REACCIONES Antgeno- Anticuerpo

Alfredo De Ioannes Inmunologa Bsica Facultad de Ingeniera Universidad de C hile Septiembre 2007

Caractersticas de la Interaccin Antgeno - Anticuerpo

Especfica Reversible Dependiente de pH Sensible a la Temperatura Sensible a la fuerza inica

Fuerzas implicadas en la Interaccin Antgeno - Anticuerpo

Puentes de hidrgeno Fuerzas electrostticas (enlaces inicos) Fuerzas de van der Waals Enlaces hidrfobicos

AFINIDAD Y AVIDEZ

Afinidad y Avidez de un anticuerpo por un epitopo

Afinidad
Suma de todas las fuerzas atractivas y repulsivas entre un sitio de unin del anticuerpo (paratopo) y el correspondiente epitopo. Se define por una constante de equilibrio (Ka), segn la ley de accin de masas.

Avidez
Fuerza con la que un anticuerpo multivalente se une a un Antgeno multivalente. Su valor es mucho mayor que la suma de las afinidades.

(ecuacin vlida solo para molculas monovalentes)

Cintica de la Reaccin
k

Hapteno + Ac k Ka = k k =

( Hapteno-Ac) (Hapteno-Ac) (Hapteno)(Ac)

[Ac] la concentracin de sitios libres de Ac [Ac-H] la concentracin de sitios ocupados del Ac

Los anticuerpos como sondas para buscar antgenos de inters

Ventajas
Especificidad Sensibilidad Estabilidad Versatilidad en el diseo: ELISA, IFI, Western blot, etc. Tiempo de ejecucin razonable: inutos a ~ hrs Costo conveniente Infraestructura mnima

Los anticuerpos como sondas para buscar antgenos de inters

Ej. Haptenos (drogas, toxinas, hormonas, etc).

Inmunizacin con Carrier-hapteno

Antisuero

Anlisis de los Ac. unidos a: Hapteno libre Hapteno en otra Protena Hapteno al mismo carrier

Tcnicas Inmunoanalticas
- Reaccin de precipitacin En medio lquido
Floculacin Nefelometra Precipitacin de complejos Inmunes Inmunodifusin doble Inmunodifusin radial Inmunoelectroforesis Rocket electroforesis Contrainmunoelectroforesis Inmunoelectroforesis cruzda bidimensional de Laurel

En gel

- Reaccin de aglutinacin
Aglutinacin pasiva Aglutinacin directa

- Fijacin y actividad hemoltica del complemento - Reacciones en fase slida

o o

ELISA Western blot

Reacciones de Precipitacin y Floculacin en solucin

Reacciones de sueros humanos de pacientes con Tiroiditis de Hashimoto auotoinmune.
c c Ex A o es

Equivalencia

Ex ce Ag so

Precipitado de protenas (mg)

Tiroglobulina agregada (mg)

Inmunodifusin Doble
(o de Ouchterloni)

Suero humano

Ej: Mezcla de antgenos y suero polivalente

AS (pozo central) : Antisuero de conejo anti-suero humano HSA: Albmina humana purificada HIg: Inmunoglobulina humana purificada

HIg

HSA

Suero humano

Ensayo Immunoturbidimtrico

Suero + Ag complejos insolubles Aumenta turbidez de la solucin y puede ser medida pticamente Turbidez proporcional a la cantidad de protenas en la muestra

Sensibilidad de mtodo se puede incrementar con los anticuerpos Unidos a ltex: mayores agregados

Inmunodifusin Radial
Ag

Anticuerpo incorporado al gel

El tamao de los halos es proporcional a la concentracin del antgeno

Reacciones de Aglutinacin
Se considera aglutinacin cuando el antgeno es particulado y tiene como tamao mnimo el bacteriano

Aglutinacin Directa: Las partculas o clulas tienen un antgeno intrnseco. Aglutinacin Pasiva: partculas o clulas a las cuales se le agrega el antgeno

Reacciones en fase slida

ELISA Western bots Inmunofluorescencia Cromatografa de Afinidad

ELISA

(Enzime linked immunosorbent assay )

Deteccin de anticuerpos

Deteccin de Antgeno

Determinacin de antgenos por ELISA

Competencia Sndwich

Densidad ptica

[ Ag ]

Densidad ptica

[ Ag ]

Caso de Haptenos

Caso de Protenas

Western blot
Precipitado producto enzimtico

Quimioluminiscencia
Sustrato Anti-anticuerpo-Enzima Anticuerpo especfico

Inmunofluorescencia indirecta

Anticuerpo anti-Acrosina

Se puede hacer con clulas vivas o fijadas, con o sin permeabilizar.

Anticuerpo anti-Ag de embrin de ratn

Cromatografa de Afinidad
Ej: Purificacin de un anticuerpo uniendo el antgeno a una resina (sp). Sin embrago, tambin se puede hacer lo contrario.
Anticuerpo

Anticuerpo no unido

Buffer de elusin

Elucin de Anticuerpo