UNIVERSIDAD TECNICA DE MANABI

Facultad Ciencias De La Salud

Escuela de Laboratorio Clnico

EXPOSICION BIOLOGIA MOLECULAR II

TEMA: GENERACION DE UNA MOLECULA DE ADN RECOMBINANTE

Integrantes:

STEFANY PICO NAPA

VANESSA MEZA ANDRADE
MARIA GARCIA VILLAFUERTE
GISEL BRAVO POLANCO
ALDRITH MOLINA CHAVEZ
ROCIO IZA CEDEO
KARLA ALCIVAR CEDEO

PALABRAS CLAVES

DIDEOXINUCLETIDOS
RECOMBINANTE
CLONACIN
ESCALONADA
BACTERIOFAGO
PLASMIDOS

GLOSARIO
Dideoxinucletidos.- Nucletido modificado que en posicin 3' ha perdido el grupo OH. Se
simboliza como ddNTP. Se incorpora en sntesis de DNA y RNA pero se inhibe el proceso se
sntesis posterior.
Escalonada: Semejante en la superficie a una serie de escalones.
Bacteriofago.- Es un virus que infecta exclusivamente bacterias. Tal y como sucede con muchos
otros virus que infectan a clulas
Plsmidos.-Son molculas de ADN extracromosmico circular que se
replican y transmiten independientes del ADN cromosmico
Recombinante.- Clula u organismo que resulta de la recombinacin de genes en la molcula de
ADN, independientemente de si se ha producido de forma natural o por medios artificiales.

Generacin de
una molcula de
ADN
La estrategia bsica en la
Recombinante.

clonacin molecular es
insertar un fragmento de
ADN de inters en una
molcula que es capas de
replicarse de forma
independiente en una clula
husped.

Los fragmentos de ADN utilizados

para crear molculas de ADN
recombinante son generados por
digestin con endonucleasas de
restriccin.
Estas enzimas cortan sus secuencias de
reconocimiento de forma escalonada,
generando extremos complementarios
o cohesivos de una sola hebra que
puede asociarse entre si por
apareamiento de bases

EL ADN producido se liga al

vector de ADN de modo antes
descrito, los genes eucariticos
estn
interrumpidos
por
secuencias no codificantes o
intrones

Que se eliminan de ARNm por corte y

emplamado o splicing, la posibilidad de
clonar ADNc adems del ADN genmico
para el entendimiento de la estructura y
funcin de los genes

Vectores para adn recombinante

DEPENDIENDO DEL TAMAO DEL ADN QUE SE
INSERTA Y DEL PROPSITO DEL EXPERIMENTO
ES POSIBLE UTILIZAR DISTINTOS VECTORES DE
CLONACIN PARA GENERAR MOLCULAS
RECOMBINADAS
OTROS TIPOS DE VECTORES DESARROLLADOS
PARA EXPRESAR ADN CLONADO E INTRODUCIR
MOLCULAS RECOMBINADAS EN CLULAS
EUCARIOTAS SE DISCUTEN EN SECCIONES
POSTERIORES.
LOS PLSMIDOS GENERALMENTE SE USAN PARA
CLONAR INSERTOS DE ADN GENMICO O ADNC

LOS VECTORES
PLASMIDICOS
GENERALMENTE
CONSISTEN EN 2
A 4 KB DE ADN,
INCLUYENDO UN
ORIGEN DE
REPLICACIN
UN GRUPO DE
FRAGMENTOS DE
ADNC SON
LIGADOS A UN
PLSMIDO DE
ADN
PREVIAMENTE
DIGERIDO
MEDIANTE UNA

Las bacterias que contengan el

plsmido de inters pueden crecerse
en grandes cantidades y extraerse su
ADN. Las pequeas molculas
circulares del ADN plasmdico a
menudo existen cientos de copia por
clula, pueden separarse del ADN
cromosmico bacteriano.
Los vectores del bacterifago
tambin son empleados por el
aislamiento tanto del ADN genmico
como clones de ADNc a partir de las
clulas eucariotas y pueden
acomodar fragmentos mayores al
ADN inserto que los plsmidos.

En los vectores de clonacin, las

secuencias del genoma del
bacterifago que son dispensables
para la replicacin viral han sido
eliminadas y sustituidas por sitios
nicos de restriccin para la insercin
del ADN clonado.

El ADN de estos fagos puede

entonces aislarse, dando lugar a
grandes molculas
recombinantes que contiene un
solo fragmento de ADN clonado.

En determinados estudios de
anlisis de ADN genmico es
preciso clonar fragmentos de ADN
mayores de lo que un fago X
puede portar.

COSMIDOS

BACTERIOFAGOS PI

CROMOSOMA
ARTIFICIAL PI
En determinados estudios de
anlisis de ADN genmico es
preciso clonar fragmentos de ADN
mayores de lo que un fago X
puede portar.

C. ARTIFICIAL
BACTERIANO

C. ARTIFICIAL DE
LEVADURA

ecuenciacin de ADN
LA CLONACION MOLECULAR DE
UN FRAGMENTO INDIVIDUAL DE
ADN PERMITE EL AISLAMIENTO
DE LAS GRANDES CANTIDADES
DE MATERIAL GENETICO,
INCLUYENDO LA
DETERMINACION DE SU
SECUENCIA DE NUCLEOTIDOS
LA SINTESIS DE ADN SE
INICIA EN UN PUNTO
UNICO DEL ADN
CLONADO
A PARTIR DE UN
CEBADOR SINTTICO

LAS SECUENCIAS
CODIFICANTES DE
GENES ESTAN
RELACIONAS
FRECUENTEMENTE
CON LAS DE GENES
PREVIAMENTE
ESTUDIADO

EL METODO BASICO
EMPLEADO PARA SECUENCIAR
EL ADN(1977), SE BASA EN LA
INTERRUPCION PREMATURA
DE LA SINTESIS DE ADN
MEDIANTE LA INCLUSION DE
DIDEOXINUCLETIDOS
( HIDROXILO 3 DE LA
DESOXIRRIBOSA

LA RECREACCION DE
SINTESIS DE ADN
INCLUYE 4
DIDEOXINUCLETIDOS

( A,C,G y T)

LA INCORPORACION DE UN
DIDEOXINUCLETIDO
DETIENE LA SINTESIS DE
ADN POR QUE NO HAY
NINGUN GRUPO HIDROXILO
EN 3 DISPONIBLE PARA LA
EDICCION DEL SIGUIENTE
NUCLEOTIDO

La luz emitida resultante es

detectada por un
fotomultiplicador y un
ordenador recolecta y analiza
los datos

Serie de
molculas de ADN

Fragmentos de
ADN son entonces
separados en
funcin de su
tamao

La secuencia de ADN
puede ser leda por el
orden
de
fragmentos
marcados
con
fluorescencia

La secuencia de
ADN automtica
de
alto
rendimiento, que
emplea
dideoxinucleotido
s

Se ha desarrollado
mtodos nuevos que
permite secuenciar
el ADN mucho ms
rpido

Tcnicas
novedosas,
agrupadas
bajo el nombre
de
secuenciacin

Es
posible
secuenciar
miles
de
millones
de
bases de ADN
al da.

Se
han
desarrollado
tcnicas
que
permiten
secuenciar
ARN
directamente,