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ANTIBIOTICOS PRODUCCION DE PENICILINA

Definicin y Procedencia. es una sustancia qumica producida por un organismo vivo que muestra actividad inhibidora o germicida frente a microorganismos. La actividad antibitica se califica en ocasiones de: antibacteriana, antifngica o antimicrobiana. Produccin de antibiticos. Los antibiticos son producidos por ciertos hongos, bacterias, actinomicetos, algas y lquenes. El origen ms importante y frtil de antibiticos de importancia comercial es el gnero Streptomyces de los actinomicetos. Muchos mohos producen antibiticos, tales como la penicilina que es el ejemplo ms destacado producido por los mohos. En la produccin de antibiticos muchos de los detalles especficos siguen siendo, con algunas excepciones secretos industriales. Produccin de Penicilina. Para la produccin de penicilina se siguen los siguientes pasos: Aislamiento de mohos. Mtodo de incubacin directa. Se prepara un medio de cultivo de bacterias, el ms usado es el Staphylococcus aureus. Para el cultivo de estas bacterias se preparan tres medios de nutricin, que son los siguientes: Medio 1. Cuya composicin es la siguiente: Peptona 6,0 g. Hidrolizado pancretico de caseina 4.0 g. Extracto de levaduras 3,0 g. Glucosa 1,0 g. Agar 15,0 g. Agua destilada c.s. hasta 1000,0 ml. PH 6,5 6,6 tras la esterilizacin Medio 2. Denominado agar base, su composicin es la siguiente: Peptona 6,0 g. Extracto de levaduras 3,0 g. Agar 1,5 g. Agua destilada c.s. hasta 1000,0 ml. PH 6,5 6,6 tras la esterilizacin.

Medio 3. Denominado caldo de cultivo, su composicin es la siguiente: Peptona 5,0 g. Extracto de levaduras 3,0 Extracto de carne de buey 1,5 g. CLNa 3,5 g. K2HPC4 3,68 g. KH2PO4 1,32 g. Agua destilada c.s. hasta 1000,0 ml.

Produccin de penicilina. por medio de cultivo superficial o sumergido. En los medios de cultivo superficial el moho crece en la superficie de capas poco profundas del medio de fermentacin. En los medios de cultivo sumergido, el moho se desarrolla sumergido en el medio de fermentacin. Mohos usados. Ningn otro detalle tiene mayor importancia en la produccin en un antibitico que la seleccin de una capa seleccionada apropiada. Las cepas ms usadas para la produccin de la penicilina son: P. Notatun y P.Crysogenun. Medios de esporulacin. En la produccin de penicilina es necesario desarrollar rpidamente gran nmero de esporas para la inoculacin y resiembra. Se tiene varios mtodos de esporulacin de los cuales se expondr uno de ellos. Para el medio de esporulacin se cortan en cubos de un centmetro de lado pan integral fresco (libre de inhibidos de mohos) y se esteriliza con vapor en capas finas en matraces Erlenmeyer. El pan enfriado se inocula masivamente con esporas de mohos y se incuba a 25 - 27C durante 4 - 5 das, despus de sacar los cultivos de pan se puede guardar durante al menos dos semanas a 40 El plan cubierto de esporas se puede pulverizar perfectamente a los 6 7 das y se usa para la inoculacin. Mtodos de inoculacin. En los mtodos de cultivo superficial, la superficie del medio se inocula con esporas secas, bien solos o mezcladas con algn tipo de material de tipo de harina de trigo. En mtodos de cultivo sumergido al medio de inolucin se puede hacer con esporas secas, con esporas sin germinar, en suspensin o con grnulos inoculantes. En un procedimiento de produccin de penicilina, las esporas del moho se usan para sembrar un medio de germinacin de matraces, despus de un periodo de incubacin en el sacudidor se transfiere los contenidos de los matraces a recipientes especiales de metal, este tanque especial se conecta acpticamente al tanque de siembra y se impulsa al interior del fermentador la suspensin del moho utilizando aire estril.

Materias primas. En la seleccin de materias primas para la produccin de penicilina es esencial considerar las necesidades nutricias del hongo, las condiciones ptimas para la acumulacin de la penicilina y la subsiguiente extraccin y purificacin de la penicilina. Fuentes de carbono. La lactosa es la mejor fuente de carbono para la produccin de penicilina, usndose una concentracin del 6%. Tambin puede usarse 3% de lactosa, almidn de maz, y dextrina de maz. A pequeas velocidades de alimentacin se puede usar glucosa y sacarosa en vez de lactosa. Fuentes de nitrgeno. Las sustancias usadas como fuente de nitrgeno son: nitrato sdico, sulfato, acetato, y lactato amnico, lquido de remojo de maz y otros materiales. Elementos minerales. Ciertos elementos (P, K, Mg, S, Mn, Cu) parecen esenciales o al menos beneficiosos para la produccin de penicilina, aunque algunos de ellos se encuentran en el lquido de remojo de maz. Los diferentes minerales se suministran en forma de Kh2PO4, MgSD4, 7H20. Las concentraciones de estas sales en el medio son: KH2PO4, 0,019 M, MgSO47H20 0,002 M y NaN03 0,019 M. Lquido de remojo de maz. El uso de lquido de remojo de maz en el medio de fermentacin, aumenta grandemente los rendimientos de penicilina, el lquido de remojo de maz debe tener la siguiente composicin: Slidos 40 60% Acido lctico 12 27% x Nitrgeno total 7,4 7,8% x Nitrgeno amnico 2,6 3,3% x Azcar reductor en glucosa 1,5 14% x Cenizas 18 20% x x = referido a producto seco. Harina de semillas de algodn. Puede usarse como sustituyente del lquido de remojo de maz. Precursores. Sustancias utilizadas en la produccin de antibiticos (penicilina) para incrementar el rendimiento del producto. Los precursores ms usados son: fenil actico que favorece la produccin de la penicilina G por P. Chrisogenun. El cido p-hidroxifenil actico incrementa la produccin de penicilina X Aminocido Lcistina, L-cinteina y valinas. Condiciones de fermentacin. Temperatura. La temperatura ptima para la produccin de penicilina parece ser de 24C. Regulacin de pH. Es esencial la regulacin de pH durante la fermentacin, ya que un pH alto o bajo origina considerables prdidas de penicilina. El pH de fermentacin debe mantenerse de 5 a 7.5. El pH del medio resulta afectado por el tipo y cantidad de azcar presente, cantidad de lquido de remojo de maz, existencia de amortiguadores, etc.

Aireacin. La adecuada aireacin es esencial para mantener rendimientos ptimos de penicilina ya que los mohos son microorganismos aerobios. Taylor describe en un mtodo usado por l, que es conveniente una insuflacin de aire 11.500 litros por hora para un fermentador de 20.000 litros de capacidad. Presin. El uso de presin en los tanques para incrementar la efectividad de la aireacin es una prctica comn en los procesos de produccin. Se realiza generalmente las fermentaciones en tanques a una presin de 1,5 atmsferas. La reduccin de presin a 0,15 atmsferas no afecta la produccin, pero una presin mayor a 3 atmsferas reduce la produccin del mismo. Agitacin. El uso de un tipo apropiado de agitacin y a una velocidad adecuada suele mejorar los rendimientos de penicilina, pues comunica una velocidad de aireacin constante durante la fermentacin. Agentes antiespumantes. La eliminacin de la espuma excesiva mejora el rendimiento de la penicilina. Entre las sustancias antiespumantes que se usan estn las siguientes: Citrato de tributilo, octadecanol, en solucin al 3% en aceite de manteca de cerdo, octadecanol al 3% en aceite de soya. Prevencin de la contaminacin. Es muy importante prevenir la contaminacin del medio de fermentacin, la contaminacin produce la rpida destruccin de la penicilina, para evitar se debe esterilizar todos los tanques de fermentacin, tuberas o instalaciones en las que puede tener contacto la penicilina. Es necesario utilizar aire esterilizado para la aireacin, los agentes antiespumantes tambin se deben esterilizar antes de introducir al tanque de fermentacin. Aislamiento y purificacin de la penicilina. El objeto del aislamiento consiste en separar las cantidades relativamente mnimas de antibitico de las clulas productoras y del considerable volumen del medio agotado. La primera fase es el proceso de recuperacin es la separacin del micelio o clulas por filtracin o centrifugacin. Se pueden usar filtros contnuos de vaco, filtros de BirdYoung, centrfugas de cesto u otra instalacin, dependiendo de la naturaleza de las clulas. La segunda fase importante consiste en extraer el antibitico del medio de produccin agotado, con disolventes, por adsorcin, por precipitacin o por una combinacin de estos mtodos. La extraccin en disolventes puede efectuarse en extractores a cortacorriente como los del tipo Podhielniak, en tornos, en frascos, en el sistema de distribucin de Graig o de otras formas dependiendo del volumen del material y del objetivo perseguido. Para la extraccin se puede usar acetato de amilo, ter, cloroformo, acetona y otros disolventes segn la solubilidad del antibitico, posibilidad prctica, y otros factores. La temperatura, la regulacin del pH son factores muy importantes para la consecusin de elevados rendimientos de extraccin de antibiticos. La adsorcin se puede realizar sobre carbn activo, resinas de intercambio inico u otros materiales.

La purificacin se realiza por extraccin adicional con disolventes, destilacin, sublimacin, cromatogrfica en colmna o por otros procedimientos dependiendo de la naturaleza del antibitico, su costo y otros factores. El antibitico se esteriliza, eliminndole los pirgenos (sustancias que producen reacciones febriles) por filtracin a travs de filtros Seitz, moleculares u otros bacterianos de tipo apropiado. Comprobacin, ensayo y certificacin. Se realizan ensayos para la comprobacin de la potencia del antibitico y prueba de esterilidad, pirgenos, humedad y otras caractersticas segn se requiera. La potencia de la penicilina se determina de una manera similar al mtodo de aislamiento de cultivos de mohos puros. Es decir se emplean los mismos medios de cultivo para las bacterias, el mismo tipo de bacteria, slo se diferencia en que en vez de las partculas de suelo se coloca la penicilina obtenida, y al mismo tiempo penicilinas patrones despus de la incubacion se mide las zonas claras alrededor del antibitico y se los compara con el antibitico patrn y los resultados de comparacin se evalua por medio de grficas y de esta manera se puede conocer la potencia de la penicilina obtenida. Mtodos de valoracin de la penicilina. Entre los mtodos de valoracin de penicilina se tienen los siguientes: Mtodo del cilindro y placa (mtodo microbiolgico). Mtodo yodomtrico (metodo qumico). Propiedades de la penicilina. La penicilina es activa frente a ciertas bacterias Grampositivas en presencia de sangre, pus y fluidos orgnicos. Puede ser considerada como atxica, ya que es posible administrar dsis muy grandes durante un periodo de tiempo sin efectos perjudiciales. En un pequeo porcentaje se pueden presentar alergias individuales a la penicilina. Urticaria, ardor y picazn son algunas de las respuestas que se observan en personas sensibles. Segn Welch y colaboradores la penicilina produce una inhibicin parcial de la fagocitsis. La penicilina es soluble en agua, muy soluble en acetona, acetado de amilo, ciclohexano, dioxano, acetato de etilo, etanol y ter, y poco soluble en benceno, cloroformo y tretracloruro de carbono. Es inestable frente a un gran nmero de agentes por Ej. la descomponen los cidos y alcalis fuertes. Se inactiva por los agentes oxidantes, debe evitarse el contacto con ciertos metales pesados como cobre, plata, plomo y mercurio ya que tienden a destruir la penicilina. Destruye tambin la penicilinasa, enzima producida por algunos mohos, levaduras y bacterias. Las soluciones acuosas de la penicilina son inestables y se debe conservar refrigeradas, tambin el pH influye en la estabilidad de la solucin acuosa. Tipos de penicilina. Los tipos ms comunes de penicilina son: Penicilina F, G, X, K., cuyas estructuras se indicarn despus. La mayor parte de las penicilinas son mezclas generalmente de los tipos F, G, K, aunque la penicilina G es la que se produce en mayor cantidad y la que se considera ms prctica. La penicilina G sdica cristalina debe contener al menos 90% de penicilina G.

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