dos seres ViVos

identidade

DNA: A receitA DA viDA e o seu cDigo

EXPERIMENTO

Extrao de DNA

verso: janeiro 23, 2010 11:33 AM

Extrao de DNA

1. resumo
esta atividade prtica possibilita a extrao de DNA de morango, que tambm pode ser substitudo por banana ou tomate utilizando materiais de fcil acesso.

2. o experimento 2.1 Materiais:

2 ou 3 morangos (pode ser substitudo por banana ou tomate); saco plstico comum transparente; Detergente comercial Bquer ou copo; colher de caf; Proveta ou outro frasco com graduao volumtrica; lcool etlico absoluto ou lcool etlico domstico (>90og.L). (Deve ser mantido gelado at o momento da sua utilizao); Gaze para filtrar; tubo de ensaio; cloreto de sdio (sal de cozinha); Funil; Faca; Basto de vidro ou palito de madeira; Pipeta Pasteur, seringa ou conta-gotas.

Figura 1: Materiais necessrios

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2.2 Procedimento:
sugerimos que essa atividade seja realizada como complemento s aulas tericas sobre DNA. Verifique, inicialmente, quais so os conhecimentos dos alunos sobre o conceito de DNA como a molcula responsvel pelas caractersticas de todos os seres vivos. Pergunte, por exemplo, quais organismos possuem DNA e qual a funo que essa substncia tem nos seres vivos. Discuta com eles onde o DNA encontrado nas clulas eucariticas: o DNA o prprio cromossomo? se necessrio, relembre os nveis de organizao do material gentico (de cromossomos at a dupla hlice do DNA) para lembrar que o DNA se encontra associado s molculas de protenas. essas informaes sero teis para que os alunos compreendam melhor cada etapa do processo de extrao do DNA. importante discutir com os alunos a questo das dimenses: possvel enxergar clulas a olho nu? e o seu ncleo? e os cromossomos? e a dupla hlice? isso fundamental para no criar no aluno a expectativa equivocada de que a atividade permitir que ele visualize a dupla hlice do DNA. Depois de revisados os principais conceitos, distribua o roteiro de trabalho e explique qual o objetivo do experimento e de seu procedimento.

2.2.1 Protocolo experimental

Preparo da Soluo de Lise (ruptura das membranas celulares):
Misturar 6 mL de detergente, 4g de Nacl (sal de cozinha), o equivalente a aproximadamente 4 colheres cheias de caf, e completar com gua at 60 mL.

Figura 2: Preparo da soluo de lise com (A) sal de cozinha, (B) detergente e (C) gua.

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Extrao do DNA:
1. cortar e macerar os morangos com a soluo de lise, no saco plstico, at se obter uma soluo liquefeita da polpa do fruto. Este procedimento facilitar a filtrao.

Figura 3: Etapa 1 da extrao de DNA: (A) pedaos da fruta no saco plstico, (B) adio da soluo de lise e (C) soluo liquefeita da poupa resultante da macerao

A macerao proporcionar uma primeira quebra das clulas e aumento da superfcie de contato com a soluo de lise, cuja funo romper as membranas celulares e as membranas nucleares ainda intactas, o que liberar as molculas de DNA que estavam localizadas no interior do ncleo. As molculas de detergente desestruturam os lpideos, principal componente da membranas, provocando sua ruptura, e o sal favorece a aglomerao das molculas de DNA. 2. Misturar a soluo durante 2 a 3 minutos e, em seguida, filtrar utilizando a gaze, o funil e o tubo de ensaio, conforme a mostra a figura 4.

Figura 4: Filtrao do macerado

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3. Depois de realizar a filtrao, acrescentar o lcool etlico gelado lentamente, com o auxlio de uma pipeta ou conta gotas, at dobrar o volume inicial da soluo.

A B Figura 5: Adio de lcool etlico (A) e obteno do DNA (B)

o DNA possui baixa solubilidade em lcool etlico e tambm sofre um processo de desidratao, fazendo com que as molculas fiquem mais compactadas. Alm disso, o DNA tambm apresenta baixa densidade em relao a outros componentes celulares. esses fatores fazem com que ele seja visualizado como um sobrenadante na soluo de lcool etlico, que tem o aspecto de uma nuvem, como mostra a Figura 5B. Depois de terminado o experimento, voc pode pedir que os alunos respondam s questes que propomos no roteiro de trabalho, e realizar uma discusso sobre as respostas dadas.

3. sugesto de roteiro de trabalho:

A seguir, sugerimos um roteiro de trabalho para ser utilizado na ntegra ou adaptado, e que poder ser entregue aos alunos. ele contm todas as orientaes necessrias para o desenvolvimento da aula prtica e tambm algumas questes que auxiliaro no fechamento da atividade.

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PRTICA LABORATORIAL DE BIOLOGIA Extrao de DNA Nome: __________________________ N_____ Srie: _____ Data: ________ Objetivo da aula prtica:
extrao de DNA

Protocolo Experimental Materiais:

2 ou 3 Morangos (pode ser substitudo por banana ou tomate); Saco plstico comum transparente; Detergente comercial Bquer ou copo; Colher de caf; Proveta ou outro frasco com graduao volumtrica; lcool etlico absoluto ou lcool etlico domstico (>90oG.L). (Deve ser mantido gelado at o momento da sua utilizao); Gaze para filtrar; Tubo de ensaio; Cloreto de sdio (sal de cozinha); Funil; Faca; Basto de vidro ou palito de madeira; Pipeta Pasteur, seringa ou conta-gotas.

Procedimento:
Preparo da soluo de Lise: 1. Misturar 6 mL de detergente, 4g de Nacl (sal de cozinha), o que corresponde a aproximadamente 4 colheres de caf cheias, e completar com gua at 60 mL. extrao do dna: 2. cortar e macerar o morango com a soluo de lise, num saco plstico, at obter uma soluo liquefeita da polpa do fruto, o que facilitar a filtrao. 3. Misturar a soluo durante 2 a 3 minutos e, em seguida, filtrar o contedo do saco, utilizando a gaze, o funil e o tubo de ensaio. 4. Aps a filtrao, acrescentar o lcool etlico gelado lentamente, com o auxlio de uma pipeta ou conta gotas, at dobrar o volume inicial da soluo.

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Questes:
1. Como se apresentou o DNA extrado? Descreva qual o seu aspecto e em que regio da soluo do tubo de ensaio ele foi visualizado.

2. Qual a importncia da etapa de maceramento?

3. Qual o papel da soluo de lise? Responda especificando as funes do detergente e do sal.

4. Qual o papel do lcool etlico na extrao do DNA?

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4. Bibliografia complementar
1. abordagem qumica na extrao de dna de tomate Artigo que apresenta um experimento mais complexo sobre extrao de DNA de tomate, discutindo os aspectos qumicos do processo. LiMA, r.; FrAceto, L. F. Abordagem qumica na extrao de DNA de tomate. in: Qumica Nova na escola, n 25. Maio/2007. Disponvel em: http://qnesc.sbq.org.br/online/qnesc25/eeq04.pdf Acesso em: 01/04/2009 2. eletroforese de cidos nuclicos: Uma Prtica para o ensino de Gentica Artigo que apresenta uma aula prtica de eletroforese de DNA em gel de amido de uso culinrio. MArtiNeZ, e. r. M.; PAivA, L. r. s. eletroforese de cidos Nuclicos: uma Prtica para o ensino de gentica. in: revista gentica na escola, ano 3, vol. 1, p. 43-48. 2008. Disponvel em: http://www.sbg.org.br/geneticaescola2/web/ano3vol1/9.pdf Acesso em: 01/04/2009 3. animaes em Biologia Celular tpicos variados como DNA, Mitose, Meiose, apresentados atravs de animaes computacionais. MArQues-sANto, L. F. Animaes em Biologia celular. in: Biblioteca Digital de cincias, 11. Fevereiro/2008. Disponvel em: http://www.ib.unicamp.br/lte/bdc/visualizarMaterial.php?idMaterial=545 Acesso em: 27/01/2009 4. Pgina do Centro Federal de educao tecnolgica de Qumica de nilpolis/rJ - contm vrias informaes sobre a descoberta, estrutura e papel da molcula de DNA. H tambm algumas sugestes de atividades educativas. Disponvel em: http://www.cefeteq.br/dna/aplicacoes/genesmed/genesmed.htm Acesso em: 15/05/2009 5. Pgina online do jornal Folha de so Paulo contm muitas informaes sobre o DNA, publicada em 2003, por ocasio do aniversrio de 50 anos da descoberta de sua estrutura molecular. Disponvel em: http://www1.folha.uol.com.br/folha/especial/2003/dna/ Acesso em: 15/05/2009 6. especial da revista Cincia Hoje das Crianas sobre o dna. edio com diversos artigos sobre o tema DNA. Disponvel em: http://cienciahoje.uol.com.br/2157 Acesso em: 15/05/2009 7. revista Gentica na escola. Artigos disponibilizados pela sociedade Brasileira de gentica, apresentam muitas atividades educativas. Disponvel em: http://www.sbg.org.br/geneticaescola2/web/index.htm Acesso em: 15/05/2009

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FiCHa tCniCa
Universidade estadual de Campinas reitor: Fernando Ferreira costa. Vice-reitor: edgar salvadori de Decca. Pr-reitor de ps-graduao: euclides de Mesquita Neto. instituto de Biologia diretor: Paulo Mazzafera. Vice-diretora: shirlei Maria recco-Pimentel.

eXeCUo

Projeto eMBriao Coordenao geral: eduardo galembeck. Coordenao de Mdia - audiovisuais: eduardo Paiva. Coordenao de Mdia - software: eduardo galembeck e Heloisa vieira rocha. Coordenao de Mdia - experimentos: Helika A. chikuchi, Marcelo J. de Moraes e Bayardo B. torres. apoio Logstico/administrativo: eduardo K. Kimura, gabriel g. Hornink, Juliana M. g. garaldi.

oBJeto de aPrendiZaGeM

extrao de dna redao: Bianca caroline rossi rodrigues e Maurcio Aurlio gomes Heleno, Helika A. chikuchi e eduardo galembeck. Pesquisa: Bianca caroline rossi rodrigues, Maurcio Aurlio gomes Heleno e roney vander dos santos. reviso de Contedo: Daniela Kiyoko Yokaichiya e Marcelo J. de Moraes. testes de Bancada e captura de imagens: gislaine Lima Marchini e roney vander dos santos. edio de imagem: Florencia Mara Pin Pereira Dias. adequao Lingustica: Lgia Francisco Arantes de souza, raquel Faustino e Marina gama. diagramao: Henrique oliveira.

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Laboratrio de tecnologia educacional Departamento de Bioqumica instituto de Biologia - caixa Postal n 6109 universidade estadual de campinas uNicAMP ceP 13083-970, campinas, sP, Brasil

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