Abstrak : Tujuan dari penelitian ini adalah untuk melaporkan terjadinya variasi somaklonal dalam in vitro regenerasi Ledebouria

graminifolia sebuah bola adat di Botswana dan menilai penggunaan potensi sebagai tanaman hias. Tanaman yang menggunakan regenerasi kultur jaringan yang ditanam dalam campuran tanah kebun dan tanah pot di rumah kaca dan juga ditanam di lapangan dalam kondisi alam tanpa sumber daya tambahan yang disuplai ke tanaman. Fitur morfologi dan toleransi terhadap kekeringan yang digunakan untuk menilai variasi somaklonal antara klon. In vitro tanaman diperbanyak tumbuh dengan baik di rumah kaca, mereka menghasilkan daun yang menarik besar dan terus menerus berbunga banyak. Lapangan tanaman tumbuh dengan baik dan selamat diaklimatisasi periode kekeringan dan suhu tinggi. Evaluasi morfologi tanaman menunjukkan lima varian visual yang berbeda. Morphotype 1 terdiri dari tanaman bersujud dengan besar, lebih sedikit, daun hijau terang. Morphotype 2 terdiri dari tanaman bersujud dengan besar, daun lanset hijau kurang terang. Morphotype 3 terdiri dari tanaman dengan media aristate, keabu-abuan hijau, daun keriting dengan penampilan karet. Morphotype 4 memiliki karakteristik peralihan antara 2 dan 3 dengan keabuabuan, daun lanset. Morphotype 5 biasanya mewakili orangtua fenotip tanaman liar, terdiri dari tanaman yang sangat tegak dengan keriting, daun linier dengan penampilan karet. Varian juga menunjukkan perbedaan toleransi terhadap kekeringan dengan morphotypes 3 dan 5 yang paling toleran dan morphotypes 1 dan 2 yang paling toleran. Bohlam bisa disebarkan massal dan dieksploitasi untuk tujuan hias di Botswana untuk melengkapi atau sebagai alternatif untuk tanaman eksotis populer saat ini mendominasi industri florikultur. PENDAHULUAN

Dalam propagasi in vitro memiliki potensi besar untuk menyebarkan tanaman vegetatif mereproduksi dan telah diusulkan untuk menjadi alat bioteknologi yang menawarkan solusi potensial untuk masalah tanaman obat dan hias adat atas-eksploitasi di banyak bagian Afrika (Afolayan dan Adebola, 2004). Misa propagasi menggunakan teknik kultur jaringan dapat menawarkan alternatif murah untuk pemanenan dari alam seperti praktik umum di banyak negara Afrika dan juga berkontribusi terhadap konservasi tanaman yang berguna adat (McCartan dan Van Staden, 1999;. Entwistle et al, 2002; Afolayan dan Adebola, 2004). Tanaman yang telah diregenerasi menggunakan metode kultur jaringan sering menunjukkan variasi (Sahijram et al, 2003;. Podwyszynska, 2005). Ini variasi, disebut variasi somaklonal (Larkin dan Scowcroft, 1981; Scowcroft dan Larkin, 1988) telah ditemukan memiliki dasar genetik dan dapat ditularkan ke keturunan melalui reproduksi seksual atau perbanyakan vegetatif. Kultur jaringan tanaman, sehingga dapat memberikan variabilitas genetik tambahan dengan cepat menggunakan teknologi sederhana dan dapat menyediakan alat tambahan untuk perbaikan tanaman (Evans dan Sharp, 1986; Bajaj, 1990; Karp, 1995; Jain dan De Klerk, 1998;. Tremblay et al, 1999) dan peninjauan komprehensif tentang propagasi tanaman hias menggunakan kultur jaringan diberikan oleh Rout et al. (2006).

Botswana adalah kebanyakan kering tandus semi dan negara kaya keanekaragaman tanaman asli disesuaikan dengan kondisi kekeringan. Tanaman dan produk mereka adalah penting dalam mempertahankan kehidupan di masyarakat pedesaan dan banyak memiliki potensi ekspor yang tinggi (Taylor, 1985). Tanaman yang dipanen dari alam adalah sayuran berdaun terutama, buah-buahan dan tanaman obat (Mateke dan Matlhare, 2000;. Rositter et al, 1997) dan dijual di pasar baik lokal maupun luar negeri dan telah memainkan peran besar dalam melengkapi pendapatan sebagian besar masyarakat pedesaan. Di Botswana, pengumpulan dan pemasaran tanaman asli telah menjadi sangat populer dibandingkan dengan jalan-vended makanan, terutama di kota-kota besar. Sementara ada sejumlah bisnis yang terus berkembang dan pedagang tanaman pembibitan tanaman jalanan di negara ini, ada sedikit usaha untuk mempromosikan eksploitasi / penggunaan tanaman asli sebagai tanaman hias meskipun kesadaran dan minat di lingkungan perkotaan hijau. Sebagian besar spesies tanaman saat ini sedang dimanfaatkan sebagai tanaman hias untuk rumah dan kebun yang eksotik dan succulents beberapa adat. Dimana, mereka digunakan, tanaman adat sering undervalued mendukung eksotik dan alien. Namun, ada banyak non-tanaman sukulen dengan potensi besar yang dapat digunakan dalam industri florikultur. Selain itu, tanaman yang saat ini dikumpulkan dari alam liar memiliki potensi besar untuk menggunakan serbaguna. Tanaman yang kurang dimanfaatkan dapat dimanfaatkan di industri florikultur dan dapat memberikan kontribusi signifikan terhadap mata pencaharian masyarakat dengan memberikan penghasilan tambahan terutama untuk perempuan pedesaan dan perkotaan, yang merupakan kekuatan pendorong di belakang sektor ekonomi booming informal di Botswana. Ada banyak keuntungan dari menggunakan tanaman asli sebagai tanaman hias dibandingkan dengan spesies eksotis atau asing. Tanaman asli biasanya juga disesuaikan dengan kondisi kering lokal dan meningkatnya kekurangan hujan dan air irigasi dari yang paling eksotik. Masyarakat pedesaan, khususnya perempuan, yang akrab dengan tanaman dan biasanya memiliki kegunaan ganda potensial. Oleh karena itu tanaman asli bisa mengisi kesenjangan yang penting dalam industri hortikultura (Mander et al., 1996). Oleh karena itu ada kebutuhan untuk menciptakan kesadaran dan mempromosikan keunggulan ini eksploitasi tanaman tradisional untuk kepentingan hias sehingga dapat menawarkan satu alternatif sumber pendapatan terutama untuk perempuan pedesaan dan untuk memberdayakan mereka dengan ide-ide baru menggunakan potensi multiguna dan tidak hanya panen tanaman untuk penggunaan obat, tetapi juga dalam propagasi, perkalian dan untuk konservasi keanekaragaman hayati. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi kinerja in vitro regenerasi tanaman Ledebouria graminifolia di rumah hijau dan aklimatisasi mereka untuk kondisi lapangan, sehingga untuk mempromosikan eksploitasi berkelanjutan sebagai tanaman hias dan untuk konservasi tanaman. Ledebouria graminifolia, adalah sebuah bola pribumi di Botswana dengan potensi besar sebagai tanaman hias untuk indoor maupun outdoor. Bohlam secara luas dipanen dari alam dan dijual di pasar untuk sifat obat (Mutanyatta et al, 2003;.. Shushu et al, 2005).

BAHAN DAN METODE Penelitian ini dilakukan di University of Botswana, Departemen Ilmu Biologi di 2004-2007. Tanaman yang digunakan dalam penelitian ini adalah regenerasi secara in vitro dari eksplan daun pada skala Murashige dan Skoog (1962) menengah ditambah dengan BA dan NAA yang hasilnya telah diterbitkan di tempat lain (Shushu et al., 2005). Lampu awalnya diperoleh dari pedagang pasar tanaman obat. Tanaman pertama kali dipindahkan ke pot tanah komersial di pot 8 cm dan lebar diaklimatisasi di rumah hijau untuk tiga bulan. Setelah berdirinya ke dalam tanah, tanaman dipindahkan ke pot yang lebih besar dalam campuran tanah lapangan dan pot tanah komersial (1:1). Tanaman yang dipelihara di rumah hijau dan pertumbuhan dan perkembangan tanaman dipantau. Aklimatisasi tanaman untuk kondisi lapangan: Dalam rangka untuk menilai kemampuan dalam regenerasi tanaman in vitro untuk tumbuh dalam kondisi lapangan alami, beberapa tanaman yang diambil dari rumah kaca dan ditanam di luar plot terbuka dan tidak diberi suplemen tambahan seperti sebagai pupuk. Tanaman yang disiram sekali sehari hanya untuk bulan pertama dan selanjutnya dibiarkan tumbuh di bawah kondisi lapangan alami selama satu tahun.

Penentuan varian: Selama masa pertumbuhan, tanaman secara teratur diperiksa untuk kehadiran varian fenotipe di rumah hijau dan lapangan dan fenotipe yang berbeda diikuti untuk melihat stabilitas mereka di lapangan. Ciri-ciri morfologi yang digunakan untuk menentukan variasi somaklonal (Bajaj, 1990; Tremblay et al, 1999.). Ukuran, jumlah daun sepenuhnya diperluas, bentuk, warna dan pola permukaan daun dan bunga ditentukan untuk setiap tanaman setelah satu tahun pertumbuhan di lapangan. Jumlah tanaman yang bertahan dan kebiasaan pertumbuhan tanaman juga ditentukan. Analisis varians digunakan untuk menentukan perbedaan dalam jumlah dan ukuran daun varian. HASIL Tanaman rumah kaca: Secara in vitro tanaman regenerasi diaklimatisasi berhasil ketika ditransfer di tanah di rumah hijau dengan survival rate 90%. Tanaman terus tumbuh sangat baik di rumah hijau di semi-peliharaan kondisi (Gambar 1). Mereka diproduksi besar, menarik, daun mengkilap dan Inflorescences kecil dengan bunga ungu (Gambar 1e, f). Tanaman menghasilkan daun baru terus-menerus ketika disiram secara teratur. Tanaman juga terus memproduksi Inflorescences berhasil, beberapa tanaman yang dihasilkan 2-3 Inflorescences pada satu waktu. Aklimatisasi tanaman untuk kondisi lapangan: Ada 100% kelangsungan tanaman dipindahkan ke kondisi lapangan. Tanaman yang disiram selama satu bulan saja setelah transfer. Tanaman selamat periode paparan suhu yang sangat

tinggi (suhu rata-rata 38 C.) Dan kekeringan. Tanaman kehilangan semua daun selama musim dingin (Mei-Juli). Sembilan puluh enam persen dari tanaman kembali pertumbuhan selama musim hujan (Oktober-April). Data yang disajikan dalam Tabel 1 di bawah ini diambil dari daun baru yang dikembangkan selama periode basah, hangat berikut musim dingin mati-kembali.

Fig. 1: Ledebouria graminifolia plants: (a) Wild type phenotype, (b) In vitro regenerated plants in the green house, (c) Variants of in vitro regenerated Ledebouria in green house (wild type, far left), (d) In vitro propagated plants new growth after winter die off and, (e) Young inflorescence of regenerants and (f) Ledebouria flowers Table 1: Variation in size and No. of leaves and flowering of variants grown in the field

Data are expressed as MeanSE

Variasi somaklonal: Pada tumbuhan vitro regenerasi menunjukkan tingkat tinggi variasi dalam kebiasaan pertumbuhan dan morfologi daun di rumah kaca dan di lapangan (Gambar 1c, Gambar 2, Tabel 1.). Tanaman lapangan menunjukkan lima jenis morfologi terlihat berbeda (Gambar 2). Morphotype 1 terdiri dari tanaman dengan besar, lebih sedikit, daun hijau terang dengan Speckles kemerahan kecil (Gambar 2 T1a dan T1b). Tipe ini menunjukkan kebiasaan tumbuh bersujud. Morphotype 2 terdiri dari tanaman dengan besar, daun lanset yang hijau agak terang (Gambar 2, T2). Morphotype 3 terdiri dari media lanset, daun sangat aristate (Gambar 2, T3). Daun berwarna hijau keabu-abuan dengan penampilan karet yang melingkar ke dalam. Tanaman sedikit tegak. Morphotype 4 memiliki karakteristik peralihan antara 2 dan 3 dengan keabu-abuan, daun lanset sedikit (Gambar 2, T4). Morphotype 5 terdiri dari tanaman yang sangat tegak dengan menggulung, daun menonjol linier dengan penampilan kenyal dan Speckles kemerahan yang menonjol di dasar (Gambar 2, T5). Jenis ini biasanya direpresentasikan orangtua fenotip tanaman liar. Ada perbedaan yang signifikan dalam panjang daun antara fenotipe tipe liar dan semua varian dan juga antara morphotypes 2 dan 3. Lebar daun juga berbeda antara tipe liar dan semua varian tapi tidak di antara varian. Ada juga perbedaan yang signifikan dalam jumlah daun yang dihasilkan oleh varian. Semua jenis menunjukkan bergelombang menonjol, daun berbintik karakteristik tanaman. Hanya Morphotype 1 dan 2 bunga yang dihasilkan dalam musim tanam. PEMBAHASAN Penelitian ini telah menunjukkan bahwa secara in vitro regenerasi adat bola Ledebouria graminifolia diaklimatisasi sangat baik baik dengan kondisi rumah kaca dan lapangan. Tingkat kelangsungan hidup di rumah hijau adalah 90%. Di bawah lingkungan semipeliharaan, Ledebouria diproduksi daun menarik lebih besar dari tanaman liar ketika diberikan dengan air dan medium pertumbuhan yang baik seperti campuran tanah dan pot tanah. Meskipun bola yang dihasilkan Inflorescences menarik kecil dan tidak begitu (Gambar 1c, e). Ledebouria dapat tumbuh sebagai tanaman hias pot untuk daun berbintik-bintik besar yang menarik, fitur yang diinginkan dalam industri. In vitro regenerasi tanaman menunjukkan toleransi Ledebouria luar biasa dan ketahanan terhadap kondisi lingkungan yang ekstrim bila ditanam di lapangan. Tanaman menyesuaikan diri dengan baik setelah transfer ke lapangan dan terkena kondisi alam dengan perawatan minimal. Ada 96% tingkat kelangsungan hidup di lapangan. Tanaman melewati kembali mati musim dingin (Mei-Juli) dan mampu melanjutkan pertumbuhan

setelahnya. Botswana memiliki tingkat yang sangat rendah curah hujan antara 200 dan 600 mm per tahun dan suhu dapat mencapai setinggi 40 C Kemampuan in vitro tanaman diperbanyak untuk menahan kondisi kering membuat Ledebouria tanaman yang cocok untuk digunakan untuk mengisi kesenjangan yang penting dalam industri florikultur berkembang dan tumbuh di Botswana yang saat ini sedang didominasi oleh tanaman eksotis yang biasanya membutuhkan sumber daya tinggi dalam menempatkan , terutama air. Ledebouria juga merupakan obat yang penting bola di Botswana maka luas dipanen dari alam liar (Mutanyatta et al., 2003). Kultur jaringan dapat digunakan untuk massa menyebarkan tanaman (Shushu et al., 2005) untuk distribusi ke masyarakat untuk digunakan sebagai tanaman hias indoor atau outdoor serta maka kontribusi untuk konservasi tanaman. Variasi somaklonal: Pada tumbuhan vitro regenerasi menunjukkan berbagai variasi morfologi daun seperti ukuran daun, bentuk, warna dan kebiasaan tumbuh di rumah kaca dan di lapangan terutama mengingat bahwa semua tanaman ini regenerasi dari bohlam tunggal. Variasi somaklonal adalah variasi yang diamati antara tanaman diregenerasi dengan kultur jaringan (Larkin dan Scowcroft, 1981). Ada beberapa cara untuk menilai variasi somaklonal, variasi fenotip dan respon terhadap kondisi lingkungan digunakan untuk menilai variasi dalam penelitian ini. Ledebouria liar tanaman terdiri dari daun linear dengan Speckles hijau abu-abu dan gelap. Dasar daun dihiasi dengan Speckles ungu terang. Evaluasi morfologi in vitro tanaman regenerasi setelah satu tahun `s menunjukkan pertumbuhan lima jenis yang berbeda variasi. Morphotype 1 memiliki kebiasaan tumbuh bersujud; memiliki jumlah terkecil namun terbesar, daun menarik. Namun jenis ini tidak terlalu baik disesuaikan dengan kondisi lapangan seperti yang ditunjukkan oleh pengeringan awal daun yang dimulai dari ujung. Morphotype 2 memiliki daun lebih dari tipe 1. Namun, ini adalah satu-satunya varian yang dihasilkan bunga. Morphotypes 3 telah semi-tegak kebiasaan. Jenis ini menghasilkan daun lebih yang tangguh dengan penampilan kasar. yang sangat panas dan kering. Daun Morphotype 3 cenderung melengkung ke dalam mungkin mengurangi permukaan daun lamina terkena sebagai adaptasi terhadap kekeringan. Morphotype 5 terdiri dari panjang, daun menggulung ke dalam linear yang juga. Seperti disebutkan sebelumnya, ini mewakili fenotipe alami ditemukan di alam liar. Morphotype 4 memiliki karakteristik peralihan antara 2 dan 3 (Gambar 2). Telah dicatat dalam studi ini bahwa variasi dalam menanggapi kondisi lingkungan tampaknya berhubungan dengan morfologi dan pertumbuhan variasi kebiasaan ditunjukkan di atas. Artinya, Morphotype 1 dan 2 tanaman (dengan besar, daun lebih hijau dan kebiasaan bersujud) yang rentan terhadap pengeringan lebih dari jenis lainnya. Ukuran daun tidak bisa menyumbang untuk ini karena tidak ada perbedaan yang signifikan antara varian kecuali tipe 5. Kurangnya toleransi terhadap kekeringan bisa saja karena kebiasaan pertumbuhan prostat dan lamina daun sepenuhnya terkena yang sangat dekat dengan tanah dipanaskan yang mungkin telah menyebabkan luas permukaan yang tinggi terkena untuk kehilangan air meningkat. Morphotype 3, 4 dan 5 lebih toleran terhadap kekeringan dan panas, juga mereka adalah tanaman terakhir kehilangan daun sebagai ditetapkan dalam musim dingin mungkin karena keriting daun dan semi kebiasaan tumbuh tegak yang mengurangi kehilangan air dari daun. Faktor lain seperti perbedaan dalam anatomi daun fitur mungkin telah terlibat, aspek ini tidak diselidiki dalam penelitian ini.

Ada banyak faktor mungkin yang menyebabkan variasi somaklonal. Kelainan genetik dalam sel-sel eksplan awal, sumber eksplan, waktu dalam budaya dan hormon pertumbuhan telah dikutip untuk memiliki efek pada tingkat variasi somaklonal (Karp, 1995). Variasi yang terlihat pada tanaman ini bisa saja karena efek zat pertumbuhan. Semua tanaman dalam penelitian ini berasal dari lampu tunggal sebagai sumber eksplan dan durasi tanaman dalam budaya adalah 12 minggu. Hal ini kurang mungkin bahwa genotipe dan durasi dalam budaya bisa menjadi sumber utama dari variasi tinggi terlihat dalam studi ini meskipun kita tidak bisa sepenuhnya diskon itu. Variasi ditemukan di dalam tanaman in vitro regenerasi mungkin tidak stabil karena gangguan fisiologis dan pengaruh epigenetik (Bajaj, 1990). Variasi diamati pada tanaman ini, tampaknya stabil sebagai variasi fenotipe yang disajikan dalam penelitian ini diperoleh dari set generasi kedua daun yang dikembangkan setelah musim dingin mati-belakang yang mirip dengan fenotip tanaman yang dipindahkan ke lapangan. Variasi somaklonal telah ditemukan untuk menjadi alternatif yang berguna untuk pengembangan produk baru. Ia menawarkan kesempatan untuk mengungkap variabilitas alami pada tanaman terutama untuk tanaman diperbanyak vegetatif (Larkin dan Snowcroft, 1981; Bajaj, 1990; Sahijram et al, 2003.). Tingginya tingkat variasi fenotipe terungkap dalam penelitian ini dianggap menjadi sumber yang baik dan berharga dari fenotipe yang diinginkan yang dapat dimanfaatkan dalam florikultur komersial untuk memenuhi preferensi konsumen pasar yang berbeda dalam industri.

Penggunaan tanaman asli di industri tanaman hias telah benar-benar tidak diberi banyak perhatian meskipun banyak dari tanaman ini dapat menawarkan alternatif yang lebih baik bagi spesies eksotis yang saat ini banyak digunakan dalam industri ini. Ada sangat sedikit negara di Afrika yang telah mengarahkan upaya menuju mempopulerkan tanaman asli untuk digunakan hias (Reinten dan Coetzee, 2002) meskipun bunga yang tumbuh di lingkungan perkotaan hijau. Banyak tanaman yang digunakan untuk tujuan pengobatan juga dapat digunakan sebagai tanaman hias. Penelitian dan budidaya komersial dari lampu adat untuk pasar obat dan hias telah membuat kemajuan di negara lain seperti Afrika Selatan (McCartan dan Van Staden, 1999; Reinten dan Coetzee, 2002) dan Turki (Entwistle et al, 2002;. Acar et al. , 2007). Botswana memiliki keragaman lampu adat seperti Ledebouria sp. yang cocok untuk industri tanaman hias yang bisa melengkapi atau menawarkan alternatif yang ideal untuk tanaman eksotis saat ini mendominasi lanskap kota dan swasta rumah kebun. Ledebouria bisa diproduksi secara massal diperbanyak dan didistribusikan untuk menanam sehingga berkontribusi terhadap perkotaan keanekaragaman hayati, pemanfaatan berkelanjutan dan konservasi. Upaya penelitian harus diarahkan pada metode propagasi massal yang efisien, persyaratan pertumbuhan untuk meningkatkan karakteristik agronomi dan pasar. UCAPAN TERIMA KASIH Penelitian ini merupakan perpanjangan dari penelitian tentang eksploitasi geophytes adat di Botswana: Kimia dan Biologi investigasi didukung oleh Kantor Penelitian dan Pengembangan dari University of Botswana, Penelitian suara No R028, yang dukungan keuangan syukur dihargai. .