You are on page 1of 10

细菌的 培养 法

细菌的 培养 法  培养基 的制备及常 用培养基  细菌的 培养法 EMB 培养基 的制备 肠道病原菌的 分离与鉴定 (一)

培养基 的制备及常 用培养基 细菌的 培养法 EMB 培养基 的制备 肠道病原菌的 分离与鉴定 (一) 血清学 检测 - 肥达氏反 应

培养基 的制 备

( ) 肉汤 培养 基

培养基 的制 备 ( 一 ) 肉汤 培养 基  材料:鲜 牛肉 、蛋白 胨、 氯化钠 、

材料:鲜 牛肉 、蛋白 胨、 氯化钠 、 pH 试纸 、 10 %碳酸 氢 钠、试管 、三 角烧瓶 、蒸 馏水等 。

方法

1 .将新鲜 牛肉 500g 切碎或搅 碎, 加水 1000ml ,放 4冰箱或冷 处浸 泡过夜 ,然 后煮沸 30min ,放凉, 使残 余的 脂肪凝固 ,再 用绒布 或滤 纸过滤 ,将 滤液补 足为 原量。 2 1000ml 肉水中 加入蛋 白胨 10g 、氯 化钠 5g ,加热 溶解。

  • 3 .用 精密 pH 试纸测酸 碱度 ,用 10 %碳 酸氢钠 校正 pH 7.2 左右。过 碱时 ,可用 10 %醋酸校 正之 。

  • 4 .分 装于试 管中 或三角 烧瓶 中, 15 (121) 高压 蒸气 灭菌 20 30min

高压 蒸汽灭 菌器
高压 蒸汽灭 菌器
高压 蒸汽灭 菌器

高压 蒸汽灭 菌器

( ) 普通 琼脂 培养基

材料:肉 水、 蛋白胨 、氯 化钠、 琼脂 、无菌 平皿 、灭菌 试管、三 角烧 瓶等。

方法

( 二 ) 普通 琼脂 培养基  材料:肉 水、 蛋白胨 、氯 化钠、 琼脂 、无菌 平皿 、灭菌
  • 1 .按 上记数 量把 肉水、 蛋白 胨、氯 化钠 和琼脂 放到 三 角烧瓶中 ,加 热溶化 。

  • 2 .用 pH 试纸测 酸碱度 ,用 10 %碳酸氢 钠校 正 pH 7.2 左右。

  • 3 15 磅高 压蒸气 灭菌 20 30min

  • 4 .趁 热将溶 化的 培养基 倒入 灭菌平 皿内 ,每个 平皿 倒 入约 15ml ,凝 固后即 成普 通琼脂 平板 培养基 ;如 趁热 将培养基 倒入 灭菌试 管内 ,再将 试管 斜放试 验台 上,凝 固后即成 普通 琼脂斜 面培 养基。

( ) 血液琼 脂培养 基

有些 细菌其 营养 要求较 高, 在普通 琼脂 培 养基上生 长不 良,可 用血 液琼脂 培养 基进行 培养 。

材料

普通 琼脂培 养基

血液 ( 脱纤维羊 血或 兔血 )

方法

  • 1 .加 热溶化 普通 琼脂培 养基 。

( 三 ) 血液琼 脂培养 基 有些 细菌其 营养 要求较 高, 在普通 琼脂 培 养基上生 长不
  • 2 .待 冷至 50左右 时,加 入无 菌的脱 纤维 血液, 混匀 ( 注意 勿使产 生泡 沫 )

  • 3 .分 注于灭 菌试 管或平 皿中 制成血 斜面 和血平 板培 养基。

E.M.B 琼脂培养基 的制备

成分

 

蛋白胨

10g

磷酸氢 二钾

2g

琼脂

20g

乳糖溶 液 (20 )

50ml

伊红溶 液 (2 )

20ml

美蓝溶 液 (0.5 )

20ml

蒸馏水

1000ml

制法

E.M.B 琼脂培养基 的制备  成分 蛋白胨 10g 磷酸氢 二钾 2g 琼脂 20g 乳糖溶 液 (20 %

① 将蛋白胨和磷 酸氢二钾加 温溶化于 蒸馏水中 ② 校正 pH 值为 7.6 加入琼脂 ③ 煮沸溶化过滤 后分装三角 瓶中,每 瓶定量分装 15 30min 高压灭菌

⑤ 以无菌操作法 按量加入经 10 20min 高压灭 菌的乳糖、 伊红美兰 液,混匀后倾 注平皿备用 。

E.M.B 培养基

原理

E.M.B 培养基  原理 大肠 杆菌 能分 解乳 糖产 酸, 使培 养基 pH 值 下降,伊红与美蓝相结合成一种复合物,酸性 环境中,菌体带正电,易与伊红结合,故菌落

大肠 杆菌 能分 解乳 糖产 酸, 使培 养基 pH 值 下降,伊红与美蓝相结合成一种复合物,酸性 环境中,菌体带正电,易与伊红结合,故菌落 呈紫黑色或紫红色,并有金属光泽。碱性环境 中伊红与美蓝不结合,病原菌不分解乳糖,不 产酸故菌落为无色半透明。其次,伊红、美蓝 有抑制革兰氏阳性菌生长的作用。

用途

用于 分离 肠道 致病 菌, 是一 种鉴 别培 养基 。 并有弱的选择作用。

肥达氏反应

肥达氏

反应 通常用 已知 的伤 寒杆菌 O” H”

肥达氏反应  肥达氏 反应 通常用 已知 的 伤 寒 杆菌 “ O” 、 “ H” 菌

乙型 副伤寒 杆菌 H” 菌液与病 血清 作定 量 凝试 验 ( 试管法 ) ,以 检测 病血 清中 有无相 应

在 ,根 据抗多少 情况 用于伤 寒副 伤寒病 的辅 助诊断

材料

① 待检可 疑伤 寒血清 (1:10 稀释 ) 诊断菌 液: 伤寒杆 菌O” (O) 伤寒杆菌 H”

(OH)

H” (PA)

H” (PB)

甲型副伤 寒杆 菌

乙型副伤 寒杆 菌

方法

本实四 人,每 人取 6 只小 试管, 成 一计 四列为一 完整 试验。 分别 明每 诊 断菌 液如 O” OH” PA” PB” 。按下表 先向 每 管加生理 0.5ml ,再 加 10 倍稀释血 清 0.5ml l 管,做 顺序 的等倍 稀释 后 加入 等量的 诊断 菌液,分混 匀,372~4h ,再放24 时 后观察

方法  本实 验 四 人 一 组 ,每 人取 6 只小 试管, 排 成 一

试 管

1

2

3

4

5

6

生理盐水( ml

  • 0.5 0.5

 
  • 0.5 0.5

 

0.5

0.5

病理血清

         

0.5→

10X ml

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

弃去

诊断菌液( ml

  • 0.5 0.5

 
  • 0.5 0.5

 

0.5

0.5