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2010
INFORME
Tabla de contenido
1. TEMA: Aislamiento Identificación y Preservación de Cepas de bacterias
fermentadoras de Embutidos cárnicos tipo Salami............................................................ 3
2. RESUMEN............................................................................................................................. 3
3. INTRODUCCIÓN .................................................................................................................. 3
4. OBJETIVOS .......................................................................................................................... 4
4.1. OBJETIVO GENERAL: ...................................................................................................... 4
4.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS: ............................................................................................... 4
5. MARCO TEORICO ............................................................................................................... 4
5.1. Información General ..................................................................................................... 4
5.2. Clasificación de las cepas según su propiedad ............................................................. 5
5.3. Características de las cepas ........................................................................................... 5
6. MARCO METODOLOGICO.................................................................................................. 6
6.1. Métodos Generales de Análisis ................................................................................... 6
6.2. Métodos Específicos de Análisis: ................................................................................ 6
6.2.1. Caldo de enriquecimiento y Medios De Cultivo Para Su Aislamiento E
Identificacion De Lactobacilos Plantarum ............................................................................. 6
6.2.2. CALDO DE ENRIQUECIMIENTO Y MEDIOS DE CULTIVO PARA SU AISLAMIENTO E
IDENTIFICACION DE MICROCCUS .......................................................................................... 6
6.2.3. CALDO DE ENRIQUECIMIENTO Y MEDIOS DE CULTIVO PARA SU AISLAMIENTO E
IDENTIFICACION DE MOHOS Y LEVADURAS. ......................................................................... 8
7. RESULTADOS: ..................................................................................................................... 9
8. DISCUSIONES .................................................................................................................... 12
9. CONCLUSIONES................................................................................................................. 13
10. Bibliografía ................................................................................................................... 14
11. ANEXO ............................................................................................................................ 15
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1. TEMA: Aislamiento Identificación y Preservación de Cepas
de bacterias fermentadoras de Embutidos cárnicos tipo Salami
2. RESUMEN
El objetivo principal fue el aislamiento de los microorganismos que proporcionan sabor, olor y
color en los productos cárnicos fermentados. Para el asilamiento de microorganismos se
empleó medios específicos que proporcionen las condiciones adecuadas de crecimiento. Con
lo que se obtuvo un total de 7 cepas en las que están mohos (3), levaduras (2) y bacterias (2).
Con lo que se concluyó que este producto tiene dos tipos de fermentaciones una aerobia
causada por los mohos y las levaduras y otra anaerobia causada por las bacterias.
3. INTRODUCCIÓN
Los productos cárnicos fermentados se pueden definir como una mezcla de carne picada y
otros aditivos, que es introducida en las tripas naturales o artificiales y sometida a un proceso
de fermentación llevado a cabo por microorganismos, seguida de una fase de secado. El
producto final se almacena normalmente sin refrigeración y se consume sin tratamiento
térmico. Los cambios en la composición, sabor, olor y color que tienen lugar en los productos
cárnicos fermentados se deben fundamentalmente a la microflora natural o añadida, que se
desarrolla en el producto durante la fermentación y maduración de este y ejerce una actividad
enzimática intensa. Los tipos de cepas de microorganismos usados en la industria de la
charcutería son: las bacterias lácteas, las micrococáceas, los mohos y la levadura de
diferentes especies.
El propósito del presente estudio es buscar un método efectivo para aislar, seleccionar y
preservar los microorganismos, encargadas de la fermentación de un producto cárnico, tipo
salami, a partir de un embutido comercial, del muestreo en el lugar de almacenamiento y
maduración del producto y usando para su aislamiento medios específicos tanto comerciales
como formulados en el laboratorio según la cepa. Este estudio se realizó debido a que el país
tiene empresas que se dedican a la elaboración de estos embutidos y no existen
investigaciones publicadas respecto al tema de selección de microorganismos específicos o
elaboración de un cultivo iniciador propio para nuestros embutidos, en unos casos las
empresas usan cultivos iniciadores comerciales importados y otro caso la fermentación se
realiza sin adición de cultivo iniciador.
Una vez realizado el estudio de logró aislar 7 cepas de los microorganismos encargados de la
fermentación del producto, de que la mayoría son mohos y levaduras; estas cepas son las
encargadas de la fermentación en la parte externa del producto.
Se logró identificar algunas de las cepas que la bibliografía indica que son usadas como cultivos
starter entre las que se que están el micrococcus y el Lactobacilos.
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4. OBJETIVOS
4.1.OBJETIVO GENERAL:
El propósito del presente estudio es buscar un método efectivo para aislar, seleccionar y
preservar los microorganismos, encargadas de la fermentación de un producto cárnico, tipo
salami, a partir de un embutido comercial y del muestreo en el lugar de almacenamiento y
maduración de los mismos.
4.2.OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
Establecer puntos clave de muestreo que permita colectar en su totalidad todos los
microorganismos encargados de la fermentación del embutido.
Establecer las características mas propicias para que los microorganismos puedan
desarrollarse en laboratorio.
Establecer cuales son los medios mas adecuados para el aislamiento especifico de
microorganismos fermentadores de embutidos tipo salami
Seleccionar y dar un medio propicio para el desarrollo solo de los microorganismos de
interés.
Buscar el método mas adecuado para la conservación de las cepas puras de
microorganismos seleccionados.
5. MARCO TEORICO
5.1. Información General
Tradicionalmente la elaboración de embutidos ha sido empírica, ya que no se conocía la
relación entre la actividad microbiana, y los cambios, fundamentalmente sensoriales, que se
desarrollaban en el producto durante el curado.
En la actualidad sabemos que los cambios en la composición, sabor, olor y color que tienen
lugar en los productos cárnicos fermentados se deben fundamentalmente a la microflora
natural o añadida, que se desarrolla en el producto durante la fermentación y maduración de
este y ejerce una actividad enzimática intensa.
Hoy en día los productos cárnicos fermentados se pueden definir como una mezcla de carne
picada, grasa, sal, agentes del curado, azúcar, especias y otros aditivos, que es introducida en
las tripas naturales o artificiales y sometida a un proceso de fermentación llevado a cabo por
microorganismos, seguida de una fase de secado. El producto final se almacena normalmente
sin refrigeración y se consume sin tratamiento térmico.
Los tipos de cepas de microorganismos usados en la industria de la charcutería son: las
bacterias lácteas, las micrococáceas, los mohos y la levadura, como se indica en la tabla No.
1, que brindan las características especiales al producto, Tabla No. 2, interviniendo en su color,
sabor, bioprotecciòn, etc.
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5.2. Clasificación de las cepas según su propiedad
Las bacterias responsables de la fermentación del salami contribuyen al desarrollo de las
características organolépticas y reológicas del alimento, sino que generan en los mismos
ambientes poco favorables para el desarrollo de microorganismos patógenos debido a su
marcada capacidad antagonista, la cual favorece su proliferación en el alimento (tabla 2).
Además de este importante papel en procesos de bioconservación, se ha podido comprobar
que algunas cepas de bacterias lácticas, son beneficiosas para la salud.
Características Cepas
Pediococcus cerevisiae
Acidificantes
Lactobacillus plantarum
Micrococcus varians
sabor/color
Staphylococcus carnosus
Bioprotectoras Lactococcus lactis
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6. MARCO METODOLOGICO
Muestreo:
Las muestras fueron recolectadas de la Industria Cárnica “El Salinerito” seleccionando
al azar la o las unidades que conformaron la muestra.
Se utilizó material estéril tanto para la toma como para contener la muestra.
El plasma se obtuvo a partir de sangre fresca de bovino mediante la técnica descrita por
Barboza Y. y col. 1994 (se utilizó como fuente proteica). Luego se le adicionó dextrosa al 1 % y
los demás componentes. El pH del medio se le ajustó a 6,2 con ácido acético. En el caso en que
se necesitó preparar el medio en forma sólida se le adicionó 15 gramos de agar.
Condiciones de cultivo:
Las bacterias ácido lácticas crecieron a 37ºC en medio MRS y Medio plasma de Bovino.
Medio de conservación:
Como método de conservación a largo plazo se congelaron a –20ºC en caldo MRS con 30 % de
glicerol.
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carbono, nitrógeno, y vitaminas. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de
sodio mantiene el balance osmótico y el fosfato disódico otorga capacidad buffer.
Las bacterias que crecen en un medio con alta concentración de sal y fermentan el manitol,
producen ácidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo
al amarillo.
Condiciones de cultivo:
Los Micrococcus crecen bien en este medio, formando colonias rojas, relativamente grandes,
elevadas, cupuliformes y opacas, de consistencia cremosa, a las 18-24 horas de incubación a
35-37 °C, en aerobiosis. No fermentan el manitol.
Medio de conservación:
Como método de conservación a largo plazo se congelaron a –20ºC en caldo infusión cerebro
corazón con 30 % de glicerol.
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6.2.3. CALDO DE ENRIQUECIMIENTO Y MEDIOS DE CULTIVO PARA SU
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE MOHOS Y LEVADURAS.
COMPOSICIÓN EN g/l
Extracto de malta 13.0
Dextrina 2.5
Peptona de gelatina 5.0
Condiciones de cultivo:
En aerobiosis, a 22-25 ºC ó 30-32 ºC, durante 5 días o mayor tiempo.
Selección de las cepas:
De las cepas se hicieron observaciones macroscópicas de su morfología.
Medio de conservación:
En cajas petri que contienen medio PDA con micelio de hongo crecido se lavan las esporas con
3,75ml de caldo Extracto de malta, se coloca esta suspensión en un frasco que contiene 1,25ml
de glicerol estéril (autoclavado). Homogenizar y alicutar a razón de 1,5ml en crioviales
estériles, rotular los tubos con la identificación correspondiente. Conservar los tubos a – 20ºC
en el congelador.
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7. RESULTADOS:
CRECIMIENTO
RECIPIENTE MORFOLOGÍA
CAJAS
levaduras blancas redondas,
+
brillosa de aspecto baboso
10-2
+ moho azul halo blanco
+ moho verde
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levaduras blancas redondas,
+
brillosa de aspecto baboso
moho blanco, de textura
+
algodonosa
levaduras blancas redondas,
+
brillosa de aspecto baboso
10-2
+ moho verde
Muestra 3
levaduras amarillas redondas,
+
brillosa de aspecto baboso
10-4
levaduras blancas redondas,
+
brillosa de aspecto baboso
levaduras blancas redondas,
+
brillosa de aspecto baboso
10-2
+ moho verde
Muestra 4
levaduras amarillas redondas,
+
brillosa de aspecto baboso
10-4
levaduras blancas redondas,
+
brillosa de aspecto baboso
levaduras blancas redondas,
+
brillosa de aspecto baboso
10-3
+ moho verde
Muestra 6
levaduras amarillas redondas,
+
brillosa de aspecto baboso
10-5
levaduras blancas redondas,
+
brillosa de aspecto baboso
Simbología:
+ Crecimiento positivo
- Crecimiento negativo
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Tabla No. 3.- Resultados de crecimiento de bacterias por caja de siembra
CRECIMIENTO
+ + + - + +
HUMANO)
CRECIMIENTO
+ + - - + +
BOVINO)
Simbología:
+ Crecimiento positivo
- Crecimiento negativo
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Tabla No. 4.- Identificación de mohos y levaduras.
# MORFOLOGÍA IDENTIDFICACIÓN
Penicillum
3 moho verde
commune
Penicillium
5 moho azul halo blanco
roqueforti
# MORFOLOGÍA IDENTIDFICACIÓN
8. DISCUSIONES
Las muestras originales, pese a ser de los mismos productos fueron tomadas de
diferentes áreas. Hisopado de la parte externa para ver crecimiento de Mohos y
Levaduras e hisopado de la parte interna para ver el crecimiento de Bacterias,
debido a que son aerobios y microaerofílicos respectivamente.
Cabe destacar que existió un poco de dificultad al momento de realizar los medios
con plasma, debido a lo difícil que se hizo conseguir este componente, por la gran
cantidad de sangre que se necesita para obtenerlo y gran diversidad de técnicas de
preparación del medio que existe en la bibliografía utilizada.
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En el proceso de aislamiento de mohos y levaduras se adicionó al agar PDA una
solución de gentamicina al 2% como inhibidor de bacterias, para evitar el
crecimiento de la flora acompañante que pese a que el medio es exclusivo para
este tipo de cepas, se obtuvo también un crecimiento de bacterias principalmente
gram negativas (identificadas por tinción) sobre las cuales la gentamicina tiene un
gran espectro de acción.
9. CONCLUSIONES
Las cepas de mohos y Levaduras aisladas son las encargadas de la fermentación del
producto por la parte externa, debido a que son aerobias.
Se aisló Lactobacillus plantarum, que fue determinado por medio de tinción gram y
observación al microscopio por la formación característica de redes de bacilos de
color azul como indica la bibliografía.
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Se logro comprobar que las cepas eran efectivamente de Lactobacilos al
sembrarlos en una caja con ausencia de oxigeno en la que no se logro desarrollar la
cepa debido a que es microaerofílica.
Basado en los resultados obtenidos, se concluye que aunque el agar que utiliza
plasma como fuente proteica, es muy inestable se logro aislar las cepas de
lactobacillos deseadas.
10. Bibliografía
1. R., Jorge Ruiz. ELABORACIÓN DE UN PRODUCTO CÁRNICO FERMENTADO CON L.
PLANTARUM UTILIZANDO PLASMA DE BOVINO COMO MEDIO DE CULTIVO. [En línea]
2 de Febrero de 2001. [Citado el: 14 de Mayo de 2010.]
http://revistas.luz.edu.ve/index.php/rc/article/viewFile/4700/4572.
5. Pacheco Morales Pedro Antonio. MICROCOCCUS [En línea] 2009. [Citados el: 16 de
Mayo de 2010] http://www.slideshare.net/pedritopacheco/micrococcus
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11. ANEXO
ANEXO 1: FOTOS DE CAJAS DE 1era SIEMBRA
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ANEXO 2: FOTOS DE MICROORGANISMOS AISLADOS.
BACTERIAS
Lactobacillus
Tinción Gram
Micrococcus
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MOHOS
Penicillium nalgiovense
Penicillium común
Penicillium Roqueforti
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LEVADURAS
Debaryomyces
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