CROMATOGRAFIA MATERIAL PRODUCTOS Capilares naranja de metilo(dis) 1 cubeta azul de metileno(dis) placas de silica gel etanol de 96% naftaleno(dis) acetanilida(dis) veratrol(dis) hexano diclorometano Fundamento teérico Las técnicas cromatograficas se utilizan actualmente para la separacion, aislamiento, purificacién e identificacién de sustancias, tanto organicas como inorganicas. Todos los métodos cromatograficos se basan en las diferentes afinidades de los componentes de una muestra por las fases inmiscibles con las que estan en contacto. Segin sea el proceso de separacién, los métodos cromatograficos se clasifican en: 1. Cromatografia de adsorcién Las propiedades responsables de la separacién son las fuerzas de adsorcion. Si una mezcla de sustancias disuelta en una fase se pone en contacto con otra fase, las sustancias se concentraran mas o menos en la superficie de la otra fase; esto se llama adsorcién. Segiin las fases que intervienen puede ser: ¢ Cromatografia de adsorcién liquido-gas. La fase fija es un liquido y la fase movil un gas. ¢ Cromatografia de adsorcién sélido-gas. La fase fija es un solido y la movil un gas. =¢ Cromatografia de adsorcién sélido-liquido. La fase fija es un sdlido y la movil un liquido. Es la mas usual. se puede hacer en columna o en capa fina. 2. Cromatografia de particién. La separacion se basa en la distinta solubilidad de las sustancias en dos fases diferentes. Esta diferencia de solubilidad se expresa mediante coeficientes de reparto. Puede ser de dos tipos: ¢ Cromatografia de particién liquido-liquido. La fase fija es la fase acuosa que esta sujeta en un sdlido, y la fase movil es la orgdnica. Segin el tipo de soporte, puede ser de varios tipos: Papel: el soporte es la celulosa. Columna o capa fina: el soporte es silicagel, almidén, etc * Cromatografia de particién liquido-gas. La fase fija es un liquido organico no volati: soportado en un sdlico, y !a movi! un gas inerte. 3. Cromatografia de cambio iénico Sdlo se puede aplicar a sustancias con carga eléctrica, intrinseca o inducida, en disoluciones acuosas. Cuando sustancias que forman iones en disolucién acuosa se ponen en contacto con resinas cambiadoras de iones, hay una interaccion entre las cargas de los grupos funcionales de los cambiadores iénicos y las cargas de los iones. La fuerza de atraccién varia con la fuerza idnica y el pH del medio. La fase fija son cambiadores, naturales o sintéticos, y la fase mévil es la disolucién. Los iones de mayor carga son retrasados mas durante el paso a través de la columna y asi se verifica la separacién. 4, Cromatografia de permeacién La separacién se basa en la diferencia de tamaiios y pesos moleculares de las distintas sustancias. Las sustancias de pequefio tamaiio tienden a penetrar en el interior de los poros y son retrasadas en la elucién respecto a las mds grandes. Hay dos técnicas: 7© Cromatografia de vidrio poroso. ¢ Filtracién por gel También se realizan otros tipos de clasificaciones entre las que cabe destacar la clasificacion por aplicaciones: © Cromatografia analitica: para identificar sustancias. © Cromatografia preparativa: para separar sustancias y aislarlas. Cromatografia de adsorcién en columna El equipo consta de una columna de vidrio provista de una Ilave en la parte inferior Esta columna se lena con el adsorbente adecuado. hay diferentes métodos de llenado de las columnas, pero es muy importante que el llenado sea perfecto, que no queden burbujas de aire porque la separacién seria mala. El método de empaquetado més usual consiste en formar una papilla entre el adsorbente y el disolvente e ir adicionandola poco a poco. Una vez finalizado el empaquetamiento, se puede proceder a la separacion. La mezcla que se quiere aislar y purificar se disuelve en la minima cantidad posible de disolvente (el mismo del Ilenado de la columna) y se adiciona por la parte superior de la columna. A continuacién se va pasando disolvente, para eluir las sustancias adsorbidas. Se puece usar un Unico diso'vente, 0 mezc!as de diso'ventes de potaridad creciente, dependiendo del tipo de sustancias a separar. La adsorcion y la velocidad de migracion depende de: ¢ Polaridad del disolvente © Polaridad del producto ¢ Actividad del adsorbente Los disolventes ordinarios se pueden ordenar segiin su polaridad creciente: éter de petroleo, tetracloruro de carbono, ciclohexano, éter, acetona, benceno, diclorometano, cloroformo, acetato de etilo, piridina, etanol, metanol, agua, acido acético. La actividad de los adsorbentes aumenta en el siguiente orden: celulosa, almidon, azucar, silicagel, sulfato calcico, fluorisil, magnesia, alumina, carbon activo. La secuencia de elucion de compuestos, en orden de elucién creciente: hidrocarburos, olefinas, éteres, compuestos halogenados, aromaticos, cetonas, aldehidos, alcoholes y _aminas, dcidos y bases débiles. Se van recogiendo las fracciones y luego se analiza el contenido de cada fraccién. Cromatografia en capa fina cual iva Sirve para identificar los distintos componentes de una mezcla. Se realiza usando unas microplacas (portaobjetos de un microscopio) que se cubren con el adsorbente adecuado al que se afiade agua para formar la papilla. Una vez extendida la papilla, se deja secar y luego se mete a la estufa para activar el adsorbente. Una vez secas, se aplica la muestra en disolucién en la parte inferior con un capilar. Se introduce la placa en una cubeta con el eluyente adecuado y se deja desarrollar el cromatograma. Si los productos son coloreados, la separacién podra observarse directamente; en caso contrario, se usan reveladores. Cromatografia en capa fina preparativa Sirve para separar y aislar los distintos componentes de una mezcla. Se usan placas (20x20 cm) de cristal. El procedimiento de preparar las placas es similar al anterior. La aplicacién se hace en forma de franja y no de punto. Practica a realizar La practica consiste en la identificacion por cromatografia en capa fina de diferentes mezclas: A. Mezcla azul de metileno-naranja de metilo. En la placa de silicagel se aplican tres muestras: © una muestra patrén de azul de metileno una muestra patron de naranja de metilo e la mezcla azul de metilenonaranja de metilo La elucion se realizara utilizando etanol de 96% como fase movil. Se calcularan los Ry delnaranja de metilo y del azul de metileno en las condiciones de la practica B. Mezcla problema La practica consiste en la identificacion de una mezcla problema que puede contener naftaleno y/o veratrol y/o acetanilida. En primer lugar, se aplicaran las tres muestras patron en la placa de silicagel, realizindose la elucién utilizando diclorometano y hexano como eluyentes. Se calcularan los Re de los tres patrones en las dos condiciones. A continuacién, se aplica la muestra problema y se eluye la mezcla en cualquiera de los dos eluyentes. Por comparacién de los valores de Rr se identifican los productos de la mezcla. Fitter ‘of sample (110%) Chromatographic deveiopment unit, in volatile solvent Preparation Wares sovent front a Robe Determination of R, on Ue chromatogram.RESULTADOS PARTE A. MEZCLA DE INDICADORES Compuesto Rr Azul de metileno Naranja de metilo Mezcla PARTE B. MEZCLA PROBLEMA Compuesto Ry en CoHig Re en CH2Clz Naftaleno Veratrol (dimetoxibenceno) Acetanilida Mezcla problema Numero del problema= Constituyentes de la mezcla problema: 56CUESTIONES 1. Si se analiza por cromatografia una mezcla constituida por cuatro sustancias, {cuantos valores de Rp se obtendran? 2. Explicar por qué el Rr de las sustancias estudiadas es mayor en diclorometano que en hexano. 7