MELHORAMENTO GENTICO ANIMAL

h = Profa.
2

2 a 2 p

Profa. Dra. Marlia Martins Departamento de Zootecnia Universidade Estadual do Maranho

2009

Introduo ao Melhoramento Gentico Animal

01. Melhoramento Gentico Animal e sua importncia

um

conjunto

de

processos

seletivos

de

direcionamento

dos

acasalamentos, cujo objetivo aumentar a freqncia dos genes de efeitos desejveis ou das combinaes genticas boas em uma populao, com a finalidade de aperfeioar a capacidade de produo dos animais que apresentam interesse econmico para o homem em um dado ambiente. Para atingir tal finalidade, o homem dispe de duas ferramentas bsicas: a seleo de progenitores e os mtodos de acasalamento (Faco e Villela, 2005). Sabe-se que o fentipo de um indivduo nada mais que o somatrio do gentipo e o meio ambiente. Sendo assim, pode-se elevar a produo dos animais domsticos atravs do melhoramento do ambiente e do melhoramento gentico, pois ambos so necessrios para otimizar a eficincia de produo. No entanto, a importncia do melhoramento gentico para o incremento da produo animal frequentemente subestimada, pois as respostas decorrentes de modificaes no manejo ou na alimentao so percebidas com maior facilidade e mais rapidamente. A importncia relativa do melhoramento gentico pode ser ressaltada atravs da observao simples de que, em qualquer nvel de manejo e alimentao fixado, a gentica o nico fator que pode ser trabalhado para aumentar a produtividade animal e tem, em relao s tcnicas de natureza ambiental, a vantagem de promover alteraes hereditrias, ou seja, de ser passvel de transmitir as boas caractersticas, obtidas pelo melhoramento, aos descendentes. Por outro lado, o melhoramento ambiental normalmente de alto custo, algumas vezes no adotado amplamente devido a problemas tcnico, pessoal e financeiro e s proporciona bons resultados se o material gentico disponvel for melhorado. Por outro lado, importante ressaltar que a expresso fenotpica mais intensa est vinculada ao ambiente prprio para os indivduos expressarem ao mximo seus potenciais genticos, razo pela qual ao se promover melhoramento gentico nos rebanhos, deve-se levar em considerao o ambiente. Melhoramento Gentico Animal Profa. Dra. Marlia Martins

02. Histrico do melhoramento gentico animal: do Darwinismo Genmica

O melhoramento animal teve incio na Inglaterra, nos trabalhos de Robert Bakewell (1725-1795), responsvel pela formao e evoluo de raas dentro das espcies bovina, ovina e eqina. Seus trabalhos desencadearam a formao das associaes de criadores e a criao dos registros genealgicos. A Bakewell geralmente dado o crdito de ter estabelecido o padro moderno de melhoramento dos animais e ele algumas vezes chamado o fundador do melhoramento dos animais. A criao de animais de pedigree foi estabelecida no seu tempo. O trabalho de melhoramento propriamente dito de Bakewell foi feito com o antigo gado Longhorn, o carneiro Leicester e o cavalo Shire. Foi tal o seu xito que seus animais tinham enorme procura para reproduo. Ele inaugurou o sistema de arrendamento de reprodutores ovinos. Isto , no vendia de vez os seus melhores reprodutores, mas arrendava o seu uso por um ano de cada vez. Seus leiles anuais ou arrendamento de machos ovinos despertervam muita ateno. Seus trabalhos eram fundamentados no conhecimento emprico, no qual formava grupos de animais estreitamente aparentados entre si e similares em tipo, caracterizando os acasalamentos endgamicos. Para ele, a endogamia produz prepotncia e fixao de um tipo desejvel. As raas Hereford e Shorthorn tiveram suas bases de formao a partir dos princpios enunciados por Bakewell. Como cincia, pode-se dizer que o melhoramento animal surgiu com a descoberta das leis da herana pelo monge austraco Gregor Mendel, a partir das quais os princpios da gentica comearam a ser desvendados. H algumas razes para o xito alcanado por Mendel, entre elas, a escolha do material experimental e as caractersticas estudadas. Infelizmente, seu trabalho s foi reconhecido em 1900, 16 anos aps sua morte, quando trs pesquisadores (De Vries, Correns e Von Tschermak), independentemente, mostraram que a teoria do monge Agostiniano era correta, razo pela qual a gentica considerada uma cincia do sculo XX. Vale ressaltar que Mendel trabalhou com caractersticas qualitativas, ou seja, variveis descontnuas, simples, pouco influenciadas pelo ambiente e controladas por poucos genes. O estudo da herana de variveis contnuas surgiu a partir de 1876 graas a Francis Galton, Pearson e outros, graas ligao da estatstica com a herana. Melhoramento Gentico Animal Profa. Dra. Marlia Martins

Galton descobriu a tcnica estatstica da regresso e aplicou-a a populaes humanas, para predizer a estatura mdia de filhos, por meio do conhecimento das estaturas dos pais. Apesar de as experincias acumuladas indicarem que as caractersticas quantitativas apresentavam uma base mendeliana de herana, coube a Fisher (1918), professor ingls da poca, unificar uma teoria da herana, alicerada nos princpios de Mendel, que se ajustaria a ambos os tipos de caractersticas: qualitativas e quantitativas. Logo aps a proposio de Fisher, Wright (1922) apresentava uma formulao equivalente da teoria. Posteriormente, Jay L. Lush, na dcada de 1940 e I. Michael Lerner, na de 1950, foram os pioneiros na aplicao prtica dos princpios da gentica quantitativa no melhoramento gentico animal. Com a difuso da inseminao artificial, na dcada de 1940, e a utilizao dos computadores na dcada de 1950 houve massificao dos registros de produo dos animais, permitindo o estabelecimento de programas nacionais de

melhoramento gentico e mais rpida identificao e multiplicao dos gentipos superiores. Entretanto, atribui-se a Charles Henderson e seus colaboradores os avanos na chamada gentica quantitativa, desenvolvendo as Equaes de Modelos Mistos que combinam a estimao de quadrados mnimos com ndice de seleo para derivar estimadores no viciados dos valores genticos de indivduos criados em diferentes ambientes. Hoje so amplamente utilizadas nas avaliaes genticas. Porm, nenhuma destas metodologias requer alguma informao da arquitetura gentica das caractersticas sob seleo. O que se segue na histria do melhoramento gentico das espcies veio preencher esta lacuna. Uma exploso de descobertas nas reas de mtodos de anlise do DNA, de equipamentos sofisticados de anlise de grande quantidade de amostras, de ferramentas estatsticas e de informtica (bioinformtica) propiciaram o surgimento da Genmica, cincia que trata do genoma completo dos diferentes organismos. O que est ocorrendo um espantoso acmulo de dados genmicos que est disposio dos pesquisadores para serem interpretados e utilizados, o que deixa em aberto uma enorme trilha a ser percorrida nos prximos anos.

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A transio da gentica mendeliana para a gentica genmica foi possvel medida que foram desenvolvidas tecnologias como a do DNA recombinante e da amplificao de segmentos de DNA via PCR (Polymerase Chain Reaction). Estas novas tecnologias de anlise molecular da variabilidade do DNA permitem determinar pontos de referncia nos cromossomos, tecnicamente denominados de marcadores moleculares.

03. Perspectivas do Melhoramento Gentico

Em pases desenvolvidos, onde a Gentica Animal j uma ferramenta forte no incremento da produo, as taxas anuais de ganhos genticos pela seleo variam, em mdia, de 1 a 2%. Em pases subdesenvolvidos, como o Brasil, os valores so bem menores, principalmente em razo da pouca sensibilidade de produtores e das Associaes de Raas pela massificao dos programas de melhoramento. Apesar deste entrave principal, algumas Universidades e/ou Instituies de pesquisa, bem como algumas associaes de raa tm intensificado esforos no sentido da realizao de avaliaes genticas. Nos pases desenvolvidos, as perspectivas de alavancagem dos programas de melhoramento gentico esto vinculadas utilizao potencial de novas biotecnologias capazes de promover novos ganhos genticos pela seleo. Entre estas podem ser destacadas: a transferncia de embries, a sexagem do smen e de embries, o uso de ncleos MOET (Multiple Ovulation and Embryo Transfer), a utilizao de seleo assistida por marcadores moleculares (MAS), a clonagem, a transgenia e o mapeamento e o sequenciamento genmico dos animais. Em relao contribuio potencial dos marcadores moleculares no melhoramento animal, alguns exemplos de aplicao comercial j podem ser mencionados: a) Kappa-casena e betalactoglobulina, vinculadas composio do leite; b) gene FEC de ovinos, associado taxa de ovulao; c) receptor de estrognio em sunos (gene ESR), que se relaciona com o tamanho da leitegada; d) receptor de rianodina, associado hipertermia maligna (PSS), cujo gene mutante causa prejuzos econmicos considerveis suinocultura; e) receptor de miostatina,

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associado ao fentipo de musculatura dupla em bovinos e outras espcies, cujo gene mutante confere efeito aditivo no percentual de carcaa. Em longo prazo, o sequenciamento do genoma bovino, recentemente concludo, poder trazer os seguintes benefcios: a) gerao de conhecimento dos mecanismos biolgicos em nvel gnico; b) patenteamento de genes e de marcadores associados s caractersticas de importncia econmica; c)

patenteamento de processos ou de mecanismos de ao gnica relacionados com a resistncia s doenas; d) reduo do uso de produtos qumicos no combate ecto e endoparasitas; e) melhoria da qualidade dos produtos carne e leite; f) dar sustentabilidade atividade pecuria bovina. Em curto prazo, acredita-se que o sequenciamento do genoma bovino possibilitar as seguintes vantagens: a) aumento da eficincia do processo de seleo, por meio da seleo

assistida por marcadores moleculares; b) populaes; c) d) gerao de um grande nmero de informaes de seqncias de DNA; identificar genes candidatos para caractersticas relacionadas sade conhecimento, em nvel molecular, da variabilidade gentica das

e qualidade dos alimentos (Martinez e Machado, 2002).

Atualmente, o uso comercial destas tcnicas limitado pelo alto custo. As perspectivas futuras de otimizao do uso dessas biotecnologias no melhoramento gentico animal so possveis e, com certeza, provocaro nova revoluo na gentica animal. No entanto, em pases subdesenvolvidos como o Brasil, o foco de atuao do melhorista deve ser educar os produtores e dirigentes de Associaes de Raas no sentido de incrementar os programas de avaliao gentica e o uso mais intensivo dos animais comprovadamente superiores nos processos reprodutivos de seus rebanhos, para que ocorra efetivamente a multiplicao desses materiais geneticamente superiores atravs das biotcnicas.

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04. Bases Genticas do Melhoramento

4.1 Introduo Entende-se por populao um conjunto de indivduos que se acasalam e apresentam determinadas caractersticas em comum. A estrutura da populao determinada pela soma dos fatores que afetam os gametas que se unem para formar a prxima gerao. Um dos aspectos importantes do estudo da evoluo a anlise da variabilidade gentica das populaes e do seu comportamento ao longo das geraes. Esses aspectos constituem a preocupao fundamental da gentica de populaes, que procura descrever a composio gentica das populaes bem como sua resposta frente atuao de fatores tais como o tipo de acasalamento, o tamanho da populao, a mutao, a migrao e os vrios tipos de seleo. O estudo das propriedades genticas das populaes designado por Gentica de Populaes. A Gentica de populaes estuda o comportamento dos genes em uma populao, ao invs de olhar apenas para os resultados de simples acasalamentos. Assim, os melhoristas interessados em incrementar a produo devem ter conhecimento deste assunto. Do ponto de vista gentico, uma populao animal pode ser considerada como uma populao de genes. Neste caso, o conceito de populao gentica envolve a idia de troca de genes entre os indivduos, isto , o mecanismo da reproduo sexuada. Portanto, o patrimnio gentico da populao flui entre todos os seus membros e desta forma entende-se que todos os componentes da populao so potencialmente acasalveis entre si.

4.2 Constituio gentica da populao

4.2.1 Frequncias gnicas e genotpicas Para descrever a constituio gentica de um grupo de indivduos, deve-se identificar as propores dos diferentes gentipos e dos distintos alelos de um gene na populao. Melhoramento Gentico Animal Profa. Dra. Marlia Martins

A freqncia gnica diz respeito ao nmero relativo em que um gene se encontra na populao. obtida pelo nmero ou pela proporo de diferentes alelos que ocorrem em cada loco. A freqncia genotpica est relacionada ao nmero de indivduos de um determinado gentipo em relao a todos os componentes da populao. obtida pelo nmero total de indivduos dos diferentes gentipos. Pode ser estimada tambm a partir da freqncia gnica.

4.2.2 Clculo das frequncias gnicas e genotpicas Considerando um par de alelos A e a, define-se uma populao de tamanho N como aquela constituda pelo agrupamento de: nAA indivduos AA nAa indivduos Aa naa indivduos aa A seguir sero apresentadas, em forma de tabelas, a estrutura de clculo das freqncias genotpicas e gnicas.

Tabela 1. Representao das freqncias genotpicas Gentipo Nmero de indivduos Freqncia genotpica AA Aa aa Total
N = nAA + nAa + naa D+H+R=1

nAA nAa naa N

D = nAA/N H = nAa/N R = naa/N 1

Em resumo, a freqncia genotpica calculada da seguinte forma:

D = nAA/N H = nAa/N R = naa/N

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Tabela 2. Representao das freqncias gnicas obtidas pelo n de alelos

Gentipo Nmero de Nmero de Nmero de Total gentipos alelos A alelos a AA nAA 0 Aa aa Total
N = nAA + nAa + naa

nAa naa N 0

f ( A) = p = f ( A) = D +

2nAA + n Aa estimao pelo n de alelos 2N 1 H estimao pelo conhecimento da frequncia genotpica 2

f (a ) = q = f (a ) = R + p + q =1

2naa + nAa estimao pelo n de alelos 2N 1 H estimao pelo conhecimento da frequncia genotpica 2

D + H + R =1

Como pode ser verificado, a freqncia gnica pode ser obtida tanto pelo nmero de diferentes alelos que ocorrem em cada loco como tambm pelo conhecimento das freqncias genotpicas.

Exemplo: Considerando uma populao de 1000 bovinos, sendo 100 vermelhos (homozigotos dominantes AA), 700 rosilhos (heterozigotos Aa) e 200 brancos (homozigotos recessivos aa), as freqncias seriam dadas de acordo com a Tabela 1.

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Gentipo Nmero de indivduos Freqncia genotpica AA Aa aa Total nAA = 100 nAa = 700 naa = 200 N = 1000 D = nAA/N = H = nAa/N = R = naa/N=
100 = 0,10 = 10% 1000 700 = 0, 70 = 70% 1000 200 = 0, 20 = 20% 1000

N 1000 = = 1, 00 = 100% N 1000

A freqncia gnica pode ser obtida pelo conhecimento do nmero de alelos por gentipo, como dado na Tabela 2.

Gentipo Nmero de Nmero de Nmero de Total gentipos alelos A alelos a AA nAA = 100 200 0 200 Aa aa Total nAa = 700 naa = 200 N = 1000 700 0 900 700 400 1100 1400 400 2000

Assim,
2n AA + n Aa 200 + 700 900 = f ( A) = p = = = 0, 45 = 45% 2N 2000 2000

f ( A) = p = Ou f ( A) = D + f (a) = q =

1 1 H = f ( A ) = 0,10 + 0, 70 = 0, 45 2 2

2naa + n Aa 400 + 700 1100 = f (a) = q = = = 0, 55 = 55% 2N 2000 2000

Ou
f (a ) = R + 1 1 H = f (a ) = 0, 20 + 0, 70 = 0, 55 2 2

Neste caso, a freqncia fenotpica igual a genotpica, ou seja, 10% vermelhos (AA), 70% de rosilhos (Aa) e 20% brancos (aa).
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4.3 Teorema de Hardy-Weinberg

G. H. Hardy

W. Weinberg

At o momento, a descrio da constituio gentica de uma populao foi feita numa dada gerao. O que acontece com as freqncias allicas e genotpicas nas geraes futuras? A resposta foi dada por Hardy-Weinberg. Este teorema, formulado em 1908 por estes cientistas, tem o seguinte enunciado:
Em uma populao infinitamente grande e sob sistema de acasalamento ao acaso, ambas as frequncias gnicas e genotpicas permanecem constantes ao longo das geraes, na ausncia de migrao, mutao e seleo.

Uma populao assim caracterizada encontra-se em equilbrio gentico. Na natureza, entretanto, no existem populaes sujeitas rigorosamente a essas condies.

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4.3.1 Descrio dos requisitos necessrios ao Teorema

Ausncia de seleo: Este requisito ignora o princpio da seleo natural que estabelece, basicamente, que os indivduos melhor adaptados tm maior chance de sobrevivncia e reproduo. Neste sentido, se existirem genes associados adaptabilidade dos indivduos, ou seja, alelos que determinem aos seus portadores maior chance de deixar mais filhos para a gerao seguinte, estes alelos devero passar para a gerao seguinte em uma freqncia maior que seus pares. E desta forma, o efeito da seleo natural mudar as freqncias dos genes na populao. A seleo artificial executada pelo homem constitui a fora mais importante para o aumento da freqncia gnica em uma populao. Uma populao sujeita a uma seleo contnua nunca atingir o equilbrio gentico, porque, em cada gerao, certos indivduos portadores de certas combinaes gnicas mais favorveis deixaro um maior nmero de filhos. Por outro lado, genes que sofreram seleo contrria por muitas geraes, como os letais, tm freqncia baixa. Os efeitos da seleo artificial so opostos queles observados quando o acasalamento ao acaso.

Ausncia de mutao: As mutaes gnicas conduzem a alteraes na seqncia de bases nitrogenadas de um segmento do DNA e, consequentemente, produzem novas formas alternativas, os alelos. tida como um processo sistemtico que altera a freqncia gnica, podendo ocorrer em qualquer clula, tanto em clulas da linhagem germinativa como em clulas somticas, sendo que naquelas as mutaes podem ser transmitidas prole, mas as somticas no. Considerando-se que a taxa de mutao da maioria dos genes da ordem de 10-4 a 10-7, so necessrias muitas geraes para produzir modificaes considerveis nas freqncias gnicas de um pool de genes, apenas por presso de mutao. Alm desse aspecto, deve-se salientar que as mutaes, em geral, so prejudiciais e desprezveis em termos de importncia do ponto de vista do melhoramento animal.

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Ausncia de migrao: Os efeitos da migrao sobre a freqncia de um alelo, em uma populao receptora, dependem de dois aspectos: da taxa de migrao e das diferenas de freqncia entre os migrantes e a populao receptora.

Populao grande: O tamanho populacional influi diretamente na estabilidade gentica, tendo em vista que em pequenas populaes as freqncias gnicas so sujeitas a flutuaes ao acaso originadas pela amostragem de gametas. Essas flutuaes ao acaso so denominadas de oscilao gentica ou deriva gentica. Os gametas que transmitem genes para a gerao seguinte, carregam a amostra dos genes da gerao parental e, se a amostra no for grande, as freqncias gnicas sero sujeitas a modificaes entre uma gerao e a seguinte. Essa mudana ao acaso da freqncia gnica o processo dispersivo. Neste sentido, em populaes pequenas, as alteraes de freqncia gnica ocorridas ao acaso podem se fixar no grupo. J em populaes grandes as variaes de freqncias se equilibram e a freqncia dos genes no grupo como um todo permanece inalterada.

4.3.2 Demonstrao do teorema Na derivao da lei de Hardy-Weinberg, trs etapas so consideradas:

1 etapa: dos pais produo de gametas Considerando dois alelos A e a, com freqncias p e q, os gentipos da gerao paterna e suas respectivas freqncias so: AA = D, Aa = H e aa = R. Esses gentipos produzem dois tipos de gametas, A e a, com as seguintes freqncias: A = p = D + 1/2H e a = q R + 1/2H.

2 etapa: dos gentipos da unio dos gametas aos gentipos nos zigotos produzidos O acasalamento ao acaso dos indivduos equivalente unio ao acaso dos gametas que eles produzem. Portanto, as freqncias genotpicas nos zigotos

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formados so obtidas pelo produto das freqncias dos gametas que se unem para formar os zigotos, ou seja, vulos e suas freqncias A a p q Espermatozides e A Suas freqncias a p q p2 AA pq Aa pq Aa q2aa

As freqncias genotpicas nos zigotos so: Gentipos Frequncias AA p2 Aa 2pq Aa q2

Em resumo: AA: a probabilidade de um vulo portador do gene A ser fecundado por um espermatozide portador do gene A : p x p = p2 aa: a probabilidade de um vulo portador do gene a ser fecundado por um espermatozide portador do gene a : q x q = q2 Aa: a probabilidade de um vulo portador do gene A ser fecundado por um espermatozide portador do gene a : p x q = pq Aa: a probabilidade de um vulo portador do gene a ser fecundado por um espermatozide portador do gene A : q x p = qp

3 etapa: dos gentipos dos zigotos freqncia gnica na prognie Pelas freqncias genotpicas dos zigotos, as freqncias gnicas nos descendentes podem ser obtidas por:

Freqncia de A = p2 + 1 2pq 2 Freqncia de a = q2 + 1 2pq 2

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Portanto, as propriedades de uma populao, com respeito a um locus apenas, expressas na lei de Hardy-Weinberg, so: 1) as freqncias genotpicas nos descendentes, sob acasalamento ao acaso, dependem somente das freqncias gnicas na gerao dos pais e no da freqncia genotpica; 2) independente das freqncias genotpicas da gerao paterna, o equilbrio atingido em uma gerao, e: 3) mantidas as condies especificadas para o equilbrio, as freqncias gnicas e genotpicas permanecem constantes, gerao aps gerao.

Exemplo1: Para exemplificar numericamente este teorema, vamos supor uma populao com as seguintes freqncias gnicas: p = freqncia do gene B = 0,9 q = freqncia do gene b = 0,1 Pode-se estimar a freqncia genotpica dos descendentes utilizando a frmula de Hardy-weinberg: (p2 +q2)= p2 + 2pq + q2 = = (0,9)2 + 2(0,9) . (0,1) + (0,1)2 = = 0,81 + 0,18 + 0,01 81%BB 18%Bb 1%bb

Exemplo 2: A frmula de Hardy-Weinberg pode ser utilizada para estimar a freqncia de determinado par de alelos em uma populao em equilbrio, conhecendo-se o aspecto fenotpico. Supondo que, em uma populao em equilbrio, 16% dos indivduos so mopes e o restante tem viso normal, qual a freqncia de genes recessivos e dominantes para esse carter nessa populao, sabendo-se que a miopia determinada por gene recessivo? Pela frmula de Hardy-Weinberg p2 + 2pq + q2 = 1 Onde: p = freqncia do gene M
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q = freqncia do gene m q2 = 16% = 0,16 q=

0,16 = 0, 4

q = 0,4 Como: p+q=1 p=1q p = 1 0,4 p = 0,6 A freqncia do gene m 0,4 e a do gene M 0,6. Sabendo disso, podemos estimar a freqncia genotpica do seguinte modo:

p2

2pq

q2

(0,6)2
MM = 0,36%

2. (0,6) . (0,4)

(0,4)2

Logo, a freqncia genotpica :

Mm = 0,48 = 48% mm = 0,16 = 16%

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