1 Prendre 200 g de pommes de terre.

2 Bien nettoyer les pommes de terre - NE PAS LES

PELER.
3 Découper les pommes de terre en des cubes de 12
mm.
4 Peser 200g de pommes de terre.
5 Rincer rapidement dans de l'eau courante.
6 Placer dans un (1) litre d'eau.
7 Faire bouillir pendant une (1) heure.
8 Faire une purée et presser le pulpe à travers un
tamis fin.
9 Ajouter 20 g d'agar et faire bouillir jusqu'à la
dissolution de l'agar.
10 Ajouter 20 g de glugose et mélanger jusqu'à la
dissolution.
11 Ajouter de l'eau pour faire un (1) litre.

12 Steriliser à 15 psi pendant 20 minutes.

Le PDA est le milieu usuel de culture pour la plupart des champignons. Il contient de la

pomme de terre, du sucre sous forme de dextrose et de la gélose (Agar). Il est préparé selon la
procédure suivante:

- Peser 39ramme de poudre de PDA (BDH) dans un erlenmeyer de 1,5 -2 litres;

- Ajouter 1 litre d'eau distillée;

- Mettre au bain-marie pour faciliter la dissolution de la gélose;

- Stériliser à l'autoclave à 121 oC pendant 15mn à une pression de 1,2 bar;

- Laisser refroidi jusqu'à 55 oC pour éviter la condensation de vapeur;

- Distribuer dans des boîtes de pétri stériles, de 9 cm de diamètre, à raison de 20 ml

par boîte;

Classification des milieux en fonction de leur utilisation

Milieux usuels dits de base

Ces milieux permettent la culture d'une variété de bactéries aussi grande que
possible, mais il n'existe pas de milieu universel. Le choix d'un milieu usuel est en
général fonction de l'habitat naturel des bactéries à isoler ou conditionné par
l'examen microscopique direct du produit étudié.
En bactériologie médicale on utilise souvent des milieux à base d'extrait de viande
pour la culture de la plupart des microbes commensaux ou pathogènes de l'homme
et des animaux.
Les milieux les plus utilisés sont le bouillon nutritif et la gélose nutritive (bouillon
additionné de gélose à raison de 20 g environ par litre).

Le bouillon nutritif est une macération de viande additionnée de peptones (15 à 20 g

par peptones/litre) et légèrement salée (5 g par litre). Les peptones sont obtenues en
dégradant les protéines de tissus animaux ou végétaux jusqu'au stade des acides
aminés directement assimilables par les bactéries.
En bactériologie agricole on utilise des milieux à base de lait, d'extraits végétaux, etc.

Milieux d'isolement

Ces milieux, qui permettent d'obtenir les bactéries contenues dans un produit naturel
à l'état de culture pure, peuvent être:

- Les milieux de base usuels précédemment cités.

- Les milieux de base enrichis de produits biologiques: sang, suppléments poly

vitaminiques, sérum. Ces milieux enrichis facilitent l'isolement des bactéries fragiles
et exigeantes à partir des pro- duits pathologiques.
- Les milieux électifs et sélectifs qui favorisent la culture d'une espèce ou d'un groupe
d'espèces bactériennes alors que la croissance des autres bactéries est difficile,
entravée, ou nulle.

Les milieux d'identification

L'identification des bactéries est surtout basée sur l'étude de leurs propriétés
biochimiques. Cette étude est rendue possible par la culture de la souche
bactérienne sur un grand nombre de tubes de milieux spéciaux. On observe  la
modification des milieux soit directement, soit grâce à des indicateurs chimiques,
puis on rassemble tous les renseignements obtenus sous forme d'une fiche
signalétique qui permet d'établir l'identité de la bactérie en cause.
On appelle galerie bactérienne l'ensemble des milieux permettant l'identification
d'une bactérie:

Les milieux de conservation

Milieux pauvres qui maintiennent les bactéries dans un état de vie ralentie. .

Les qualités d'un bon milieu de culture, d'une bonne « gélose» sont:

- d'être claire c'est-à-dire peu colorée et transparente. Si un trouble apparaît il peut

s'agir d'une température de stérilisation trop élevée ou d'une mauvaise qualité des
produits de base ou d'un pH mal ajusté.

- d'être élastique. Si le milieu est friable ou trop mou la cause peut être une erreur de
pH, l'emploi d'agar de mauvaise qualité ou un mélange insuffisant lors de la
préparation.