RFLP Method Página 1 de 6

Método RFLP - Fragmentos de Restricción Polimórficos

RFLP (a menudo pronunciado "rif" de labios, como si se tratara de una palabra) es un método usado por los
biólogos moleculares que seguir una secuencia particular de ADN, que se transmite a otras células. RFLPs se
puede utilizar en muchos entornos diferentes para lograr diferentes objetivos. RFLP se pueden utilizar en los
casos de paternidad o casos penales para determinar el origen de una muestra de ADN. RFLP se pueden utilizar
determinar el estado de la enfermedad de un individuo. RFLP se pueden utilizar para medir las tasas de
recombinación que puede llevar a un mapa genético con la distancia entre los loci RFLP mide en cM.

En esta página web, usted puede ver cómo se producen los RFLP y, a continuación tres ejemplos de la aplicación
del análisis de RFLP: paternidad, estado de la enfermedad, Y mapeo genético.

RFLP Producción

Cada organismo hereda su ADN de sus padres. Dado que el ADN se replica en cada generación, cualquier
secuencia dada pueden pasar a la siguiente generación. Un RFLP es una secuencia de ADN que tiene un sitio de
restricción en cada extremo con una "objetivo"Secuencia en el medio. Una secuencia de la blanco es cualquier
segmento de ADN que se unen a una sonda mediante la formación de pares complementarios base. Una sonda es
una secuencia de ADN de cadena sencilla que se ha etiquetado con radiactividad o una enzima de tal forma que
la sonda puede ser detectado. Cuando una sonda de pares de bases a su objetivo, el investigador puede detectar
esta unión y saber dónde está la secuencia diana desde la sonda sea detectable. RFLP produce una serie de
bandas cuando un Southern blot se realiza con una combinación particular de enzima de restricción y la
secuencia de la sonda.

Por ejemplo, vamos a seguir un particular RFLP que se define por la enzima de restricción EcoR I y la secuencia
diana de 20 bases GCATGCATGCATGCATGCAT. EcoR I se une a su reconocimiento seuqence GAATTC y
corta el ADN de doble cadena, como se muestra:

En el segement de ADN se muestra a continuación, puede ver los elementos de un RFLP; una secuencia diana
flanqueado por un par de sitios de restricción. Cuando este segmento de ADN es cortada por EcoR I, tres
fragmentos de restricción se producen, pero sólo uno contiene la secuencia diana que puede ser obligado por la
secuencia de la sonda complementaria (púrpura).

Echemos un vistazo a dos personas y los segmentos de ADN que llevan a que contienen este RFLP (para mayor
claridad, sólo veremos una de las dos bases de ADN). Desde que Jack y Jill son organismos diploides, tienen dos
copias de este RFLP. Cuando examinamos una copia de Jack y una copia de Jill, vemos que son idénticas:

http://www.bio.davidson.edu/courses/genomics/method/RFLP.html 18/05/2010
RFLP Method Página 2 de 6

Jack 1:-GAATTC --- (8,2 kb) ---GCATGCATGCATGCATGCAT--- (4,2 kb) --- GAATTC-

Jill 1:-GAATTC --- (8,2 kb) ---GCATGCATGCATGCATGCAT--- (4,2 kb) --- GAATTC-

Cuando examinamos sus propios ejemplares de esta segunda RFLP, vemos que no son idénticos. Jack 2 carece
de un sitio de restricción EcoR I que Juana tiene 1,2 kb corriente arriba de la secuencia diana (diferencia en
cursiva).
Jack 2:-GAATTC - (1,8 kb) -CCCTTT- (1,2 kb) -GCATGCATGCATGCATGCAT- (1,3 kb)-GAATTC-

Jill 2:-GAATTC - (1,8 kb) -GAATTC- (1,2 kb) -GCATGCATGCATGCATGCAT- (1,3 kb)-GAATTC-

Por lo tanto, cuando Jack y Jill tienen su objeto de ADN para el análisis de RFLP, tendrán una banda en común y
una banda que no coincide con el de otros en el peso molecular:

Caso de paternidad
Usemos la tecnología RFLP para determinar si Carlos es el padre del hijo de Jill llamado Payle.

En este escenario, se extrajo el ADN de las células blancas de la sangre de los tres individuos y sometidos a
análisis de RFLP. Los resultados se muestran a continuación:

En este caso, parece ser que Jack podría ser el padre, ya que heredó el fragmento Payle 12,4 kb de Jill y el
fragmento de 4,3 Jack. Sin embargo, es posible que otro hombre de similar patrón RFLP podría ser tan well.To
estar seguro, varios más loci RFLP se pongan a prueba. Sería muy poco probable que dos hombres (excepto los
gemelos idénticos) compartiría con varios patrones de RFLP y así se pudo confirmar la paternidad.

En un escenario diferente, se extrajo el ADN de las células blancas de la sangre de los tres individuos y
sometidos a análisis de RFLP. Los resultados se muestran a continuación:

http://www.bio.davidson.edu/courses/genomics/method/RFLP.html 18/05/2010
RFLP Method Página 3 de 6

Esta vez, se puede determinar que Jack no es el padre de Payle desde Payle tiene una banda de alrededor de 6 kb
y Jack no lo hace. Por lo tanto, es muy probable que el padre de Payle no es Jack, aunque es posible que Payle
lleva a una nueva mutación en este locus y una banda de distinto tamaño se haya producido. ¿Qué podrías hacer
como investigador a ser más seguro de que Jack no era el padre de Payle?

Situación sanitaria
En este ejemplo, queremos saber si una persona lleva toda la fibrosis quística (FQ) alelos y si es así, cuántos.
Debido a que la FQ es una enfermedad recesiva, anyonne padece esta enfermedad debe ser homocigóticos para
alelos de enfermedad. De la información de pedigrí, a menudo podemos determinar quién en esta familia es
portadora. Sin embargo, si una pareja llega a un asesor en genética, a menudo un análisis de RFLP se lleva a
cabo sobre el ADN de la pareja.

RFLPs son conocidos por CF y por lo que sería fácil determinar si una persona en homocigosis de tipo salvaje
(peso), Heterocigotos "porteador", o alelos homocigóticos la enfermedad y por lo tanto tienen esta enfermedad.

Para parejas que están esperando un niño, sería fácil de probar tanto los padres y hacer una predicción sobre el
estado de la enfermedad final de su feto. Por ejemplo, si ambos padres eran homocigotos peso, Entonces todos
sus hijos también serían homocigóticos peso:

http://www.bio.davidson.edu/courses/genomics/method/RFLP.html 18/05/2010
RFLP Method Página 4 de 6

Sin embargo, si ambos padres son heterocigotos, que podrían tener los niños con cualquiera de los tres
genotipos, aunque los niños heterocigotos sería el doble de probabilidades de que cualquiera de los genotipos
homocigóticos.

Con el aumento de información de la secuencia genómica, un creciente número de enfermedades genéticas se

puede predecir a partir de análisis RFLP.

Mapeo genético
Para calcular la distancia genética entre dos loci, necesita ser capaz de observar la recombinación.
Tradicionalmente, esto se realizó mediante la observación de los fenotipos, pero con el análisis RFLP, es posible
medir la distancia genética entre dos loci RFLP si son una parte de los genes o no.

Veamos un ejemplo sencillo en moscas de la fruta. Dos loci RFLP con dos bandas RFLP posible en cada lugar:

http://www.bio.davidson.edu/courses/genomics/method/RFLP.html 18/05/2010
RFLP Method Página 5 de 6

Estos loci se encuentran en el mismo cromosoma de la hembra (izquierda) y el macho (derecha). El locus
superior puede producir dos diferentes bandas llamada 1 y 3. El lugar más bajos puede producir bandas, 2 o 4. El
macho es homocigota para la banda 1 en el locus de la parte superior y 2 para el lugar más bajo. La hembra es
heterocigoto en ambos loci. Sus patrones de bandas RFLP se puede ver en el Southern blot a continuación:

El macho sólo puede producir un tipo de gametos (1 y 2), pero la hembra puede producir cuatro gametos
diferentes. Dos de los cuatro posibles se llaman los padres porque llevan dos bandas RFLP del mismo
cromosoma, 1 y 2 de la izquierda o cromosoma 3 y 4 del cromosoma derecha. Los otros dos cromosomas son
recombinantes, porque se ha producido la recombinación entre los dos loci y por lo tanto las bandas RFLP se
mezclen de manera que 1 está ahora vinculada a 4 y 3 se vincula a 2.

Cuando estas dos moscas pareja, la frecuencia de la progenie cuatro posibles pueden ser medidos y de esta
información, la distancia genética entre los dos loci RFLP (superior e inferior) se puede determinar.

http://www.bio.davidson.edu/courses/genomics/method/RFLP.html 18/05/2010
RFLP Method Página 6 de 6

En este ejemplo, el 70% de la progenie se producen a partir de huevos genotipo parental y el 30% fueron
producidas por los huevos genotipo recombinante. Por lo tanto, estos dos loci RFLP de 30 cM alejados unos de
otros.

Web de la célula Front Page

Genómica Esquema del curso y Plan de Estudios

Calendario de Genómica

Biología molecular del curso

Biología Materiales del Curso

Biología Página de inicio

© Copyright 2001 Departamento de Biología, Davidson College, Davidson, Carolina del Norte 28036
Envíe sus comentarios, preguntas y sugerencias a: macampbell@davidson.edu

http://www.bio.davidson.edu/courses/genomics/method/RFLP.html 18/05/2010