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油镜的 使用方法
革兰氏 染色法
抗酸染 色法
示教标 本
油镜的使 用方 法
使用前 必须对 所用 显微镜 进行 详细检 查
④ 用灭 菌后 已冷 却的接 种环伸 入试 管
中取出 材料 ,此 时注意 勿使 沾有材 料的接 种
环触碰 试管 壁及 试管口 。
⑤ 将试 管口 、棉 塞再次 灭菌, 塞好 棉
塞,放 回原 处。
⑥ 将接 种环 上之 材料涂 于载物 片上 ,
随后立 即将 接种 环用火 焰烧 灼灭菌 。
为防止 细菌 溅散 污染环 境, 接种环 灭菌前 ,
须先将 接种 环靠 近火焰 或放 内焰中 烤干, 然
后再在 外焰 中烧 红灭菌 ,杀 死残留 的细菌 。
2 .干燥 :放空 气中 自然 干燥。 如欲 加速,
也可 把涂 片置于 火焰上 部的 热气 层中烘 烤
,但 切勿 将涂膜 烤焦。
3 .固定 :用染 色夹 子夹 住涂片 ,在 火焰的
最热 部分 连续通 过三次 ,以 固定 之。此 时
杀死 大部 分细菌 ,并使 标本 固定 于玻片 上
,以 免在 染色或 水洗过 程中 被冲 掉。
4 .染色 :
① 初染 : 将结晶 紫染 液加于 涂膜上 ,染 色
1min 。
② 媒染 : 水洗后 加芦 戈氏碘 液处理
1min 。
③ 脱色 : 水洗后 用 95 %酒 精脱 色, 脱色
时频频 摇动 玻片 ,直至 流下 的液体 无色为 止
( 约需 0.5min) 。
④ 复染 : 水洗后 加石 炭酸复 红稀释 液染
1min 。
,如脱色过度,则革兰氏阳性菌可能
被误染为革兰氏阴性菌,如脱色不够
,则革兰氏阴性菌可能被误染为革兰
氏阳性菌,所以脱色时间要很好掌握。
脱色时间的长短还受涂片厚薄的影响
,一般涂片时取菌要少,涂片薄而均
匀为好。
被检菌的培养条件、培养基成分、菌龄的
不同等原因会影响染色结果,如革兰氏阳
性菌的陈旧培养物也有出现革兰氏阴性的
几率,所以被检菌的菌龄一般最好在
18~24h 之内。
抗酸 染色
材料
1 .结核病人的喀痰
2 .抗酸染色液
3 . 3% 盐酸 酒精
4 .碱性美兰染液
5 .生理盐水
6 .滤纸片
7 .载物玻片,接种环等
方法
1 .涂膜
2 .干燥
3 .固定
4 .染色
染色方 法
① 在已固定好的 涂片上放 置滤纸片(滤 纸的作
用是滤 去染液中的 沉渣,使标 本清晰), 滴
加抗酸 染液于滤纸 片上,将整 个滤纸片滴 满
。
② 将加有染液的 滤纸片加 温:在火焰上 方保持
一定高 度,加热至 出现蒸气( 注意不能使 染
液沸腾 ),如此反 复 2~3 次(约 5min )。
在加热 过程中要防 止将染液烘 干,应及时 添
加染液 。
③ 去掉滤纸片,待玻片 冷却 后,水洗。
④ 用 3% 盐酸 酒精脱 色,直 到流下 的液体
无色为止,进行水洗。
⑤ 用碱性美兰染液复染 30s ,水洗,干燥
,镜检。
结果观 察