Aceites esenciales Definicin Los componentes voltiles provenientes de plantas han atrado la atencin del hombre desde la antigedad

como principios aromticos o especies de gran complejidad en su composicin. El estudio de los aceites esenciales como materias primas bsicas para la industria de fragancias y sabores, se ha transformado en una de las reas de investigacin y desarrollo ms importantes para muchos pases. Inicialmente considerados como material de deshecho del metabolismo de las plantas, la importancia biolgica de los aceites esenciales ha sido reconocida slo recientemente. Los aceites esenciales son las fracciones lquidas voltiles, generalmente destilables por arrastre con vapor de agua, que contienen las sustancias responsables del aroma de las plantas y que son importantes en la industria cosmtica (perfumes y aromatizantes), de alimentos (condimentos y saborizantes) y farmacutica (saborizantes). Los aceites esenciales generalmente son mezclas complejas de hasta ms de 100 componentes que pueden tener la siguiente naturaleza qumica: Compuestos alifticos de bajo peso molecular (alcanos, alcoholes, aldehdos, cetonas, steres y cidos), Monoterpenos, Sesquiterpenos, Fenilpropanos.

En su gran mayora son de olor agradable, aunque existen algunos de olor relativamente desagradable como por ejemplo los componentes que forman parte de la fraccin aromtica del ajo y la cebolla, los cuales contienen compuestos azufrados. Los aceites pueden estar asociados formando mezclas con otros productos naturales como es el caso de las resinas y productos relacionados. Resinas y combinaciones de resinas Dentro de este grupo de productos naturales, podemos encontrar a su vez una serie de posibles combinaciones o mezclas: 1. Resinas, son productos amorfos slidos o semislidos de naturaleza qumica compleja. Pueden ser de origen fisiolgico o fisiopatolgico. Ejemplos: resina colofonia, obtenida por separacin de la oleorresina trementina. Composicin: cido abitico y derivados resina jalapa, extraccin alcohlica de la raz de Exogonium purga. Composicin: glicsidos con accin como catrticos. 2. Oleorresinas, son mezclas homogneas de resinas y aceites esenciales. Ejemplos: oleorresina trementina, obtenida por incisin en los troncos de diversas especies de Pinus. Composicin: resina (colofonia) y aceite esencial (esencia de trementina) que se separa por destilacin por arrastre con vapor oleorresina copaiba, obtenida por incisin en los troncos de diversas especies de Copaiba. Composicin: resina y aceite esencial que se separa por destilacin por arrastre con vapor. Tambin se utiliza el trmino oleorresina para nombrar los extractos vegetales obtenidos mediante el uso de solventes, los cuales deben estar virtualmente libres de dichos solventes. Se utilizan extensamente para la sustitucin de especias de uso alimenticio y farmacutico por sus ventajas (estabilidad y uniformidad qumica y microbiolgica, facilidad de incorporar al producto terminado). 3. Goma-resinas, son extractos naturales obtenidos de un rbol o planta. Estn compuestos de mezclas de gomas y resinas.
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Ejemplo: guta, obtenida por incisiones de la corteza de Garcinia handburyi. Composicin: resina y un polisacrido (arabina). Si la fuente de la goma-resina tambin contiene un aceite esencial, se denomina oleo-goma-resina. Ejemplo: asaftida (obtenida por incisiones en las races y rizomas de diversas especies del gnero Ferula), mirra (obtenida por incisiones en las cortezas de diversas especies del gnero Commiphora). 4. Blsamos, son extractos naturales obtenidos de un arbusto o un rbol. Se caracterizan por tener un alto contenido de cido benzoico y cinmico, as como sus correspondientes steres. Ejemplos: blsamo de benju, obtenido por incisin de las cortezas de diversas especies del gnero Styrax blsamo de Per, obtenido por incisin de los troncos de rboles del gnero Myroxylon. Clasificacin de los aceites esenciales Los aceites esenciales se clasifican con base en diferentes criterios: consistencia, origen y naturaleza qumica de los componentes mayoritarios. De acuerdo con su consistencia los aceites esenciales se clasifican en esencias fluidas, blsamos y oleorresinas. Las esencias fluidas son lquidos voltiles a temperatura ambiente. Los blsamos son de consistencia ms espesa, son poco voltiles y propensos a sufrir reacciones de polimerizacin, son ejemplos el blsamo de copaiba, el blsamo del Per, Benju, blsamo de Tol, Estoraque, etc. Las oleorresinas tienen el aroma de las plantas en forma concentrada y son tpicamente lquidos muy viscosos o sustancias semislidas (caucho, gutapercha, chicle, oleorresina de paprika, de pimienta negra, de clavero, etc.). De acuerdo a su origen los aceites esenciales se clasifican como naturales, artificiales y sintticas. Los naturales se obtienen directamente de la planta y no sufren modificaciones fsicas ni qumicas posteriores, debido a su rendimiento tan bajo son muy costosas. Los artificiales se obtienen a travs de procesos de enriquecimiento de la misma esencia con uno o varios de sus componentes, por ejemplo, la mezcla de esencias de rosa, geranio y jazmn enriquecida con linalool, o la esencia de ans enriquecida con anetol. Los aceites esenciales sintticos como su nombre lo indica son los producidos por la combinacin de sus componentes los cuales son la mayora de las veces producidos por procesos de sntesis qumica. Estos son ms econmicos y por lo tanto son mucho ms utilizados como aromatizantes y saborizantes (esencias de vainilla, limn, frutilla, etc.). Desde el punto de vista qumico y a pesar de su composicin compleja los aceites esenciales se pueden clasificar de acuerdo con los componentes mayoritarios. Segn esto los aceites esenciales ricos en monoterpenos se denominan aceites esenciales monoterpnicos (por ej. hierbabuena, albahaca, salvia, etc.). Los ricos en sesquiterpenos son los aceites esenciales sesquiterpnicos (por ej. copaiba, pino, junpero, etc.). Los ricos en fenilpropanos son los aceites esenciales fenilpropanoides (por ej. clavo, canela, ans, etc.). Aunque esta clasificacin es muy general resulta til para estudiar algunos aspectos fitoqumicos de los monoterpenos, los sesquiterpenos y los fenilpropanos, sin embargo existen clasificaciones ms complejas que tienen en cuenta otros aspectos qumicos. Distribucin y estado natural Los aceites esenciales se encuentran ampliamente distribuidos en plantas que incluyen las Compuestas, Labiadas, Laurceas, Mirtceas, Pinceas, Rosceas, Rutceas, Umbelferas, etc. Se les puede encontrar en diferentes partes de la planta: en las hojas (ajenjo, albahaca, eucalipto, hierbabuena, mejorana, menta, pachul, romero, salvia, etc.), en las races (anglica, crcuma, jengibre, sndalo, sasafrs, valeriana, vetiver, etc.), en el pericarpio del fruto (ctricos como limn,
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mandarina, naranja, etc.), en las semillas (ans, cardamomo, hinojo, comino, etc.), en el tallo (canela, etc.), en las flores (lavanda, manzanilla, piretro, tomillo, rosa, etc.) y en los frutos (nuez moscada, perejil, pimienta, etc.). Aunque en los aceites esenciales tanto los mono-, los sesquiterpenos y los fenilpropanos se les encuentra en forma libre, ms recientemente se han investigado los que estn ligados a carbohidratos, ya que se considera que son los precursores inmediatos del aceite como tal. Extraccin y aislamiento Los diferentes procesos de extraccin utilizados en la obtencin de aceites esenciales y extractos aromticos, se pueden resumir de la siguiente forma:

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Mtodo
1. Mtodos directos

Mtodos de extraccin de mezclas aromticas Procedimiento

1.1.1. Compresin de cscaras 1.1. Expresin 1.1.2. Raspado de cscaras 1.2. Exudado 1.2.1. Lesiones mecnicas en cortezas

Productos obtenidos

aceites esenciales ctricos

gomas, resinas, blsamos

2. Destilacin 2.1. Directa 2.2. Por arrastre con vapor (directo, indirecto, a presin, a vaco) 2.3. Destilacin-maceracin almendras, mostaza, ajo, hojas de abedl (liberacin enzimtica de agliconas en agua caliente) 3.1.1. En caliente 3. Extraccin con solventes 3.1 Solventes voltiles 3.1.2. En fro concretos y absolutos, resinoides en fro, oleoresinas pomadas en caliente, absolutos de pomadas lavados y infusiones y resinoides alcohlicos en caliente, oleoresinas aceites esenciales, y aguas aromticas

3.2.1. En caliente 3.2. Solventes fijos (grasas y aceites) 3.2.2. En fro 4. Procesos de extraccin con fluidos en condiciones subcrticas y supercrticas

pomadas en fro, lavados y absolutos de enflorados

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Los aceites esenciales se pueden extraer de las muestras vegetales mediante diferentes mtodos como: expresin, destilacin con vapor de agua, extraccin con solventes voltiles, enfleurage y con fluidos supercrticos. En la expresin el material vegetal es exprimido mecnicamente para liberar el aceite y este es recolectado y filtrado. Este mtodo es utilizado para el caso de las esencia de ctricos. En la destilacin por arrastre con vapor de agua, la muestra vegetal generalmente fresca y cortada en trozos pequeos, se coloca en una recipiente cerrado y sometida a una corriente de vapor de agua sobrecalentado, la esencia as arrastrada es posteriormente condensada, recolectada y separada de la fraccin acuosa. Esta tcnica es muy utilizada especialmente para esencias fluidas, especialmente las utilizadas para perfumera. Se utiliza a nivel industrial debido a su alto rendimiento, la pureza del aceite obtenido y porque no requiere tecnologa sofisticada. En el mtodo de extraccin con solventes voltiles, la muestra seca y molida se pone en contacto con solventes tales como alcohol, cloroformo, etc. Estos solventes solubilizan la esencia pero tambin solubilizan y extraen otras sustancias tales como grasas y ceras, obtenindose al final una esencia impura. Se utiliza a escala de laboratorio pues a nivel industrial resulta costoso por el valor comercial de los solventes, porque se obtienen esencias impurificadas con otras sustancias, y adems por el riesgo de explosin e incendio caractersticos de muchos solventes orgnicos voltiles. En el mtodo de enflorado o enfleurage, el material vegetal (generalmente flores) es puesto en contacto con una grasa. La esencia es solubilizada en la grasa que acta como vehculo extractor. Se obtiene inicialmente una mezcla (concreto) de aceite esencial y grasa la cual es separada posteriormente por otro medios fisico-qumicos. En general se recurre al agregado de alcohol caliente a la mezcla y su posterior enfriamiento para separar la grasa (insoluble) y el extracto aromtico (absoluto). Esta tcnica es empleada para la obtencin de esencias florales (rosa, jazmn, azahar, etc.), pero su bajo rendimiento y la difcil separacin del aceite extractor la hacen costosa. El mtodo de extraccin con fluidos supercrticos, es de desarrollo ms reciente. El material vegetal cortado en trozos pequeos, licuado o molido, se empaca en una cmara de acero inoxidable y se hace circular a travs de la muestra un fluido en estado supercrtico (por ejemplo CO2), las esencias son as solubilizadas y arrastradas y el fluido supercrtico, que acta como solvente extractor, se elimina por descompresin progresiva hasta alcanzar la presin y temperatura ambiente, y finalmente se obtiene una esencia cuyo grado de pureza depende de las condiciones de extraccin. Aunque presenta varias ventajas como rendimiento alto, es ecolgicamente compatible, el solvente se elimina fcilmente e inclusive se puede reciclar, y las bajas temperaturas utilizadas para la extraccin no cambian qumicamente los componentes de la esencia, sin embargo el equipo requerido es relativamente costoso, ya que se requieren bombas de alta presin y sistemas de extraccin tambin resistentes a las altas presiones. Monoterpenos y sesquiterpenos Los monoterpenos y sesquiterpenos son terpenos de 10 y 15 tomos de carbonos derivados biosintticamente de geranilpirofosfato (GPP) y farnesilpirofosfato (FPP) respectivamente. La Figura 1 muestra ejemplos de monoterpenos y sesquiterpenos naturales. De acuerdo con su estructura se les clasifica segn el nmero de ciclos como acclicos, monocclicos, bicclicos, etc.

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mentano

tuyano

carano

mirceno

canfano

CH2OH CHO

geraniol

geranial

humulano bisabolano elemano

cadinano

eremofilano

cariofilano

Figura 1. Ejemplos de mono- y sesquiterpenos naturales

Biosntesis Los monoterpenos y en general todos los compuestos terpenoides naturales se biosintetizan por la ruta de la acetilcoenzima a travs de un intermedio comn que es el cido mevalnico. Sin embargo, recientemente se ha propuesto que algunos terpenoides no se originan por esta ruta, sino por una ruta alterna que puede involucrar piruvato, gliceraldehdo-3-fosfato y un intermedio de 5 tomos de carbono, la 1-desoxi-xilulosa-5-fosfato. Secuencia biosinttica 1. Biosntesis del cido mevalnico Inicialmente se condensan dos molculas de acetilCoA, con la participacin hipottica de una -cetotiolasa y una enzima condensante. Esta unidad es atacada por otra unidad de acetilCoA que ha perdido un H-. La hidrlisis de una de las dos
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funciones tioster da lugar a la -hidroxi--metilglutarilcoenzima-A. Una segunda hidrlisis del otro grupo tioster seguida de dos reducciones sucesivas con una reductasa NADPH-dependiente se llega al cido mevalnico. 2. Biognesis de IPP y DMAPP El cido mevalnico es el precursor de las dos unidades bsicas que dan origen a los terpenoides: Isopentenilpirofosfato (IPP) y dimetilalilpirofosfato (DMAPP). Inicialmente, una molcula de cido mevalnico es pirofosfatada por dos unidades de ATP para originar mevalonil-pirofosfato. La molcula sufre un proceso concertado de descarbonatacin con la participacin de otra molcula de ATP. De esta manera se origina una molcula de Isopentenilpirofosfato (IPP). La isomerizacin del enlace doble del IPP da origen a la unidad de DMAPP. 3. Condensacin cabeza-cola de IPP y DMAPP Una unidad de IPP puede condensarse con muchas unidades DMAPP mediante un proceso de condensacin comnmente denominado condensacin "cabeza-cola", siendo la cabeza la funcin pirofosfato y la cola el extremo donde estn ubicados los metilos. El proceso de condensacin de dos molculas de 5 tomos de carbono (IPP y DMAPP) da origen a una molcula de 10 tomos de carbono: geranilpirofosfato (GPP). Esta sustancia es el precursor inmediato de todos los monoterpenos naturales. La condensacin de geranilpirofosfato con una nueva unidad IPP da origen al farnesilpirofosfato (FPP), el cual es el precursor de todos los sesquiterpenos naturales.

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OH acetil-CoA HO2C cido mevalnico OH

H OPP Hs isopentenil PP (IPP) HR

isomerasa

OP dimetilalilpirofo (DMAPP)

OPP DMAPP

OPP HR Hs IPP E OPP geranil PP (GPP) HR HS

OPP

OPP

OPP GPP HR Hs

OPP

HR

HS

OPP

OPP farnesil PP (FPP) Figura 1. Biosntesis de mono y sesquiterpenos Ejemplos de monoterpenos y sesquiterpenos naturales La Figura 2 muestra varios ejemplos de monoterpenos naturales representantes de varias clases de esqueletos como mentano, pinano, canfano, etc. La Figura 3 muestra ejemplos de sesquiterpenos naturales con varias clases de esqueletos.

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CH2OH CH2OH CHO

Nerol

Geraniol

Citronelal

Limoneno

OH

Car-3-eno

Alcohol Fenchlico

Fenchona

Thuyona

O H O O

O O

alfa-Pineno

Alcanfor gama-Thuyaplicina Nepetalactona

Figura 2. Ejemplos de monoterpenos

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HOCH2 OH

Farnesol

Nerolidol

gama-Bisaboleno

alfa-Cadineno

beta-Selineno

Cariofileno

OH HO COOH O

Carotol

Acido abscsico

Figura 3. Ejemplos de sesquiterpenos

Mtodos de anlisis Ensayos de reconocimiento Debido a la diversidad de grupos funcionales que pueden estar presentes en los componentes mono- y sesquiterpnicos de un aceite esencial no existe una prueba especfica para su reconocimiento. Sin embargo existen unos pocos procedimientos experimentales que permiten reconocer algunos de ellos por su coloracin con diferentes reactivos, su absorcin de luz UV de 254 nm y su Rf en cromatografa en capa fina. A manera de ejemplo la Tabla 1 resume las caractersticas de varios monoterpenos y su comportamiento al analizarlos por cromatografa en capa fina con varios agentes reveladores. Por ejemplo, el limoneno se reconoce en las placas de TLC porque no absorbe luz UV 254 nm, adiciona bromo, no forma un derivado 2,4-dinitrofenilhidrazona y produce color pardo con el cido sulfrico. Otros reactivos tiles para revelar monoterpenos y sesquiterpenos son anisaldehdo-cido sulfrico, vainillina-cido sulfrico y cido fosfomolbdico. Tabla 1. Reconocimiento de Monoterpenos por TLC
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TERPENO Limoneno -Pineno Pulegona Geraniol Carvona p-Cimeno -Terpineol 1,8-Cineol

UV + + + -

ENSAYO BROMO + + + + + + -

ENSAYO 2,4-DNFH + + -

ENSAYO H2SO4 Pardo Pardo Amarillo Prpura Rosa Verde Verde

Mtodos fundamentales de anlisis de aceites esenciales 1. determinaciones fsicas 1.1. aroma 1.2. peso especfico 1.3. ndice de refraccin 1.4. desviacin ptica (poder rotatorio) 1.5. solubilidad en mezclas alcohol-agua (alcoholes rebajados) 2. determinaciones qumicas 2.1. ndice de acidez libre 2.2. ndices de saponificacin y ster 2.3. determinacin de aldehdos y cetonas 2.3.1. formacin de fenilhidrazonas 2.3.2. formacin de oximas 2.3.3. formacin de semicarbazonas 2.3.4. mtodo del bisulfito 2.4. ndice de acetilo 2.5. tcnicas cromatogrficas: TLC, TLC/AgNO3, HRGC, HPLC 2.6. mtodos espectroscpicos: UV, IR, GC-MS, 1H-, 13C-NMR Extraccin y aislamiento Como se mencion anteriormente, la mayora de monoterpenos y sesquiterpenos se encuentran presentes en los aceites esenciales de diversas plantas. A partir de dichos aceites es posible realizar su aislamiento mediante la utilizacin de uno o varios mtodos cromatogrficos tales como la cromatografa en columna, en capa fina y HPLC. Para las cromatografas en columna y en capa fina se utiliza ampliamente la slica gel como fase estacionaria. Como fase mvil se emplea solventes apolares puros o mezclados. Sin embargo actualmente se utilizan tcnicas de separacin ms eficientes y rpidas como la cromatografa lquida de alta eficiencia HPLC, y la cromatografa de gases (GC), as como tambin combinaciones online HPLC-GC-MS.
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Esta ltima tcnica gracias al desarrollo reciente de columnas capilares de alta resolucin, permite analizar mezclas complejas presentes en aceites esenciales, e identificar los componentes a partir de los tiempos de retencin a travs de los denominados Indices de Retencin de Kovats (IK). Estos valores son caractersticos para cada componente y existen bases de datos con los ndices de muchos componentes de aceites esenciales. Los valores IK se determinan en dos columnas cromatogrficas una polar (por ejemplo Carbowax 20M) y una apolar (por ejemplo SE-52, DB-5). Adicionalmente, la tcnica acoplada Cromatografa de Gases-Espectrometra de Masas (GC-MS), permite obtener el espectro de masas de cada componente con el cual se obtiene el peso molecular e informacin estructural. As mismo existen bases de datos con los espectros de masas de muchos componentes, por lo cual el ndice de Kovats (determinado en dos columnas de diferente polaridad) y el espectro de masas son criterios para la asignacin qumica de muchos componentes de aceites esenciales, no solo monoterpenos sino tambin otros tipos de sustancias caractersticas de dichos aceites. Ms recientemente se han desarrollado columnas cromatogrficas quirales para la separacin de componentes pticamente activos, y se han desarrollado mtodos para el anlisis combinado HPLC-MS y HPLC-NMR de mezclas de sesquiterpenos. Caracterizacin espectral Los monoterpenos y sesquiterpenos en un buen nmero se pueden caracterizar qumicamente a partir de los datos de cromatografa de gases y los espectros de masas tal como se anot anteriormente, pero cuando existen dudas de tal caracterizacin se recurre a los mtodos espectrales como Infrarrojo, Ultravioleta y Resonancia Magntica Nuclear. Espectro infrarrojo El espectro infrarrojo permite detectar la presencia de grupos hidroxilo, carbonilo, anillos aromticos, enlaces dobles C=C cis y trans, etc. Para determinar el espectro basta con colocar una gota del componente en una celda de NaCl. Espectro ultravioleta El espectro UV de los monoterpenos y sesquiterpenos permite el reconocimiento de grupos funcionales y grupos cromforos. Por ejemplo el limoneno presenta un mximo de absorcin en 262 nm (E=6400). En general, la espectrofotometra ultravioleta tiene una utilidad limitada en el estudio de la gran mayora de los aceites esenciales terpnicos, ya que pocos terpenos tienen grupos cromforos. Sin embargo, en la fraccin no voltil de los aceites esenciales ctricos se encuentran componentes carotenoides o con ncleos heterocclicos oxigenados (cumarinas, furocumarinas sustituidas y polimetoxiflavonas), lo que da a estas esencias un comportamiento caracterstico en el UV. Esta particularidad se ha utilizado para la puesta a punto de mtodos que permite evaluar la calidad y la genuinidad, identificar el origen geogrfico de una muestra, la tecnologa empleada para su extraccin o la poca de produccin del aceite. Espectro de Resonancia Magntica Nuclear Gracias a los desarrollos de la NMR se cuenta con bases de datos de los espectros, especialmente de 13C-NMR para los monoterpenos y sesquiterpenos ms frecuentes. En la Figura 4 se presentan los desplazamientos qumicos de los carbonos de varios monoterpenos y varios sesquiterpenos.

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17.6 131.1 25.6 26.8 124.4 39.8

16.1 136.9 125.3 58.6

17.6 131.5 25.6 27.7 124.5 42.2

22.8 73.3 111.5 145.1

OH

OH

GERANIOL
17.4 130.8 25.4 125.0 26.9 39.7 13.7 134.9 25.6 124.3 39.8 15.9 137.1 58.6 124.7 139.0

LINALOOL
115.5 17.1 145.9 26.1 112.9 30.8 124.4 131.0 25.1

OH

FARNESOL

MIRCENO

17.4 132.9 26.3 27.2 123.1 32.5

24.4 162.1 128.7

17.4 132.2 25.3 123.5 26.0 40.5

17.0 162.1 127.5 190.0

CHO

CHO
189.4

cis-CITRAL
22.3 31.9 35.0 23.5 50.4 25.8 21.0 16.0 45.6 70.9 25.9 44.6 71.9 26.7 120.7 23.1 132.9 30.9 23.6

trans-CITRAL
23.8 133.2 120.8 30.6 41.2 149.7 20.5 108.4 30.9 28.0

OH

OH
27.1

MENTOL
15.4 135.2 143.8 31.3 42.7 147.2 20.2 110.3

TERPINEOL
22.2

LIMONENO
19.5 20.0 46.6 30.1 9.7 57.0 43.2

O
197.7 43.1

131.5 119.6 116.5 34.0 20.6 20.6 28.5 24.8 140.9

O
214.7

27.4

43.2

CARVONA

TERPINENO

ALCANFOR

Figura 4. Desplazamientos qumicos (ppm) de varios mono- y sesquiterpenos Por otra parte, el desarrollo reciente de los mtodos bidimensionales homo- y heteronucleares, han permitido la determinacin estructural fina de los terpenoides y dems sustancias naturales, eliminando la ambigedad en la asignacin de las seales observadas. Espectrometra de Masa En relacin con el estudio de aceites esenciales el acoplamiento del HRGC a la Espectrometra de Masa (GC-MS) es el que ha recibido mayor atencin desde su introduccin. La tcnica acoplada GC-MS permite obtener el espectro de masas de cada componente eludo. Se obtiene el dato de su peso molecular e informacin estructural. Existen bases de datos con los espectros de masas de muchos componentes, por lo cual el ndice de Kovats (determinado en dos columnas de
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diferente polaridad) y el espectro de masas son criterios para la identificacin qumica de muchos de los componentes de un aceite esencial, sean monoterpenos u otros tipos de sustancias caractersticas de dichos aceites. En el acoplamiento de GC-MS, la tcnica de ionizacin ms utilizada es la de impacto electrnico (EI). Sin embargo la tcnica de ionizacin qumica (CI) tiene cada vez ms aplicaciones, por la mayor informacin que permite obtener Fenilpropanos Los fenilpropanos son sustancias naturales ampliamente distribuidas en los vegetales caracterizadas por un anillo aromtico unido a una cadena de 3 carbonos y derivados biosintticamente del cido shikmico. La Figura 5 muestra varios ejemplos de fenilpropanoides ampliamente distribuidos. Ntese como la cadena lateral puede presentar varios estados de oxidacin (grupos metilo, hidroximetileno, aldehdo y carboxilo) e insaturacin. El anillo aromtico generalmente est sustituido en los carbonos 3, 4 y 5, siendo estos sustituyentes grupos hidroxilo, metoxilo o metilndioxi, principalmente.
OH HO OCH3 Alcohol hidrocinamlico Alcohol coniferlico Cinamaldehdo OH CHO

CH3O Ans-cetona

HO OCH3 Eugenol

HO OCH3 Isoeugenol CH3O O O Isosafrol Isomiristicina OH CH3O

O O Safrol CH3O O O Miristicina GluO

O O

OCH3 Coniferina (glicsido)

O O Apiol

OH

HO HO OH Elemicina CH3O Anetol

Figura 5. Ejemplos de fenilpropanos naturales presentes en aceites esenciales Biosntesis

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Los fenilpropanos presentes en los aceites esenciales se originan biosintticamente a partir del cido shikmico. El cido shikmico se aisl inicialmente de la planta asitica Illicium sp. (Fam. Illiciaceae) y es reconocido como un compuesto que es el punto de partida para un vasto nmero de compuestos naturales de muchas clases. Aunque es un discreto constituyente vegetal, no hay duda de que es un metabolito universal de las plantas superiores. El cido shikmico es el precursor de los constituyentes vegetales que contienen anillos aromticos diferentes a los formados por la ruta de la malonilcoenzima-A Hay en muchos casos dos patrones estructurales claros que permiten reconocer los compuestos aromticos derivados biosintticamente desde el cido shikmico: el patrn de oxigenacin, y la presencia de anillos aromticos ligados a cadenas de tres tomos de carbono (patrn C6C3). Mientras que en los metabolitos aromticos originados por la va de la malonilcoenzima-A, los grupos oxigenados se hallan en disposicin meta entre s, en el caso de los originados a partir del cido shikmico, los grupos oxigenados estn en disposicin orto diorto entre s. La Figura 6 esquematiza la biosntesis de fenilpropanoides a travs de la formacin del cido shikmico. Este precursor es convertido posteriormente en los aminocidos fenilalanina o tirosina los cuales por accin enzimtica dan origen bien sea al cido cinmico o p-hidroxicinmico (tambin llamado cido p-cumrico por otros autores). Estos dos cidos aromticos son los precursores directos de los fenilpropanos naturales.

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OP O O OH OH OP Pi

O HO O CH2 Pi O OH 5-dehidroquinato COOH fosfoenolpirvico O OH

HO OH OH

fosfoenolpiruvato COOH

eritrosa-4-fosfato

OP

COOH

OH OH O O O

HO OH

OH O

ATP

ADP

PO OH NH2

OH

Pi

cido shikimico COOH

OH O O

OH O

OH

CO2 H2O OH OH O 1) p-hidroxilacin

2) metilacin

cido fenilpirvico OH O
reduccin

fenilalanina OH

NH3

cido cinmico

reduccin

OMe

OMe

OMe anetol

Figura 6. Biosntesis de fenilpropanoides a travs de la formacin del cido shikmico

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Mtodos de anlisis Extraccin y aislamiento Los fenilpropanos presentes en aceites esenciales se extraen con la misma metodologa descrita anteriormente para monoy sesquiterpenos. Sin embargo, debido a su anillo aromtico presentan ventajas en su deteccin por TLC y HPLC pues absorben luz ultravioleta (254 nm) y no requieren ser revelados con agentes qumicos, ni necesitan ser derivatizados, y por lo tanto pueden aislarse y analizarse ms fcilmente. Ensayos de reconocimiento Existen ensayos de reconocimiento para el anillo aromtico como la reaccin con formaldehdo y cido sulfrico. As mismo en el caso de fenilpropanos con hidroxilos fenlicos estos pueden reconocerse por el ensayo del cloruro frrico, el cual produce coloraciones verdes y azules con sustancias fenlicas en general. La tabla 2 presenta los valores Rf y coloraciones con dos reactivos reveladores para varios fenilpropanos. Bajaj et al. reportaron la utilidad del reactivo Cloramina-T para la deteccin de varios compuestos fenlicos. Tabla 2. Valores Rf en slica gel y colores de algunos fenilpropanos Compuesto Rf en Rf en Benceno n-hexano/CHCl3 (3 :2) 0.74 0.86 0.72 0.69 0.50 0.71 0.39 0.41 0.38 0.20 0.31 0.29 0.27 0.42 0.42 0.27 Color con VainillinaH2SO4 Rosado Rojo Pardo Pardo Rojo Pardo Rojo Color con R. de Gibbs Gris Pardo Pardo Pardo Amarillo Rojo pardo Prpura Amarillo

Safrol Estragol Anetol Miristicina Apiol Timol Eugenol Isoeugenol Metileugenol Metilisoeugenol Elemicina

Caracterizacin espectral Espectro infrarrojo Por tratarse de sustancias con anillo aromtico, sus espectros infrarrojo muestran las seales caractersticas de estos compuestos y dan informacin sobre el tipo de sustitucin del anillo aromtico adems de los grupos funcionales presentes en la molcula. Por ejemplo, el espectro IR del eugenol muestra entre otras bandas en 3500 (ancha) debida al grupo hidroxilo, 1510 caracterstica de aromticos, y tres bandas en 990, 920 y 938 cm-1 caractersticas de un grupo vinilo monosustitudo. El espectro IR del cinamaldehdo muestra bandas en 3330 (dbil), 3050, 2820, 2750, 1660 (intensa, debida al grupo carbonilo), 975, 740 y 695 cm-1 entre otras. Espectro ultravioleta

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A diferencia de la mayora de mono- y sesquiterpenos, los fenilpropanos absorben luz UV con mximos alrededor de 254 nm dependiendo de los grupos cromforos presentes en la molcula. Por ejemplo el isoeugenol muestra mximos en 260 (15850) y 305 (7000), el safrol en 286 nm, la miristicina en 276 nm, el isosafrol en 264 nm, el cido trans-cinmico en 273 nm y el cido cis-cinmico en 264 nm. Espectro de Resonancia Magntica Nuclear Los espectros de 1H-NMR de los fenilpropanos muestran seales de protones aromticos alrededor de 6-8 ppm cuyas multiplicidades y constantes de acoplamiento permiten realizar una asignacin estructural clara an con espectros de baja resolucin. Espectrometra de Masa Debido tambin a su anillo aromtico, los fenilpropanos presentan espectros de masa con iones moleculares intensos, lo que facilita la determinacin de su peso molecular. En el caso de compuestos con grupos carboxilo e hidroxilo es conveniente derivatizarlos para obtener sustancias ms volatilizables y trmicamente ms estables, ya que esto facilita por ejemplo su anlisis en mezclas mediante GC o GC-MS. Tratamientos posteriores al proceso de extraccin Posteriormente al proceso de extraccin, puede ser necesario realizar una o mas de los tratamientos que se enumeran: 1. purificacin de absolutos 2. eliminacin de colorantes 3. desterpenacin 3.1 destilacin fraccionada con vaco -cabeza de destilacin: hidrocarburos monoterpnicos -cuerpo de destilacin: componentes oxigenados (mono y sesquiterpenos) -1a cola de destilacin: hidrocarburos sesquiterpnicos -2da cola de destilacin: ceras y alquitranes de destilacin 3.2 extraccin con solventes selectivos -mezclas etanol-agua -empleo de 2 solventes inmiscibles a contracorriente 3.3 separacin por adsorcin cromatogrfica 4. descerado

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