e015 Intercionia-Avences one seo conceptual de olbioreactores para el culo de microalgas aticulos —-tnisaqueca de articulos— Scinfio Sao Interciencia versién impresa ISSN 0378-1844 Servicios INCI v.28 n& Caracas ago. 2003 Artculo Gy Arcata en xt. . [Dy Referencias del ariculo AVANCES EN EL DISENO CONCEPTUAL DE FOTOBIORREACTORES PARA EL CULTIVO DE MICROALGAS P Tradueclin automation (5g) Enviar article por email [D Come citar este ariculo Coral Contreras-Flores, Juliin Mario Peft-Castro, Luis Bemardo Flores-Cotera y Rose Olivia Catizares- Vilanueva Indicadores Links relacionados: Coral Contreras-Flores. Ingeniero Bioquimico, Instituto Tecnoligico de Celaya, México. Estudiante de Maestria, Laboratorio de Biotecnologia de Microalgas, Departamento de Biotecnologia y Bioingenieria, CINVESTAV-IPN. México. 1 Otes Bookmark Juliin Mario Pefia-Castro. Macstro en Ciencias en Biotecnologia y Estudiante de Doctorado, CINVESTAV-IPN. Departamento de Biotecnologia y Bioingenieria, CINVESTAV-IPN. México. Luis Bemardo Flores-Cotera. Doctor en Ciencias Bioquimicas, Universidad Nacional Auténoma de México, Profeso Departamento de Biotecnologia y Bioingenierfa, CINVESTAV-IPN, México, Rosa Olivia Cafizares- Villanueva. Doctor en Ciencias en Ecologia, Instituto Politéenico Nacional. Profesora, CINVESTA\ IPN. Direccién: Laboratorio de Biotecnologia de Microalgas, Departamento de Biotecnologia y Bioingenieria, CINVESTA\ IPN. Av. IPN 2508, C.P. 07360 D.F., México, e-mail reanizar(@mail.cinvestav.mx. Resumen Durante a década pasada se han usado miltiples dsefios de fotobiorreactores para el cultvo de orginismos fotoautotrbfic microscépicos como microalgas y cianobacterias. Los avances en el disefio de estos sistemas han permitide mejor notablmente la densidad celular, a productividad y por ende la economia de los cukivos para distintos fines, En este traba se revisan diferentes aspectos del disefo de fotobiorreactores, tanto aquellos que implican el aprovechamiento adecuado de energia hminosa (ciclos lz-oscuridad, trayectora de la luz y geomettia de fotobiorreactores) como los basados en concept fiiolégicos (fotoinhibicion por oxigeno, cuitivos de alta densidad celular, uitra alta densidad cehilar, heterotrofia y mixotrofa ‘Se presentan kis principales aplicaciones de los diferentes discios, en la produccién de compuestos de alto valor agregado suuso potencial en la biotecnologa ambiental ‘Summary During the last decade, many different photobioreactor types have been used for cufturing autotrophic microorganisms le microalgae and cyanobacteria. Advances in reactor design allowed considerable improvements of cellular density, productivi and overall economy of cultures for diverse purposes. In this paper, several important photobioreactor design concepts a reviewed, inching those involved with adequate use of fight energy (lightdark cycles, light path and reactor geometry) as wi as those based in physiological concepts (oxygen photoinhibition, high ccll density culures, ultra high density culture heterotrophy and mixotrophy). A brief account of the current applications of new pholobioreactors in fine chemica production and possible uses in environmental biotechnology is made. Resumo nip ww stielo.org steel phppid=$0978-184420030008000048script=scl_artettigt wme015 Irercienca- Avences ene ise conceptual de lobo eactres paral culo de microaigas Durante a década passada se tem usado miitiplos desenhos de foto bio reatores para © cultivo de organisms fo aulotréficos microscépicos como microalgas ¢ cimobactérias. Os avangos no desenho destes sistemas tem permite melhorar notavelmente a densidade cehlar, a produtividade e por isto a economia dos cultivos para distintos fins. Nes trabalho se revisam diferentes aspectos do desenho de foto bio reatores, tanto aqueles que implcam © aproveitamert adequado da energia huminosa (ciclos luz-escurdao, trajetéria da hye geometria de foto bio reatores) como os baseados conceitos fsioligicos (foto iibigao por oxigénio, cultvos de alta densidade cehulr, ubra-alta densidade celiar, heterotrofia rrixotrofia). Apresentam-se as principas aplicagSes dos diferentes desenhos, na produsio de compostos de ato vah agregado e seu uso potencial na biotecnologis ambiental PALABRAS CLAVES / Biotecnologia / Cianobacterias / Fotobiorreactores / Microalgas / Recibido: 2003/2003, Aceptado: 291/07/2003, Enka década de 1950 se postulé por primera ver que el empleo de luz solar y agua marina, para obtener cultivs masivos « ricroalgas ricas en proteina de alta calidad, podria ser una buena altemativa para obtener alimento para el ser humar (Becker, 1994). Durante los aflos 60 y 70, diversos grupos de investigacién tanto de paises desarrollados como en vias ¢ desaroli, dedicaron esfuerms a intentar lograr rendimientos de biomasa que pudieran equipararse a los obtenidos cc rmicroorganismos no aufétrofos (principalmente levaduras). En el transcurso de lbs alos se pudieron diversifcar las dre: donde las microalgas eucariotas (Vilchez ef al, 1997) y cianobacterias (Moraks et al., 2002; Prosperi, 2000) culivads masivamente tienen aplicaciones prometedoras, especialmente en la producciin de compuestos quitnicos "finos" combustibles, en el tratamiento de aguas residuales, como intercambiadores iénicos y biofertiizantes, para la obtenciin « compuestos terapéuticos o aplicados a la terapéutica, y como alimento de consumo humano o animal. Sin embargo, productividad te6rica estimada de 100 toneladas amuales por hectérea de cuivos microalgales (Richmond, 2000), no pué ser alearzada ni siquiera en los laboratories de investigaciSn, sino hasta principios de la década de los 90. Una limitante pa lograr los estimados teéricos se debié a que el sistema en carrusel, que ‘nicialmente fue el mejor sistema para desarroll culivos en masa por su facilidad de construccién y operacién, paraddjicamente resulté inapropiado como punto de parti para el desarrollo de sistemas de culivo de alta productividad (Richmond, 2000). El cutive intensive de microalgas ha sic posible en gran medida gracias al desarrollo de nuevos disefios de fotobiorreactores. A continuacién se revisan los avanes que han tendo lugar en este campo, principalmente durante la hima d&cada, Existen dos disefios bisicos para la produccién de microorganisms fotoautotrficos (Grobbelaar, 2000), los sistem abiertos en los que el cuitivo esti expuesto a la atmésftra y bes sistemas cerrados, cominmente denominadc fotobiorreactores, en los que el culivo tiene poco o ningin conlacto con la atmésfera. La mayoria de los sistemas ¢ produccién industrial de biomasa de microalgas construidos antes de los afios 90 fixcron esencislmente sistemas abicrtos tp ccarrusel (Figura 1), que permiten alcanzar densidades celulares de hasta 0,7 de eéhulas (base seca) por litro. Estos sistema constiuidos por canales poco profimdos (nivel de agua de 15-20em) en forma de eircuito cerrado, en los que el medio « ccukivo es impulsado mediante paletas rotatorias, generalmente requieren de grandes dreas de terreno (500-5000m2), per tienen como ventaja el bajo costo de produceién de biomasa algal en algunas zonas geogrificas especifcas. Sin embargo, perfeccionamiento de esta tecnologia hace tiempo Teg6 a su limite, restringiendo asi el desarrollo de la biotecnologia « rmicroalgas. La baja densidad cela origina varios inconvenientes,incluyendo baja productividad, ficil contaminaciSn, costo: recuperacin del producto de medios diltidos y difcutad para el control de la temperatura, Estos inconvenientes estimmlarc cl desarollo de fotobiomeactores construidos con materiales transparentes como vidrio y policarbonato, entre ott materiales. Los primeros fotobiorreactores fueron propuestos por Pitt et al., (1983), Gudin y Chaumont (1983), y Toraillo al., (1986). En i tina década los fotobiorreactores tubulares y de placas planas (Figura 1) ban recibido, entre otros, mic! atencién, ya que permiten establecer cultivos de alta densidad celular, 3 0 mis veces en comparacién con los sisters convencionales de camusel. Esto tiene ventajas como 1) ficilidad para cosechar la biomasa, 2) mantenimiento del cutivo s contaminacin, 3) mejor control de las condiciones de cukivo y 4) menor inversién de capital en el fotobiorteactor. Este din factor es un elemento importante en el costo de produccién de productos derivados de microalgas nip ww stielo.org steel phppid=$0978-184420030008000048script=scl_artettigt ante015 Intercionia-Avences one seo conceptual de olbioreactores para el culo de microalgas 3 Figura 1. Tipos bisicos de forobiorrenctnres. a: Tipo earusel, vist superior. los blogues negios indican propelas. b: Tipo. plano, vista horizontal. c: Con ituminacisn interna, los bloques blancos indica espacios de ilumioaeidn. d: Tipo serpentin. e:) Tipo tubular hori zontal con sistema airlift. La Curva Dosis-Respuesta a la Energia Lumtinosa Un aspecto de suma importancia en el cuitivo de organismos fotoautotréficos en general, es el relacionado con aprovechamiento de la energia radiante durante la fotosintesis. La tasa de fotosintesis cehilar F (capacidad de captacién c ftones) depende de la energia luminosa que reciben las céhias. La curva dosis-respuesta que describe esta relac representa una respuesta tipica del crecimiento respecto a lx disponibiidad de sustrato (Richmond, 2000). A bajos niveles « intensidad luminosa la rapidez de la fotosintesis aumenta con la intensidad de luz, pero niveles de energia incidente superiores un cierto valor (Ek) inducen slo pequefios cambios en F (Figura 2). La constante especifica Ek, caracteristica para cac organism, indica el nivel de energia minosa al que comienza a saturarse el fotosistema de un organismo, La energiainciden puede llegar a niveles que causan inhibiciin de ls fotosistemas celulares, lo cual puede deteriorar el cukivo y causar inchso 1 dafo irreversible, Por otro lado, la eficencia (F/E) con la que la hi incdente es uliizada, es decir a fraccién de enere luminosa incidente convertida a energia quimica, disminuye répidamente al aumentar el flujo de fotones y tiende a valor rminimos cuando la energia incidente alvanza niveles superiores a Ek (a mediodia en cuitivos expuestos a la luz solr). ‘Tass toiosintaitea [F) Ek Enereifa lurtinosa (E) Figura 2. Elveto de 1a energy luminosi (B) en tn tasa fotosinté siea (F) yan Ia eficienaia fotosintstion (F/R). Bk as 1a constanie de saturacisn (Richmond, 2000). La curva dosis-respuesta describe lo que sucede cuando la hw es el fictor limitante y todas las células reciben la misn cantidad de energia luminosa, como sucede en una capa celular delgada o en cuitivos de muy baja densidad celular. S nip ww stielo.org steel phppid=$0978-184420030008000048script=scl_artettigt ane015 Irercienca- Avences ene ise conceptual de lobo eactres paral culo de microaigas embargo, estos conceptos aunque generales no describen la realidad en la gran mayoria de los cuitivos que se desarrollan en Inboratorio o a gran escala, en especial si se trata de cuitivos de alta densidad cellar (>3g/t Javanmardian y Palsson, 1991 Bajo ciertas condiciones, los cutivos con mayor densidad cela, son capaces de ullizar la hu incidente con mayor eficiene cen comparaciin con culvos convencionales ditiidos. Por ejemplo, en cultivos de Spirulina en los que se optim: cuidadosamente la densidad celular, no se observa una disminuciin sigifcativa de la eficiencia al aumentar a intensidad de huz incidente. Fs decir, la fotoinhibicién puede no presentarse ain en cukivos expuestos a intensidades de huz elevadas, Esto « gran medida se debe a una diticin de la kuz, como resuitado del autosombreado, mis marcado entre las células confon aumenta la densidad celular. Un exceso de huz a una densidad de 1,8g/1, puede resukar 6ptimo para un cultivo a 16g/len cual cada eétua recibe una porcién menor de la hu incidente (Hu et al, 1996a). Siempre que la densidad celular aumenta cc relaciina la hu ncidente, el cukivo no aleanza a saturarse por completo. Entonces, la inhibiciin del crecimiento por un exces de huz(fotoinhibiciin) implica en esencia que la densidad celular no se ajusta a la intensidad de la fuente de luz. Sélo en este casos se puede apreciar una disminucién sigifcativa de la efciencia al aumentar la intensidad de ihminacién, La omisiin « estos conceptos condujo a que el disefio de sistemas comerciales frecuentemente se basara sélo en los caleulos ¢ profindidades para evitar la digestiin anaerobia del cutivo y en los céleubos de potencia de las paletas rotatorias para imprin ‘movimiento al cukivo, hasta el limite de esfuerzo de corte tolerado por la microalga en cuestién (Ogbonna y Tanaka, 2000). Disefio de Fotobiorreactores Basado en Conceptos sobre Distribucién de Luz En cuttivos de microorganisms fotoaut6trofos en bos que otros fictores no son limtantes, la disponibilidad de huz determina intensidad a la que se realiza la fotosintesis y, como consecuencia, determina también la velocidad de crecimiento (1). S embargo, en todos ls sistemas de cubivo, las e&hulas mis cercanas a la superficie ihminada impiden la penetracién de la h hacia el seno del medio de cutivo y producen un efecto de sombreado sobre las céhilas mis akjadas de la superficie. 1 algunos cultvos se ha estimado que la luz penetra solo de | a 2mm mis alli de la superfcie, de manera que la 7ona fitic representa solo una pequeiia ffaecién (10-30%) del volumen total del cutivo (Figura 3), Debido a que el medio de culivo es cen constante movimiento, las eékuls solo son expuestas por breves instantes a la huz, en ciclos que pueden durar desc rilisegundos a unas cuantas décimas de segundo. En condiciones reales, el fictor que determina la actividad fotosintética es cantidad de energés disponible para cada célula individual, mis que fa cantidad de energia huminosa incidente (Lu y Vonshal 1999). Energia luminosa [Fone fetica Trayectorta de la luz Oscuidad fy —~=~C*«C «aa wD Tiempo: Figura 3. Hustracisn de la trayeetoria de le hz y de los ciclos luzfoseuridad Los parémetros que pueden considerarse como basicos para describir l disponibiidad de energia bajo una ituminaci¢ intermitente son dos, la relaciin de los periodos uz/oscuridad (L/O) y la frecuencia de los cichs L/O. Estos, junto con intensidad de la huz y ls trayectoria de la luz en el reactor, que se describird mis adelante, establecen en gran medida régimen de iiuminacién, el cual es un indicador de la disponibilidad de huz para una célula individual (Feminde7.et al, 2002 Para asegurar la meixima actividad fotosinética y la mejor utiizacién de la hw incidente, se requiere de un régimen ¢ ‘duminacién éptimo, No obstante, a pesar de su importancia, éste no puede determinarse cuantitativamente, razin por la cu es comin usar los pardmettos citados antes para caracterizar la incidencia de hizen ls fotobiorreactores. nip ww stielo.org steel phppid=$0978-184420030008000048script=scl_artettigt ante015 Intercionia-Avences one seo conceptual de olbioreactores para el culo de microalgas Trayectoria de la luz La trayectoria de la hz es fa distancia transversal que debe recorrer un fotdn para pasar a través de un fotobiorreacti (Richmond, 1996), concepto que se ihstra en le Figura 3. Su magnitud es determinada por diferentes medidas en k diferentes tipos de reactores. Asi, la tayectoria de la huz es determinada por la profundidad de liquido en un reactor de tip camusel, por la separacién entre las placas en un reactor de placas (horizontal 0 vertical) 0 por el didmetto del tubo en . reactor tubular Incrementar la trayectoria de la hw. implica reducir el volimen iluminado en relaciin all volumen no iluminado « el tobiorreactor, debido a que el autosombreado entre las céinas s6lo permite a la huz penetrar una corta distancia dentro d culivo. En consecuencia, un incremento de la trayectoria de la luz reduce tanto la frecuencia promedio con la que las céhuk son expuestas a lt hz, como la relaciin de fos periodos LO (Grobbelzar, 1994; Ogbonna y Tanaka, 1998). Por el contrari una trayectoria pequefa de la liz aumenta fa relaciin de vohimenes iuminado/obscuro, permitiendo asi periodos L/O mayore luna mayor frecuencia con la que las células son expuestas en promedio a la hwy por ende un mejor régimen de iduminacis En reactores tubulates de diimetro pequetio (I-3em) se pueden lograr ciclos de aa frecuencia de L/O, que contribuyen obtener una alia productividad. Lo anterior ha sido verifcado en culos de Spirulina platensis y de diversas especies ¢ ricroalgas, tanto en reactores tubulares horizontales como en reactores planos verticales e inclinados. Hu et al. (1996a) he reportado que al reducir la trayectoria de la luz se obtiene un aumento significativo de la densidad celular éptima y de velocidad especifica de crecimiento, En un fotobiorreactor de plano inclinado estos autores observaron ademiis que con w trayectoria de is uz de 10,4em, la productividad fue sélo 6% de la obtenida en otro reactor con una trayeetoria de la hz ¢ 13cm, En fotobiorreactores tubulares, se han reportado resultados simiares al reducir la trayectoria de la hi. Richmond et « (1993) usando un nuevo diseflo de reactor tubular horizontal reportaron un aumento de 77% en la productividad volumetric cuando el diimetro del tubo disminuys de 5 a 2,8em. La productividad en este titimo caso fue 640% superior a la obtenida « 1m sistema convencional de carmusel con 1Sem de profindidad. Las rutas luminosas que mejores resultados han dado « diferentes fotobiorreactores estin entre 2,6 y 3,0cm sin embargo, en cuitivos de alka densidad celular, una trayectoria de lah de om aumenta la probabilidad de que las células en promedio estén expuestas aun régimen de fiuminacién éptin (Javanmardian y Palsson, 1991). En virtud de lo anterior, actualmente no es recomendable utilizar rutas luminosas de mes ¢ 10cmen ningin tipo de biorreactor. Otros Factores Importantes en el Disefio de Fotobiorreactores Debido a que una condicién necesaria para el éxito comercial de una biotecnologa es tener una productvidad aka consistente, los diferentes tipos de fotobiorreactores se comparan con frecuencia en base a su productividad por unidad c volumen de reactor (g de bionasa/m3-da), a su productividad por unidad de rea ocupada de reactor (gim2-diz) y a productividad por drea iuminada de reactor (g?-dia), siendo la primera la mis utilzada, En wn cultivo contin productividad volumética (Py) es proporeional a la velocidad especfica de crecimiento y a la concentracién cellar x (PX 49. Asi, para lograr una alla productividad se deben mantener atas densidades celulares, pero sin que la velocidad « crecimiento disminuya signifcatiamente, por ejemplo debido a un mayor sombreado entre céhilas. La factildad de es depende, como ya se discuié, de un suministro adecuado de hz a las células, pero ademis se requiore aline cuidadosamente ls condiciones ambientales en el reactor con ls necesidades de la cepa scleecionada, Independientemen de la configuracién del fotobioreactor se deben considerar ademls de los factores ya discutidos que alectan el suministro ¢ luz, otros findamentales como el mezclado, el autosombreado entre las c¢hulas, el suminstro de nutrientes (incuyendo CO cl control de la temperatura y la remocin del Oy producido fotosintéticamente. Algmos requerimientos del cutive como son el suministro de nutrientes y el control de la temperatura, son relativamente ficikes de cubrir (Morita er al, 2002), pet otros como el suministro de liz, ademis de ser ertico, es dificil de controlar. En especial la consideracién cuidadosa d mezcldo, el autosombreado y la remocién del 0 es importante para lograr alias productividades. A contimuacién se discuten los efectos del mezelado y de la densidad celular, que son fitctores que juegan también un pap crucial en el régimen de iluminacién y que de ninguna manera pueden considerarse menos importantes que la trayectoria de huz.o que la intensidad de luz, Importancia del Mezclado en Fotobiorreactores El mezclado favorece cl intercambio gascoso, evita la sedimentacién de eéhilas, la formacién de gradientes de condicio ambientales y de concentracién de nutrientes, pero su fimciin principal es permitir que todas las céhulas puedan acceder a k zonas ituminadas en un fotobiorreactor (Ogbonna y Tanaka, 2000; Ugwu ef al, 2002). El mezvlado puede inducirse de mm diversas formas; sin embargo, los sistemas basados en la aireacién del cutivo con aire comprimido (colummas burbujeadas nip ww stielo.org steel phppid=$0978-184420030008000048script=scl_artettigt site015 Irercienca- Avences ene ise conceptual de lobo eactres paral culo de microaigas airlift), se san cominmente por su sencillez y porque pueden disefiarse para inducir un esfueran de corte pequefio que r cause daito mecénico a las eéhulas (Richmond ef al., 1993; Sinchez et al, 2000). El tiempo que las céhulas permanecen en zonas ihuminadas y la frecuencia con lx que son ihuminadas (frecuencia de los cick LO) dependen de la trayectoria de la hz, pero al mismo tiempo dependen del mezclado del medio de cukivo (Grobbeba 1994), En un mismo fotobiorreactor es posible establecer diferentes condiciones de mezclado para manipular el régimen « fuminacién y asi tasa de fotosiniess. Richmond (1996) ha reportado que la eficienciafotosintética disminuye al aumentar intensidad huminosa en cuitivos de baja densidad celular con una aireacién de 0,61 de aire/Lmin, En cambio, a una denside celular éptima y una aireacién de 4,2Utmin, las eficiencias fueron similares a pesar de aumentar la intensidad de huz en t factor de 4, Adicionalmente, al aumentar la aireacién de 0,6 a 4,2Vkmin la productividad aument6 al doblc. En cultivs de al densidad celular en los que se utlizanniveks de iuminacién como los que se presentan tipicamente al mediodia, con frecuene se reportan aumentos de la productivided al aumentar la intensidad de mezclado, Por ello, para lograr una ata productividad 1m aprovechamiento éptimo de la hz, Richmond (1996) recomienda wna iuminacion intensa (mediodia), el uso de reactor con una trayectoria de la luz pequeia, y un mezclado vigoroso hasta donde lo permita la fiaglidad de las céhuas. Por ot parte, Grobbelaar (1994, 2000) determind experimentalmente la contribucién de los cislos L/O y de la transferencia c rutrientes, y conchyyé que los dos componentes del mezclado actian sinérgicamente sobre la productividad. Una frecuene alla o mediana de ciclos L/O ayuda a evitar la fotoinhibicién, aim a niveles elevados de iminacién, debido a que las céhilas estin expucstas permanentemente a la luz (Grobbelaar, 1994). La tasa de fotosintesis y la productividad de fos cukive aumenté al aumentar la fiecuencia de fos ciclos L/O en el intervalo de 0,05-S000Hz. La metodologia empleada podr adecuatse para optimizar los ciclos L/O en diferentes especies de alga. El mezclado de un cuitivo permite una utiizacién éptima de la huz y un "mejor réginen de iluminacién’, sin embargo, puec tambign causar daft a las células, La fiagildad celular es con frecuencia un factor que limita la intensidad de mezclado qt puede aplicarse a un cultivo, En virtud de que la fiagilidad chiar y las caracteristicas fotosintéticas entre otros fictores pued« variar de cepa a cepa, los niveles éptimos de mezclado dependerin de cada especie culiivada (Gudin y Chaumont, 1991). Cireulacién del Medio de Cultivo en el Reactor La elecein del método para circular el liquido es otra consideraciin importante en el disefio de fotobiorreactores. Las paleti rotatorias, las bombas de tomnillo, rotatorias o de desplazamiento positvo, y en general cualquier método mecéiio, tiene desventaja de producir importantes esfuerzos de corte y dato celular. Por ell, en fotobiorreactores tubulares dispueste horizoniaimente, es comin usar el método hidroneumitico basado en el principio airlift. (Richmond et al., 1993; Sanchez al., 2000). La velocidad del medio de cultvo en los tubos tiene que ser sufciente para asegurar un fiyjo turbulento que evite crecimiento en la pared del tubo o la sedimentaciin de las céhiias por una parte, y por otra que ascgure un régimen ¢ fiuminaciin favorable para establecer una fotosintesisintensa (Gudin y Chaumont, 1991, Camacho et al., 1999; Molina et a 1999), Una baja velocidad de circulacién del liquido (<1Sem’s) casi siempre produce crecimiento en lt pared y posibiemen inhibiciin del crecimiento por akas concentraciones de O> dsueto, Una velocidad de lquido en los tubos de 30-Sdem/s apropiada en la mayoria de ls casos. Como ya se menciond, disminuir la trayectoria de la hiz increments la eficencia de utlizaciin de huz y la productividad. S embargo, emplear rutas luminosas muy cortas implica obsticubs técnicos adicionales, ya que la fuerza motriz necesaria pa ‘mantener un fijo turbulento es inversamente proporcional al diimetro del tubo empleado. Entonces, las mayores densidad celulares y mayores viscosidades asociadas con diimetros de tubo pequetios pueden producir lmitaciones diferentes a impuestas por la hw; por ello es de suma importancia optimizar el diimetro del reactor, Tanto en reactores tubulares con planos, una trayectoria de la wz de 1-2cm podria ser el mimo préctico para operar fotobiorreactores cerrados. Cultivos de Alta y Ultra Alta Densidad Celular Una tecnologia que surgié a finales de los afios 80 fic la de culivos algales de Aka Densidad Celular (ADC) y Ultra Al Densidad Celular (UADC), que implican mantener concentraciones celulares superiores a 3g/1 de biomasa para los primert (Lee y Paksson, 1994) y de 15 a 80g/1 para los segundos, ambos en base seca (Hu et al., 1996a, b; 1998). Al aumentar densidad celular es posible evitar la fotoinhbicion, ain a ahas intensidades de hz incidente, pero por otto lado los efectos ¢ sombreado entre las céhilas se vuelven ms severos debido a que la luz penetra menos en cukivos densos en comparacién ec cikivos de menor densidad. Cuando el suministro de nutrientes y las condiciones ambientales no son litantes, el mezclndo « dterminante para la efciencia fotosintética y la productividad a densidades cehulares por encima de 3g/l Altas densidad celulares solo son posibles mediante una combinacién de alta intensidad de hy, una trayectoria de la hz pequefa (1-Sem) yt nip ww stielo.org steel phppid=$0978-184420030008000048script=scl_artettigt ente015 Intercionia-Avences one seo conceptual de olbioreactores para el culo de microalgas ‘mezclado vigoroso inducido por burbujas de aire (Javanmardian y Palsson, 1991). Hu et al. (1996b) midieron la relaci¢ entre ls fuorescencias variable y méxima de la clorofila, que es un indicador de la integridad de los fotosistemas. En eéhil ‘mantenidas a varias densidades celulares encontraron que la canfidad de energia luminosa que para células en cultivos ¢ ‘menor densidad celular es sumamente t6xiea, para las de cultivos de mayor densidad es éptim. ‘Una difcuitad adicional de ls culivos a attas densidades celulares es que las microalgas secretan sustancias autoinhibitori: (Richmond, 2000). En consecuencia, la producciin microalgal a aa densidad celular requiere de una solucién préctica problema de la acumulacién de estas substancias. Fl desarrollo tanto de cuitivos de ADC como de UADC fue posible graci a bos avances ya descritos en materia de fotobiorreactores, pero adicionalmente a la inclusién de etapas de uirafitracién fitracién en lote 0 semicontinuas que permiticron la eliminaciin de sustancias autoinhibitorias y la adicién de medio frese: Concentraciones de hasta 80g/l se han obtenido en reactores verticales con una trayectoria de la iz pequefia, una agitacit vigorosa y con remocién de substancias autoinhibitorias, Hasta ahora la remociin de estas substancias ha sido semicontinua externa al otobiorreactor en cutivos de UADC. Revientemente se han utlizado membranas de ultafitracién sumergidas en ‘medio de cuitvo, para la recuperacién continua del pigmento marenina producido por una diatomea (Rossignol et a, 2000 idea que podria ser de interés para el desarrollo de otras tecnologias en las que la ultafitracién continua sea deseable Para lograr cuitivos de UADC se han utlizado diversas geometrias de fotobjorreactores y fuentes de iuminacién, tales con reactores planos verticales con kimparas fuorescentes de tu blanca (Hu ef al, 1998), reactores ihuminados cuas intemamente por diodos (Lee y Pakson, 1994), reactores iuminados infemamente mediante fibra éptica (lavanmardian Pakson, 1991), y reactores plinos inclinados con iuminaciin solar mantenidos en exteriores (Hu ef al., 1996b), Ut comparacién de los rendimientos logrados en diferentes sistemas se presenta en la Tabla L raat = a tee sang seme Gis 2, 04 Doane dbus beim 20 Bmoittc «yt ines, as a Pisin SRA aman AE Be Pine ils UAC ad nds 35 Bi lig Wh sl 360 Sroeseaetes te ne ok ng Rentini er 9 te, Spee 188 Tenens ORE GP? nee Bie see Tir br css nth Bod eet hate Rin ero 189 Se Teint ur nga, ae Aer is Gp cat Reece RP ah Danie wena ee Use Sis Sinem Vien wane ads na Bue eeS wipe ry Pio ‘et hs Rake uae nl Plano include ADC G9 1D 22 Breeatpe ae prod Ge biomass Rison, 2000 Tiwi = Sa pean Se i Ba he se Renee tice Siar) Gent (3 as ee EE FO Tae couse sere wt te cana Bane, Thy 8 sentient gna Eee Ey Tot Zt 88 noel TSS NaS Gh 2 wh ae th a OS ca ar mn I om, Una ventaja de mantener cultivos de UADC es li disminucién de la respiracién noctuma, en la cual la célula consume O oxida los carbohidratos endégenos acurmlados durante el dia, La péndida de peso cehiar puede llegar a ser de hasta 50% « el sistema de carrusel, mientras que en UADC la pérdida puede ser menor del 5% debido a que la ata densidad cekil reduce de manera importante la disponiblidad de 02 que cada céhula puede utilizar en la respiraciin (Hu et al., 1996b). Pe otra parte, en cuitives de UADC el contenido proteico de las céhulas puede ser inferior en un 40% con respecto & céluk crecidas a baja densidad celular. Sise piensa ulilizar el producto como fuente de proteinas en alimento humano animal es podria representar una desventaja. No obstante, los rendimientos celulares son tan altos, que la ganancia en productivide proteica de células con 35% de proteina ctecidas a alta densidad es positiva en més de un orden de magnitud en comparacit con eéiulas con 55% de proteina crecidas a una densidad baja (Hue? al, 19960). Fotoinhibicién por Oxigeno nip ww stielo.org steel phppid=$0978-184420030008000048script=scl_artettigt mme015 Intercionia-Avences one seo conceptual de olbioreactores para el culo de microalgas Para escalar fotobiorreactores planos, usuaimente se aumenta la capacidad del cuitivo con unidades conectadas en serie “cascada’ (Hu et al., 1996a). En el caso de reactores tubulires y de serpentin, el escalamiento se hace aumentando ia longi de la tuberia, Cuando se usan solo estos criterios de esealamiento, la acumulacién de O disuetto puede representar un fet obstéculo para el crecimiento de las algas. Altos niveles de O> disuekto en el medio de cuitivo causan inhibiciin de fotosintesis (Camacho ef al., 1999) y en condiciones extremas pueden inchiso causar la muerte de las eéhulas por dat oxidativo, En culivos algales mantenidos en exteriores en reactores planos inctinados, se pueden aleanvar concentraciones « hasta 9,5mg/l de Oy durante las horas de mayor energia radiante, lo que representa 30% mxis que la concentracién ¢ saturacin de O2 (Hu et al., 1996a). En los reactores tubulares horizontales la concentracién aleanzada puede ser atin maye (Camacho et al., 1999), por lo que usar ls longitud de la tuberia comp iinico parimetro de escalamiento de fotobiorreacton puede conducir 2 una fills total de las plantas disefiadas. Este error fue ffecuente en bos afios 80 y condujo a creer en imposbilidad de escalar procesos algales fuera de la opcin de los sistemas de tipo carrusel (Richmond, 2000). La remocit del O2 producido forosintéticamente es una necesidad al escalar reactores cetrados. En los reactores tubulares horizontake 1a estrategia comin es instalar etapas de aireacién tipo airlift para remover por desorcién el O> del medio de culin Después de estar en contacto con el medio de cultvo, el aire enriquecido con Oz puede separarse del liguido en 1 desgasifcador. El tiempo entre etapas de aireacién depende de la velocidad lineal del medio de cultivo, de la distancia ent tapas de aireaciin y de la velocidad de fotosfatesis (Richmond ef al., 1993). Control de ptt Cuando se Ikva a cabo el escalamicnto de fotobiorreactores, el pH del medio de cuikive puede variar significativamente, I reactores tubules, el pH al final del tubo se eleva al disminir la concentraciin de CO> debido al consumo algal. 1 concentracién de CO puede ser controlada mediante su inyeccién en las zonas donde la concentraciin ya no permite capacidad fjadora mixima. El pH se controlaré al mismo tiempo debito al conocido equilbrio del CO2 con el agi (Camacho et al., 1999). Recomendaciones para el Disefio de Fotobiorreactores De ka discusién anterior se pueden proponer varias recomendaciones para el dseflo de fotobiorreactores: 1- La trayectoria de ka huz debe ser pequefa (2,Sem) 2- Mantener una alla densidad celular (8-152 Un mezclado vigoroso para asegurar ciclos L/O de alta frecuencia 4- Usar trams cortos de tuberia (20-30m) para evitarinhibicién del crecimiento por acumulacign de O 5- Evitar acumulacién de substancias inhibitorias (6 Mantener temperatura y pH dptimos La huzes uno de los fictores mis importantes que limitan la productividad de los cukivos microalgales. Sin embargo, alguns rmicroalgas son capaces de crecer ademis de en condiciones de fotoautotrofia, en mixotrofia (uso de una fuente de carbor orginico y energia luminosa como fuente de electrones) y heterotrofia (con una fiente de carbono orginico en la oscuridad Las fuentes de carbono orginico mis cominmente citadas son el etanol, el acetato y la ghicosa. Se ha reportado qu Haematococcus pluvialis puede sintetizar astaxantina en heterotrofia y mixotrofa utlizando acetato de sodio como fuente ¢ carbono, en ambos casos la concentracién del pigmento es mayor a la obtenida en condiciones de fotoautotrofia, debido « parte a que el acetato promueve la obtenciin de mayores concentraciones celulares (Kobayashi ef al., 1992). Tambign se 1 estudiado fa produccién de a-tocoférol con Euglena gracilis usando etanol como sustrato, la produccién del antioxidan aument® hasta 2,9 veces con relacién a Jo obtenido en fotoautotrofia (Ogbonna y Tanaka, 1998). La investigacién acerca ¢ Ja capacidad de las microalgas para utilizar diferentes fuentes de carbono orginico es importante, debido a que permitiria cultivo de microalgas en biorreactores més convencionales (airlift 0 de columma aircada por ejemplo), en bos que aprovechamiento Sptimo de la energia huminosa no es factible ya sea técnica o econémicamente; sin embargo éste es 1 campo de la biotecnologis microalgal que se encuentra en su desarrollo inicial ciones de los fotobiorreactores Apli Produccién de compuestos quimicos finos Las microalgas han sido reconocidas como fuentes de compuestos quimicos “finos" de ako valor agregado como vitamina nip ww stielo.org steel phppid=$0978-184420030008000048script=scl_artettigt ante015 Irercienca- Avences ene ise conceptual de lobo eactres paral culo de microaigas ficobiliproteina, pigmentos, deidos grasos esenciales, etc. Varios de estos productos son todavia producidos comercialmen cn sistemas en carusel 0 en lagunas abiertas. Ejemplos de ésto son la producciin de ficobiiproteinas y biomasa de cianobacteria Spirulina, en paises como los Estados Unidos, India, China y Cuba, asi como la producceiin de b-caroter utiizando Dunaliella en Israel y Australia (Loren. y Cysewski, 2000). La producein comercial de astaxantina utilizanc Haematococcus pluvialis se leva a cabo en dos fases, una de crecimiento y otta de produccién del pigmento, Una empre: cen Hawaii ocupa lagunas abiertas pata la produccién de la biomasa, y teactores tubulares para la induccién de la sintesis d pigmento, mientras que en Suecia otra empresa utiiza fotobiorreactores ftuminados artifcialmente en ambas fases (Olhizol 2000), La producciin de estas substancias a partir de microalgas es costosa, pero se justifca debido a la mayor aceptacié del consumidor por productos naturales en lugar de productos obtenidos por sintesis quimica. El nicho comercial de product derivados de microalgas y cianobacterias es altamente cambiante y depersle de las regulaciones aplicadas por ls agencias ¢ protecciin al consumidor a los productos sintetiados convencionalmente y al uso final de estos productos, que en vari casos no esté atin muy extendido y continia siendo diversicado (Scobiliproteinas) 0 bien tienen usos regionales, como px ejemplo en la acuacukura del salnsin (astaxantina). No obstante, el empleo de fotobiorreactores modems sin duda seré wt contiibucién importante para reducir el costo de produccién de estos compuestos y hacer mis competitva su produccit ‘mediante la utiizacion de microalgas. Descontaminacién ambiental Las mictoalgas han sido propuestas para el tratamiento de aie (fjaciin de CO, y NOx) y de aguas (remocién de DBC NXx, PXx, y metales pesados) (Gonzilez et al., 1997; Prakash et al, 1999). La mayoria de los reactores utizados pa estos fines son de tipo carrusel a bajas densidades celulres (Oswald, 1988; Rovirosa et al, 1995; Syhvestre et al., 199 Prosperi, 2000). Solo en el cuitive a UADC de Chlorococcum littorale se han utiizado los avances tecnolégicos aq revisados para remover CO, (Hu et al, 1998). El principal impusor de los avances en el dsefio de fotobiorreactores ha sic lh produccién de compuestos quimicos "fnos", y no la ya comprobada capacidad de las microalgas para convertir desecky orginicos (agroindustriales, porcicolas, aguas municipales, etc.) en insumos de ato valor agregado. El uso sistemuitco de capacidad en sistemas intensivos consistria en un hilo ecolbgico pues las microalgas, al ser la base de la cadena trét acuitica, son los microorginistos apropiados para cerrar el ciclo ecolbgico con el aprovechamiento de compuest inorgénicos que las normatividades actuakes consideran como peligrosos cuando estin ibres en el ambiente, Conelusiones Debido al entendimionto limitado de la curva dosis de energia luminosa-respuesta que presentan los organismos autotrofos y estancamiento en l uiizacién comercial del sistema en carruse, los rendimientos de biomasa obtenidos en ls prictica fuere durante mucho tiempo considerablemente infeiores a los rendimicntos teéricos que se estimaban en los primeros afios de biotecnologia algal. En bs iimos 15 aflos, diversos grupos de investigaciin han encontrado soluciones para "dir" la enere luminosa y por ende optimizar el régimen himinoso para aumentar los rendimientos de diferentes culvos de mictoalgas. Le fotobiotreactores cerrados con rutas laminosas pequefias, con ciclos I/O elevados y de frecuencia media o aka, con mezclac efcientey la utiizaciin de unidades de fitracin y utrafitracién, ban contribuido a sobrepasar inchso los rendimientos tedriee predichos en los inicos de la bioteenologia de microalgas. Agradecimientos Coral Contreras-Flores y Juliin Mario Petia Castro son becarios del CONACYT- México, Referencias 1, Becker EW (1994) Microalgae: biotechnology and microbiology. Cambridge University Press, Reino Unido. 25 pp. [Links 2. Camacho F, Acign FG, Sanchez JA, Garcia F, Molina E (1999) Prediction of dissolved oxygen and carbon dioxic concentration profies in tubular photobioreactors for microalgal culture. Biotechnol, Bioeng. 62:T1-85. [Links ] 3. Femindez JM, Gareia JL, Garcia F, Motina E, AKDabhan MH, Huping L, Kemoun A (2002) Integration of thd dynamic light regime and photosynthetic response in photobioreactors. Ist Cong. Internat. Soc. Appl. Phycol. 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