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Un método alternativo es aquel que demuestra o estima el mismo analito tal cual se
mide usando el método de referencia correspondiente para una categoría de alimentos. En
este contexto analito es el componente medido por el método; es decir, un microorganismo
usualmente patógeno, ó un recuento o numeración de algún grupo microbiano, taxonómico o
no.
Los métodos de referencia son aquellos que son reconocidos y ampliamente aceptados
internacionalmente. Algunos ejemplos de estos métodos son los publicados en:
Standard Methods for the Examination of Dairy Products (métodos oficiales en los
EE.UU.) publicados por American Public Health Association (APHA)
Environmental Protection Agency de los EE.UU.
Food Safety Inspection Service, Departamento de Agricultura de los EE.UU.
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, (APHA)
International Commission of Microbiological Specification of Foods (ICMSF)
Association of Official Analytical Chemist International –AOAC- sus Métodos Oficiales de
Análisis-
Bacteriological Analytical Manual de la Food & Drug Administration de los EE.UU. –no
oficiales- publicados por AOAC.
American Association of Cereal Chemists (AACC)
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Obviamente, también son métodos de referencia los publicados por la Organización
Internacional de Normalización (ISO), como también los métodos de la Federación
Internacional de Lechería, hoy en ISO como FIL/ISO. En los últimos años ISO y la Comisión
Europea de Normalización realizaron estudios Interlaboratorios de los métodos tradicionales
que detectan los principales microorganismos patógenos y así, las actuales normas para
patógenos y recuentos presentan datos de precisión.
La lista no es exhaustiva y seguramente existe alguna otra asociación que propone sus
métodos.
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Útiles para el monitoreo de la higiene en tiempo real
Desventajas
Entre las desventajas actuales la determinación de la Presencia / Ausencia (P / A) de un
microorganismo patógeno por un método alternativo es que aun es considerado un ensayo de
screening o prueba tamiz. Es decir, aun se requiere ó exige la confirmación de los positivos por
un método tradicional. Sin embargo, estimo que en muy poco tiempo este impedimento
desaparecerá para aquellos métodos que han sido validados bajo un protocolo armonizado.
Los resultados negativos son considerados definitivos.
Automatización
Los métodos alternativos son manuales, semi y totalmente automáticos. Por ej., hay
equipos como el Spiral Plater que una vez cargado inocula la placa en forma automática y otros
como el MiniVidas que realiza un ensayo ELFA –un tipo de ELISA (Enzyme-linked
Immunosorbent Assay) - usado para detectar patógenos que, también, una vez inoculados
son totalmente automáticos. Incluso, emite un registro con el resultado del ensayo.
Algunos requisitos
Entre los requisitos que conviene priorizar al elegir un kit o equipo destacamos que
debe ser apropiado al fin que se persigue, validado, disponible con regularidad en el mercado,
de precio accesible y sencillo para el personal que lo operara. Además, se debe calcular el
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ahorro de tiempo que significará para la empresa y las posibilidades de contar con el equipo en
comodato.
Los microorganismos patógenos al hombre que se transmiten por los alimentos son:
• Salmonella
• Listeria monocytogenes
• Escherichia coli O157:H7
• Vibrio cholerae O1
• Cryptosporidium
• Giardia
• Clostridium botulinum
• Vibrio parahaemolyticus
• Yersinia enterocolitica
• Aeromonas hydrophila
• Plesiomonas shigelloides
• Enterobacter sakazakii
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equipos disponibles han sido desarrollados para detectar Salmonella, Listeria y E.coli
O157:H7, y para los recuentos de indicadores de higiene.
Conviene mencionar que desde hace algún tiempo se promueve la determinación y/o el
recuento de E.coli en lugar del grupo coliformes o coliformes fecales. Se ha establecido que la
presencia de coliformes en frutas y verduras no es necesariamente de origen fecal. Incluso, se
ha visto que coliformes psicrótrofos son capaces de multiplicarse entre 2 y 5 ºC en productos
cocidos conservados al frío en plantas de carnes. Por lo tanto, el recuento de coliformes ha
perdido el significado que tenia como indicador de higiene durante la producción.
Caracterizar microorganismos
Recuentos o Numeración
¿Qué hay disponible? Muy someramente mencionamos los siguientes:
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4. En el campo de la filtración las Membranas Hidrofóbicas Cuadriculadas (HGMF)
combinan el recuento en placa, la membrana filtrante y la técnica del NMP (Número Mas
Probable). Es método oficial de Canadá.
5. También existe otro sistema que combina la filtración por membrana con la
bioluminiscencia de ATP. Una vez producido el desarrollo se aplica un spray para liberar
el ATP. Permite el recuento por medio de un procesador de imagen.
10. Otros sistemas miden cambios ópticos del medio de cultivo, químioluminscencia,
fluorescencia, Citometría de flujo, etc.
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4.0 la interacción seguida de migración lateral mas una segunda interacción
(inmunoprecipitación);
5.0 la aglutinación de partículas de latex muy útil para la caracterización de los
microorganismos, y
6.0 la inmúnomovilización de Salmonella utilizada para la detección de salmonelas
móviles.
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Bioluminiscencia de ATP -numerosos equipos-
Hisopos para detectar presencia de proteínas
Hisopos para detectar presencia de azúcares
Los 3 últimos brindan resultados en tiempo real y permiten, de ser necesario, establecer
de inmediato acciones correctivas. Salvo los 3 últimos los resultados se expresan por cm2.
Igualmente estos sistemas son útiles cuando se necesita evaluar la acción de los
bactericidas usados en equipos no cerrados en que podemos recoger líquidos, higiénicamente,
para su análisis. Los resultados se expresan por ml o cm3.
Estos equipos son muy útiles para evaluar el aire de zonas de envasado aséptico, como
así también en zonas que no se requiere aire estéril pero deseamos monitorear su calidad.
Conclusiones
Algunos estudios estiman un crecimiento del 17 % de las ventas anuales para los
métodos alternativos frente a un 8 % de los métodos tradicionales en Latinoamérica. Los
métodos inmunológicos son los que muestran un mayor crecimiento.
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A ningún proveedor le interesa que Ud. tenga una mala experiencia con sus equipos.
Recurra a ellos, plantee sus necesidades y vea que le ofrecen.
Agradecimiento
Mi gratitud a Mariano Czastkiewicz por la revisión del este manuscrito