material y equipo:

sustancias:

-centrifuga
-tubos de ensaye cnicos

-sol. salina isotnica

-gasa cortada en cuadros

-sol. de formaldehido al 10%

-embudos de polietileno

-ter

-vasos de precipitados de 50 ml.

-heces fecales

-aplicadores de madera

-yodo lugol

-pipetas pasteur con bulbo

-portaobjetos
-cubreobjetos
-microscopio

metodo:
a)
con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1 gr. de la materia fecal en el vaso de precipitados, se
aaden 10 ml de solucin salina y se homogeniza.

b) se filtra la suspensin a travs de la gasa colocada en el embudo recogiendo el filtrado en el tubo cnico.

c)

se centrifuga la suspensin durante 2 min. a 2000 r.p.m

.
d) se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con la solucin salina, centrifugando, decantando y
resuspendiendo 2 veces ms
.
e)

al ltimo sedimento se agregan 5 ml. de sol. de formaldehido al 10%, se mezcla y se deja reposar durante 10 min.

f)

se aaden despus 0.5 ml. de ter, se tapan los tubos y se agitan energticamente durante 30 seg.

g)

se centrifuga durante 2 min. a 2000 r.p.m.

h) despus de centrifugar se observan 4 capas ( aunque en nuestra muestra no se observaron muy bien estas capas):

>ter en la superficial
>un tapn de restos fecales
>formaldehido
>sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios.

i) se decanta el sobrenadante.

j) se introduce la pipeta pasteur hasta el sedimento, se extrae con cuidado una gota del sedimento y se coloca en el
portaobjetos.
k) se le aade una gota de lugol y se le coloca el cubreobjetos.

l) se observa la preparacin en el microscopio con los objetivos 10x y 40x.

resultados:
al observar al microscopio en el objetivo 10x se identificaron algunos quistes pero en el objetivo 40x no se lograron
observar mejor. se compararon y el resultado fue:

quistes de entamoeba histolytica

RESULTADOS Y CONCLUSIONES

Como puede verse, el resultado para huevecillos de parsitos resulto negativo. Sin embargo se encontraron una gran
cantidad de quistes deEntamoeba coli, y al menos 3 de Entamoeba histolytica. Esto significa que la persona
probablemente se enferme seguido del estmago, pero no tan grave como para presentar sntomas de amibiasis. Cabe
recordar que laEntamoeba coli vive como comensal en el ser humano, pero ltimamente se han registrado algunos
casos de amibiasis causada por ella. En cuanto a la Entamoeba histolytica, en la proporcin encontrada puede no ser
daina, pues se necesitan encontrar al menos de 8-10 quistes por campo para que cause problemas, aunque no hay que
olvidar que se puede padecer amibiasis asintomtica.
Tambin se encontraron fibras de tejido muscular semidigeridas, restos de comida y algunas grasas.
Como puede verse, el resultado para huevecillos de parsitos resulto negativo. Sin embargo se encontraron una gran
cantidad de quistes deEntamoeba coli, y al menos 3 de Entamoeba histolytica. Esto significa que la persona
probablemente se enferme seguido del estmago, pero no tan grave como para presentar sntomas de amibiasis. Cabe
recordar que laEntamoeba coli vive como comensal en el ser humano, pero ltimamente se han registrado algunos
casos de amibiasis causada por ella. En cuanto a la Entamoeba histolytica, en la proporcin encontrada puede no ser
daina, pues se necesitan encontrar al menos de 8-10 quistes por campo para que cause problemas, aunque no hay que
olvidar que se puede padecer amibiasis asintomtica.
Tambin se encontraron fibras de tejido muscular semidiegridas, restos de comida y algunas grasas.
Las tcnicas de flotacin, sedimentacin y conteo son algunas de los mtodos que se utilizan en los laboratorios de rutina
para la bsqueda de parsitos intestinales como parte del diagnstico de protozoarios, trematodos, cestodos, nematodos
y ocasionalmente, algunos artrpodos.
El mtodo de Ritchie es uno de ellos, y se basa en el principio de la densidad.
Usa sustancias qumicas, como lo son el formaldehdo y el ter, que permiten remover material lpido y coloidal y obtener as
un sedimento ms puro. Adems, la formaleina conserva huevos, larvas y quistes, por lo que el material puede
examinarse horas o incluso das despus.
La finalidad de repetir el proceso de centrifugacin con solucin salina, es porque de esa manera tambin se elimina la
mayor cantidad de restos fecales, vegetales y grasas que estn presentes, que intervienen la mayora de las veces en la
visualizacin microscpica.
La funcin de la centrifuga en esta prctica fue de suma importancia, puesto que utiliza la fuerza centrpeta para separar
sustancias de diferentes densidades. Al centrifugar la
mezcla del sedimento con el formol y el ter se menciona

la

presencia de 4 capas, las cuales son:

1.

ter en la superficie

2.

Un tapn de restos fecales y grasos

3.

Formaldehdo

4.

Sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos

parasitarios.

La concentracin por centrifugacin, sea con agua o agentes qumicos, es ms eficaz que la sedimentacin simple.
En Mxico, se ha empleado la tcnica de Ritchie como complemento del examen directo, pero no todos los laboratorios la
realizan, porque ter que se usa como reactivo se adquiere de importacin y no est al alcance de nuestras instituciones
de salud. Por tal motivo, algunos de los laboratorios de investigacin estn haciendo pruebas experimentales que puedan
sustituir al ter por la nafta, ms barata y de produccin nacional.
Sera bueno que nosotros como estudiantes tambin pudiramos hacer la prueba con nafta para comprobar como son los
resultados en el diagnstico de protozoos y poder comparar con el mtodo tradicional.