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II. ANTECEDENTES:
GULATI et al., (1996), Investigarón sobre “Maíz como materia prima en una
planta productora de alcohol etílico”, Par la hidrólisis del almidón se usa la
α -amilasa obtenida de bacterias termo resistentes Bacillus licheniformis
tiene que ser llevada a altas temperaturas (90-100ºC) para el rompimiento
de los gránulos del almidón, el almidón licuado se somete a sacarificación a
menores temperaturas (60-70ºC) con glucoamilasa con Aspergillus Níger la
cual hidroliza las dextrinas hasta glucosa.
III. JUSTIFICACIÓN:
III.1. JUSTIFICACIÓN TEORICA: El Etanol en mezcla con la Gasolina
reduce las Emisiones de Monóxido de carbono (CO), sin incrementar la
de Óxidos Nitrosos (N0x) ya que de acuerdo con la Asociación de
Recursos Renovables de Canadá, el agregado de un 10% de etanol al
combustible trae los siguientes beneficios: reducción de un 30% de las
emisiones de monóxido de carbono y disminución entre un 6% y un 10%
de reducción de las emisiones de dióxido de carbono a la atmósfera.
H2O Amilosa 20 %
Almidón
Δ Amilopectina 80 %
Los dos constituyentes del almidón difieren en diversos aspectos y por tanto
los consideramos por separado.
o Amilosa.
Amilosa es una molécula lineal compuesta por 250 a 300 unidades de Â
a -D-glucopiranosa enlazadas por uniones 1-4 (Martínez, 2006)
CH2OH
O O
HO
OH CH2OH
O
O
HO
OH CH2OH
O O
HO
OH
O
o Amilopectina.
Está también constituido por unidades de D (+)-glucosa, con enlaces
9
CH2OH
O O
HO
CH2OH OH
O O
O
HO
OH
H2C O
O
HO
OH CH2OH
O
O
HO
OH
O
Cuadro 2.
Agua el 20%
Ceniza 0,30%
Arena 0,02%
Proteína 0,09%
Fósforo, P 0,07%
Esteres por 100 ml de alcohol a 100 ºGL Máximo 6,5 mg de acetato de etilo
a) . La fermentación Aeróbica.
Es el proceso donde se suministra oxígeno al sistema y se desprende CO2.
En general las fermentaciones aeróbicas pueden representar de la siguiente
manera:
m. o + Elementos Nutrientes + O2 C02 + Productos + m.o
b) La fermentación Anaeróbica.
Es un proceso en el cual no se necesita oxígeno, Cuando no hay oxígeno,
en muchas formas de vida se detiene el mecanismo celular de respiración
aeróbica, provocando su muerte; pero en otras, como en ciertas bacterias, el
proceso se realiza por medio de un mecanismo al que los científicos
bautizaron como respiración anaeróbica. A diferencia de la respiración
aeróbica, en la anaeróbica no existe un solo grupo de reacciones químicas
que la describan, ni siempre se obtienen los mismos productos finales. En
ella, el lugar que ocupa el oxigeno atmosférico es reemplazado por
sustancias inorgánicas oxigenadas, como los sulfatos y nitratos, en tanto
que los productos formados, además del dióxido de carbono, suelen ser
sustancias inorgánicas, en vez de agua. (Jorgensen, 1995)
IV.5.1. Nutrientes.
Las Levaduras necesitan una fuente de carbono, otra de nitrógeno,
minerales y vitaminas. Entre los minerales se tiene al: fósforo, potasio,
azufre, magnesio, hierro, zinc, manganeso, cobre, etc. Se requieren también
de oligo elementos o activadores de enzima. Como constituyentes de las
otras fuentes tenemos los azucares, aldehídos, ácidos grasos, peptonas,
aminoácidos, amoniaco, sulfato de amonio, cloruro de amonio e inositol.
Se debe hacer notar que para el caso de las levaduras el fósforo es esencial
para su metabolismo. Existen tres tipos de levaduras: (KRYACHKOV, 1980).
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A. Levaduras altas.
Son aquellas que se desarrollan ascendiendo durante la fermentación hasta
la superficie del líquido en fermentación, en donde permanecen bien como
cepa uniformemente distribuida o bien corno anillo en la pared del recipiente
o cuba de fermentación. (KRYACHKOV, 1980).
B. Levaduras bajas.
Son aquellas que se desarrollan exclusivamente en el fondo del recipiente o
cuba de fermentación. Pero durante la fermentación es lanzada hacia las
partes superiores del líquido como consecuencia de la formación de
anhidrido carbónico. (KRYACHKOV, 1980).
C. Levaduras de Destilería.
Es una variedad de la Saccharomyces cerevisiae que tiene la caracteristica
de ser bastante estable y tolerar altas concentraciones de alcohol etílico
(12%), sin perjudicar su calidad fermentativa. Hay levaduras que soportan
hasta el 11 % del alcohol etílico pero tiene el inconveniente que no fermenta
todo el azúcar presente en el mosto a fermentar. La saccharomyces
cerevisiae tiene dos enzimas:
C.1. La Invertasa, que da lugar a que la sacarosa se hidrolize, formando
una molécula de glucosa y una molécula de fructuosa.
C.2. La Zimasa que transforme la glucosa y fructuosa formados, en alcohol
etílico y anhidrido carbónico. En realidad ésta zimasa está constituida por
varias enzimas y co-enzimas, las cuales originan la fermentación alcohólica.
(KRYACHKOV, 1980).
IV.5.2. pH.
Los microorganismos tienden a crecer en un intervalo limitado de pH y, aún
dentro de éste intervalo frecuéntemente cambian su metabolismo como
resultado de un cambio de incluso 1-1.5 unidades de pH. En general, las
levaduras crecen en un intervalo de 3 a 6. Esto solamente es una
generalización, puesto que ciertas bacterias y levaduras crecerán aunque
con menor rapidez a valores de pH tan bajos como 2. Estos diferentes
intervalos de pH para el crecimiento, se pueden usar durante las
fermentaciones para reducir la posibilidad de contaminación. Así las
fermentaciones de levaduras con frecuencia operan a un pH tan bajo como
económicamente sea posible para evitar la contaminación bacteriana, con
una consecuente reducción de los costos de esterilización.
Durante las fermentaciones por lo general es necesario controlar el pH,
cuando se forman productos ácidos como el ácido láctico, acético y cítrico o
cuando los mismos sustratos de crecimiento son ácidos o bases, de modo
que al consumirse el pH del medio cambiará de manera importante.
(Scragg, 1997).
IV.5.3. Temperatura.
La temperatura afecta el crecimiento de manera notable, principalmente
porque los microorganismos de una especie dada solo pueden crecer en un
rango restringido de temperatura. Los psicrófilos presentan un rango de
temperatura de 5 a 15°C, los mesófilos de 25 a 40 ºC y los termófitos de 45
a 60ºC. Además, debemos mencionar que la temperatura también afecta el
rendimiento durante la fermentación. Las levaduras se desarrollan entre 25 a
45°C, su temperatura óptima es de 30 a 40ºC, pueden vivir en forma latente
fuera de estos rangos, mientras no se inactiven sus enzimas.
(Quintero, 1981)
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IV.5.4. Oxigeno.
Las levaduras pueden desarrollarse tanto en condiciones anaeróbicas como
aeróbicas, lógicamente las rutas metabólicas serán diferentes.
El oxígeno merece mención especial, pues su ausencia o abundancia
permite una selección tanto de microorganismos como de productos del
metabolismo. El crecimiento microbiano es función de muchas variables y
todavía no se establecen relaciones matemáticas que cubran esos rangos
de operación o interrelaciones con ellas. Sin embargo, con el conocimiento
actual es posible iniciar una fermentación y poco a poco a través de la
experimentación ira mejorando y dirigiendo el crecimiento y el metabolismo
microbiano en el sentido que se desee: aumentando el rendimiento,
disminuyendo el consumo de nutrientes o excluyendo selectivamente ciertos
productos. (Quintero, 1981).
IV.6.2. Rectificación.
Es también una operación de separación basada en diferencias de
volatilidad relativa y tiene por objeto eliminar el contenido de impurezas de la
mezcla a niveles permisibles y al mismo tiempo elevar el contenido de
alcohol de Ia mezcla hasta el punto Azeotropico (En la mezcla alcohol agua
se forma un azeótropo y no es posible superar este punto por destilación
ordinaria a presión atmosférica) teóricamente.
La operación en la columna de rectificación se inicia con reflujo total a efecto
do conseguir 01 perfil de temperaturas adecuado para obtener el producto. A
propósito, existen dos; formas de operar una columna intermitente:
IV.7. FERMENTADOR.
El fermentador o bioreactor es un recipiente en donde se desarrolla
procesos bioquimicos, al cual se deberá proporcionar de un medio ambiente
aséptico en el que únicamente se encuentran los microorganismos
deseados.
Para el funcionamiento de cualquier bio-reactor, se deben tener las
condiciones necesarias para su esterilización y mantener la asépsia, debe
contar con dispositivos que permitan el suministro de substratos o de
nitratos, un control adecuado de temperatura y pH adecuado, niveles
apropiados de oxigeno disuelto, evacuando los productos y sub productos, y
una buena agitación que permita mantener las condiciones uniformes en
todo el reactor. El diseño de un bio-reactor es específico para cada proceso
biológico y su complejidad depende de los experimentos de proceso, por
tanto un sistema no debe ser más complicado de lo que resulta ser
necesario. (Vargas y Condori 2000).
Para lograr esto, se colocó una masa conocida del sustrato en el recipiente
destinado para la hidrólisis, según la corrida aleatorizada del diseño
experimental, se le adicionó cloruro de calcio (40 ppm) y se llevó a un pH de
6,5. Con un baño térmico se elevó la temperatura de la mezcla hasta 95 ºC y
se llevó a cabo el proceso de dextrinización por un período de 2,5 h con una
agitación constante de 225 r/min. Al final de esta etapa se debió enfriar la
mezcla hasta 60 ºC y agregar HCl hasta alcanzar un pH de 4,5 para
desactivar la enzima. Se agregó la cantidad de amiloglucosidasa (AMG) que
correspondiera según el diseño para continuar con la etapa de la
sacarificación por el tiempo determinado, con una agitación de 150 r/min.
Terminada esta etapa, se inactivó la enzima y se analizaron las muestras
para determinar la cantidad de azúcares reductores. (González y Córdoba,
2006).
NUTRIENTE CONCENTRACIÓN(g/L)
Los valores mas apropiados de las variables del proceso, se dan como un
rango dentro del cual se determinan los niveles apropiados para el diseño. El
nivel máximo se simboliza como (+) y el nivel mínimo como (-). La variable
dependiente o respuesta se simboliza como Y. En el caso de que cada
30
Y1 =
( Y11 + Y12 )
2
Y1 = Promedio de la respuesta.
VI. HIPÓTESIS.
-Temperatura
-Concentración de azucares totales
-El pH.
Variables
Intervinientes
(Vit) Tiempo 1.Cantidad de 1.1. Tiempo - Horas
tiempo para la
hidrólisis
Acidez del
(Vit) pH fermento 1.4. pH - % acidez
-Los resultados del trabajo de investigación sirven para que tenga como
referencia para la potencial industrialización del almidón de la papa y
sobre la obtención de nuevas fuentes de energía.
-Además el alcohol obtenido apartir de la fermentación del almidón de la
papa se podrá utilizar como disolventes y/o como insumo Alcohol Etílico
para la industria ya que el alcohol etílico es menos dañino para la salud,
en su consumo, menos contaminante para el medio ambiente y traerá
beneficios en el comercio.
IX. METODOLOGIA.
IX.1.Tipo de estudio.
a. Materia prima
En esta investigación se utilizara el almidón de la papa (solanum
tuberosum) como materia prima la cual será adquirida en el
mercado de puno.
b. iniciador.
La levadura para iniciar la fermentación alcohólica es el
Saccharomyces cerevisiae.
c. Material de laboratorio.
• Vaso de precipitados de 500ml.
• Pipetas
• Termómetro
• Papel filtro.
• Matraz de erlenmeyer,
• Tamiz de 0.1mm.
• Recipientes.
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e. REACTIVOS QUIMICOS:
• Acido clorhídrico.
• Agua destilada.
IX.3. PROCEDIMIENTO.
A.1. Primero: Lavado; con el fin de retirar tierra y otras impurezas que
trae la papa.
A.3. Tercero: licuado. Se hace pasar la papa sin cáscara por un extractor
de jugos, con el fin de extraerle todo el jugo que tiene la biomasa de
la papa
Los pasos que se siguen en la Hidrólisis de almidón por vía química son los
siguientes: Se pesa una cantidad de almidón para un volumen de 800mL y
para una concentración dada de ácido en un erlenmeyer de 1L que fue
llevado al autoclave x , condiciones de 15 psi, durante 30 minutos a una
temperatura de 120°C, terminada la hidrólisis se filtra al vacío y luego se
determina la cantidad de azúcar obtenida. (LEON, 2005).
Materia prima
papa.
Licuefacción.
Almidón.
Hidrólisis.
Ácido
clorhidrico.co
Saccharomyces
Cerviciae. Fermentación. Reactor
Fermentador.
Destilación.
Etanol.
• Color
• Olor
• Sabor
Donde:
- 0.9 es la fracción que indica que el 90% del almidón hidrolizan a azúcar,
tomando un 10% en pérdida por almidón que no se alcanza a hidrolizar.
(simbolizados como “0” en la matriz del diseño) que no son más que tres
inferior como lo muestra la matriz del diseño con el fin de evaluar el límite de
conjunta.
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Donde:
N=2n N=23=8
CUADRO 8:
Matriz de Diseño (2n) para la Hidrólisis del Almidón de la papa.
Codificación Variables
ºN de Concentració Concentración Tiempo de
Experimentos Z1 Z2 Z3 n de [HCl] de Almidón hidrólisis
1 -1 -1 -1 0.05 6 10
2 +1 -1 -1 0.10 6 10
3 -1 +1 -1 0.05 18 10
4 +1 +1 -1 0.10 18 10
5 -1 -1 +1 0.05 6 30
6 +1 -1 +1 0.10 6 30
7 -1 +1 +1 0.05 18 30
8 +1 +1 +1 0.10 18 30
9 0 0 0 0.075 12 20
10 0 0 0 0.075 12 20
11 0 0 0 0.075 12 20
Fuente: Elaboración propia
HCl − 0.075
x1 =
0.025
40
A −12
x2 =
6
t − 20
x3 =
10
C3: pH Mol/l H+ 4 6
Donde:
N=2n
N=23
N=8
CUADRO 10: Matriz de Diseño para la fermentación Alcohólica.
Codificación Variables
ºN de Azucares
Experimentos C1 C2 C3 Temperatura totales pH
1 -1 -1 -1 25 6 4
2 +1 -1 -1 37 6 4
41
3 -1 +1 -1 25 12 4
4 +1 +1 -1 37 12 4
5 -1 -1 +1 25 6 6
6 +1 -1 +1 37 6 6
7 -1 +1 +1 25 12 6
8 +1 +1 +1 37 12 6
9 0 0 0 31 9 5
10 0 0 0 31 9 5
11 0 0 0 31 9 5
T − 31
X1 =
6
AZU − 9
X2 =
3
pH − 5
X3 =
1
X. ÁMBITO DE ESTUDIO.
El presente trabajo de investigación se ejecutara en los laboratorios de
procesos, bioquímica y análisis instrumental de la facultad de ingeniería
química.
XI. RECURSOS.
XI.1. RECURSOS HUMANOS.
Nombre Función Dedicación Pago Total ($)
semanal Mensual ($)
Higinio Zúñiga Tutor 20 300 1750
Laboratorista Asistente 30 350 1600
3350
Infraestructura.
Laboratorio 200 Un Un 150
150
Materia prima.
papa 0.35 Kg. 9 3.15
3.15
Reactivos Químicos:
Acido clorhídrico 2 mL 10 2
Agua destilada 1 mL 1000 1
Acido Sulfúrico 1.5 mL 10 1.5
Ioduro de potasio 3.5 mL 10 3.5
8
Material De Laboratorio.
Autoclave 20 Un 1 20
Bioreactor 50 Un 1 50
Balanza Analítica 10 Un 1 10
Destilador. 50 Un 1 50
Estufa 30 Un 1 30
160
Material de Análisis.
Refractómetro 80 Un 1 80
Potenciómetro 80 Un 1 80
Alcoholímetro 50 Un 1 50
Picnómetro 30 Un 1 30
240
Licuado 15 Un 1 15
sedimentado 5 Un 1 5
secado 25 Un 1 25
60
Servicio de cómputo.
Papel bond 1 millón 1 1
Impresión 5 Un 4 20
Empastado 3 Un 3 9
Copias de 4 Un 3 12
tesis
42
RUBRO $
Infraestructura. 150
Materia prima. 3.15
Reactivos químicos. 8.5
Material del laboratorio. 160
Material de análisis. 240
Tratamiento de la M.P. y obtención del almidón. 60
Servicio de cómputo. 42
Imprevistos (10%). 66.365
TOTAL 663.65
A6 Ordenamiento de resultados 1
A7 Análisis de los resultados 1
A8 Redacción del informe final 2
Código Semanas
Actividad
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
A1
A2
A3
A4
A5
A6
A7
A8
XII. BIBLIOGRAFÍA.