas
transportadoras consisten de malla metlica especial. La banda superior es angosta y se desplaza
a gran velocidad, mientras que las bandas central e inferior son anchas y de malla gruesa. Esto
28
impide la deformacin o el aglomeramiento de los caramelos, uniformemente distribuidos. El
tiempo de pasaje, es decir el tiempo de enfriado, es de aproximadamente 5 minutos.
La seleccionadora SORTOMAT es un dispositivo que se emplea para la seleccin del producto
que cumpla con las especificaciones requeridas. Para ello, el equipo posee las filas
seleccionadoras, que consisten en un conjunto de cilindros ajustables donde se distribuye
uniformemente el producto. A lo largo de las mismas, los productos caen sobre una cinta de
descarga. Las distancias entre los cilindros es ms grande por debajo que por arriba, por esta
razn los productos caen en tres zonas diferentes, segn sus espesores: la zona 1 corresponde a la
de "Espesor Insuficiente", luego la zona 2 corresponde a "Bueno" y la zona 3 es para producto
"Demasiado Espeso".
La foliadora OMAG, es un equipo diseado con la finalidad de realizar el empaque primario al
producto terminado y as evitar la exposicin directa del mismo al medio ambiente. Puede ser
capaz de elaborar 200 sobres por minuto, pero esto vara de acuerdo a la naturaleza del producto,
dosificacin del mismo y/o tamao del empaque.
Este equipo trabaja con un sistema de dispensacin compuesto por una tolva, que se
encarga de alimentar el producto a dos bandejas vibratorias, las cuales a su vez, lo dosifican al
bajante. Este sistema funciona gracias a la existencia de tres sensores, dos de ellos se ubican en
las bandejas vibratorias e indican el momento en el cual existe dficit de producto en alguna de
ellas, para que las mismas sean llenadas por la tolva, en donde se ubica el tercer sensor.
El bajante de alimentacin dispone de la accin de sopladores neumticos, quienes son los
responsables de impulsar la cada del producto a los sobres correspondientes; adems, cuenta con
la presencia de ocho canales de dispensacin de producto, la mitad de los cuales son antecedidos
por
cada
bandeja
vibratoria
del
sistema
de
dosificacin
del
equipo.
Por otro lado, el equipo cuenta con un sistema de rodillos en los que se coloca el foil, el cual es
prensado a travs de los rodillos, para evitar que el mismo se arrugue durante el paso por la
mquina. Al terminar el paso por estos rodillos, el foil es dividido en dos partes, seguidamente
este es enviado por una serie de rodillos trmicos, los cuales gracias al calor sellan los empaques
del producto, para as pasar luego por una guillotina, quien divide los sobres en empaques
individuales.
CAPITULO 4
DESARROLLO DE METODOLOGA DE VALIDACIN DE PROCESO
El primer paso del desarrollo de la metodologa de validacin del proceso fue la elaboracin de
un esquema de validacin de proceso mostrado en la figura 4.1
Figura 4.1: Esquema de Validacin de Proceso
En los siguientes puntos se explicara ms a detalle cada una de las etapas del esquema anterior.
4.1. Validacin del mtodo analtico, anlisis de trazas de limpieza
El objetivo de esta validacin es establecer mediante ensayos de laboratorio que la instruccin

de trabajo utilizada para evaluar el contenido del principio activo trabajado es la adecuada y
proporciona resultados confiables. Esta capacidad se expresa en trminos de parmetros
analticos, el cual fue evaluada, mediante el ensayo de HPLC (Cromatografa de Lquidos de Alta
Eficiencia), tales como lmite de cuantificacin, especificidad, linealidad de sistema, precisin del
sistema, linealidad, precisin y exactitud del mtodo y robustez.
Para evaluar los parmetros analticos, se deben tener en cuenta los siguientes aspectos tales
como: preparacin de muestras, preparacin del estndar, preparacin de fase mvil, clculo de
lmites de aceptacin, condiciones cromatogrficas a utilizar y tcnica analtica para calcular el
30
porcentaje de recobro.
Preparacin de la fase mvil

Se prepar una mezcla de 552 ml de agua, 480 ml de metanol, 120 ml de sal de
acetato de sodio 1M (82.03 g en 1 L de agua), 48 ml de cido actico glacial,

120 mg de heptasulfnico cido disuelto en 30 ml de Metanol.
Se filtr a travs de membrana hidroflica de polipropileno 0,45 mm, 47 mm
dimetro
Preparacin del estndar

En un baln aforado de 2000 ml, se pes exactamente alrededor de 16,0 mg de
cloruro de cetilpiridio, estndar de trabajo secundario.

Se diluy y se mezcl a volumen con la fase mvil.
Preparacin de las muestras
Muestras por disolucin

En un baln aforado de 1000 ml, se pes exactamente alrededor de 1000,0 mg
de cloruro de cetilpiridio.
Posteriormente, realiz el clculo de disolucin con la siguiente frmula:
C1 .V1 = C 2 .V2
Donde:
C1: Concentracin solucin patrn (ppm)
V1: Volumen solucin patrn (ml)
C2: Concentracin disolucin (ppm)
V2: Volumen disolucin (ml)
Nota: Antes de inyectar muestras en el equipo, se filtr a travs de filtro de jeringa PTFE
0,45 m, descartando los primeros 10 ml del filtrado.
Placebos cargados
En un baln aforado, se pes exactamente la cantidad en mg de acuerdo a la
concentracin que desea preparar de cloruro de cetilpiridio.
31
Se pes exactamente la cantidad de placebo, de acuerdo a la relacin:
M placebo =
M CCP .2208,995mg
2mg
Donde:
Mplacebo: Masa de placebo a pesar (mg)
MCCP: Masa de CCP pesado en el paso anterior (mg)
Nota: Antes de inyectar muestras en el equipo, se filtr a travs de filtro de jeringa PTFE 0,45
m, descartando los primeros 10 ml del filtrado.
Condiciones cromatogrficas
Se utilizaron las condiciones cromatogrficas utilizadas para el producto terminado, las

cuales fueron las siguientes:
Tabla 4.1: Condiciones cromatogrficas
Nombre
Condicin del equipo
Columna
Novapak CN
Flujo
1 ml/min
Presin
3000 psi
Tiempo de corrida por muestra
10 min
Longitud de onda
254 m
Tcnica analtica para calcular el porcentaje de recobro
Eleccin del solvente de recobro

El analito debe ser soluble en el solvente
No debe ser txico
32
Debe estar libre de sales que puedan corroer o permitir adhesin de residuos
sobre la superficie del equipo a ser hisopado

Debe ser compatible con la tcnica analtica
Nota: el solvente de recobro utilizado en el ensayo fue 5ml el agua purificada

Sembrado del analito a recobrar
Se "ensuci" placas de acero inoxidable (en la cantidad exigida por el ensayo y
previamente curadas con el solvente de recobro), de superficie lisa y de 5 x 5

cm (25 cm2), con 100 l a 250 l de una concentracin conocida del
contaminante en estudio.
Se dej secar.
Muestreo por hisopado

Se humedeci completamente la punta del hisopo en el solvente de recobro
(contenido en un tubo de ensayo) y se elimin el exceso del mismo escurriendo

suavemente el aplicador contra las paredes del tubo.
Presione el hisopo firme y uniformemente sobre la superficie a hisopar (lmina
de acero inoxidable), dirigindolo de izquierda hacia derecha (sin retroceder),

cubriendo el rea de 25 cm2 con 10 trazos.
Rote la punta del aplicador 180 y repita el paso anterior en forma
perpendicular al trazado ya efectuado.

Se introdujo de nuevo el aplicador en el solvente de recobro, dentro del tubo.
Para remover el analito del hisopo, se coloc el (los) tubo (s) en una gradilla y
agite
sta
en
Bao
Ultrasonido
por
15
minutos.
Nota: Puede utilizarse un segundo hisopo y se suman los resultados.
Luego de preparar todas las soluciones o disoluciones necesarias se procedi a realizar

los siguientes procedimientos para los parmetros de la validacin:
4.1.1. Lmite de Cuantificacin:
Se estableci analticamente con ensayos a diferentes concentraciones, la
mnima cantidad cuantificable del analito, en este caso, cloruro de cetilpiridinio.
33
Se analiz el resultado en el HPLC por sextuplicado
4.1.2. Especificidad:
Se prepar una solucin de placebo a la misma concentracin esperada si
estuviera presente el analito.

Se prepar una muestra con agua destilada y otra con fase mvil.
Se prepar una solucin de principio activo (CCP) con la misma concentracin
cuantificable.
Se realiz el ensayo usual en HPLC, siguiendo las instrucciones indicadas en el
mtodo analtico.
4.1.3. Linealidad del Sistema:
Se realiz una solucin madre de concentracin 50 ppm de cloruro de
cetilpiridinio.
Se prepar 5 diluciones a partir de la misma solucin madre, distribuidas de la
siguiente manera: 50% (4 ppm), 75% (6 ppm), 100% (8 ppm), 150% (12 ppm)
y 200% (16 ppm).
Se realiz el ensayo usual en HPLC, se analiz cada dilucin por triplicado.
Se verific que los criterios de aceptacin cumplieran correctamente.
4.1.4. Precisin del Sistema:
Se prepar una solucin estndar correspondiente al 100%, establecido en la
linealidad del sistema.

Para dicha solucin se realiz el anlisis por HPLC por sextuplicado.
Se verific que los criterios de aceptacin cumplieran correctamente.
4.1.5. Linealidad del Mtodo:
Se prepar 5 soluciones independientes de placebo cargado, distribuidas de la
siguiente manera: 65% (5,2 ppm), 85% (6,8 ppm), 100% (8 ppm), 150% (12
ppm) y 200% (16 ppm).
Se analiz por triplicado cada muestra, y se verific que los criterios de
aceptacin cumplieran.
34
4.1.6. Precisin y exactitud del mtodo:
Se prepar de manera independiente 3 soluciones adicionadas con principio
activo distribuidas de la siguiente manera: 75% (6 ppm), 100% (8ppm) y 125%

(10 ppm).
Se deposit 250 l de cada solucin en 5 placas de acero inoxidable de 5x5 cm.
y se dej secar y se procedi a realizar el hisopado de la placa.

Se realiz el hisopado con hisopos de dacrn
Se analiz cada muestra en el HPLC, y se verific que los criterios de
aceptacin se cumplieran.
4.1.7. Robustez
Se realiz el mismo procedimiento que el punto 4.1.6, pero con un analista
diferente, en un equipo diferente.

4.2. Validacin de limpieza
El objetivo de esta validacin es verificar documentalmente que los procedimientos de

limpieza realizados son capaces de cumplir con los lmites establecidos para el principio activo
residuos de detergente y contaminacin microbiolgica. Principalmente se procedi a realizar el
protocolo de validacin de limpieza.
Para realizar dicha validacin se procedi a realizar dichos pasos:
4.2.1. Pre-requisitos
Se evalu que las instrucciones de trabajo para la limpieza de equipos y rea
correspondientes a la manufactura y envasado primario de caramelos.

Se elabor y revis el
protocolo de validacin de limpieza del rea de
manufactura de caramelos
Se revis los mtodos analticos debidamente aprobados y revisados para el
anlisis de las trazas de limpieza.

4.2.2. Seleccin de producto peor caso
Considerando la solubilidad en agua de cada uno de los principios activos, se
evalu cada uno de los productos fabricados en el rea de caramelos. En el caso
35
particular se present que dos o ms productos tenan igual solubilidad, se
procedi a seleccionar como producto peor caso
aquel que present el
menor LD50.
Se determin el factor de recuperacin del principio activo del producto peor
caso y el agente de limpieza seleccionado para la limpieza de los equipos.

Se realizaron los clculos pertinentes en relacin a los lmites de aceptacin
tanto del principio activo y detergente a utilizar.

4.2.3. Seleccin de equipo peor caso y puntos de muestreo
Se registraron los equipos que presenten mayor superficie de contacto directo
con producto.
Se registr las piezas seleccionadas de cada uno de los equipos y se anex una
fotografa o esquema de los puntos de muestreo seleccionado por pieza de

equipo, adems se seleccion como tipo de muestreo el hisopado.
4.2.4. Clculo de lmite de aceptacin
Con el uso de las frmulas (3.4), (3.5) y (3.6), fueron hallados los lmites de
aceptacin aceptables para la validacin de limpieza.

4.2.5. Validacin final
Una vez realizado todos los pasos anteriores, se coordin con el departamento
de produccin la elaboracin de tres (3) limpiezas mayores despus de la

manufactura del producto seleccionado como peor caso.
Posteriormente, se verific que se llev a cabo la limpieza siguiendo la
instruccin de trabajo correspondiente a la limpieza de los equipos y el rea

correspondiente.
Se efectu una inspeccin visual de los equipos y rea correspondiente.
Se procedi a la toma de muestras por hisopado de cada equipo y rea
correspondiente, segn la seleccin de puntos previamente realizada. Se

entregaron las muestras al departamento de control de calidad debidamente
identificadas para sus anlisis.
Una vez procesados todos los datos necesarios, se procedi a reportar los
36
resultados de residuo de activo, detergente y contaminacin microbiolgica y se
verific el cumplimiento de los lmites de aceptacin establecidos.
En el siguiente esquema representa en lneas generales las etapas del proceso de
validacin de limpieza:
Figura 4.2: Esquema de Validacin Final de Limpieza
4.3. Calificacin de instalacin, operacin y desempeo
Con la ayuda de documentos como (especificaciones funcionales, planos y manuales de

operacin, etc.) fueron establecidas las funciones a verificar, indicando las pruebas a llevar a
cabo, los pasos a seguir de forma detallada y los criterios de aceptacin de cada una de las
pruebas, para luego ser ejecutadas en las calificaciones de cada uno de los sistemas.
37
El objetivo de la calificacin del sistema de manufactura de caramelos consisti en verificar
que todos los equipos que lo conforman fueron instalados de acuerdo a las especificaciones de
diseo y las recomendaciones del fabricante, y que operan tanto en vaco como cargado con
producto dentro de los rangos establecidos, cumpliendo con las Buenas Prcticas de Manufactura.
CAPITULO 5
RESULTADOS Y ANLISIS DE RESULTADOS
En el siguiente captulo se presentarn los resultados para cada una de las validaciones y
calificaciones realizadas.
5.1. Validacin del mtodo analtico
Al iniciar la validacin del mtodo analtico, se debe tener claro cual es el lmite de
aceptacin de contaminante (cloruro de cetilpiridinio) que puede estar presente en el rea
determinada. Es por ello que se hallaron dichos lmites los cuales arrojaron los siguientes
resultados: (Para mayor detalle del clculo ver apndice A)
Tabla 5.1: Limites de aceptacin de principio activo

Lmite
Lmite por producto (L1)
Lmite por superficie (L2)
Lmite de la muestra a analizar (L3)
Valor
2 mg/g
3 mg/cm2
8 mg/ml
Se tomar como valor permisible el lmite mayor, el cual en la tabla es el L3, como un
valor del 100% de contaminante.
A continuacin sern presentados los cromatogramas obtenidos a partir del anlisis de
muestras por el mtodo de HPLC para cada uno de los parmetros de evaluacin de la
validacin del mtodo analtico, as como la tabla de resultados con los criterios de
aceptacin obtenidos y un breve comentario de cada uno.
5.1.1. Resultados Limite de Cuantificacin
En las siguientes figuras se puede apreciar los resultados del parmetro lmite de
cuantificacin. En donde las siglas CCP corresponden al cloruro de cetilpiridinio.
39
Figura 5.1: Cromatograma de lmite de Cuantificacin
Figura 5.2: Cromatograma de solucin estndar

A continuacin se presenta la tabla de resultados del parmetro de lmite de cuantificacin
Tabla 5.2: Resultados para el lmite de cuantificacin.

Muestra
Concentracin
terica (ppm)
Concentracin
experimental (ppm)
% Recuperacin
1
2
1
3
1,1
3,3
110
110
3
4
5
5
8
10
5,5
8,2
9,1
110
103
91
Promedio (%)
Desviacin estndar
C.V (%)
105
8,32
7,95
40
En la figura 5.2, cromatograma de solucin estndar, se puede observar que el tiempo de
retencin de la sustancia en estudio est en el rango de 4-6 minutos, en base a sta solucin se
colocaron las diferentes disoluciones problemas, las cuales arrojaron los resultados visualizados
en a figura 5.1, expresados como parmetros analticos cuantitativos los presentes en la tabla 5.2.
Se hallaron las concentraciones experimentales, con la ayuda del cromatograma, para as poder
determinar el porcentaje de recuperacin y observar si el criterio de aceptacin de esta prueba,
expresado por el coeficiente de variacin se cumpla correctamente. El coeficiente de variacin
cumple con el criterio de aceptacin, por lo tanto se puede continuar evaluando el siguiente
parmetro de la validacin.
5.1.2. Resultados de Especificidad
En la figura 5.3 se puede apreciar el cromatograma arrojado por el equipo de HPLC en cuanto
al parmetro de especificidad.
Figura 5.3: Cromatograma de Especificidad
41
Figura 5.4: Cromatograma de solucin estndar
En la tabla 5.3 se presentan los resultados resumidos del parmetro de especificidad.
Tabla 5.3: Resultados Especificidad

Muestra
Fase Mvil
Placebo
Agua destilada
Interferencia
No cuantifico
No cuantifico
No cuantifico
El mtodo, como se observa en el Cromatograma 5.3, tiene la capacidad de poder diferenciar

claramente el principio de otros componentes tales como: fase mvil, placebo y agua destilada.
Cuando se compara el Cromatograma 5.3 y el Cromatograma 5.2, se puede observar que el
primero presenta un pico entre el tiempo 4-6 minutos, mientras que en el segundo no muestra
ningn pico en ese intervalo, lo que garantiza que el nico componente presente en ese tiempo
de retencin es el principio activo en estudio.
5.1.3. Resultados de Linealidad del Sistema:
A continuacin se presentan los cromatogramas obtenidos para la linealidad del sistema:
42
Figura 5.5: Cromatograma de Solucin 50%:
43
Figura 5.10: Cromatograma de Solucin estndar
44
En la siguiente tabla se muestran los resultados cuantitativos resumidos de los cromatogramas
anteriores.
Tabla 5.4: Resultados de Linealidad del sistema

Concentracin Terica (ppm)
4
4
4
6
6
6
8
8
8
12
12
12
16
16
16
Concentracin recuperada (ppm)

4,2
3,9
4,2
6,1
6,1
6,3
8,3
8,2
8,2
12,2
12,2
12,2
16,3
16,3
16,7
rea
235284
218354
231069
340112
338292
351839
458491
454983
452270
674299
676757
675578
902079
905672
924375
rea/Con. Teo
58821
54588
57767
56685
56382
58639
57311
56872
56533
56191
56396
56298
56379
56604
57773
1000000
900000
Area (Absorbancia)
800000
700000
600000
500000
y = 56598x + 1928,6
R2 = 0,9992
400000
300000
200000
100000
0
0
10
15
20
Concentracin terica (ppm )
Figura 5.11: Linealidad de absorbancia vs. Concentracin terica.

La tabla 5.4, presenta de forma cuantitativas los resultados arrojados por las figuras 5.4 a 5.8, a
stos datos (concentraciones y rea expresada en absorbancia), se le fue aplicado la hiptesis de
un modelo lineal, estimndolo por el mtodo de mnimos cuadrados.
El factor de respuesta se calcula dividiendo la concentracin (ppm) por el rea. Se determina el
valor medio, la desviacin estndar y con ellas el coeficiente de variacin. Arrojando los
45
siguientes resultados:
Tabla 5.5: Tabla de resultados de Linealidad del mtodo
Promedio
Desviacin estndar
CV (%)
56883,1
1057,7
1,86
El coeficiente de variacin presenta un valor menor al establecido como criterio de aceptacin,

con lo que se puede afirmar que existe una relacin de linealidad entre ambas variables.
En la figura 5.10, se determin la ecuacin de la recta, arrojando la siguiente ecuacin, la cual
representa la linealidad de relacin de linealidad entre la absorbancia y la concentracin terica.
Absorbancia = 56598 Concentracin + 1928,6
r
r2
0,99
0,99
Tanto el valor de coeficiente de correlacin como el de determinacin r2, cercanos a 1, indican

una buena linealidad. Adems de cumplir correctamente con los criterios de aceptacin
establecidos.
5.1.4. Resultados de Precisin del Sistema:
En la siguiente figura se muestra el resultado de la prueba de precisin del sistema, arrojado

por el equipo de HPLC.
Figura 5.12: Cromatograma de Precisin del Sistema
En la siguiente tabla se muestra de manera resumida, los resultados arrojados por el equipo de
46
HPLC para la precisin del sistema.
Tabla 5.6: Resultados de la precisin del sistema
Inyeccin
1
2
3
4
5
6
Concentracin (ppm)
rea
453622
442425
441547
448260
454151
440088
Tabla 5.7: Parmetro evaluados de precisin del sistema

Promedio
Desviacin estndar %
C.V.%
446682,16
6235,55
1,40
Segn la definicin, la precisin es el grado de dispersin entre los resultados del anlisis de
una misma solucin bajo las mismas condiciones, como muestran los datos de la tabla 5.6,
expresando la seal del cromatograma de la figura 5.11 en trminos de absorbancia, los valores
poseen un grado de concordancia alto ya que el coeficiente de variacin es menor al criterio de
aceptacin (2%), es por ello que se puede decir que el sistema es totalmente preciso.
5.1.5. Resultados de Linealidad del Mtodo:
A continuacin se presentan los cromatogramas obtenidos para la linealidad del mtodo, para
cada una de las concentraciones en estudio.
Figura 5.13: Cromatograma de Solucin 65%
47
48
Figura 5.18: Cromatograma de Solucin Estndar
900000
Area (Absorbancia)
800000
700000
600000
500000
y = 57267x - 64739
R2 = 0,9917
400000
300000
200000
100000
0
0
10
15
20
Concentracin terica (ppm )
Figura 5.19: Concentracin terica del analito vs. Absorbancia
49
A continuacin, en la tabla 5.8 se muestran los resultados de la linealidad del mtodo
Tabla 5.8: Datos de Linealidad del mtodo

Concentracin (%)
65
65
65
85
85
85
100
100
100
150
150
150
200
200
200
Concentracin Terica
(ppm)
5,2
5,2
5,2
6,8
6,8
6,8
8
8
8
12
12
12
16
16
16
Concentracin recuperada
(ppm)
5,1
5,4
5,3
7
7,2
6,8
8,1
8,2
8,2
12,4
12,2
12,4
16,6
16,2
16,2
rea
226344
237685
236044
309910
317314
301582
390788
393021
392342
659494
654686
662806
837340
823272
832728
% Recobro
98
104
102
103
106
100
101
103
103
103
102
103
104
101
101
Utilizando los datos arrojados por las figura 5.12-5.18, presentes en la tabla 5.8, se realiz el
anlisis de la linealidad del mtodo, realizando el mismo procedimiento que para el parmetro de
linealidad del sistema. Obteniendo los siguientes resultados, en base al porcentaje de recobro del
analito en estudio:
Promedio % Recobro
Desviacin estndar
CV (%)
102
1,82
1,8
El coeficiente de variacin presenta un valor menor al establecido como criterio de aceptacin,

con lo que se puede afirmar que existe una relacin de linealidad entre ambas variables.
En la figura 5.19, se determin la ecuacin de la recta, arrojando la siguiente ecuacin, la cual
representa la relacin de linealidad entre la absorbancia y la concentracin terica.
Absorbancia = 57267.Concentracin - 64739

r
r2
0,99
0,99
50
Tanto el valor de coeficiente de correlacin como el de determinacin r2, cercanos a 1, indican
una buena linealidad. Adems de cumplir correctamente con los criterios de aceptacin
establecidos.
5.1.6. Resultados de Precisin, Exactitud y Robustez del Mtodo
Antes de realizar el procedimiento descrito anteriormente, se realiz un estudio del material

del hisopo de recobro, puesto que, se vea que con los hisopos disponibles en la empresa, los
cuales eran del material rayn, el recobro de la solucin era prcticamente cero (0).
Se procedi a realizar pruebas con una muestra de hisopos de dacrn y stos fueron los
resultados obtenidos:
Figura 5.20: Cromatograma y tabla para hisopos de rayn
51
Figura 5.21: Cromatograma y tabla para hisopos de dacrn
En el primer Cromatograma, figura 5.20, se puede observar claramente que el pico en el

tiempo de retencin del analito en estudio no es tan pronunciado como en la segunda figura,
figura 5.21, lo que se hace pensar que dichos hisopos de rayn no son capaces de realizar
efectivamente el recobro del analito. Es por ello que durante sta prueba, fueron utilizados
hisopos de dacrn y no de rayn.
Adems de esto, en el segundo cromatograma se realizaron dos pruebas, una con 100L de
sembrado del analito en la placa y otra con 250 L, estas pruebas arrojan mejores resultados en la
segunda ya que se recobra una mayor cantidad de analito (1,9 ppm vs. 1,1 ppm), es por ello que
se tomar como sembrado de analito la cantidad de 250 L.
52
Analista 1:
53
Tabla 5.9: Datos de Analista 1

Concentracin
(%)
75
75
75
75
75
100
100
100
100
100
125
125
125
125
125
Concentracin
terica (ppm)
6
6
6
6
6
8
8
8
8
8
10
10
10
10
10
Concentracin experimental
(ppm)
3,11
3,03
3,13
3,19
3,01
4,01
4,06
4,03
4,63
5,08
4,99
5,06
5,39
6,3
5,67
% recuperacin
51,8
50,5
52,2
53,2
50,2
50,1
50,8
50,4
57,9
63,5
49,9
50,6
53,9
63
56,7
Tabla 5.10: Resultados de analista 1

Concentracin (%)
75
100
125
Promedio
51,57
54,53
54,82
Desviacin
STD
1,2
6,0
5,3
CV (%)
2,4
9,5
9,7
En la tabla 5.9, se presentan los resultados cuantitativos mostrados en los cromatogramas de

las figuras 5.23-5.25. Se calcul el porcentaje de recuperacin para cada una de las 5 placas de
las 3 concentraciones. Posteriormente se realiz el clculo del promedio de cada uno de los
porcentajes de recuperacin y del coeficiente de variacin, los cuales cumplen satisfactoriamente
con los criterios de aceptacin.
54
Para evaluar los resultados de exactitud, precisin y repetibilidad se tuvo que hacer uso de un
segundo analista con otro equipo, los resultados se muestran a continuacin:
Analista 2
55

Tabla 5.11: Datos de analista 2
Concentracin
(%)
75
75
75
75
75
100
100
100
100
100
125
125
125
125
125
Concentracin
terica (ppm)
6
6
6
6
6
8
8
8
8
8
10
10
10
10
10
Concentracin experimental
(ppm)
3,2
3,2
3,4
3,2
3,2
4,2
4,4
4,4
4,6
4,5
5,4
5,6
5,5
5,5
5,6
% recuperacin
53,33
53,33
56,67
53,33
53,33
52,50
55,00
55,00
57,50
56,25
54,00
56,00
55,00
55,00
56,00
Tabla 5.12: Resultados de analista 2

Concentracin (%)
75
100
125
Promedio
54
55,3
55,2
Desviacin
STD
1,5
1,9
0,8
CV(%)
2,8
3,4
1,5
Al igual que los resultados del analista 1, el promedio del porcentaje de recuperacin y el
coeficiente de variacin cumple satisfactoriamente con los criterios de aceptacin.
La tabla 5.13 es una recopilacin de todos los resultados tanto del analista 1 como del analista
56
2, con los resultados de los promedios, coeficientes de variacin para cada una de las
concentraciones en estudio:
Tabla 5.13: Recopilacin de resultados robustez
Analista
1
2
1
2
1
2
Concentracin (%)
75
75
100
100
125
125
% Recuperacin
51,6
54
54,5
55,3
54,8
55,2
Promedio
Desviacin STD
CV
52,8
1,7
3,3
54,9
0,5
0,9
55,0
0,3
0,5
Con la ayuda de la tabla anterior, se pueden extraer las siguientes conclusiones expresadas en
el siguiente cuadro:
Tabla 5.14: Resultados Finales de Robustez
Repetibilidad
75%
100%
125%
CV (%) entre 9,7 y 1,5

Reproducibilidad (CV%) Exactitud (%recuperacin)
3,3
52,8
0,9
54,9
0,5
55,0
Los coeficientes de variacin estn comprendidos entre 9,7% y 1,5%, por lo tanto puede
concluirse que el mtodo analtico es repetitivo dado que, en todos los casos estn dentro del
lmite mximo especificado por la norma, el cual es 10%.
La reproducibilidad viene dada por el coeficiente global de variacin para cada concentracin,
estos valores son muy similares entre s, por lo tanto puede concluirse que el mtodo es
totalmente reproducible.
Para el caso de la exactitud, los resultados se encuentra comprendido entre 55% y 52,8%, por
lo que la tcnica cumple con el requisito de exactitud, siendo la recuperacin media para todo
intervalo de 54,2%, el cual se puede considerar aceptable con porcentajes de recobro mayores a
50% (LeBlanc, 1998).
El protocolo de Validacin del mtodo analtico se encuentra en su totalidad en el apndice B.
5.2. Validacin de limpieza
Segn lo descrito en el captulo de metodologa, se realiz el protocolo de validacin de

limpieza en base al plan maestro de validacin, dicho protocolo est conformado por las
57
siguientes secciones:
o Objetivo
o Alcance
o Definiciones
o Responsabilidades
o Introduccin
o Preliminares: Lo que tiene a su vez todo lo relacionado con lista de equipos
involucrados, lista de productos fabricados por dichos equipos, procedimientos de

limpieza, mtodos de muestreo, mtodos de anlisis, lmites de aceptacin, entre otras.
o Procedimiento: son todos los procedimientos a realizarse en la validacin de limpieza
como: pre-requisitos, fases de pre-validacin, seleccin de producto peor caso y puntos

de muestreo, entre otras.
o Documentacin y registros
o Criterio de Aceptacin
o Reporte Final
o Documentos de referencia
o Anexos
El protocolo de Validacin de Limpieza de manufactura de Caramelos se encuentra en

su totalidad en el apndice C.
5.2.1. Pre-requisitos
En esta fase se verific: las instrucciones de trabajo para la limpieza de equipos y reas
correspondientes a la manufactura de y envasado primario de caramelos, poltica de validacin de
limpieza debidamente aprobada, mtodos analticos debidamente aprobados. Encontrando la
siguiente desviacin, realizando un SACOP:
Desviacin Encontrada: Uso de un producto de limpieza no aprobado para la limpieza de la
troqueladora, violando el procedimiento de limpieza del rea, as como la instruccin de trabajo
de la preparacin de detergentes y sanitizantes aprobados, poniendo en riesgo la planta de
tratamiento, as como comprometer la calidad del producto final.
58
Acciones Correctivas: Se evalu el procedimiento de limpieza del rea, se realiz un readiestramiento al personal involucrado en la limpieza del rea, se tomaron muestras del producto
para su anlisis, arrojando resultados satisfactorios, sin presencia del producto no aprobado,
adems se realiz el estudio de toxicidad.
Dicho producto contiene los siguientes compuestos: Dietil glicol monobutil etanol y
etiloamina se realiz el clculo del lmite MC3 tanto para el producto no aprobado como para el
producto aprobado (Cloruro de benzalconio) arrojando los siguientes resultados:
Tabla 5.15: Toxicidad de componentes
Componentes
Dietil glicol monobutil etanol
Etiloamina
Cloruro de benzalconio
LD50
(mg/Kg)
5660
2100
400
MC3 (ppm)
290
107,6
20,5
Como se observa en la tabla anterior, el LD50 del cloruro de benzalconio es el menor lo cual
indica que el producto es moderamente txico, haciendo que el lmite permisible de dicho
compuesto sea menor, es decir mucho ms estricto que los dems componentes. En el caso de los
primeros dos componentes tienen un LD50 mucho ms alto que el Cloruro de benzalconio, lo que
los hace menos riesgosos en la salud de las personas, sin afectar la calidad del producto final,
adems de tener un casi 10 veces ms la probabilidad de lmite permisible en dichos equipos.
Para garantizar que dicho producto, a pesar de ser ligeramente txico, no afectara la calidad
del producto, se procedi a realizar un muestreo por hisopado en las reas donde dicho producto
fue aplicado para realizar el anlisis respectivo de trazas, dando resultados negativos a dichas
pruebas, lo que garantiza que el enjuague final realizado pudo desprender cualquier residuo
presente del producto de limpieza no aprobado.
5.2.2. Seleccin de producto peor caso
Se realiz una matriz para la seleccin del producto peor caso, la cual se presenta a
continuacin:
59
Tabla 5.16: Matriz de seleccin de producto peor caso
Producto
Principio
activo
Toxicidad
(LD50,
mg/kg)
Bencidamina
500
Cloruro de
Cetilpiridinio
200
Lidocana
317
Solubilidad
en agua
Muy
Soluble
Muy
Soluble
Muy
Soluble
Tamao de
lote
(unidades)
175.000
175.000
El principio usualmente utilizado para la seleccin del producto peor caso es la solubilidad
en agua, pero debido a que los tres principios activos poseen el mismo valor de solubilidad, se
tom en cuenta el segundo criterio, toxicidad.
El producto peor caso seleccionado fue el Cloruro de Cetilpiridinio, ya que posee el LD50
menor lo que indica un mayor grado de toxicidad.
5.2.3. Seleccin de puntos de muestreo
Los puntos de muestreo fueron seleccionados segn el plan de validacin de Laboratorios

Elmor, el cual indica que por equipo debe haber como mnimo tres (3) puntos de muestreo, los
cuales dispongan de diferentes materiales, puntos de difcil acceso de limpieza. Los puntos de
muestreo se encuentran en el apndice D.
5.2.4. Clculo de lmites de aceptacin permisibles
Antes de verificar todo lo disponible en el protocolo de validacin de limpieza, se deben hallar

los lmites de aceptacin permisibles (MC1, MC2 y MC3), los cuales se presentan en la siguiente
tabla:
Tabla 5.17: Lmites de aceptacin permisibles en la Validacin de Limpieza
Lmites de Aceptacin
Principio activo enfoque LTD (MC1)
Principio activo enfoque 10 ppm
(MC2)
Detergente (MC3)
Resultado
(ppm)
219,6
70,3
20,5
Se tomar para el principio activo el menor lmite de aceptacin, es decir el MC2, debido a que
es ms estricto que el primero. ste lmite significa que en toda el rea de manufactura de
60
caramelos (equipos con contacto directo con producto) slo se aceptar 70,3 ppm de principio
activo.
Para el caso del detergente utilizado, que es Cloruro de Benzalconio, la cantidad mxima
permisible en el rea es de 20,5 ppm.
5.2.5. Validacin Final
A continuacin se reportarn los resultados obtenidos para la cuantificacin de principio activo

para cada uno de los puntos de muestreos seleccionados anteriormente; los resultados de
detergente y contaminacin microbiolgica fueron reportados por el departamento de control de
calidad.
Figura 5.30: Cromatograma Lote 1 (Puntos 1-22 y 27-29)
61
Figura 5.32: Cromatograma de Solucin Estndar Lote 1
62

A continuacin se presenta la tabla resumen de los resultados finales de validacin, para el detalle
de resultados por puntos de muestreo ver apndice H.
Tabla 5.18: Resultados Finales de Validacin de Limpieza
Principio activo (ppm)
Lote 1
Lote 2
Lote 3
Mximo: 1,4
Mximo: 1,2
Mximo: 0,7
Mnimo: 0
Mnimo: 0
Mnimo: 0
Detergente (ppm)
Contaminacin
Microbiolgica (ufc/ml)
63
Evaluando los resultados obtenidos durante la validacin de limpieza, puede observarse que
los residuos de activo, detergente y conteo microbiolgico para todos los puntos muestreados
cumplieron con las especificaciones establecidas.
Debido a lo anteriormente expuesto, completndose el monitoreo de las tres limpiezas mayores
empleando el mismo detergente y se obtuvieron resultados que se encuentran dentro de las
especificaciones requeridas.
Se cuenta con suficiente evidencia documentada para asegurar que la contaminacin
microbiolgica de los equipos correspondientes a la fase de troquelado y foliado, se mantendr
dentro de especificacin de manera consistente.
De esta manera, las acciones inmediatas a tomar despus de efectuada la validacin de
limpieza, son las siguientes:
El detergente aprobado para la limpieza de reas y equipos de caramelos es cloruro de
benzalconio al 0,5%.
No se requerir realizar trazas despus de la fabricacin de los lotes de productos del
rea de caramelos. Slo se realizar una inspeccin visual de la limpieza por parte de los
inspectores de procesos.
Validacin realizar muestreos aleatorios para corroborar el mantenimiento del estado
validado. En caso de obtenerse resultados no satisfactorios, ser necesario retomar el

procedimiento de toma de trazas despus de cada lote.
Desarrollo de nuevos productos informar a validacin cuando se apruebe la
incorporacin de un nuevo activo al tren de manufactura de caramelos, de manera de

evaluar el impacto que ste tenga sobre la validacin.
De acuerdo a los resultados obtenidos durante la validacin de limpieza, se recomienda lo
siguiente:
1. Continuar realizando la limpieza segn lo indicado en las instrucciones de trabajo
correspondientes a cada rea y equipo en cuanto a secuencia de actividades, tiempos de
aplicacin de detergente y enjuague, entre otros.
5.3. Calificacin de instalacin, operacin y desempeo
Se realizaron los protocolos correspondientes a las calificaciones de instalacin,
64
operacin y desempeo, arrojando los siguientes resultados:
5.3.1. Calificacin de Instalacin
Se realizaron las siguientes pruebas encontrando resultados satisfactorios:

o Pre-Requisitos: Verificar que se cumplan los siguientes requisitos antes de comenzar
la ejecucin del protocolo. Se verific que los manuales de instalacin, operacin y

mantenimiento de cada uno de los equipos se encontraran disponibles.
o Datos Generales: Registrar los datos correspondientes al equipo. Se verific los datos
de cada uno de los equipos involucrados tales como: modelo, cdigo, nmero de serie,
fabricante, fecha de compra y fecha de instalacin.
o Documentos Generales: Verificar la existencia de la documentacin correspondiente
al equipo. Se ubic los documentos tales como: manuales de instalacin, operacin y

mantenimiento de cada uno de los equipos, planos y/o diagramas de las instalaciones
tanto mecnico y elctrico de los equipos, la orden de compra, registro de capacitacin
del personal en la operacin, limpieza y mantenimiento de los equipos involucrados,
certificado de los componentes en contacto directo con producto cumplan las BPM y
la lista de accesorios de los equipos.
o Instalacin Elctrica: Verificar que el equipo cuente con los requerimientos elctricos
necesarios para su funcionamiento. Se verific la instalacin elctrica para as

identificar la existencia de la caja de conmutadores, que la energa suministrada tena
conexin a tierra, y que cada uno de los componentes estaban debidamente
identificados.
o Identificacin del equipo: Verificar que el equipo cuente con la identificacin de
seguridad necesaria. Se verific que los equipos posean la placa de identificacin

general, as como el cdigo de identificacin de Laboratorios Elmor y que presenten
con las advertencias de seguridad y peligros del equipo.
o Componentes: Verificar que el equipo cuente con los componentes necesarios para su
funcionamiento. Se verific que cada uno de los equipos cuente con los componentes
necesarios para su correcto funcionamiento.
Para mayor detalle de ste protocolo ver Apndice F
65
5.3.2. Calificacin de Operacin y Desempeo:
Se realizaron las siguientes pruebas encontrando resultados satisfactorios:

o Pre-requisitos: Verificar que se cumplan los siguientes requisitos antes de comenzar la
ejecucin del protocolo, tales como: protocolo de instalacin debidamente aprobado

sin desviaciones crticas, procedimiento estndar de operacin para el manejo de los
equipos, mantenimiento preventivo de los equipos y limpieza de los equipos.
o Datos Generales: Registrar los datos correspondientes al equipo. Se verific los datos
de cada uno de los equipos involucrados tales como: modelo, cdigo, nmero de serie,
fabricante, fecha de compra y fecha de instalacin.
o Operacin General: Verificar que los componentes necesarios para el buen
funcionamiento del equipo operen de una manera correcta. Se verific que cada uno
de los equipos opere correctamente.
o Desempeo General: Verificar que los equipos cumplen de una manera correcta con
las funciones para las que fueron diseados trabajando con producto.
Para mayor detalle de ste protocolo ver Apndice G
Los Protocolos de calificacin de instalacin y operacin/ desempeo del sistema de
manufactura de caramelos, fueron ejecutados en su totalidad encontrndose las siguientes
desviaciones o SACOP que se listan a continuacin:
Verificacin de la existencia de Orden de Compra del equipo.

Desviacin Encontrada: No se encontr la orden de compra
Acciones Correctivas: No se considera relevante esta desviacin ya que se cuenta
con un manual de operacin donde se describen los componentes del equipo.

Verificacin del funcionamiento de los selectores para la regulacin de la
temperatura de los rodillos egalizadores.
Desviacin Encontrada: La prueba no se puede realizar porque los dispositivos de
regulacin de temperatura no poseen un selector para el cambio de posicin del

mismo.
Acciones Correctivas: La prueba no se pudo realizar, por lo que no se toma como
una desviacin crtica.
66
Verificacin del funcionamiento de la palanca de cambio de marcha del motor
de la Troqueladora
Desviacin encontrada: No se puede realizar la prueba.
Desviacin correctiva: Debido a que la troqueladora se encuentra en lnea con los
dems equipos de manufactura de caramelos, al variar la velocidad de sta, es

necesario ajustar las velocidades de los dems equipos, ocasionando prdida de gran
cantidad de producto que sale fuera de especificacin. Adicionalmente, el equipo
siempre opera a la misma velocidad y no se considera crtico la ejecucin de esta
prueba para el desempeo del equipo.
Despus
de
ejecutados
los
protocolos
de
calificacin
de
instalacin
operacin/desempeo del sistema de manufactura de caramelos, y corregidas las

desviaciones encontradas, se ha comprobado y documentado que este conjunto de equipos
fueron instalados de acuerdo a las especificaciones de diseo y las recomendaciones del
fabricante, y que operan dentro de los rangos establecidos tanto en vaco como con
producto, cumpliendo con las Buenas Prcticas de Manufactura.
67
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
El desarrollo de las fases del proyecto permiti el cumplimiento de los objetivos
propuestos. A continuacin se presentan las conclusiones generadas de este proyecto.
Como resultado de los estudios realizados expuestos en el protocolo de
validacin de limpieza, se obtuvo que no se detectaron residuos de principio

activo, detergente y contaminacin microbiolgica, logrando que el
procedimiento de limpieza del rea de caramelos est validado.
Luego de realizar la ejecucin del protocolo de validacin del mtodo analtico
se puede concluir que es un mtodo lineal, preciso y exacto. El lmite de

aceptacin de principio activo por hisopo es de 8ppm.
Despus de ejecutado el Protocolo de Validacin de Limpieza del Proceso de
Fabricacin de Caramelos se tiene suficiente evidencia para asegurar que los

resultados de residuos de activo y detergente cumplirn de manera consistente
con los criterios establecidos, garantizando la pureza, seguridad y eficacia de
los productos elaborados en esta rea.
Los lmites de aceptacin en el rea de manufactura de caramelos son de 70.3
ppm para el principio activo (Cloruro de Cetilpiridinio) y 20.5 ppm para

detergente (cloruro de benzalconio).
Los resultados de la Calificacin de Instalacin, Operacin y Desempeo de los
equipos del rea de manifactura de caramelos coinciden con el resultado

esperado, arrojando desviaciones las cuales fueron remitidas a los
departamentos correspondientes para su resolucin.
Las desviaciones encontradas en la ejecucin de los protocolos, no afectan de
forma crtica a la calidad del producto, es por ello que se aprueba de manera
efectiva del rea, haciendo as que el rea est totalmente validada.
Al analizar los resultados obtenidos durante el proceso validacin de limpieza de
manufactura de caramelos, se pueden realizar las siguientes recomendaciones:
Realizar la re-validacin del rea de caramelos con ms frecuencia para as
asegurar que el procedimiento de limpieza se cumplan correctamente.
68
REFERENCIAS
1) Gaceta Oficial de la Repblica de Venezuela N 38.009 de fecha 26 de agosto del 2004
2) Salazar, R. Validacin Industrial Su aplicacin a la industria farmacutica y afines. Gatt
Labortecnic SA, Barcelona 1999
3) Laboratorios Elmor. Plan de Validacin General.
4) Keith Tait. Enciclopedia de salud y seguridad del trabajo. Captulo 79 Industria
Farmacutica. 2000
5) Comit de Expertos de la Organizacin Mundial de la Salud en principios bsicos de las
BPM. Serie de Informes Tcnicos de la OMS. Reporte 37. Ginebra 2001.
6) Krull Ira, Swart M. Quantitation in Method Validation. Validation viewpoint, Boston
1992.
7) Sanz, E. Validacin de Limpieza (I), (II). FarmEspaa Industrial. 2005.
8) Sanz,E. Validacin de Limpieza (III). FarmEspaa Industrial. 2006.
9) LeBlanc, D. Validated Cleaning Technologies for Pharmaceutical Manufacturing. 1998
10) Barang, J, Antnez S . Validacin de Mtodos de Limpieza. AEFI (1994).
11) Zayas, L. Guas para la inspeccin de procesos de limpieza. FDA (1993).
12) Nash R, Wachter A. Pharmaceutical Process Validation 2000.
13) Laboratorios Elmor. Protocolo de Calificacin de Instalacin (IQ) del Sistema de
Manufactura de Caramelos Publicacin Validacin. 2009
14) Laboratorios Elmor. Protocolo de Calificacin de Operacin y Desempeo (OQ y PQ)
del Sistema de Manufactura de Caramelos Publicacin Validacin. 2009
15) Laboratorios Elmor. Protocolo de Calificacin de Instalacin (IQ) de la Foliadora
OMAG Publicacin Validacin. 2009
16) Laboratorios Elmor. Protocolo de Calificacin de Operacin y Desempeo (OQ y PQ) de
la Foliadora OMAG Publicacin Validacin. 2009
17) Marletta L. Sistemas de Calidad y Buenas Prcticas de Manufactura en la Industria
Farmacutica 1998.
18) Agalloco J., Carleton F. Validation of Pharmaceutical Process. Informa. 2002.
19) Mc Nair, H y Esquivel, B. Cromatografa Lquida de Alta Presin. Departamento de
asuntos cientficos secretaria general de la OEA. Washington DC. 1973.
20) Done, J. y Knox, J. Applications of High-Speed Liquid Chromatography. London. 1974. Pag.
3-18.
69
APENDICE A
CALCULO DE LIMITES DE ACEPTACIN MTODO
Limite en el producto:
L1 =
0,001.D Amin .1000

D Bmax
mg
.1000
mg
dia
= 2,222
mg
g
9
dia
0,001.2
L1 =
Donde:
L1 = Lmite de presencia del producto Cloruro de Cetilpiridinio en el Bencidamina (ppm)
D Amin = Dosis mnima diaria del producto Cloruro de Cetilpiridinio (mg/da)
D Bmax = Dosis
mxima diaria del producto Bencidamina (mg/da)

1000: Factor de conversin para convertir unidades de mg a g. (1000mg/g)
Lmite por superficie:
L2 =
L1 .T B
S compartida
2,22
L2 =
mg
.350000g
g
249752cm
= 3,11
mg
cm 2
Donde:
Lmite por superficie (mg/cm2)
L1 = Lmite de presencia del producto Cloruro de Cetilpiridinio en el Bencidamina (ppm)
T B = Tamao del lote del producto Bencidamina (mg)
S
=
Superficie compartida de equipos (cm2) (ver apndice D)
L2 =
compartida
Lmite de la muestra a analizar:
70
L3 =
L2 . Ahisopada
V solvente
3,11
L3 =
mg
.25cm 2
mg
cm 2
= 7,78
10ml
ml
Donde:
L 3 = Lmite
en la muestra a analizar (mg/ml)

Ahisopada =
rea superficial a muestrar con hisopo 25 cm2
Vsolvente =
Volumen de solvente de recobro 10 ml
71
APENDICE B
PROTOCOLO DE VALIDACIN DE METODO ANALITICO
(EN CD)
Contiene:
Protocolo de Validacin del Mtodo Analtico completo.
72
APENDICE C
PROTOCOLO DE VALIDACIN DE VALIDACIN LIMPIEZA
(EN CD)
Contiene:
Protocolo de Validacin de Validacin de Limpieza completo
73
APENDICE D
PUNTOS DE MUESTREO
Marmita
1
Punto 1: desage de producto
2
Punto 2: Olla parte baja
74
4
Punto 3: Olla parte alta

Punto 4: Agitador
Mezcladora
5
6
Punto 5: Paredes de la mezcladora

Punto 6: Agitador
7
Punto 7: Desage
75
Seleccionadora
8
Punto 8: Rodillos de seleccionadora
10
Punto 9: Canales de la seleccionadora
Punto 10: Cinta rotatoria de la
seleccionadora
76
11
Punto 11: Bandeja vibratoria
Mesa Trmica
12
Punto 12: Parte de arriba de mesa
77
Tnel de enfriamiento
13
Punto 13: Cadena
14
Punto 14: Bandeja de plstico
78
Ollas de traslado
15
Punto 15: Interior de olla
Egalizadora
16
Punto 16: Base de la egalizadora
79
17
Punto 17: Borde de cilindros
Bastonadora
18
Punto 18: Bastn
80
19
20
Punto 19: Carcaza de bastonadora

Punto 20: Tapa de carcaza de
bastonadora
81
Troqueladora
21
Punto 21: Punzones
22
Punto 22: Cortadora
82
Foliadora
23
Punto 23: Tolva de alimentacin
24
25
Punto 24: Bandeja vibratoria

Punto 25: Bandeja de alimentacin
83
26
Punto 26: Bandeja de foliadora
Puntos 27, 28 y 29 corresponden a la pared, techo y piso del rea de troquelado respectivamente
Puntos 30,31 y 32 corresponden a la pared, techo y piso del rea de foliado respectivamente
84
APENDICE E
LIMITES VALIDACIN DE LIMPIEZA
1. MC1 Enfoque principio activo LTD
LTD Wb Ss
R
1000 D Wt Se
2000g 350Kg
25cm 2
MC =
0,5 = 1097,82g
1000 16 0,002Kg 249072cm 2
1097,82g
MC1 =
= 219ppm
5ml
MC =
Donde:
LTD: Menor Dosis Teraputica del producto A (mg)
R: factor de recuperacin del activo para el producto A con la solubilidad
ms baja
El lmite estar basado en la dosis teraputica ms baja (LTD) y un factor de
seguridad de 1000.
2. MC2 Enfoque de los 10 ppm:

Wb 10ppm
Ss 1000
Se
350Kg 10ppm
MC =
25cm 2 1000 = 351,30g
2
249072cm
351,30g
MC 2 =
= 70,26ppm
5ml
MC =
Donde:
85
R: factor de recuperacin del activo para el producto A con la solubilidad
ms baja
3. MC3 Agentes de Limpieza. Enfoque LD50
LD50 Wb Ss
R 50
1000 D Wt Se
400 mg
25cm 2
Kg 350Kg
MC =
1 50 = 307,59g
1000 16 0,002Kg 249072cm 2
307,59g
MC 3 =
= 20,49ppm
15ml
MC =
Donde:
LD50: Dosis Letal para el 50% de los animales estudiados (mg/Kg)
50: Peso corporal humano promedio (Kg)
86
APENDICE F
PROTOCOLO DE CALIFICACIN DE INSTALACIN
(EN CD)
Contiene:
Protocolo de Calificacin de Instalacin Sistema del Manufactura de Caramelos
Protocolo de Calificacin de Instalacin de la Foliadora OMAG
87
APENDICE G
PROTOCOLO DE CALIFICACIN DE OPERACIN Y DESEMPEO
(EN CD)
Contiene:
Protocolo de Calificacin de Operacin y Desempeo Sistema del Manufactura de
Caramelos
Protocolo de Calificacin de Operacin y Desempeo de la Foliadora OMAG
Mezcladora
Marmita
Equipo/
rea
Olla parte alta
Agitador
Paredes
Agitador
Desage
Olla parte baja
Desage
Nombre del punto
Puntos
de
Muestro
70,3
70,3
20,5
20,5
Residuo
Residuo
Activo Detergente
(ppm)
(ppm)
25
25
Cont.
Microb.
(ufc/ml)
Especificaciones
0,2
0,4
0,2
1,1 0,05 0,5
1,4
1,5
1,4
2,5
0,4
1,1
Resultados anlisis
Residuos de
Contaminacin
Residuos de
Detergente
Microbiolgica
Activo (ppm)
(ppm)
(ufc/ml)
Lote
Lote
Lote
1
2
3
1
2
3
1
2
3
Tabla 5.18: Resultados Finales de Validacin de Limpieza
RESULTADOS DE VALIDACIN FINAL
APENDICE H
88
Tnel de
Enfriamiento
Mesa
Trmica
Seleccionadora
Equipo/
rea
Bandeja vibratoria
Cadena Superior
13
14
Mesa
Agitador
11
12
Olla parte alta
Olla parte baja
10
Desage
Nombre del punto
Puntos
de
Muestro
70,3
70,3
70,3
20,5
20,5
20,5
Residuo
Residuo
Activo Detergente
(ppm)
(ppm)
25
25
25
Cont.
Microb.
(ufc/ml)
Especificaciones
0
0
0
0,5
0,5
0,7
0,6
1,3
1,0
0,04
0,2
1,4 1,06 0,2
1,1
0,7
Resultados anlisis
Residuos de
Contaminacin
Residuos de
Detergente
Microbiolgica
Activo (ppm)
(ppm)
(ufc/ml)
Lote
Lote
Lote
1
2
3
1
2
3
1
2
3
Continuacin Tabla 5.18: Resultados Finales de Validacin de Limpieza
89
Troqueladora
Bastonadora
Carcaza
Tapa
Punzones
19
20
21
Cortadora
Bastn
18
22
Poleas
17
Base
16
Egalizadora
Interior de la olla
15
Olla de
Traslado
Nombre del punto
Puntos de
Muestro
Equipo/
rea
70,3
70,3
70,3
70,3
20,5
20,5
20,5
20,5
Residuo
Residuo
Activo Detergente
(ppm)
(ppm)
25
25
25
25
Cont.
Microb.
(ufc/ml)
Especificaciones
0,1
0,8
1,0
0,5
1,4 0,2 0,04
0,6 0,6
0,9 0,4 0,1
1,3
0,7
0,9
Resultados anlisis
Residuos de
Contaminacin
Residuos de
Detergente
Microbiolgica
Activo (ppm)
(ppm)
(ufc/ml)
Lote
Lote
Lote
1
2
3
1
2
3
1
2
3
90
Sala de
Troquelado
Foliadora
Equipo/
rea
Techo
Piso
29
Pared
caramelos
Bandeja
Dispensadora de
28
27
26
25
Bandeja Vibratoria
24
Bandeja
Alimentacin
Tolva
Nombre del punto
23
Puntos de
Muestro
70,3
70,3
20,5
20,5
Residuo
Residuo
Activo Detergente
(ppm)
(ppm)
50
25
Cont.
Microb.
(ufc/ml)
Especificaciones
0,8
0,4
0,4
0,02
0,01
0,01
0,02
0,1
0,5
0,2
0,3
0,3
0,3 0,1
Resultados anlisis
Residuos de
Contaminacin
Residuos de
Detergente
Microbiolgica
Activo (ppm)
(ppm)
(ufc/ml)
Lote
Lote
Lote
1
2
3
1
2
3
1
2
3
91
Sala de
Foliado
Equipo/
rea
Techo
Piso
32
Pared
Nombre del punto
31
30
Puntos de
Muestro
70,3
20,5
Residuo
Residuo
Activo Detergente
(ppm)
(ppm)
50
Cont.
Microb.
(ufc/ml)
Especificaciones
1,2 0,7
0,6 0,2
0,01 0,03
0,08
0,04
Resultados anlisis
Residuos de
Contaminacin
Residuos de
Detergente
Microbiolgica
Activo (ppm)
(ppm)
(ufc/ml)
Lote
Lote
Lote
1
2
3
1
2
3
1
2
3
92
93
94

Tesis Validacion de Limpieza HPLC

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UNIVERSIDAD SIMN BOLVAR

DECANATO DE ESTUDIOS PROFESIONALES

VALIDACIN DEL PROCEDIMIENTO DE LIMPIEZA DEL PROCESO DE

Sartenejas, Enero de 2010

UNIVERSIDAD SIMN BOLVAR

VALIDACIN DEL PROCEDIMIENTO DE LIMPIEZA DEL PROCESO DE

Realizado con la asesora de:

Sartenejas, Enero de 2010

UNIVERSIDAD SIMN BOLVAR

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Linealidad del sistema:

Precisin del mtodo:

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Linealidad del mtodo:

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