DETERMINACIN DEL RANGO DE LINEALIDAD Y ACTIVIDAD DE LA

INULINASA
I.

OBJETIVO ESPECFICO
Determinar el rango de linealidad y la actividad enzimtica
(actividades volumtrica y especfica) de la enzima inulinasa (2,1-D-fructan fructanohidrolasa [EC 3.2.1.7]) de un caldo crudo libre de
clulas Kluyveromyces marxianus NRRL Y 7571 en sus forma
soluble.

II.

FUNDAMENTO TERICO
Los ensayos enzimticos son mtodos de ensayo qumico para medir
actividades enzimticas. Son vitales para el estudio de las cinticas
enzimticas y la inhibicin enzimtica.
La actividad enzimtica es una medida de la cantidad de enzima
activa presente y del nivel de actividad de la misma, por lo que la
medida de la actividad es dependiente de las condiciones, que deben
ser especificadas cuando se dan valores de actividad. La actividad
expresa la cantidad de sustrato convertido por unidad de tiempo,
teniendo en cuenta el volumen de reaccin.
II.1.

Unidades Enzimticas
Las cantidades de enzima pueden ser expresadas en moles,
como las de cualquier otro compuesto qumico, o pueden ser
cuantificadas en trminos de actividad enzimtica.
En el Sistema Internacional de Unidades la unidad para la
actividad cataltica es el katal (kat), pero es una unidad
demasiado grande y suele usarse la unidad de actividad
enzimtica (UI).

1 kat = 1 mol sustrato convertido x s-1 = 6 x 107 UI

1 UI = 1 mol sustrato convertido x min-1 = 16,67 nkat

Otra unidad comnmente usada es la actividad especfica.

sta se refiere a la actividad de una enzima
por miligramo (mg) de protena, y se suele expresar en: mol
x min-1 x mg-1). La actividad especfica da una idea de la
pureza de la enzima.
II.2.

Medida de la Actividad Enzimtica

Salvo para unas pocas protenas que pueden ser detectadas

por medidas espectroscpicas directas, la presencia de una
enzima es determinada por la medida de la reaccin que
cataliza, pudindose estimar la cantidad de enzima por la
velocidad de la reaccin. Adems, la caracterizacin de una
enzima implica la determinacin de su actividad en diferentes
condiciones. Por esto, la medida de actividad enzimtica es
de importancia para la investigacin y anlisis de protenas.

La figura 1
muestra
una
curva tpica
de formacin
de un producto (P) en funcin del tiempo para una reaccin
catalizada enzimticamente. Se observa que la velocidad
disminuye con el tiempo, hecho que puede deberse a las
siguientes causas:
Algunos de los productos pueden inhibir a la enzima.
El transcurso de la reaccin produce una disminucin
significativa de la concentracin de sustrato (S).
La reaccin inversa puede comenzar a cursar y
hacerse relativamente importante al aumentar la
concentracin de P.
La medida adecuada de la actividad de una enzima
requiere que se determine la velocidad inicial, esto es,
obtener la tangente al origen del grfico mostrado en la
figura 1. De esta manera, las diferentes causas que
producen la disminucin de la actividad con el tiempo son
eliminadas.

La

figura

2
ejemplifica
medidas experimentales de la formacin de P en funcin
del tiempo (como en la fig.1), determinadas a tres
concentraciones diferentes de S. Puede observarse que la
velocidad (v) que se obtendra en cada caso dependera
del intervalo de tiempo que se tomara para medirla.
En este ejemplo, si medimos v para cuando S=S1,
obtendramos el mismo valor, independientemente de
haber elegido el intervalo 0-1 o el 1-2. En cambio para
S=S2, la v obtenida sera distinta segn el intervalo elegido.
Para estos dos casos, la v podra calcularse
adecuadamente eligiendo el intervalo 0-1, donde la
formacin de P es funcin lineal con el tiempo. Para el
ejemplo de la figura 2, la medida de v, cuando S=S3,
usando el intervalo 0-1, no es enteramente confiable ya que
se necesitan ms puntos experimentales que verifiquen la
condicin de linealidad en la estimacin de v realizada.
Adems de considerar la variacin de la velocidad con el
tiempo, hay que tener en cuenta que la actividad de una
enzima es afectada por otros factores como la temperatura,
la fuerza inica, el pH, la concentracin de S, la cantidad de
enzima en el medio de medida. Todos estos factores deben
ser convenientemente conocidos y fijados al realizar
medidas de actividad enzimtica.
II.2.1. Segn el seguimiento de la reaccin
La medida de la actividad de una enzima requiere
determinar el consumo de S o la aparicin de un P
de la reaccin en funcin del tiempo.
La determinacin cuantitativa de S o de P puede
hacerse por diferentes mtodos analticos segn el
caso: espectrofotomtricos (los ms comunes),

volumtricos,
potenciomtricos,
espectrofluoromtricos.

radioqumicos,

Los ensayos enzimticos pueden dividirse en dos

grupos segn la manera en que se sigue la
medicin. Por una parte estn los ensayos
continuos, en los que el mtodo ofrece una lectura
continua de la actividad monitorizando a tiempo real
el sustrato consumido o el producto generado. Por
otra parte existen ensayos discontinuos, en los que
la reaccin se detiene en un punto y se mide la
concentracin de los sustratos o los productos.
En el primer caso, la reaccin enzimtica podra
seguirse continuamente en funcin del tiempo. En
consecuencia, podran obtenerse numerosos puntos
experimentales (o trazos continuos si disponemos de
un registrador automtico) de la produccin de Q en
funcin del tiempo, a partir de un nico medio de
reaccin. Esto es lo que se denomina mtodo
continuo de medida de la actividad enzimtica.
En otros casos, la medida de la actividad de una
enzima
no
puede
hacerse
determinando
continuamente un dado S o P en presencia de los
dems componentes del medio de medida y es
necesario separar el compuesto a cuantificar, para lo
cual se requiere detener la reaccin enzimtica. En
estos casos se utilizan mtodos discontinuos, en los
que la medida de S o de P requiere partir de un
medio de reaccin diferente.
II.3.

Factores que afectan el ensayo

Fuerza osmtica: La mayora de las enzimas no pueden
tolerar concentraciones de sal extremadamente altas.
Los iones interfieren con los dbiles enlaces inicos de las
protenas.
Temperatura: Todas las enzimas trabajan en un rango
de temperaturas especficas del organismo al que
pertenecen. Los aumentos de temperatura generalmente
provocan un incremento de la velocidad de reaccin. Esto
se debe a alteraciones de la estructura de la protena
debidas a la interrupcin de uniones inicas que resultan

en la estabilizacin de la estructura tridimensional de la

enzima. La temperatura ptima de las enzimas humanas se
encuentra generalmente entre los 35 y los 40 C
pH. La mayora de las enzimas son sensibles al pH y tiene
un rango especfico en el que se detecta actividad; todas
tienen un pH ptimo. El pH puede detener la actividad
enzimtica al provocar la desnaturalizacin de la estructura
proteica rompiendo enlaces inicos y puentes de
hidrgeno. La mayora de las enzimas funcionan entre un
pH 6 y 8.
Saturacin del sustrato. Aumentando la concentracin de

sustrato aumenta la velocidad de la reaccin o actividad

enzimtica. Sin embargo, el lmite de saturacin limita la
velocidad. Una enzima est saturada cuando los sitios
activos de todas las molculas estn ocupados la mayora
del tiempo. A partir del punto de saturacin la reaccin no
puede acelerarse mediante adicin de sustrato, sea cual
sea la cantidad aadida. En un grfico la velocidad de
reaccin habra alcanzado una meseta.

III.

MATERIALES E INSTRUMENTOS

IV.

Solucin de sacarosa 0.2 0.6 M

Solucin de tampn citrato fosfato pH 5.0
Concentrado enzimtico
07 Tubos de ensayo y gradilla
Pipetas y micro-pipeta
Agua hirviendo
Hielo
Bao mara
Mechero y trpode

METODOLOGA EXPERIMENTAL
La experiencia se realizar a diferentes diluciones del concentrado
enzimtico inulinasa, 1:1; 1:2; 1:3, , luego se graficar la
concentracin de sustrato o producto contra el tiempo de reaccin y
se expresar correctamente los valores de las actividades
volumtrica (UI/ml) y especfica (UI/mg):
1. Preparar 5 tubos de ensayo, agregar a cada uno 2.9 mL de
solucin de sacarosa a la concentracin definida y a pH 5.0 y
colocarlos en un bao mara durante 3 minutos.

2. Agregar 0.1 mL de concentrado enzimtico inulinasa a cada uno

de los 5 tubos de ensayo y dejarlos reaccionar por los tiempos
requeridos para el experimento: 0; 5; 10; 15 y 20 minutos
respectivamente.
3. Detener la reaccin introduciendo cada tubo en bao de agua a
100C por 3 minutos. Retirar los tubos del bao hirviendo y
ponerlos en hielo.
4. Simultneamente en otros dos tubos hacer los blancos para el
sustrato y para la enzima.
5. Hacer la determinacin de azcares reductores.
DIAGRAMA DE BLOQUES DEL PROCESO

Preparar

En 5 tubos de ensayo

Agregar

A cada tubo, 2.9 mL de

Solucin de sacarosa (10 g
sacarosa + 0.5 L de
tampn citrato fosfato a

Colocar

Agregar

Dejar

En bao mara a 55C

durante 3 min

0.1 ml de caldo crudo

enzimtico a c/u de los
tubos de ensayo
En reaccin el tiempo
requerido por el
experimento: 0, 5, 10, 15,
20 min respectivamente

Detener

La reaccin introduciendo
cada tubo en agua a 100C
por 3 min

Retirar

Los tubos del agua

hirviendo y ponerlos en
hielo

Determina
r

Azucares
reductores
Los blanco para sustrato
(2.9 mL solucin sacarosa
+ 0.1 mL tampn citrato
fosfato) y para la enzima
(2.9 mL tampn citrato

Preparar

Azucares (g/l) vs
tiempo (min)

Graficar

V.

RESULTADOS
Cuando se efecta una reaccin enzimtica, se observa, un aumento
en la concentracin del producto y una disminucin en la
concentracin del sustrato hasta que la reaccin termina o alcanza
su punto de equilibrio. El cambio observado en la concentracin
inicial respecto al tiempo se denomina velocidad inicial de reaccin y,
en general, se expresa en unidades internacionales o en moles de
producto por minuto bajo condiciones especficas descritas.
Se trabaj a diferentes concentraciones de enzima. A continuacin se
muestran las diferentes absorbancias de las muestras, a diferentes
concentraciones de enzima para diferentes tiempos.

Dilucin

0
5
10
15
20

01:10
01:10
01:10
01:10

Blanco Sustrato
Blanco Enzima

E 1:1
Abs
540nm
0.575
0.635
0.977
1.135
1.203
0.043
0.055

P (g/L)

P (g/L)

0.963
1.062
1.631
1.894
2.007

0.787
10.448
16.137
18.765
19.896

0.078
0.098

25.000
20.000
15.000
Azucares Redcutores (g/L)

10.000
5.000
0.000
0 10 20 30
Tiempo (min)

12.000
10.000
8.000
Azucares Redcutores (g/L)

6.000
4.000
2.000
0.000

0 f(x)
10 20=30

=0
TiempoR
(min)

Dilucin

01:01

E 1:2
Abs
540nm

P (g/L)

P (g/L)

0.383

0.643

0.568

01:05

0.696

1.164

5.744

10

01:05

1.234

2.059

10.218

15

01:10

0.794

1.327

13.193

20

01:10

0.976

1.630

16.220

0.002

0.009

Blanco Sustrato

Blanco Enzima

0.036

0.066

18.000
16.000
14.000
12.000
10.000
Azucares Redcutores (g/L)

8.000
6.000
4.000
2.000
0.000
0 10 20 30
Tiempo (min)

12.000
10.000

f(x) = 0.97x + 0.75

R = 1 8.000
Azucares Redcutores (g/L)

6.000
4.000
2.000
0.000
0

5 10 15

Tiempo (min)

Dilucin

0
5
10
15
20

01:04
01:04
01:08
01:08

Blanco Sustrato

E 1:4
Abs
540nm
0.787
0.395
0.79
0.506
0.495

0.037

P (g/L)

P (g/L)

1.315
0.663
1.320
0.848
0.830

1.247
2.585
5.213
6.714
6.568

0.068

Blanco Enzima

0.003

0.011

8.000
7.000
6.000
5.000
Azucares Redcutores (g/L)

4.000
3.000
2.000
1.000
0.000
0 10 20 30
Tiempo (min)

8.000
7.000

f(x) = 0.38x
+ 1.09
6.000
R = 0.98
5.000
Azucares Redcutores (g/L)

4.000
3.000
2.000
1.000
0.000
0 5 101520
Tiempo (min)

CUADRO 1: RANGO DE LINEALIDAD Y ACTIVIDAD ENZIMTICA

t
0
5
10
15
20

E 1:1
Dilucin P (g/L)
0.885
01:10
10.546
01:10
16.235
01:10
18.863
01:10
19.994

E 1:2
Dilucin P (g/L)
0.634
01:05
5.810
01:05
10.284
01:10
13.259
01:10
16.286

E 1:4
Dilucin P (g/L)
1.247
01:04
2.585
01:04
5.213
01:08
6.714
01:08
6.568

GRAFICA 1: RANGO DE LINEALIDAD Y ACTIVIDAD ENZIMTICA

25.000
20.000
15.000
Azucares Redcutores (g/L)
E 1:1

E 1:2

10.000

E 1:4

5.000
0.000
0 10 20 30
Tiempo (min)

CUADRO 02: RESUMEN DE ACTIVIDADES ESPECFICA Y

VOLUMTRICA

[ ] de
a
av
ae
Enzima (g/L.min) (UI/mL) (UI/mg)

t (min)
linealidad

E 1:1

1.535

25.583

25.5833

0.9783

10

E 1:2

0.965

16.083

32.1667

0.9982

10

E 1:4

0.3806

6.343

25.3733

0.9838

15

ae =1.535

av=

ae
[ ]enzima

ae =0.965

g
1 mol 10 6 u mol 3103 L
UI
x
x
x
=25.583
Lmin 180 g
1 mol
1 ml
mL
UI
mL
UI
=25.583
mL
mg
1
mg

25.583
=

g
1 mol 106 u mol 3103 L
UI
x
x
x
=16.083
Lmin 180 g
1 mol
1 ml
mL

UI
mL
UI
av=
=
=32.167
[ ]enzima
mL
mg
0.5
mg
ae

ae =0.3806

8.03

g
1 mol 106 u mol 3103 L
UI
x
x
x
=6.343
Lmin 180 g
1 mol
1 ml
mL

UI
mL
UI
av=
=
=25.373
[ ]enzima
mL
mg
0.25
mg
ae

VI.

3.17

DISCUSIONES
La actividad enzimtica fue determinada por la aparicin de azcares
reductores mediante el mtodo DNS. La mezcla de reaccin,
conteniendo 2.9 mL de sustrato (sacarosa al 2 %) en un
amortiguador de citrato fosfato pH 5.0, un equivalente a 0.1 mL de
concentrado enzimtico para tener un volumen final de 3 ml, fue
incubada por 3 min a 55C; al trmino del tiempo, la reaccin fue
detenida mediante inactivacin trmica de 100C durante 3 minutos y
haciendo un shock trmico en hielo. Se procedieron hacer blancos
tanto para el sustrato y para la enzima debida a que el caldo crudo
libre de clulas de Kluyveromyces marxianus NRRL Y 7571 en sus
forma soluble no se encuentra completamente pura y hay que
determinar algunos azcares reductores presentes.
La inulinasa (E.C. 3.2.1.7) es una enzima miembro de la familia de
glicsido hidrolasa 32(GH32), la cual catalisa la hidrlisis de inulina a
fructosa. La purificacin de inulinasa microbiana extracelular es
hecha por mtodos convencionales de centrifugacin, ultrafiltracin,
precipitacin con solventes o sales, cromatografa de intercambio
inico y de permeacin en gel, mientras que las inulinasa intracelular
requiere disrupcin celular antes de practicar los mtodos reportados
para las enzimas extracelulares (Kushi et al., 2000).
Segn Barreiro-Palma en Comprobacin de la selectividad de la
tcnica de precipitacin por acetona de la inulinasa extracelular
(E.C.3.2.1.7) de Kuyueromyces marxianus CDBB-L-278. La
actividad enzimtica de la inulinasa presente en los concentrados
obtenidos se determin mezclando 1 ml de cada uno de ellos con 9
ml de una solucin de sacarosa al 4% y midiendo los azcares
reductores cada 60 seg despus de iniciada la reaccin, por un lapso
de 4 min, manteniendo la temperatura a 50 C. La solucin de
sacarosa (J.T. Baker) se prepar en solucin amortiguadora de
acetatos (0.1 M, pH 5.0). Los azucares reductores se determinaron
por el mtodo de Nelson-Somogyi, para lo cual se prepar una curva
patrn con una mezcla equimolar de glucosa y fructosa (J.T. Baker).
La actividad enzimtica se midi en ug de glucosa-fructuosa
producidos por minuto por ml de solucin de enzima. Se utiliz un
espectrofotmetro Shimadzu UV-160A.
A partir de la concentracin de protenas y de las actividades
enzimticas de los concentrados de los sobrenadantes de los caldos

de fermentacin se obtuvo la actividad enzimtica especfica la cual

podemos observar en la ltima columna de la Tabla 1. Como
podemos ver las actividades ms altas se obtienen con la
ultrafiltracin en todos los medios de cultivo. Como era de esperarse
la mayor actividad especfica de inulinasa se obtuvo en el medio de
inulina adicionado de fosfato de potasio, ya que este anin libera la
inulinasa asociada a la pared celular de la levadura.

Segn Corona-Gonzales (et. al., 2005) en Optimizacin de la

produccin de inulinasas por saccharomyces sp. a partir de agave
tequilana weber variedad azul. Se determin la actividad enzimtica
al colocar 1 ml de la enzima diluida (sobrenadante de muestras) y 15
ml de una solucin al 5 por ciento de polifructosas de Agave
tequilana weber variedad azul (sustrato), en buffer de acetatos (pH
4.8 y 0.1M), se prepararon una muestra y dos blancos, uno para el
sustrato y otro para la enzima. Se colocaron las tres preparaciones
en bao de agua a 50C por 30 minutos, la reaccin se detuvo a
ebullicin por 5 minutos y se determinaron azcares reductores a 540
nm por el mtodo de DNS.
El anlisis estadstico mostr que el mayor efecto se obtiene con una
temperatura de 30C, pH 5.5 y 30 g/L de polifructosas, con estas
condiciones se produjeron 240.6 U/ml de inulinasas. La produccin
de inulinasas ms alta reportada en cultivo en lote es 374 U/ml
elaborada por Aspergillus niger van Teighem, una cepa mutada con
luz UV. Trabajos recientes con Kluyveromyces bulgaricus informan
produccin de inulinasas de 124.4 U/ml y con Aspergillus niger 80
U/ml.
Por otra parte, se ha descrito que la glucosa o fructosa libres en
presencia de inulina por lo general moderan la formacin de
inulinasas. Para corroborar esta prueba el medio de cultivo (estril)
de las fermentaciones se analiz antes de inocular y se encontr que
a pH 5.5 las polifructosas son el sustrato principal, sin embargo, a pH
4 las polifructosas son hidrolizadas completamente a fructosa y
glucosa. De aqu que a valores de pH bajos exista represin

catablica por azcares residuales. Estos desenlaces demuestran

que el pH influye bastante sobre la produccin de la enzima para
este microorganismo en particular, y se confirma la represin por
azcares libres.
Se ha dicho que las concentraciones altas de la fuente de carbono
causan represin catablica con especies de Kluyveromyces por lo
que se utilizaron menores a 20 g/L.
La localizacin de las inulinasas (intracelulares o extracelulares)
vara con los grados de crecimiento y las temperaturas por abajo del
rango ptimo de crecimiento elevan la fraccin de la enzima en el
sobrenadante y disminuyen la enzima asociada a la pared.
El proceso de extraccin de la inulinasa, adems de determinar el
rendimiento y si la enzima es extracelular o intracelular, determina
otras caractersticas como su peso molecular (MW), su modo de
accin sobre la molcula de inulina, su actividad hidroltica sobre la
sacarosa, respuesta a los cambios de pH y temperatura, propiedades
cinticas y efecto de la concentracin de sustrato (Chi et al., 2009).
Se ha reportado diferentes valores de MW dependiendo de la fuente
de microorganismo, del mtodo de determinacin, as por ejemplo
para la K. marxianus var. bulgricus vara de 57 a 77 KDa (Kushi et
al., 2000) y para K. marxianus CBS 6556 se determin un valor de 64
KDa (Rouwenhorst et al., 1990).
Se ha determinado que las inulinasas pueden ejercer dos modos de
accin diferentes sobre la molcula de inulina, una accin extrema y
una accin interna, correspondiendo dos clases de inulinasas
llamadas exo-inulinasas y endo-inulinasas respectivamente. Las
exoinulinasas (74 KDa, pH 5.1 7.0) empiezan con la separacin de
la primera molcula de D-fructosa y va hasta el ltimo enlace para
liberar glucosa de la unidad de sacarosa y la endo-inulinasa (64 KDa)
acta sobre enlaces internos y rinde un conjunto de
inulooligosacridos (inulotriosa, inulotetrosa y inulopentosa) pero sin
actividad invertasa. Estas propiedades dependen del origen
microbiano de la enzima. De este punto de vista la mejor cepa sera
la que tenga ambas propiedades, como el caso del A. ficuum
(Pandey et al., 1999), dado que una mezcla de endo y exo inulinasa
puede resultar en una mejor conversin de inulina a fructosa que solo
utilizar enzimas puras aisladas, dado que las endo-inulinasas
romperan las molculas de inulina en muchos oligosacridos,
aumentando as los puntos de ataque para las exo-inulinasas, con el
consecuente incremento de la velocidad de reaccin de inulina a
fructosa.

Por tanto queda probado que las exoinulinasas tambin ejercen

actividad cataltica sobre la sacarosa, desdoblndola en glucosa y
fructosa, es decir tienen actividad de invertasa. Se afirma que la
actividad invertasa es mayor en enzimas producidas por levaduras
que en aquellas obtenidas a partir de mohos (Ricca et al., 2007).
Notoriamente una actividad invertasa de inulinasa es deseable.
Laloux et al. (1991) sostienen que las inulinasas poseen sitios
catalticos comunes, pero diferentes sitios de enlace para la hidrlisis
de inulina y sacarosa.
La actividad y estabilidad depende de la respuesta de la enzima a los
cambios de temperatura y pH. Los valores de temperatura y pH
dependen del tipo de microorganismo usado como fuente,
generalmente se da valores ms altos para bacterias y levaduras que
mohos. As se tienen los rango de valores de pH, para mohos 4.5
7.0, para levaduras 4.4- 6.5 y para las bacterias 4.8 7.0 (Ricca et
al., 2007). Singh et al. (2007b), determinaron que la exo-inulinasa de
Kluyveromyces marxianus YS-1 exhibi considerable actividad a un
valor de pH ptimo de 5.5 en que mantuvo estable su actividad
cataltica al 100% durante 3 h a la temperatura ptima de 50 C. Se
observa que todava existe la necesidad de investigar la actividad y
estabilidad de la inulinasa contra la temperatura, as como los
modelamientos y simulacin de procesos o cintica de desactivacin
de la enzima.
Por otra parte se han evaluado los parmetros cinticos de inulinasas
provenientes de diferentes fuentes de microorganismos en torno a
solo un valor de temperatura ptima. Kushi et al. (2000) determinaron
los valores de los parmetros cinticos aparentes Km y Vmax de la
inulinasa purificada por HPLC de Kluyveromyces marxianus var.
Bulgaricus ATCC 16045 en presencia de inulina y sacarosa siendo
86.9 mg/ml y 53.7 U/mg de protena y 4.58 mg/ml y 441.0 U/mg de
protena a 55 C y pH 4.4 ptimos, respectivamente, demostrando
que la enzima producida es una exo-inulinasa con ms alta afinidad y
reactividad por la sacarosa que por la inulina. De Paula et al. (2008)
tambin determinaron los valores de los parmetros cinticos de un
caldo crudo exento de clulas conteniendo inulinasa de
Kluyveromyces marxianus var. bulgaricus ATCC 16045 siendo de Km
igual a 61.83 mM y Vmax igual a 37.60 U/mg de protena a 55 C y
pH 3.5 ptimos.
VII.

CONCLUSIONES
Se determin el rango de linealidad y actividad enzimtica tanto
volumtrica como especfica de la enzima inulinasa en una caldo

crudo libre de clulas obteniendo que para una concentracin de

enzima 1:1 el tiempo que se tom para evaluar su linealidad fue de
10 minutos obteniendo una correlacin R2=0.98 esto conlleva a un
valor de 25.583 y 25.583, UI/mL y UI/mg respectivamente; para una
concentracin de enzima 1:2 el tiempo que se tom para evaluar su
linealidad fue de 10 minutos obteniendo una correlacin R 2= 0.99
esto conlleva a un valor de 16.083 y 32.167 UI/mL y UI/mg
respectivamente; para una concentracin de enzima 1:3 el tiempo
que se tom para evaluar su linealidad fue de 15 minutos obteniendo
una correlacin R2= 0.98 esto conlleva a un valor de 6.343 Y 25.373
UI/mL y UI/mg respectivamente.
VIII.

RECOMENDACIONES
Los trabajos futuros estarn encaminados a probar concentraciones
superiores a sustrato 2% para evaluar el incremento de actividad
enzimtica, variando condiciones de pH, T, y encontrar los valores
ms ptimos para la inulinasa en presencia de sacarosa e inulina.
Es importante conocer ms acerca de la actividad de la enzima en un
medio compuesto con sacarosa para la produccin de glucosa y
fructuosa, evaluar parmetros como pH, T y evaluar datos que
favorecen o limitan la actividad de la enzima, el conocimiento de su
composicin permitir explotar mejor sus propiedades.

IX.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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