UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO Facultad de Qumica

Fisiologa (Laboratorio) INTEGRANTES DEL EQUIPO:

Camacho Escobar Karina. Garca Aldama Erika. Flores Sols Isaac Jonathan. Tellezgirn Lara Vanessa. GRUPO: 04 FECHA DE REALIZACIN: 8 de Febrero del 2011.

PRCTICA No. 1: Permeabilidad de la membrana plasmtica. INTRODUCCIN La membrana plasmtica celular acta como una barrera separando los compartimientos intra y extracelular, esto debido a que los dos medios son acuosos y podra haber prdida de enzimas, nucletidos y otras molculas hidrosolubles que se encuentran dentro de la clula. (Fox, 2008) Esta membrana se encuentra constituida por una pelcula bilipdica delgada donde flotan numerosas protenas retenidas por uniones no covalentes, estas protenas dejan parte de sus cadenas polipeptdicas a uno u otro lado de la membrana. (Houssay, 1980) La capa bilipdica consiste en fosfolpidos (como la fosfatidilcolina y la fosfatidiletanolamina). La forma de la molcula semeja a grandes rasgos un espermatozoide con doble cola, la cabeza terminal contiene fosfato que es soluble en agua (parte hidrfila), que se encuentran expuestas al ambiente acuoso que hay en el exterior de la clula y en el citoplasma; y las colas son insolubles en agua (parte hidrfoba), y se encuentran orientadas hacia el interior de la membrana, que es escasa en agua. (Ganong, 1997) La capa bilipdica cumple con funciones de barrera hidrofbica y brinda a la membrana fluidez y alta resistencia elctrica. Las protenas, por su parte, son las responsables de la comunicacin entre el citoplasma y el medio extracelular. (Houssay, 1980) Una membrana, ya sea natural o artificial, posee la capacidad de permitir el paso de una sustancia a travs de ella, a esta capacidad se le denomina

permeabilidad; y hay diferentes clasificaciones de membranas de acuerdo a su permeabilidad: Impermeable, Semipermeable y Permeable. (Houssay, 1980) Existen diferentes protenas que se encuentran embebidas en la membrana, algunas se presentan como unidades globulares separadas que atraviesan por completo la membrana (estas llamadas integrales) y otras que solo se adhieren en el interior o en el exterior (llamadas perifricas). Estas protenas (integrales o perifricas) ayudan a transportar activamente iones a travs de la membrana por medio de bombas, tambin trasladan sustancias en direccin de los gradientes electroqumicos mediante difusin facilitada y otras, actan como canales inicos, que activados, permiten el paso de iones al interior o al exterior de la clula. (Fox, 2008) La membrana plasmtica lleva a cabo un fenmeno llamado osmosis, que es la difusin de disolvente por una membrana impermeable a est, hacia una parte en la que existe una mayor concentracin de soluto, misma que es un factor importante en los procesos fisiolgicos. Este fenmeno puede evitarse mediante la aplicacin de presin a la solucin ms concentrada, a esta presin se le denomina presin osmtica() que es una propiedad coligativa1 y se calcula con la presin de la disolucin menos la presin del disolvente puro, o si est en una solucin ideal por medio de la siguiente frmula: = RTC.(Ganong, 1997) La concentracin de las partculas osmticamente activas se expresa en osmoles, que es equivalente al peso gramo molecular de una sustancia dividido entre el nmero de partculas en movimiento libre que cada molcula libera en solucin. Entonces, por lo tanto, la osmolaridad es el nmero de osmoles por litro de solucin. La concentracin osmolar plasmtica humana es de 300 mOsm/L 20 mOsm/L. (Houssay, 1980) OBJETIVOS DE LA PRCTICA Generales Observar el fenmeno de hemlisis y explicarlo en funcin de las diferencias de presin osmtica entre el interior y el exterior de la clula. Comprobar que la presin osmtica de una solucin depende del nmero de partculas qumicamente activas y no de su concentracin. Determinar la relacin que existe entre el coeficiente de particin y la permeabilidad de la membrana. Explicar el fenmeno en funcin de la estructura qumica de la membrana. Particulares Darse cuenta, a partir de la experimentacin, la importancia de la membrana plasmtica.

Las propiedades coligativas son las que dependen de la cantidad de partculas sin importar la naturaleza de las mismas; las otras propiedades coligativas son: Disminucin de la presin de vapor y Descenso del punto de congelacin y aumento del punto de ebullicin.

Entender su funcionamiento y cmo reacciona ante disoluciones de diferente concentracin para aplicarlo en la vida real.

MATERIAL Y MTODOS En esta prctica se realizaron 4 diferentes experimentos en donde observamos la reaccin de un eritrocito ante soluciones de diferente especie a diferentes concentraciones. Primeramente, preparamos una suspensin de glbulos rojos a partir de 5 mL de suero salino y 5 gotas de sangre, estas recolectadas de un voluntario que se pincho un dedo con una lanceta esterilizada, 1. Observacin de la hemlisis. Se usaron 5 gotas de suspensin inicial de glbulos rojos en dos tubos de ensayo que contenan, respectivamente, 5 mL de agua destilada y 5 mL de suero salino, y mezclamos suavemente. Todo esto para identificar en que tubo ocurri la hemolisis y poder identificarlo en los otros experimentos. 2. Actividad osmtica de sustancias no difusibles. En esta parte de la prctica, identificamos a partir de diferentes soluciones de diferentes concentraciones de sacarosa, NaCl y CaCl2 donde podra pasar la hemolisis. Para esto, preparamos diferentes concentraciones de soluciones de sacarosa, NaCl y CaCl2 (indicadas en la tabla proporcionada por los profesores) y le aadimos a cada tubo 5 gotas de suspensin inicial de glbulos rojos, mezclando suavemente cada uno. Observamos los cambios cada 3 minutos y dimos una explicacin de lo sucedido. 3. Actividad Osmtica de sustancias difusibles. En dos tubos de ensayo con diferentes soluciones, uno con glicerol 0.3 osmolar y otro con sacarosa 0.3 osmolar, le agregamos 5 gotas de la suspensin inicial de glbulos rojos y mezclamos suavemente. Despus, esperamos a que se produjera un efecto en las soluciones. 4. Velocidad de difusin. Aqu, utilizamos tres soluciones isoosmoticas a los eritrocitos (0.3 M) de alcohol metlico, alcohol etlico y alcohol proplico, cada una en un tubo de ensayo diferente, y aadimos 5 gotas de suspensin inicial, gracias a esto observamos en qu consiste la velocidad de difusin. RESULTADOS 1. Observacin de hemlisis Suero salino: Se presentaba una turbidez roja. Agua destilada: La solucin se vea de color rosa claro un poco mas cristalino.

Figura 1. Imagen donde se muestra la diferencia de reacciones ante diferentes soluciones con diferentes concentraciones. Tubo con agua destilada y eritrocitos, (derecha) y tubo con suero salino y eritrocitos (izquierda).

2. Actividad osmtica de sustancias no difusibles TABLA 1a. ml de NaCl 0.15 M 5 4 3 2 1 ml de H2O Concentracin Osmolaridad destilada final (M) G=1.8 0 0.15 300 mOsm 1 0.12 240 mOsm 2 0.09 180 mOsm 3 0.06 120 mOsm 4 0.03 60 mOsm

Tubo 1 2 3 4 5 TABLA 1b.

TABLA 1a: Concentraciones y osmolaridades de las diferentes soluciones de NaCl.

TUBO 5 4

TIEMPO (minutos) 3 3

TABLA 1b: Tubos de soluciones a diferentes concentraciones de NaCl con variable de tiempo en minutos, indicando un cambio en la apariencia inicial.

TABLA 2a. Osmolaridad Tubo G=2.6 1 450 mOsm 2 360 mOsm 3 270 mOsm 4 180 mOsm 5 90 mOsm TABLA 2a: Concentraciones y osmolaridades de las diferentes soluciones de CaCl2. TABLA 2b.
TUBO 5 TIEMPO (minutos) 3

ml de CaCl2 0.15 M 5 4 3 2 1

ml de H2O Concentracin destilada final (M) 0 0.15 1 0.12 2 0.09 3 0.06 4 0.03

TABLA 2b: Tubos de soluciones a diferentes concentraciones de CaCl 2 con variable de tiempo en minutos, indicando un cambio en la apariencia inicial.

TABLA 3a. ml de sacarosa ml de H2O 0.15 M destilada 5 0 4 1 3 2 2 3 1 4 Concentracin final (M) 0.15 0.12 0.09 0.06 0.03 Osmolaridad 150 mOsm 120 mOsm 90 mOsm 60 mOsm 30 mOsm

Tubo 1 2 3 4 5

TABLA 3a: Concentraciones y osmolaridades de las diferentes soluciones de Sacarosa.

TABLA 3b.
TUBO 5 4 3 TIEMPO (minutos) 3 3 6

TABLA 3b: Tubos de soluciones a diferentes concentraciones de Sacarosa con variable de tiempo en minutos, indicando un cambio en la apariencia inicial.

3. Actividad osmtica de sustancias difusibles Glicerol: La solucin se torno rosa claro tipo cristalino. Sacarosa: La solucin se torno turbio de color rojo.

4. Velocidad de difusin Tiempo en el que el tubo presento un cambio en la apariencia inicial de la solucin: Alcohol metlico: 32 segundos Alcohol etlico: 21 segundos Alcohol proplico: 10 segundos

ANLISIS DE RESULTADOS En la primera parte de la prctica, observamos como en el suero salino al agregar 5 gotas de suspensin de glbulos rojos, formada con 5 gotas de sangre y 5 mL de suero salino, se presentaba una turbidez que indicaba que los glbulos rojos permanecan igual. Pero al agregar 5 gotas de suspensin de glbulos rojos a 5 mL de agua destilada observamos que el color rojo era cristalino, ya que se produjo hemlisis (hemoglobina disuelta en el agua destilada). En la segunda parte, observamos como la hemlisis se presento en los tubos de todas las soluciones (NaCl, CaCl2 y sacarosa) con concentraciones muy bajas que iban de 120 mOsm a 30 mOsm (excepto la solucin del tubo 3 de sacarosa, 120 mOsm). En el tubo 3 de Sacarosa (90 mOsm) se presento la hemlisis en el minuto 6, mientras que en los otros tubos haba cierta turbidez que no cambio durante los 18 minutos despus de la primera observacin. En la tercera parte de la prctica, se utilizo glicerol 0.3 M y sacarosa 0.3 M en dos tubos de ensayo (una sustancia para cada tubo) y se les agrego 5 gotas de suspensin de glbulos rojos a cada uno. Despus, observamos como en la solucin de la sacarosa se presentaba una turbidez (glbulos rojos sin romper), mientras que en la solucin del glicerol, se presentaba la hemlisis, color rosa claro tipo cristalino. En la cuarta y ltima parte de la prctica, observamos que suceda en 5 mL de tres diferentes alcoholes (metlico, etlico y proplico) al agregrsele a cada uno 5 gotas de suspensin de glbulos rojos. Vimos como en el alcohol metlico tardo para que se produjera la hemlisis (32 segundos), en el alcohol etlico solo tardo 21 segundos para que se produjera la hemlisis y en el alcohol metlico solo tardo 10 segundos.

DISCUSIN DE RESULTADOS En la prctica se estudia la permeabilidad selectiva de las membranas en la cual se determina qu tipo de sustancias pueden entrar o salir de la clula. La difusin neta de agua se conoce como osmosis. La difusin neta de una molcula o ion a travs de la membrana depender si va a favor o en contra del gradiente de concentracin. Cuando lo haga a favor del gradiente pasara en forma pasiva y no habr gasto de energa metablica. Si, por el contrario las molculas se movilizan en contra del gradiente de concentracin ser necesario el aporte de energa metablica (ATP) y el pasaje ser activo. En la primera parte de la prctica utilizamos dos tipos de soluciones para demostrar la osmosis, una solucin isoosmotica al eritrocito (suero salino o NaCl 0.15 M) y una solucin hipotnica (agua destilada). Al agregar las 5 gotas del suspensin de glbulos rojos lo que podemos ver es que el solvente va hacia donde se encuentra ms concentrado, atravesando la membrana del eritrocito; esto se puede observar en la solucin de agua destilada, ya que es un solvente desionizado, as que al estar menor concentrado que el eritrocito, el agua puede atravesar la membrana por medio de canales llamados acuaporinas (Fox, 2008), hasta alcanzar un equilibrio de presiones, pero el eritrocito no resistir toda el agua que pase por la membrana si la diferencia de concentraciones es mucha, as que se rompe y la hemoglobina dentro de el se disolver haciendo que la apariencia de la solucin se vea rosa claro cristalino (presencia de hemolisis). En el caso del suero salino difiere la reaccin, ya que al hacer el clculo con la ley de la presin osmtica de Vant Hoff vemos que la concentracin de NaCl equivale a 300 mOms, que es aproximadamente la concentracin osmolar del plasma, as que al agregar las 5 gotas de suspensin de glbulos rojos a la solucin de suero salino la concentracin de afuera y adentro del eritrocito es aproximadamente la misma, as que no le causa dao alguno a este, por tanto se mantiene su tamao. En la segunda parte de la prctica abordamos un poco ms el tema de las soluciones a diferentes concentraciones y de diferentes especies. Agregamos 5 gotas de suspensin de glbulos rojos a diferentes concentraciones de NaCl, CaCl2 y Sacarosa y observamos que los eritrocitos de las soluciones que se acercaban a los 300 mOsm se mantenan sin romperse. Tambin los eritrocitos de las soluciones que iban de los 280 mOsm a los 180 mOsm (hipotnicas), aguantaban sin romperse pero su volumen iba en aumento por las diferencias de concentracin. Las osmolaridades las pudimos saber ya que al usar la ley de Vant Hoff debamos tomar en cuenta la cantidad de partculas osmticamente activas (iones) para cada solucin, en el caso del NaCl debamos multiplicar la molaridad por 2 y en el caso del CaCl2 debamos multiplicarlo por 3. En el caso de la sacarosa ocurra algo diferente, ya que la sacarosa en solucin no se disocia, la molcula permanece completa o simplemente diluida as que la molcula se toma como una sola partcula osmticamente activa, as que la presin osmtica se presenta en funcin del nmero de partculas de glucosa presentes (Ganong, 1997), as que no eran suficiente para hacer llegar a los eritrocitos a la hemolisis aun teniendo soluciones muy hipotnicas.

En la tercera parte de la prctica, observamos dos diferentes sustancias con la misma concentracin (0.3 M) glicerol y sacarosa, estas presentaban diferente comportamiento debido a su estructura molecular. En el caso del glicerol, es una molcula que tiene una cadena de 16 carbonos, que hace que se le asimile un poco a los de los lpidos, as que le es fcil pasar a travs de la membrana (que est compuesta de fosfolpidos principalmente), con esto se dice que es una sustancia difusible. Por el contrario, la sacarosa es una molcula de glucosa y fructosa, formando dos hexgonos de carbonos unidos, nada similar a los lpidos, as que esta molcula no tiene la capacidad de pasar la membrana, as que solo pasa el solvente. En el experimento, vimos como al agregar suspensin de glbulos rojos a las dos soluciones, aun teniendo en cuenta que la concentracin es la misma que en el plasma aproximadamente, en la solucin con glicerol se presentaba hemolisis debido a que el glicerol difunde fcilmente hacia dentro del eritrocito junto con el agua y esta no aguantaba, y por lo tanto, se reventaba. Al contrario de esto, la sacarosa no difunde hacia dentro del eritrocito, as que las concentraciones y las presiones se equilibraban de ambos lados de la membrana y no haba presencia de hemlisis. En la cuarta y ltima parte de la prctica, observamos como el tamao de las molculas tiene que ver con la velocidad con la que atraviesan la membrana bilipdica, y esto lo podemos comparar gracias a un coeficiente llamado coeficiente de particin, que se saca con la comparacin de la solubilidad de dicha sustancia en aceite y en agua. Este coeficiente aumenta cuando la sustancia es ms soluble en aceite (molcula con cadena larga de carbonos), por tanto, puede atravesar la membrana fcilmente a comparacin con la sustancias que son mas solubles en agua, ya que tienen un coeficiente de particin menor. En el caso del alcohol metlico podemos observar que es una molcula con un solo carbono y que su coeficiente de particin es de 0.0097, as que es ms soluble en agua, por lo tanto, tarda ms en difundir hacia dentro del eritrocito (32 segundos); en el caso del alcohol etlico se ve que, a comparacin con los otros dos alcoholes que trabajamos, tiene capacidad de solubilizarse medianamente en agua y en aceite, coeficiente de particin= 0.0357; y por ltimo, el alcohol proplico, que es de una cadena de 3 carbonos y tiene un coeficiente de particin de 0.156, as que puede solubilizarse ms fcilmente en aceite, por lo tanto difunde ms rpidamente a travs de la membrana (10 segundos). (Fox, 2008) Gracias a esto, podramos ayudar en la industria qumica elaborando soluciones, dependiendo del problema que se tenga, tomando en cuenta que concentracin se requerira para cada caso. CONCLUSIONES En esta prctica pudimos observar cuando ocurra la hemlisis y logramos entender porque es que se llevaba a cabo dependiendo de las concentraciones dentro y fuera del eritrocito expresadas en miliosmoles.

Con lo anteriormente dicho, podemos explicar que es presin osmtica y que diferencia hay interna y externamente cuando se lleva a cabo esta. Observamos como la presin osmtica depende de la cantidad de partculas qumicamente activas (iones) que trabajan y no de la concentracin de la solucin, como en la sacarosa. Logramos determinar la relacin que existe entre el coeficiente de particin y la permeabilidad de la membrana tomando en cuenta la estructura molecular de las sustancias que utilizamos para observar esto. A la vez entendimos que tan importante es la membrana en el cuerpo humano y como nos podra llegar a servir el entender este tema para la vida cotidiana.

BIBLIOGRAFA Fox, Stuart Ira. Fisiologa Humana. 10 Edicin. Ed. McGraw Hill. Espaa, 2008. pp. 52-55. Ganong, William F. Fisiologa Mdica. 18a Edicin. Ed. El manual moderno. Mxico, 1997. pp. 7-13. Houssay, Bernardo A. Fisiologa Humana. 5ta Edicin. Ed. El ateneo. Argentina, 1980. pp. 2-5 y 20-21.