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主要内 容

 肠道病原 菌的分离鉴定 ( 2 )
 肥达氏反 应结果观察
 细菌的生 长状态及菌落 观察
 细菌的药 敏试验
 实验动物 感染试验
肥达氏 反应 结果观 察
 试验管 自第 1 管看 起,如有凝 集 ( 阳性反 应 ) 时则于管 底呈圆片状
、边缘 不整齐的凝集 物,轻轻摇 动,可见凝块 或颗粒浮 起,上清
透明或 有不同程度的 混浊。其凝 集的强弱可用 “ +~++++” 号表 示
如下:
“++++” 细菌 全部凝集, 液体澄清 ,有大片状 ,边缘不整 齐的凝
集块。
“+++” 细菌绝 大部分凝集 ,液体有轻 度混浊,凝集 块较小些。
“++” 细菌部 分沉淀于管 底,液体半澄 清,凝集块 呈颗粒状。

“+” 细菌仅少量凝 集,液体混 浊。


“-” 不凝 集,液体混 浊与对照 管相似。
 记录结 果并判定凝集 效价。通常 以能产生明显 凝集 (++) 的血清最
大稀释 倍数做为该血 清的凝集效 价。
结果分 析
 首先应 了解当地正常 人效价,一 般凝集价超过 正常凝集 价才有
诊断意 义。
 真正的 伤寒病人 O 凝集素 出现常较 H 凝集素为早, 存在于血清
内时间 较短; H 凝集素 产生较慢但效 价较高,存 在时间较长 ,
可达数 年。
 过去曾 接种过伤寒菌 苗或患过伤 寒病,近期又 感染流感 或布鲁
氏菌病 时,可产生高 效价的 H 凝集素 及较低的 O 凝集素,此种
反应称 为非特异回忆 反应,其他 如结核病、败 血症、斑 疹伤寒
、肝炎 等也可出现类 似反应。
 确诊为 伤寒的患者中 ,约有 10 %肥达 氏反应始 终为阴性, 故阴
性结果 不能完全排除 伤寒的诊断 。
 采血时 间不同,肥达 氏反应的阳 性率也不同, 发病第一 周 50 %
,第二 周 80 %,第四周 90 %以上。恢复期 凝集价最 高,以后 逐
渐下降 。一般以双份 血清 ( 急性期 和恢复期 ) 对比,凝集 价有明
显上升 者作为新近感 染的指征。
菌落观 察
 大小
大菌落 ( 直径在 5mm 以上 )
中等大菌落 ( 直径在 3mm 左右 )
小菌落 ( 直径在 1mm 左右 )
 形状:点状、圆形、卵圆形、叶状等

 边缘:整齐、锯齿状、毛发状等。
 表面:光滑、皱纹、湿润、干燥等。
 隆起度:凸起、扁平、中心凹陷等。
 结构:均质性、颗粒状等。
 色调:无色、白色、黄色、褐色等。
 透明度:透明、半透明、不透明等。
细菌的药物敏感性试验
 原理:将干燥的浸有一定浓度抗菌药物的滤纸片放在
已接种一定量某种细菌的琼脂平板上。经培养后,可
在纸片周围出现无细菌生长区,称抑菌环。测量抑菌
环的大小,即可判定该细菌对某种药物的敏感程度。
目的是使学生学会此实验方法并了解其在临床治疗上
的意义。
 材料
① 普通琼脂平板培养基
② 金黄色葡萄球菌分离培养物
③ 大肠杆菌分离培养物
④ 药物纸片
⑤ 酒精
⑥ 镊子
 方法
1 .按 无菌操 作法 用接种 环从 分离培 养平 板上已 选好
的菌落沾 取细 菌,反 复交 叉密涂 于平 板培养 基上 ,以
便生长出 均匀 的菌苔 ( 注意不要 划破 培养基 ) 。
2 .用 沾酒精 点燃 灭菌的 小镊 子取药 物纸 片按下 图贴
于平板培 养基 上,并 轻轻 按压贴 紧。
3 .做 好标记 ,放 37℃ 温箱培养 过夜 ( 不超过
17h) 。
结果观 察
 观察纸片 周围 有无抑 菌环 ,并测 其直 径大小 。
最终判断 细菌 对每种 抗菌 药物的 敏感 程度, 记
录和报告 结果 。
 判定标准 :实 验条件 不同 判定标 准可 有所不
同。一般 抑菌 环直径 在 15mm 以上 者为高 度敏
感, 10 ~ 15mm 为中 度敏感 , 10mm 以下为
低度敏感 ,无 抑菌环 者为 耐药。
肺炎球 菌对 小白鼠 的传染 试验
 实验动物 的接 种
1 .首 先将两 种菌 悬液做 涂片 ,革兰 色染 色和镜 检, 以便
与后述死 亡动 物尸体 的细 菌学检 查结 果对比 。
2 .用 消毒好 的注 射器, 按无 菌操作 法抽 取菌悬 液后 ,再
用无菌镊 子夹 一灭菌 棉花 纸包, 将针 头刺入 棉花 纸包内 ,
排出注射 器内 的气体 ,然 后将注 射器 平置于 试管 架上。
3 .固 定小白 鼠: 用右手 轻拖 鼠尾, 使其 爬行于 金属 网盖
上,再突 然用 左手拇 食两 指抓紧 小白 鼠颈项 部及 两耳, 将
鼠体搜入 手掌 中,再 用左 手无名 指和 手掌夹 住小 白鼠尾 根
,以无名 指和 小指夹 住其 左腿。
4 .以 无菌镊 子取 碘酒棉 球, 消毒小 白鼠 左下腹 部,
用镊子取 下注 射器针 头上 的棉花 纸包 ,放入 消毒 罐
中。左手 倾斜 ,使小 白鼠 头部向 下, 然后将 注射 器
针头自小 白鼠 左侧腹 股沟 部刺入 皮下 ,使针 头在 皮
下组织内 前进 约 l cm 左右,再 直立 注射器 ,轻 轻向
F 刺入腹腔 内, 注入菌 液 0 . 2ml 后再 将针头 拔出 。
将小白鼠 用染 料涂抹 做好 标记, 放入 动物罐 中。