Lab Microbiologia

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD
ESCUELA DE CIENCIAS BASICAS TECNOLOGIA E INGENIERIA

GUIA COMPONENTE PRCTICO DEL CURSO: 201504 MICROBIOLOGA
UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

GUA COMPONENTE PRCTICO
201504 MICROBIOLOGA
MERY LILIANA LPEZ MARTNEZ
Director Nacional
YURBY SALAZAR
Acreditador
PASTO
MAYO DE 2015

2. ASPECTOS DE PROPIEDAD INTELECTUAL Y VERSIONAMIENTO

El contenido de este componente prctico ha sido creado por Mery Liliana Lpez
Martnez, Docente de la UNAD en el CEAD de Pasto, Magster en Ingeniera Ambiental de
la Universidad Mariana de Pasto, Especialista en Microbiologa de la Universidad Catlica
de Manizales y Biloga de la Universidad Nacional de Colombia.
La Dra. Yurby Salazar docente de la UNAD, apoya el proceso de revisin de estilo e hizo
aportes disciplinares, didcticos y pedaggicos en el proceso de acreditacin del material
didctico para el desarrollo del componente prctico en el 2015.

3. CARACTERSTICAS GENERALES
Introduccin
Justificacin
Intencionalidades
formativas
La microbiologa estudia los microorganismos u organismos

generalmente microscpicos, aunque algunos pueden ser
observados a simple vista.
Su estudio comprende la identificacin y clasificacin de los
microorganismos, su origen y evolucin, la dinmica del
crecimiento, el rol interactivo de los microorganismos con el sistema
inmunolgico, las enfermedades que pueden producir y su
importancia en la produccin industrial.
El curso de Microbiologa hace parte del Campo de Formacin
Disciplinar Comn, constituyndose en herramienta fundamental de
los procesos de desarrollo cientfico y que posibilitan la insercin de
nuestro pas en las dinmicas globales del desarrollo. Por lo tanto,
su objetivo primordial es comprender y reconocer la importancia de
los microorganismos en la vida del planeta, conocer su morfologa,
fisiologa, bioqumica, distribucin y sus efectos beneficiosos y/o
perjudiciales para el hombre.
Propsitos:
Diferenciar los diferentes grupos de microorganismos de acuerdo
a su morfologa, fisiologa y mecanismos de reproduccin.
Identificar los protocolos de observacin experimental, cultivo,
aislamiento y control de las poblaciones microbianas.
Analizar el papel que juegan los Microorganismos para deducir
los efectos beneficiosos y/o perjudiciales que pueden causar al
hombre.
Objetivos:
Conocer, comprender y aplicar los conceptos y procedimientos
relacionados con la microbiologa, en el contexto de su vida
cotidiana.
Manejar adecuadamente las tcnicas bsicas de manejo de los
microorganismos en un laboratorio.
Conocer y aplicar los fundamentos de los mtodos de
bioseguridad que deben considerarse en un laboratorio.
Interpretar los resultados obtenidos en un laboratorio de
Microbiologa.

Metas:
Desarrollar la totalidad de las prcticas que se presentan en esta
gua.
Competencias:
El estudiante interpreta las implicaciones polticas, econmicas,
cientficas y religiosas de los descubrimientos y avances de la
microbiologa en la historia de la humanidad.
El
estudiante
categoriza
los
diferentes
grupos
de
microorganismos de acuerdo a sus caractersticas morfolgicas,
fisiolgicas y mecanismos de reproduccin.
El estudiante implementa apropiadamente los mtodos y
protocolos de cultivo, aislamiento e identificacin de
microorganismos, para el anlisis experimental con poblaciones
microbianas.
El estudiante aplica la metodologa de los estudios
epidemiolgicos para la toma de decisiones en la prevencin de
transmisin de enfermedades.
Denominacin de
practicas
El estudiante explica los agentes infecciosos como causa de

morbi-mortalidad entre las poblaciones humanas y animales.
Prctica 1: Normas generales de bioseguridad.
Prctica 2: Preparacin de medios de cultivo.
Prctica 3: Microorganismos del ambiente.
Prctica 4: Siembra de microorganismos
Prctica 5: Tcnicas de Tincin
Nmero de horas
10 horas
Porcentaje
20%
Curso Evaluado
por proyecto
SI__X
Seguridad
industrial
Normas de Bioseguridad para un laboratorio tipo I.
NO__

4. DESCRIPCIN DE PRCTICAS
PRACTICA No. 1 NORMAS GENERALES DE BIOSEGURIDAD
Tipo de practica
Presencial X Autodirigida
Otra Cul
Porcentaje de evaluacin
Horas de la practica
Temticas de la prctica
Intencionalidades
formativas
Remota
20%
2 horas
Equipos y bioseguridad en un laboratorio de
microbiologa.
Propsito:
Conocer los principales equipos con los cuales se
trabaja en un laboratorio de microbiologa y conocer
y aplicar las normas de bioseguridad que se deben
tener en un laboratorio.
Objetivo:
Establecer normas y principios
comportamiento en el laboratorio.
bsicos
de
Fundamentacin Terica
La bioseguridad es un conjunto de medidas preventivas encaminadas a reducir el riesgo
de transmisin de enfermedades infecciosas, las plagas de cuarentena, las especies
exticas invasoras, organismos vivos modificados.
Cuando se trabaja en laboratorio con microorganismos se deben poner en prctica varias
normas de bioseguridad para evitar accidentes y adquirir enfermedades.
Descripcin de la practica
A continuacin encuentra las normas de bioseguridad bsicas de cualquier laboratorio y
los cuidados que se deben tener al lavar material del vidrio. Por favor realice una buena

lectura pero principalmente ponga en prctica todas las recomendaciones.

Normas generales de bioseguridad.
Mantener una actitud responsable, no se permite hacer bromas, jugar, correr o
gritar.
No se permite el ingreso de personas ajenas al laboratorio y/o que no porten sus
implementos de bioseguridad adecuados.
No se permitir el ingreso de personas bajo efectos de bebidas alcohlicas o
sustancias psicoactivas.
Para el ingreso a los laboratorios, prstamo de material
presentar el carnet vigente.
o equipo se debe
Todas las superficies de trabajos se limpiaran y desinfectaran diariamente y

siempre que se produzca un derrame.
Usar bata de manga larga con puos, la cual debe estar completamente cerrada.
Usar guantes de nitrilo, tapabocas, gorro, gafas de seguridad y todos los
elementos de seguridad solicitados dependiendo del riesgo.
Evitar tocar sus ojos o piel con las manos enguantadas.
Usar cabello recogido, calzado cerrado y bajo, no usar falda, joyas, manillas, reloj
o elementos que puedan entorpecer la manipulacin de los materiales o
equipos.
Bajo ninguna circunstancia se permitir comer, beber o fumar en el laboratorio.
Bajo ninguna circunstancia, se debe tocar, oler o probar las sustancias qumicas o
biolgicas utilizadas en el desarrollo de las prcticas.
No trabajar nunca solo en el laboratorio.
No pipetear sustancias con la boca.
Cuando en el desarrollo de las prcticas se utilice cido y agua en diluciones,
agregue el cido sobre el agua.
No devolver reactivos a los frascos, as no hayan sido utilizados.
Siga fielmente todas las recomendaciones dadas por el docente responsable del
laboratorio.
Al calentar los tubos de ensayo en el mechero dirija la boca donde nadie corra
peligro de quemarse.

Los residuos y muestras de procedimientos de microbiologa que van a ser

incinerados fuera del laboratorio deber ser sometidos a desactivacin en
autoclave.
Como norma general no se podr verter ninguna sustancia peligrosa para el
medio ambiente por el desage.
Al culminar el trabajo, dejar limpio y ordenado el mesn, devolver los elementos y
materiales perfectamente limpios, asegrese de dejar cerrado el gas, agua y
lavarse las manos.
Para la eliminacin de los residuos se deben utilizar los recipientes destinados
para este fin siguiendo las indicaciones del docente responsable del laboratorio.
Cualquier accidente por pequeo que sea debe comunicarse al docente
responsable del laboratorio.
Trabajo con material de vidrio
No se debe calentar recipientes de vidrio comn.
No calentar directamente al mechero de gas ni colocar recipientes de vidrio vacos
o hmedos por fuera en la parrilla elctrica.
Cuando utilice cubreobjetos, se deben revisar los mesones y evitar que queden
sobre ellos.
Comprobar la temperatura del material de vidrio.
No forzar el cierre del material.
Comprobar cuidadosamente la temperatura de los recipientes que hayan estado
sometidos a calor antes de tomarlos directamente con las manos.
No lavar los elementos de vidrio de laboratorio con medios abrasivos que al rayar
la superficie debilitan el vidrio.
Al lavar el material utilice guantes y gafas de seguridad y no deje residuos.
Al lavar la vidriera de laboratorios no se debe someter a cambios brusco de
temperatura.
Recursos a utilizar en la prctica (Equipos / instrumentos)

Cajas de petri, pipetas diferentes volmenes, pipetas de Pasteur, horno, autoclave,
incubadora reactivos, medios de cultivo.

Software a utilizar en la prctica u otro tipo de requerimiento para el desarrollo de

la prctica
Estudiar la teora sobre normas de bioseguridad.
Seguridad Industrial
Normas de Bioseguridad.
Metodologa
Deben llevar al laboratorio un pre informe donde resuelvan las siguientes preguntas:
Qu es bioseguridad?
Cules son las normas bsicas de bioseguridad en el laboratorio de microbiologa?
En el laboratorio seguir claramente las instrucciones dadas por el docente.
Para el informe deben entregar un documento donde se especifique el procedimiento
desarrollado en el laboratorio, los resultados obtenidos y la discusin y anlisis de los
resultados.
Sistema de Evaluacin
El pre informe tiene un peso del 20%, el desarrollo del laboratorio un peso del 40% y el
informe tiene un peso del 40%
Informe o productos a entregar
Pre informe e informe de laboratorio

Rbrica de evaluacin
ACTIVIDAD
VALORACIN
BAJA
VALORACIN
MEDIA
VALORACIN
ALTA
Pre informe
No lleva el pre
informe al
laboratorio o lo
lleva pero no
cumple con lo
solicitado en la
gua.
Desarrolla las
preguntas del
pre informe pero
alguna no es
correcta.
Desarrolla de
forma correcta
todas las
preguntas del
pre informe
(0 puntos)
(10 puntos)
(20 puntos)
No se presenta
a la prctica.
Llega tarde a la
prctica o no
presenta un
comportamiento
adecuado.
Cumple con
todos los
objetivos
planteados para
la prctica.
(15 puntos)
(40 puntos)
No presenta el
informe.
Desarrolla el
informe pero se
encuentra
incompleto
Desarrolla
correctamente
el informe de
laboratorio.
(0 puntos)
(20 puntos)
(40 puntos)
Desarrollo de
la prctica
(0 puntos)
Informe de
laboratorio
Retroalimentacin
MXIMO
PUNTAJE
20 puntos
40 puntos

PRACTICA No. 2 PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO
Tipo de practica
Otra Cul
Intencionalidades
formativas
Remota
20%
2 horas
Preparacin de medios de cultivo, medios de cultivo
selectivos, diferenciales, medios de cultivo slidos,
semi slidos y caldos.
Propsito:
Conocer los principales medios de cultivo, la forma
de preparacin y presentacin.
Objetivo:
Aprender la preparacin y manipulacin de los
medios de cultivo.
El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento
de los microorganismos. La composicin precisa depender de la especie que se quiera
cultivar, porque las necesidades nutricionales varan considerablemente. Hay
microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio
normales y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias
como vitaminas, suero o sangre para crecer.
Revise las etiquetas de los recipientes de diferentes medios de cultivo, anote el nombre,
la composicin y forma de preparacin.
En las instrucciones de forma de preparacin le dicen la cantidad en gramos de medio
deshidratado que se necesitan para disolver en un litro de agua. En muchas ocasiones

no es necesario preparar un litro de medio, por lo tanto mediante un clculo matemtico

sencillo ustedes pueden preparar una cantidad menor.
Supongamos que desean preparar 325 mililitros de medio de cultivo, al leer las
instrucciones de preparacin en la etiqueta dice que para preparar 1 litro (1000 ml) de
medio se necesitan 20 gramos medio deshidratado.
Para hacer el clculo se realiza un regla de tres simple:
20 gr.
1000 ml
X= (20 gr.x 325ml)/1000= 6.5 gr.
X gr.
325ml
Esto quiere decir que se necesitan 6,5 gramos de medio deshidratado para preparar 325
ml de medio de cultivo. Para preparar el medio se hace el siguiente procedimiento:
Pese 6.5 gramos del agar deshidratado. Mida 325 mililitros de agua destilada con una
probeta. De esos 325 mililitros de agua destilada coloque la mitad en un erlenmeyer
previamente lavado con agua destilada, para eliminar residuos de otras sustancias. El
erlenmeyer debe ser de volumen superior a la cantidad que se va a preparar. Agregue
los 6.5 gramos de agar deshidratado al agua contenida en el erlenmeyer y
posteriormente adicione el resto del agua destilada. Mezcle con el agitador.
A continuacin lleve la preparacin a disolver en la plancha de calentamiento, agite
constantemente con ayuda de la varilla de vidrio hasta que ebulla para lograr la
disolucin total del Agar.
Tape la boca del erlenmeyer papel aluminio. Si las normas de preparacin no indican otra
cosa, la esterilizacin se lleva a cabo en autoclave, a 121 grados centgrados, durante 15
minutos.
Esterilizado el medio deje enfriar aproximadamente a 45C.
Proceda a servir el medio en presencia del mechero y en cajas de Petri, previamente
esterilizadas. Las burbujas de aire en la superficie de la placa se eliminan abanicando
brevemente la superficie con la llama no luminosa de un mechero Bunsen. Deje enfriar
hasta que solidifique.
Los medios de cultivo lquidos se preparan de la misma forma y se sirven en tubos con
tapa rosca. Posteriormente lleve los tubos con caldo a esterilizar en autoclave. No olvide
que cuando se va a esterilizar medios directamente en los tubos estos no deben tener la
tapa ajustada. Finalmente tenga en cuenta que para preparar Agar inclinado en tubo,
solo cambia el momento en que se pone a solidificar ya que los tubos deben colocarse
sobre una pipeta para lograr que se forme el pico de agar inclinado.

Tome un medio de cultivo al azar y realice los clculos para preparar volmenes de 356
ml, 1567 ml, 131 ml y 24 ml.
Experimentalmente prepare 70 ml de medio de cultivo slido y srvalo en 2 cajas de Petri,
2 tubos con agar y 2 tubos con agar inclinado. Prepare 20 ml. de cualquier caldo de
cultivo y srvalos en 2 tubos de ensayo con tapa.

Cajas de petri, pipetas, horno, autoclave, incubadora, medios de cultivo, balanza, tubos
de ensayo, papel aluminio.
la prctica
Estudiar la teora sobre medios de cultivo
Metodologa
Qu es un medio de cultivo; de qu estn compuestos principalmente; cmo se clasifican
segn su proporcin de Agar y segn su suministro de nutrientes?
Cul es la utilidad de los medios de cultivo y qu diferencia un caldo de un medio
slido?
En qu momento se esteriliza un medio de cultivo y por qu?

Rbrica de evaluacin
ACTIVIDAD
VALORACIN
BAJA
VALORACIN
MEDIA
VALORACIN
ALTA
Pre informe
No lleva el pre
informe al
laboratorio o lo
lleva pero no
cumple con lo
solicitado en la
gua.
Desarrolla las
preguntas del
pre informe pero
alguna no es
correcta.
Desarrolla de
forma correcta
todas las
preguntas del
pre informe
(0 puntos)
(10 puntos)
(20 puntos)
No se presenta
a la prctica.
Llega tarde a la
prctica o no
presenta un
comportamiento
adecuado.
Cumple con
todos los
objetivos
planteados para
la prctica.
(15 puntos)
(40 puntos)
No presenta el
informe.
Desarrolla el
informe pero se
encuentra
incompleto
Desarrolla
correctamente
el informe de
laboratorio.
(0 puntos)
(20 puntos)
(40 puntos)
Desarrollo de
la prctica
(0 puntos)
Informe de
laboratorio
Retroalimentacin
MXIMO
PUNTAJE
20 puntos
40 puntos

PRACTICA No. 3 MICROORGANISMOS EN EL AMBIENTE
Tipo de practica
Otra Cul
Intencionalidades
formativas
Remota
20%
2 horas
Ubicuidad de los microorganismos, caractersticas
de las bacterias, protistos y hongos.
Propsito:
Cultivar microorganismos de diferentes ambientes y
realizar una descripcin macroscpica de las colinas
que crezcan.
Objetivos:
Explicar cmo se puede demostrar la presencia de
microorganismos en diferentes sitios.
Describir las caractersticas macroscpicas de las
colonias bacterianas.
En esta prctica se va a demostrar la presencia de microorganismos en el ambiente que
nos rodea. Con este fin se toman muestras de diferentes sitios y se las siembra en un
medio de cultivo que contiene las sustancias nutritivas que las bacterias necesitan para
desarrollarse, se las lleva a incubar a la temperatura apropiada y se las deja el tiempo
necesario para que crezcan y se puedan observar las colonias a simple vista y as
determinar las caractersticas macroscpicas de esas colonias.

Marcar cada caja de Petri que se va a utilizar con los siguientes datos: Nombre, Sitio del
cual se tom la muestra, Fecha de la prctica.
Tome cajas de Petri que contengan agar nutritivo y tome muestras de los diferentes sitios
que se relacionan a continuacin:
Deje una caja de Petri abierta durante 30 minutos en el sitio del laboratorio que
desee.
Pase un copito sobre la superficie del mesn en el cual est trabajando y siembre
en una caja de Petri.
Pase sus dedos por el cabello y rasque suavemente para que el producto que
salga caiga sobre la caja de Petri.
Toque con sus dedos la superficie de una caja de Petri.
Tosa o estornude sobre una caja de Petri.
Introduzca un copito en su odo y siembre en una caja de Petri.
Siembre una muestra tomndola del sitio que desee.
Todas las cajas llvelas a incubar durante 24-48 horas a 37 Grados.
Para sembrar hongos tome cajas de Petri que contengan Agar PDA, destpelas y djelas
al aire libre durante 30 minutos en el sitio que desee y luego tpelas. Djelas a
temperatura ambiente y en las oscuridad durante 48- 72 horas.
4. Resultados
Observe las colonias y basndose en la figura 1, llene los datos de la tabla describiendo
las caractersticas de las colonias y la cantidad de crecimiento (mucho, abundante,
regular, poco). Describa 2 colonias de cada caja teniendo en cuenta las siguientes
caractersticas:
Tamao
Forma: circular, irregular, extendida
Color: pigmentada, incolora
Textura: Granular, friable, hmeda, seca, membranosa.
Superficie: suave, spera, rugosa, opaca, resbalosa.
Elevacin: Plana, convexa, Umblicada.

Borde: irregular, aserrado, discreto, regular, entero ondulado,

Olor: inodora, aromtica desagradable.
TABLA 1. CARACTERSTICAS DE LAS COLONIAS
SITIO DE TOMA DE
LAS MUESTRAS
CANTIDAD DE
CRECIMIENTO
CARACTERSTICAS
DE LAS COLONIAS
Superficie del mesn

Cabello
Figura 1. Forma, elevacin y borde de las colonias microbianas
Fuente: Valencia (2004) Manual de prcticas de microbiologa bsica. Coleccin Notas de Clase.
Editorial UNIBIBLIOS. Universidad Nacional de Colombia.


Cajas de petri, pipetas, incubadora, medios de cultivo, isopos.
la prctica
Estudiar la teora sobre las caractersticas de los diferentes grupos de microorganismos.
Metodologa
Consulte la composicin de los medios de cultivo empleados y regstrelos en su informe
Qu es un medio de cultivo selectivo y un medio de cultivo no selectivo?
En ciertos procesos industriales se requiere de reas blancas. Qu significa el trmino
anterior?

Rbrica de evaluacin
ACTIVIDAD
VALORACIN
BAJA
VALORACIN
MEDIA
VALORACIN
ALTA
Pre informe
No lleva el pre
informe al
laboratorio o lo
lleva pero no
cumple con lo
solicitado en la
gua.
Desarrolla las
preguntas del
pre informe pero
alguna no es
correcta.
Desarrolla de
forma correcta
todas las
preguntas del
pre informe
(0 puntos)
(10 puntos)
(20 puntos)
No se presenta
a la prctica.
Llega tarde a la
prctica o no
presenta un
comportamiento
adecuado.
Cumple con
todos los
objetivos
planteados para
la prctica.
(15 puntos)
(40 puntos)
No presenta el
informe.
Desarrolla el
informe pero se
encuentra
incompleto
Desarrolla
correctamente
el informe de
laboratorio.
(0 puntos)
(20 puntos)
(40 puntos)
Desarrollo de
la prctica
(0 puntos)
Informe de
laboratorio
Retroalimentacin
MXIMO
PUNTAJE
20 puntos
40 puntos

PRACTICA No. 4 SIEMBRA DE MICROORGANISMOS
Tipo de practica
Otra Cul
Intencionalidades
formativas
Remota
20%
2 horas
Tcnicas de siembra
Propsito:
Conocer y aplicar las diferentes tcnicas de siembra
que existen.
Objetivo:
Determinar las condiciones necesarias para realizar la
siembra de microorganismos
Reconocer los distintos sistemas de siembra y su utilidad.
Sembrar es colocar una muestra de inculo, en un medio de cultivo para obtener el
crecimiento de los microorganismos. Para ello se extiende la muestra sobre caja de Petri,
que contiene un medio compuesto por las sustancias que necesitan los microorganismos
para crecer. A veces se aaden otras clases de sustancias; por ejemplo, para impedir el
crecimiento de otras bacterias que podran contaminar el cultivo. La siembra se puede
hacer en otros tipos de medios de cultivo, como tubos de vidrio con gel, frascos con
lquidos nutritivos para los microorganismos.
Si el cultivo bacteriano tiene xito, crecern "colonias" de bacterias en el medio de
cultivo. Estas colonias tienen caractersticas de color, forma, tamao etc. propias de cada
bacteria y esto nos ayuda a identificarlas. Tambin se puede someter a las bacterias de
las colonias a pruebas bioqumicas o de otro tipo para lograr su identificacin. Algunas
bacterias son muy difciles de cultivar, otras tardan mucho tiempo en crecer y algunas,
finalmente, no se han conseguido cultivar.

1. Siembra de medio lquido a medio lquido
Marque correctamente los tubos con el nmero del grupo, sistema de siembra utilizado y
la fecha.
Para crear un ambiente de esterilidad encienda el mechero y trabaje siempre al lado de
l.
Esterilice un asa recta a la llama de un mechero y djela enfriar.
Tome el tubo que contiene la muestra a sembrar, retire la tapa del tubo, flamee la boca
del tubo. Introduzca el asa en tubo sin tocar las paredes y tome un poco de colonia del
cultivo, flamee nuevamente la boca del tubo, tpelo y djelo en una gradilla. Tome el tubo
de caldo nutritivo estril en el cual va a colocar la muestra, destpelo, flameando la boca
el tubo con el mechero e introduzca el asa con la muestra obtenida.
Realice movimientos de rotacin con el asa para emulsionar con el caldo las paredes del
tubo. Retire el asa, flamee la boca del tubo y tape.
Esterilice el asa en el mechero despus de usarla.
Incube los tubos a 37C por 24 horas.
Observar el crecimiento obtenido. Si no hay crecimiento el caldo queda transparente
2. Siembra de medio lquido a slido
Proceda en la misma forma que en la siembra anterior pero con el asa de argolla. Si la
siembra es en tubo recuerde hacer puncin y estra. Si es en caja puede utilizar
diferentes sistemas como estra, agotamiento, rejilla con el fin de lograr un cultivo puro.
Siembra de medio slido a slido
Proceda de la misma forma que en la siembra anterior pero utilizando el asa recta.
Los medios slidos contienen agar en proporcin de 1.5 a 2.0% y se emplean para
obtener colonias aisladas. Las placas de agar se pueden inocular mediante varios
mtodos: como estras, agotamiento y rejilla con el fin de lograr un cultivo puro.
3. Siembra por agotamiento
Tome una placa de agar, marque la base de la caja de Petri con los nmeros 1, 2 y 3.
Coloque la muestra a sembrar en el nmero 1, realice estras hasta la mitad de la caja.
Esterilice el asa y gire la caja hasta el nmero 2, tome las dos ltimas estras y siga
estriando hasta el nmero 3. Gire la caja y termine de estriar, tenga cuidado de no tocar

las estras ya hechas.

4. Siembra por estras
Marque la caja en 6 puntos. Coloque la muestra en el punto nmero uno, realice estras
hasta el nmero 2. Esterilice el asa, tome las dos ltimas estras y extindalas hasta el
nmero 3, tome las dos ltimas estras y extindalas hasta el nmero 4 y as
sucesivamente hasta llegar al nmero 6.
5. Siembra en agar inclinado
Esta se realiza por puncin y por estra. Por puncin: Introduzca el inoculo con el asa
recta hasta el fondo del medio con un solo movimiento y teniendo cuidado de hacer el
mismo trayecto de entrada que de salida. Por estra: Extienda el inoculo sobre el agar
inclinado deslizando suavemente el asa por la superficie en forma de zigzag.
No olvide flamear la boca del tubo antes y despus de la siembra.
Evalu la presencia de crecimiento en el agar por la formacin de una pelcula o por el
crecimiento de colonias en la superficie.
6. Siembra en profundidad
Marque la caja de Petri estril con el nmero de grupo, la fecha y siembra en
profundidad. Abra ligeramente la caja de Petri cerca del mechero.
Abra un tubo con cultivo de bacterias y con ayuda de una pipeta de Pasteur plstica,
transfiera 1 ml de ste cultivo a la base de la caja de Petri estril. Descarte la pipeta en el
frasco de boca ancha con clorox.
Vierta un poco de agar nutritivo en la caja de Petri, tape la caja y luego realice
movimientos suaves sobre el mesn, en el sentido de las agujas del reloj, luego al
contrario, en forma de L y L invertida, y por ltimo en forma de 8. Esto garantiza una
distribucin homognea de las bacterias en todo el agar para facilitar su posterior
recuento.
Envuelva las cajas de Petri y los tubos con cinta de enmascarar, mrquelos con el
nmero de grupo, la fecha. Luego incube 37 c por 48 horas.
Cajas de petri, asa, medios de cultivo, tubos de ensayo.
la prctica
Estudiar la teora sobre tcnicas de siembra

Metodologa
Qu es una unidad formado de colonia?
Qu tcnicas existen para hacer una cuantificacin del crecimiento de los
microorganismos?
Los microorganismos pueden vivir de forma indefinida en un medio de cultivo? Sustente
su respuesta.

Rbrica de evaluacin
ACTIVIDAD
VALORACIN
BAJA
VALORACIN
MEDIA
VALORACIN
ALTA
Pre informe
No lleva el pre
informe al
laboratorio o lo
lleva pero no
cumple con lo
solicitado en la
gua.
Desarrolla las
preguntas del
pre informe pero
alguna no es
correcta.
Desarrolla de
forma correcta
todas las
preguntas del
pre informe
(0 puntos)
(10 puntos)
(20 puntos)
No se presenta
a la prctica.
Llega tarde a la
prctica o no
presenta un
comportamiento
adecuado.
Cumple con
todos los
objetivos
planteados para
la prctica.
(15 puntos)
(40 puntos)
No presenta el
informe.
Desarrolla el
informe pero se
encuentra
incompleto
Desarrolla
correctamente
el informe de
laboratorio.
(0 puntos)
(20 puntos)
(40 puntos)
Desarrollo de
la prctica
(0 puntos)
Informe de
laboratorio
Retroalimentacin
MXIMO
PUNTAJE
20 puntos
40 puntos

PRACTICA No. 5 TCNICAS DE TINCIN
Tipo de practica
Otra Cul
Intencionalidades
formativas
Remota
20%
2 horas
Tcnicas de siembra
Propsito:
Realizar diferentes tipos de tinciones para identifcar
microorganismos.
Objetivo:
Preparar frotis de bacterias para observaciones
microscpicas
Observar las bacterias teidas al microscopio y
clasificarlas por su forma y su reaccin a la
coloracin de Gram.
La observacin microscpica de las bacterias se facilita cuando han sido coloreadas. Se
acostumbra fijar las bacterias en la lmina portaobjetos para poder teirlas con facilidad.
La fijacin puede hacerse con solventes o con calor.
deshidratar la clula y coagularla con protenas.
En cualquier caso se trata e
Las coloraciones pueden ser simples cuando se utiliza un solo colorante o compuestas
cuando se utilizan 2 ms colorantes. Tambin se puede hacer una coloracin negativa
en la cual se tie el fondo, adems de la bacteria, para poder observar la cpsula.

1. Coloracin Simple
Para la coloracin simple se utiliza azul de metileno y se trabaja con Staphylococcus
aureus. Se toma una pequea muestra del microorganismo y se fija con calor,
posteriormente se aade una gota pequea de azul de metileno, se coloca la laminilla o
cubre objetos y se observa al microscopio en un aumento de 100x.
2. Tincin de Gram
La tincin de Gram se realiza en cultivos de Staphylococcus aureus, y Escherichia coli.
La tincin de Gram. Es una coloracin compuesta porque en ella se utilizan 2 colorantes,
uno primario: cristal violeta o violeta de genciana y uno de contraste, safranina o fucsina
de Gram. Es una tincin diferencial porque segn la composicin qumica de la pared
celular las bacterias quedan teidas con el cristal violeta o la safranina, como mordiente o
sustancia fijadora del color se utiliza lugol.
El agente diferenciador, es decir, el que acta de modo diferente sobre la pared celular
de las Gram. Positivas y las Gram negativas es la solucin alcohol cetona alcoholcido.
Los pasos de la tincin de gran son los siguientes:
Fijar la muestra al calor
Aadir el violeta de genciana o cristal violeta y dejarlo actuar durante 1minuto
Lavar con agua para eliminar el exceso de colorante
Aadir lugol y dejarlo actuar durante 1 minuto
Aadir alcoholcido y dejarlo actuar durante 15 segundos y lavar rpidamente
con agua
Aadir fucsina y dejar actuar durante 5 minutos
Secar al aire libre o con una toalla absorbente segn las indicaciones del profesor
Observar en el microscopio a un aumento de 100x.
Observe todas las bacterias con las diferentes coloraciones, determine su morfologa y
trate de identificar sus partes, determine si son bacterias Gram. Positivas bacterias
gran negativas. Dibuje lo observado.


Cultivos de microorganismos, asa, colorante, porta objetivos, cubre objetos, microscopio,
aceite de inmersin.
la prctica
Estudiar la teora sobre tcnicas de tincin.
Metodologa
Establezca las diferencias entre una coloracin simple y una coloracin de gram
Investigue que coloracin se debe utilizar para observar las endoporas o esporas
bacterianas, y para observar la cpsula.

Rbrica de evaluacin
ACTIVIDAD
VALORACIN
BAJA
VALORACIN
MEDIA
VALORACIN
ALTA
Pre informe
No lleva el pre
informe al
laboratorio o lo
lleva pero no
cumple con lo
solicitado en la
gua.
Desarrolla las
preguntas del
pre informe pero
alguna no es
correcta.
Desarrolla de
forma correcta
todas las
preguntas del
pre informe
(0 puntos)
(10 puntos)
(20 puntos)
No se presenta
a la prctica.
Llega tarde a la
prctica o no
presenta un
comportamiento
adecuado.
Cumple con
todos los
objetivos
planteados para
la prctica.
(15 puntos)
(40 puntos)
No presenta el
informe.
Desarrolla el
informe pero se
encuentra
incompleto
Desarrolla
correctamente
el informe de
laboratorio.
(0 puntos)
(20 puntos)
(40 puntos)
Desarrollo de
la prctica
(0 puntos)
Informe de
laboratorio
Retroalimentacin
MXIMO
PUNTAJE
20 puntos
40 puntos

7. FUENTES DOCUMENTALES
APHA, AWWA. WPCF. 1989. Standar Methods for the examination of water
and wasterwater.
GARCES, Emira. 2003. Morfologa y Clasificacin de los hongos. Notas de
clase Universidad Nacional de Colombia. Editorial UNIBIBLIOS.
GRANT Y LONG. 1999. Microbiologa Ambiental. Editorial Acriba. Espaa.
MADIGAN, M.T., MARTINKO, J.M. Y PARKER,J. PEARSON BROCA. 2003.
Biologa de los Microorganismos, Prentice Hall.
MONTOYA, Olga Ines. 2004. Manual de Microbiologa. Universidad Nacional
de Colombia Sede Medelln.
PELCZAR, M.J. y Reid, R.A. 1984. Elementos de Microbiologa. McGraw-Hill,
Ed.
SALDARRIAGA, Yamil y PINEDA, Fabio.
Aplicada. Editorial Universidad de Antioquia.
2001.
Manual de Micologa
SANCHES, Marina, MARMOLEJO, Fernando y BRAVO, Nelson. 2000.

Microbiologa Aspectos Fundamentales. Universidad Nacional de Colombia, sede
Palmira. Feriva S.A.
VALENCIA. Hernando. 2004. Manual de Prcticas de microbiologa bsica.
Notas de clase Universidad Nacional de Colombia. Editorial UNIBIBLIOS.

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