Universidad Nacional de La Plata Licenciatura en Qumica Qumica Analtica III

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Eficiencia en Cromatografa de Gases

Objetivo del trabajo Determinar el comportamiento de la altura equivalente de plato terico (H) en funcin de la velocidad de la fase mvil (u), ajustar la forma matemtica de la ecuacin de van Deemter a los datos experimentales, calcular la velocidad ptima e interpretar los resultados Fundamento El ancho del pico cromatogrfico depende de la dispersin longitudinal de la banda cromatogrfica en el interior del sistema durante el anlisis. La altura equivalente de plato terico (H) se interpreta como la longitud de columna necesaria para que se establezca un equilibrio entre la fase estacionaria y la mvil, mientras que el nmero total de platos tericos (N) se interpreta como el nmero total de equilibrios que el analito establece entre las fases luego de recorrer todo el sistema. Tanto H como N se utilizan como medida de la eficiencia cromatogrfica y son valores que se determinan experimentalmente: 2 Z N= Z

Si el analito eluye a Z (Z puede ser tiempo tr, volumen de fase mvil Vr,, longitud de papel, etc., etc.) y suponemos que el pico obtenido es gaussiano entonces es la desviacin estndar. Desde el punto de vista matemtico o estadstico caracteriza al ancho del pico gaussiano que es, concretamente, de 2 veces cuando se mide a la altura de los puntos de inflexin en las mismas unidades que Z. Desde el punto de vista cromatogrfico nos sirve para caracterizar la dispersin longitudinal real que sufre el analito en la banda cromatogrfica durante su viaje entre el inyector y el detector. La distribucin de gauss (y tambin el pico cromatogrfico) no toma el valor cero sino que tiende a cero cuando Z. Sin embargo, para fines prcticos debemos considerar un lmite concreto, que sirva para caracterizar el ancho total del pico cromatogrfico medido sobre la lnea de base. Por convencin se toma como ancho de pico en la base, o ancho de base, el valor de 4. El rea debajo de la campana de gauss integrada entre -2 y +2 respecto del centro del pico es el 98% del rea total del pico, que podra obtenerse integrando entre - y +. Una de las formas de determinarlo es trazar dos rectas que pasen por los puntos de inflexin haciendo que se crucen a una altura de dos veces la altura de los puntos de inflexin, hi. Por trigonometra bsica puede razonar que si a 2hi se encuentra el vrtice del tringulo y a hi el ancho es 2 y entonces en la base el ancho ser de 4. N puede calcularse utilizando el que se obtiene del ancho de base, wb. Sustituyendo en la ecuacin anterior se obtiene una expresin conocida en cromatografa:
2 t 'r Z N=16 =16 w b Z w bt

Sin embargo, la triangulacin necesaria para obtener wb tambin requiere utilizar los puntos de inflexin, no es muy preciso e introduce importantes errores cuando el pico presenta asimetra. Una alternativa sera tener en consideracin que los puntos de inflexin de una gaussiana se encuentran a 60.65% de la altura total del pico, medido entre la base y el mximo. Pero esta es una proporcin incmoda de utilizar. Por otra parte existe una proporcionalidad matemtica directa entre el
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ancho de pico medido en el punto de inflexin (wi) y el ancho de pico que se mide a cualquier otra altura. Algunos autores proponen medir el ancho al 5% de la altura del pico, otros al 10%, considerando en cada caso proporcionalidad correspondiente respecto de w i. Lo mas sencillo es medir el ancho a la mitad de la altura entre el mximo del pico y la lnea de base (wh). La proporcin entre estos anchos de pico es: wh= 2 ln 2 wi = 1.177wi = 8ln 2 Medir el ancho de pico a a mitad de la altura resulta mas fcil y N puede calcularse como:

N=8 ln2

t 'r wh t =5.54 t 'r wh t

Para comprender el sentido fsico de N hagamos la siguiente suposicin: una sustancia eluye a tiempo tr obtenindose un pico cuyo ancho en el punto de inflexin es del 2% del tiempo de retencin, por lo tanto el ancho de base es del 4%. Si en un cromatograma el el N y el ancho de pico se mantiene constante (esto nunca es as) en un tiempo mximo, t r,se podran acomodar tr/4 picos iguales separados por un ancho de base constante de 4. En otras palabras, entraran 25 picos. Si. w i= 2tr/100 y = tr/100 entonces N=(100)2=10000. Resumiendo, con un N=10000 podra obtener como mximo 25 picos idnticos con sus mximos separados por 4 y solapando un 2% de su rea con los picos contiguos. Si el ancho de pico fuese de 0.1% , o sea tr /1000 entonces N=1.000.000 y entraran 250 picos idnticos separados con sus mximos separados por 4. Esto es un razonamiento rudimentario dado que el ancho de los picos cromatogrficos que eluyen a distintos tiempos vara y aqu cabe realizar una aclaracin importante: EL ANCHO DE PICO NO DEPENDE DEL REA TOTAL DEL PICO NI DE LA CANTIDAD DE ANALITO INYECTADO Con un mismo tipo de fase estacionaria se pueden construir columnas cromatogrficas de distinta longitud. La eficiencia de las columnas tambin se caracteriza mediante la altura equivalente de plato terico, H o HETP, que esta dado como:

H=

L N

Para una longitud de columna determinada mayor eficiencia implica mayor N y menor H. Sabiendo el H para un tipo de columna determinado y el N requerido para una separacin se puede calcular la longitud de columna necesaria. Evidentemente, a mayor L mayor N. Desde el punto de vista fsicoqumico H esta dado por la ecuacin de van Deemter:

H=A

B C.U U L t0

donde U es la velocidad lineal de la fase mvil que est dado por la longitud de columna (L) en cm y el tiempo que tarda en eluir una sustancia no retenida (tiempo muerto) en minutos (t0) segn:

U=

Cuando la columna es rellena, dependiendo del dimetro y forma de las partculas, de la homogeneidad en el tamao y la calidad del empaque, se pueden establecer diferentes recorridos a lo largo de la columna haciendo que algunas molculas eluyan antes y otras despus. Esto es una contribucin a la dispersin longitudinal de la banda cromatogrfica que aumenta el ancho de los picos, y que no depende del tipo ni del caudal de la fase mvil sino que es constante. Esta dispersin por diferencia de recorridos se encuentra caracterizada por el parmetro A de la ecuacin de van
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Deemter y suele llamarse difusin Eddy. Esta dispersin es simtrica. Cuando las columnas son capilares de tubo abierto y el flujo es laminar el termino A=0 ya que no habr diferentes caminos para recorrer. Cuando un soluto se inyecta en forma de pulso las molculas tendern naturalmente a difundir desde la zona central de mayor concentracin hacia las zonas de menor concentracin siguiendo la ley de fick. Esto implica una dispersin simtrica que no depende de que la banda cromatogrfica se mueva o no, pero que aumenta en el tiempo. En otras palabras, cuanto antes eluya el pico cromatogrfico mejor y por ello la contribucin a la dispersin es inversamente proporcional a la velocidad de la fase mvil. Esta contribucin queda caracterizada por el parmetro B y B/U suele llamarse trmino de difusin longitudinal Finalmente, si el flujo de la fase mvil es menor el soluto podr establecer un mayor nmero de equilibrios entre ambas fases. O sea que cada equilibrio se establecer en una distancia menor si el caudal es mas bajo, con lo cual estamos diciendo que la contribucin a H es proporcional a U. El parmetro C de la ecuacin de van Deemter es la constante de proporcionalidad y puede desglosarse en dos contribuciones o dos trminos:

C.U=Cm Cst . U
Cm que caracteriza la transferencia del analito entre el seno de la fase mvil y la superficie de la fase estacionaria, y Cst que caracteriza la transferencia del analito entre la superficie y el seno de la fase estacionaria. A este trmino se lo llama resistencia a la transferencia de masa Ahora podemos ver que, en sentido estricto, N= L/H no es el nmero de equilibrios que se establecen a lo largo de toda la columna sino que el nmero de equilibrios sera L/(C.U), pero dado que la bondad de la separacin esta dada por TODOS los trminos de la ecuacin de van Deemter el N calculado como N=L/H es la mejor forma de caracterizar la eficiencia de la columna. La forma grfica de la ecuacin de van Deemter y sus trminos individuales se muestran en la siguiente figura:

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La curva de van Deemter tiene un mnimo que puede hallarse igualando a cero la derivada respecto a U de la expresin:

H B =0= 2 C U U opt

entonces

U opt=

Evaluando la expresin completa para U=Uopt se obtiene el H mnimo posible para el sistema en particular. Sin embargo, en la prctica los caudales para Uopt resultan demasiado bajos y alargan los demasiado los tiempos de anlisis y suelen utilizarse velocidades 2 o 3 veces Uopt. Por esa razn los fabricantes de columnas cromatograficas orientaron los desarrollos para reducir la pendiente de la rama ascendente (C.U), es decir, disminuir la resistencia a la transferencia de masa. Para reducir la resistencia en fase mvil se utilizan columnas rellenas con partculas de dimetro menor, a expensas de tener cadas de presin mayores a lo largo de la columna o dimetros de tubo menores en el caso de tubos capilares. En ambos casos la consecuencia es que la cada de presin a lo largo de la columna se debe aumentar para mantener el mismo caudal. Para cromatografa de gases esto no es problema dado que la presin de los tubos es suficiente, pero en cromatografa de lquidos se requiere de bombas con mayor tecnologa. En 2003 Waters present su equipo de cromatografa de ultra alta resolucin (UPLC) que utiliza columnas con partculas submicroscpicas (>1m ) y aplica presiones superiores a las 1000 atmsferas y logrando N>80000. Otra opcin es disminuir la viscosidad mediante la temperatura. En el caso de los lquidos la viscosidad disminuye al aumentar la temperatura, y por ello existen varios grupos de investigacin trabajando en HPLC a altas temperaturas. En el caso de los gases la viscosidad disminuye al enfriar (por eso los aviones viajan a 10.000m de altura donde T=-30C), pero en este caso tambin disminuyen los coeficientes de difusin logrndose un efecto contraproducente. En CG capilar disminuir el dimetro de los tubos implica reducir sensiblemente la cantidad de analito inyectado, lo cual exige detectores mucho mas sensibles. Para reducir la transferencia de masa en la fase estacionaria se utilizan recubrimientos de fase estacionaria de menor espesor. Esto tambin limita la capacidad de carga y exige detectores con lmites de deteccin mas bajo.

C B

Universidad Nacional de La Plata Licenciatura en Qumica Qumica Analtica III Trabajo Experimental

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Se utilizar un equipo de cromatografa gaseosa compuesto por una columna rellena de L=1.2m y 6 mm de dimetro, que contiene un relleno consistente en un soporte de slice tipo y Chromosorb P (mesh 80-100) en donde se deposit la fase estacionaria de metil-silicona (DC200) obtenindose un relleno con 20% p/p de la misma. El detector es de conductividad y se utilizar hidrgeno como gas portador. PRECAUCIN: El detector puede encenderse solo cuando circula gas portador, de lo contrario el filamento acumula calor, se pone al rojo y se funde. Luego de regular el caudal y medirlo se realizaran inyecciones de 2 L de n-heptano y 3 L de aire o metano como marcador de t0. Se realizaran anlisis a caudales de aproximadamente: 10, 15, 20, 30, y

40 ml / min.
Obtenidos los cromatogramas, se procede de la siguiente manera:

a) Se determinan los anchos de pico a media altura ( w1/2 ).

b) Se determinan los tiempos muertos (t0) y de retencin (tr). c) Con los datos de tr y w1/2 se calculan los N y con L se determina H.

d) Con t0 y L se determina U e) Se representa grficamente H vs U y de ser posible se ajusta la ecuacin de van Deemter para obtener los parmetros. Obtenidos los mismos se calcula Uopt, Hmin y Nmax.