RECONOCIMIENTO DE AMINOACIDOS QUE CONTIENEN AZUFRE EN LAS PROTEINAS

Los aminocidos son las unidades ms simples que componen las protenas. Algunos de ellos son esenciales, es decir, han de ser aportados diariamente a travs de los alimentos porque el organismo no es capaz de producirlos por s mismo, mientras que otros no son esenciales, puesto que el organismo s es capaz de sintetizarlos a partir de otros compuestos qumicos. En el grupo de los aminocidos esenciales se encuentra la metionina (un aminocido azufrado), mientras que la cistena es un aminocido no esencial, ya que se puede formar a partir del anterior (no al revs).Los aminocidos azufrados se diferencian del resto en que contienen azufre en su composicin, de ah su nombre. Tanto es as que la mayor parte del azufre que se consume en la dieta se encuentra en los aminocidos azufrados. El azufre es un mineral necesario para la formacin del colgeno y otros componentes proteicos que forman parte del tejido conectivo, como la queratina y otros mucopolisacridos que componen los huesos, los cartlagos, los tendones y los ligamentos. Por ello, un aporte adecuado de azufre a travs de aminocidos azufrados es esencial para el buen mantenimiento de la piel, el cabello, as como los ligamentos y los tendones. Para aminocidos azufrados utilizamos un medio alcalino y junto con sales de plomo formamos un precipitado negro (pbs) Reaccin de los aminocidos azufrados se pone de manifiesto por la formacin de un precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Se basa esta reaccin en la separacin mediante un lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo La cistena tambin es llamada cistina, pero esta ltima se trata de un dmero de dos cistenas a travs de un puente disulfuro. El grupo tiol de la cistena es nucleoflico y fcilmente oxidable. La reactividad aumenta cuando el tiol es ionizado y los residuos de cistena en protenas tienen valores de pH cercanos a la neutralidad, por lo que a menudo se encuentran tioles en forma reactiva en la clula. Debido a su alta reactividad, el grupo tiol de la cistena tiene numerosas funciones biolgicas. Desnaturalizacin de una protena En bioqumica, la desnaturalizacin es un cambio estructural de las protenas o cidos nucleicos, donde pierden su estructura nativa, y de esta forma su ptimo funcionamiento y a veces tambin cambian sus propiedades fsico-qumicas.

Las protenas se desnaturalizan cuando pierden su estructura tridimensional (Conformacin qumica) y as el caracterstico plegamiento de su estructura. Las protenas son filamentos largos de aminocidos unidos en una secuencia especfica. Son creadas por los ribosomas que "leen" codones de los genes y ensamblan la combinacin requerida de aminocidos por la instruccin gentica. las protenas recin creadas experimentan una modificacin en la que se agregan tomos o molculas adicionales, como el cobre, zinc y hierro. Una vez que finaliza este proceso, la protena comienza a plegarse sin alterar su secuencia (espontneamente, y a veces con asistencia de enzimas) de forma tal que los residuos hidrfobos de la protena quedan encerrados dentro de su estructura y los elementos hidrfilos quedan expuestos al exterior. La forma final de la protena determina cmo interaccionar con el entorno. Si la forma de la protena es alterada por algn factor externo (por ejemplo, aplicndole calor, cidos o lcalis), no es capaz de cumplir su funcin celular. ste es el proceso llamado desnaturalizacin. Es la destruccin de la estructura terciaria de una protena, en la que pasa de una forma plegada o enroscada a una forma opuesta, por rompimiento de enlaces de hidrgeno. En la protena desnaturalizada ocurren cambios estructurales que afectan sus propiedades biolgicas, como la hormonal, enzimticas y la actividad inmunolgica. Es generalmente un proceso irreversible, fuertemente endotrmico, que produce un desorden del sistema. Los principales agentes desnaturalizantes son: a) Altas temperaturas, provocan la coagulacin. Ej. Huevo cocido. b) Cambios bruscos de pH. Puentes disulfuro Los puentes disulfuro tienen un papel importante en el ensamblaje y la estabilidad de algunas protenas, normalmente las protenas secretadas al medio extracelular. Desde que la mayora de los compartimentos celulares son medios reducidos, los puentes disulfuros son generalmente inestables en el citosol, excepto algunas excepciones que vemos a continuacin. Los puentes disulfuros en protenas se forman por la oxidacin de grupos tioles de residuos de cistena. Los otros aminocidos que tambin contienen azufre, como la metionina no pueden formar puentes disulfuro. Oxidantes muy agresivos convierten la cistena en los correspondientes cido sulfnico y cido sulfnico. Los residuos de cistena tienen un papel de gran valor en protenas reticuladas, ya que incrementa la rigidez de las protenas y tambin confiere resistencia proteoltica. Dentro de la clula, los puentes disulfuros entre residuos de cistena actan de soporte en la estructura secundaria de polipptidos. La insulina es un

ejemplo de protenas con cistenas reticuladas, en donde dos cadenas separadas de pptidos son conectadas por un par de puentes disulfuros.Las protenas disulfuro isomerasas catalizan la propia formacin de puentes disulfuros; la clula transfiere cido deshidroascrbico al retculo endoplasmtico. En la naturaleza, las cistenas se encuentran , en general, oxidadas a cistinas siendo su nica funcin la nucleoflica. ENLACE DISULFURO Dos cistenas unidas por un puente disulfuro (ss) para formar una cistina. un enlace disulfuro, puente disulfuro o enlace ss (enlace azufre-azufre) es un enlace covalente fuerte entre grupos tiol (-sh2) de dos cistenas. Este enlace es muy importante en la estructura, plegamiento y funcin de las protenas. El grupo sulfhidrilo (-sh2) de la cistena es muy reactivo. la reaccin ms comn es una oxidacin reversible que forma un disulfuro. la oxidacin de dos molculas de cistena forma cistina, una molcula que contiene un enlace disulfuro. cuando dos residuos de cistena forman un enlace as, se denomina puente disulfuro. el enlace puede producirse en una nica cadena para formar un anillo o entre dos cadenas separadas para formar un puente intermolecular. los puentes disulfuro ayudan a estabilizar muchos polipptidos y protenas. Debido a la habilidad de los tioles de sufrir reacciones redox, la cistena tiene propiedades antioxidantes. Estas propiedades antioxidantes de la cistena son mayoritariamente expresadas en glutationes tripptidos que se producen tanto en humanos como en otros organismos. La disponibilidad sistemtica de glutatin oral (GSH) es insignificante, por esto ha de ser biosintetizado a partir de los aminocidos que lo constituyen como son la cistena, la glicina y el cido glutmico. El cido glutmico y la glicina se encuentran abundantemente en la mayora de las dietas occidentales, as que la disponibilidad de cistena puede ser el substrato limitante. Estos papeles de la cistena son tpicos limitados al medio intracelular, donde el medio est reducido y la cistena no se encuentra oxidada en cistina. Unin al ion metlico Aparte de las hierro-sulfuro-protenas, muchas otros cofactores metlicos en enzimas son uniones para el sustituyente del tiol de los residuos de cistena. Ejemplos de esto son el zinc en los dedos de zinc y el alcohol desidrogenasa; el cobre en las protenas azules cuprosas, el hierro en el citocromo P450; y el nquel en las [NiFe]-hidrogenasa. El grupo tiol tambin tiene gran afinidad con los metales pesados, por lo que protenas que contienen cistena como la metalotionina que unir metales como el [[mercurio], plomo y cadmio fuerte.

HIPOTESIS Lo que obtendremos al emplear la tcnica de Reconocimiento de

Aminocidos Azufrado en las protenas es identificar aquellas que tienen en su composicin aminocidos con azufre (metionina y cistena) por medio de una coloracin cafenegroso. OBJETIVO: Demostrar que en algunas protenas se pueden encontrar aminocidos azufrados. FUNDAMENTO Investigar

MATERIAL Y EQUIPO 1 Tubo de ensaye 1 Pinza para tubo de ensaye 1 Mechero 1 Bao Mara 1 Tripi 1 Gotero 1 Pipeta 5 ml REACTIVOS Clara de huevo Hidrxido de sodio al 20% Acetato de plomo TECNICA: 1. Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. de albmina de huevo (clara de huevo). 2. Aadir 2 cc. de solucin de hidrxido sdico al 20%. 3. Aadir 10 gotas de solucin de acetato de plomo al 5%. 4. Calentar el tubo hasta ebullicin a bao mara. 5. Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha formado sulfuro de plomo, utilizndose el azufre de los aminocidos, lo que nos sirve para identificar protenas que tienen en su composicin aminocidos con azufre.