1268 第四军医大学学报 ( J Fourth M il M ed Univ) 2005; 26 ( 14 ) 　http: / / journal. fmmu. edu.

cn

・研究原著 ・ 文章编号 : 1000 22790 ( 2005 ) 14 21268 204

抗人肝细胞癌单链抗体基因的构建和表达
陈 　葳 ,李 　旭 ,王 　莹 ,张利平 　 (西安交通大学医学院第一附属医院实验医学中心 ,陕西 西安 710061)

Genera tion and expression of a recom 2 【摘 　要 】目的 : 构建抗人肝细胞癌单链抗体基因 ,并在大肠

杆菌中表达 . 方法 : 采用 RT2PCR 法扩增抗体重链和轻链可
b inan t sin gle 2cha in Fv an tibody frag2 变区基因 ,用 ( Gly4Ser) 3 肽段连接 VH 基因和 VL 基因 ,构建克
m en t aga in st hepa tocellular carc in oma 隆载体 ,将测序完全正确的 ScFv基因克隆到分泌性表达载体
CHEN W ei, L I X u, WAN G Y ing, ZHAN G L i2P ing p CAN TAB 5 E 中诱导表达转化的 TG1 和 HB 2151 细胞 . 用
Center for LaboratoryM edicine, First Affiliated Hosp ital, M edical SDS2PAGE和免疫组化方法分析检测表达产物 . 结果 : DNA
College, Xi’an J iaotong University, Xiπan 710061, China 测序证实 ScFv基因结构正确 , 可在大肠杆菌中成功表达 , 游
离 ScFv相对 分子 质量大 约为 30 ku, 与 HC 2108, HepG22 和
【Abstract】A IM : To ge ne ra te a nd e xp re s s a s ing le 2cha in SMMC 27721 肝癌细胞有特异性的结合反应 . 结论 : 重组制备

Fv ( S cFv) fra gm e n t from the HCD 78 hyb ridom a p ro duc ing 的抗人 HCD78 分子单链抗体在人肝癌的基础和临床研究中
m o no c lo na l a n tibo d ie s a ga in s t hep a to ce llu la r ca rc inom a 具有潜在的应用价值 .
(HCC ). M ETHOD S: VH a nd VL ge ne se gm e n ts w e re ge n 2 【关键词 】癌 ,肝细胞 ; 单链抗体 ; 碱基序列

e ra te d from the HCD 78 hyb ridom a by re ve rse tra n sc ribe d 2 【中图号 】R392. 11 　　　【文献标识码 】A

po lym e ra se cha in re a c tio n ( R T2PCR ) . The S cFv w a s a r2

ra nge d in VH 2VL o rie n ta tio n, jo ine d to ge the r w ith a 15 2am i2 0 　引言
no 2a c id ( G ly4S e r) 3 linke r. The S cFv e nco d ing se que nce 原发性肝癌 ( hepatocellular carcinoma, HCC ) 是
w a s am p lifie d a nd c lo ne d in to pMD 18 2T ve c to r. Am p lifica 2 肝脏最常见的恶性肿瘤 ,占世界上肿瘤死亡原因的第
[1]
tio n o f the re su lta n t S cFv ge ne w a s p e rfo rm e d be fo re it w a s 三位 . 临床上一直寻找可用于 HCC 早期和准确诊
in tro duce d in to E. co li TG1 a nd HB 2151 via a p ha gem id 断的分子标志物 , 通过 HCC 的早期诊断提高患者的
ve c to r pCAN TAB 5E. So d ium do de cyl su lfa te 2po lya c rylam 2
治疗效果 . 抗肿瘤单克隆抗体 (M cAb ) 与抗原特异性
ide ge l e le c trop ho re s is ( SD S 2PAGE ) a nd im m uno h is to 2
结合对肿瘤诊断和导向治疗有较大的应用价值 ,特别
chem is try a na lys is w e re u se d to de te rm ine the cha ra c te ris 2
是相对分子质量小 、 结构简单 、
组织穿透力强 、 体内循
tic s o f the so lub le S cFv. RESUL TS: DNA se que nc ing
环半衰期短 、 较亲本抗体免疫原性低的单链抗体片段
p ro ve d tha t the HCD 78 S cFv ge ne w a s co rre c tly c lo ne d in to
( ScFv)的产生 , 不仅克服了 M cAb 的诸多不足 , 还可
the e xp re s s io n ve c to r. SD S 2PAGE a na lys is o f the re com b i2
na n t a n tibo dy re ve a le d tha t a p ro te in w ith app a re n t m o le cu 2 与其他效应分子构建成多种具有新功能的抗体分
[2]
la r w e igh t o f app ro xim a te ly 3 ×10 w a s succe s sfu lly e x2
4 子 ,成为肿瘤治疗的新手段 . 我们从自建的小鼠抗
[ 3, 4 ]
p re s se d in E. co li HB 2151. The S cFv a n tibo dy show e d a 人肝细胞癌 mAb杂交瘤细胞株 HCD78 中克隆出
sp e c ific re a c tio n w ith HC 2108, Hep G 22 a nd SMMC 27721 抗体基因 VH 和 VL , 构建并表达了抗人 HCD78 分子
hep a to ce llu la r ca rc inom a ce lls by im m uno h is to chem ica l a s 2 的 ScFv基因 .
sa y. CO NCL US IO N: The HCD 78 S cFv is succe s sfu lly co n 2
s truc te d a nd e xp re s se d, w h ich ha s the po te n tia l to be u se d
1 　材料和方法
a s a n a ge n t in the re se a rch a nd c lin ica l m a na gem e n t o f
1. 1 　材料 　HCD78 细胞为分泌抗人 HCC mAb 的鼠
hep a to ce llu la r ca rc inom a.
杂交瘤细胞株由本中心建株 . 肝细胞癌细胞株 ( HC 2
【 Keywords 】 ca rc inom a , hep a to ce llu la r; s ing le 2cha in a n ti2
108, HepG22, SMMC 27721 ) ; 宫 颈 癌 细 胞 株 ( Hela,
bo dy; ba se se que nce
SiHa, RJC 21 ) ; 胃腺癌细胞株 (M GC 2803 ) ; 卵巢癌细
胞株 (AO10 /17 ) ; 肺腺癌细胞株 ( A549 ) 细胞由本中
收稿日期 : 2005 202 228; 　修回日期 : 2005 204 204
心保存 . PMD18 2T vector购自大连宝生物工程公司 ;
基金项目 : 陕西省自然科学基金 ( 1999SM52)
通讯作者 : 李 　旭 . Tel. ( 029) 85323528 　Email. li. xu@ tom. com
p CAN TAB 5 E 表达载体 、TG1 和 HB2151 表达体系为
作者简介 : 陈 　葳 ( 1962 2) , 女 (汉族 ) , 福建省上杭县人 . 副研究员 . 大连理工大学胡学军博士惠赠 ; 3 ′ 2full RACE 试剂
Tel. ( 029) 85323528 　Email. chw62@ tom. com 盒 、5 ′2Full RACE 试剂盒 、PCR 片段回收试剂盒均购

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自大连宝生物工程公司 ; N ot I, S fil I内切酶 、T4 DNA
连接 酶 为 Pharmacia 公 司 产 品 ; Taq DNA 聚 合 酶 、
RN ase A 为 TaKaRa 产品 ; 琼脂糖 、IPTG, dNTP、
酵母
提取 物 、胰 蛋 白 胨 等 为 Sigma 产 品 . 轻 链 引 物
上游 GGGCGGCCGCTTTTATT,下游 CAACTAGTTGAC
　　　N ot I　　　　　　　　　　　　　L inker
ATTGTGAT. 重链引物 　A: AGTGAAGATATCCTGY2
AAGGC; R t: GACGTGTCTACAGTAGT;
CAGCTACTGGATGCA; S2: GAGGCCTGGACAAGGC 2
CT; A2: AGGCTGCTGAGCTGCATG; A1: ACTCCT2
GAGACGCCAGAT. 引物由大连宝生物公司合成 .
1. 2 　方法
1. 2. 1 　RNA 的提取和第一链 cDNA 的合成 　取 1 ×
6
10 左右的对数生长期抗人 HCC 杂交瘤细胞 ,一步法
提取细胞总 RNA. 采用 O ligo 2dT为 3 ′
端的引物进行
RT2PCR 扩增 cDNA.
1. 2. 2 　ScFv基因的扩增 　加入 VL 上下游引物进行
PCR. VH 基因的扩增采用 3 ′ 端未知序列的扩增法 ( 3 ′
RACE )和 5 ′
端未知序列的扩增法 ( 5 ′
RACE ) . 通过 3 ′
RACE, 5 ′
RACE 获得 VH 的全序列 , 在 VH 序列的两
头设计带有 S fil I和 L inker部分基因的引物进行普通
RT2PCR 反应 ,重叠延伸连接法将 VH , VL 基因用 L in2
ker连接起来 . 应用 AB I373 测序仪进行 DNA 测序 .
1. 2. 3 　克 隆 载 体 的 构 建 　将 ScFv 基 因 插 入 到
PMD18 2T载体 ,进行克隆测序 . 制备 JM109 感受态细
胞 , 取 ScFv 连 接 反 应 物 , 加 入 到 新 鲜 感 受 态 菌 株
JM109 中进行热转化 . 采用 PCR 法筛菌并判断插入
方向 (M13 247, RV 2M , Prim er) . 从中选择 6 个阳性
克隆大量培养后 , 提取质粒 , 进行 DNA 测序 , 并与
VH , VL , L inker 序列进行对比 , 判断点突变和与鼠
ScFv同源性 . 选择序列完全正确的一个克隆 , 进行
N ot I, S fil I双酶切反应 .
1. 2. 4 　p CAN TAB 25 E 表达载体的构建 　纯化双酶切
后的 ScFv片段 ,与载体 p CAN TAB 5 E 连接 . 将重组体
加入新鲜制备的 TG1 和 HB 2151 感受态细胞热转
化 . 从 TG1 和 HB 2151 转化菌平板上分别选取生长
良好的白色单菌落 ,进行 PCR 筛菌 .
1. 2. 5 　可溶性抗体的诱导表达及检测 　从 SOB 2AG
平板上挑取一个筛菌结果阳性的 HB 2151 单菌落接
种于 2 ×YT2AG培养液 , 摇菌 , 其离心上清中即含可
溶性单链抗体 . 沉淀分两等份 ,一份用于提取细胞周
质中的可溶性单链抗体 ; 另一份用 PB S重悬沉淀 、 煮
沸、 离 心 , 取 上 清 以 获 取 全 细 胞 裂 解 液 中 的 抗 体.
SDS2PAGE 法鉴定可溶性 ScFv的分子质量 .
1. 2. 6 　可 溶 性 抗 体 的 活 性 鉴 定 　取 HC2108,
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HepG22, SMMC 27721, Hela, SiHa, RJC 21, M GC 2803,
AO10 /17, A549 细胞为抗原 ,采用免疫组化法对全细
胞裂解液中的抗体进行活性鉴定 ,以抗人肺癌单链抗
体为阴性对照 . 以细胞染色为阳性反应 ,阳性细胞 >
50%以上判定为 7 , 25% ～50%为 6 , < 25%为 +.
2 　结果
S1: CAC 2 2. 1 　VH , VL , ScFv 基因测序 　VH 基因片段大小为
390 bp , 5 ′
端带有 S fil I酶切位点 , 3 ′
端带有 L inker的
一段序列 ; VL 基因片段大小为 355 bp , 5 ′ 端带有 L in2
ker的一段序列 , 3 ′ 端带有 N ot I酶切位点 , 与预期的
VH 基因和 VL 基因片段大小相一致 . ScFv 基因全长
835 bp ( Fig 1 ) , VH 基因位于 L inker上游 , VL 基因位
于 L inker下游 ( Fig 2 ) .
1, 3: DL2000 marker; 2: ScFv gene.
Fig 1 　PCR p roducts of single chain variable fragment
图 1 　ScFv扩增产物
2. 2 　 ScFv 基因克隆与扩增 　用 N ot I, S fi I酶切测序
正确的克隆 ,得到 ScFv基因 ,将其与 p CAN TAB 5 E 载
体连接 , 在转化的 TG1 和 HB 2151 菌平板上获得生
长良 好 的 白 色 单 菌 落 , PCR 也 证 实 转 化 成 功
( Fig 3 ) .
2. 3 　可溶性 ScFv 蛋白的鉴定 　 SOB 2AG 平板上阳
性的转化 HB2151 单菌落经 IPTG诱导表达后 , 分别
取经诱导的转化 HB 2151 菌周质腔液 、 细胞培养上
清液 、 全细胞裂解液 10 μL , 进行 SDS2PAGE 电泳 , 电
泳结果示全细胞裂解液在 30 ku 左右位置上出现条
带 ,细胞培养上清液和周质腔液条带不明显 ( Fig 4 ) .
此结果与预计的 ScFv 分子质量为 30 ku 左右相符
合 . 全细胞裂解液条带明显 ,说明全细胞裂解液蛋白
表达量比周质腔液和细胞培养上清液表达量多 .
2. 4 　可溶性抗体的活性鉴定 　含抗肝细胞癌单链抗
体的全细胞裂解液与 HC 2108 ( + ) , HepG22 ( 6 ) 和
SMMC 27721 ( 6 ) 细胞有特异性的结合反应 , 与 Hela
( + ) ,M GC 2803 ( + ) 和 A549 ( ±) 有弱的交叉反应 ,
与 SiHa ( - ) , RJC - 1 ( - ) 和 AO10 /17 ( - ) 无交叉
反应 .
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A 　　A 　 I　 P　 A 　 Q 　 V 　 Q 　 I　 Q 　 Q 　 P　 G　 S　 E 　 L 　 V
GCG GCC A TC CCG GCC CAG GTC CAA CTG CAG CAA CCT GGG TCT GAG CTG GTG

　S f il I
R 　 P　 G　 A 　 S　 V 　 K　 L 　 S　 C 　 K　 A 　 S　 G　 Y　 T　 E
AGG CCT GGA GCT TCA GTG AAG CTG TCC TGC AAG GCT TCT GGC TAC ACA TTC

T　 S　 Y　 W 　 M 　 H 　 W 　 V 　 K　 Q 　 R 　 P　 G　 Q 　G　 L 　 E
ACC AGC TAC TGG A TG CAC TGA GTG AAG CAG AGG CCT GGA CAA GGC CTT GAG

W 　 I　 G　 N 　 I　 Y　 P　 G　 S　 G　 S　 T　 N 　 Y　 D 　 E 　 K
TGG A TT GGA AA T A TT TA T CCT GGT AGT GGT AGT ACT AAC TAC GA T GAG AAG

F　 K　 S　 K　 A 　 T　 L 　 T　 V 　 D 　 T　 S　 S　 S　 T　 A 　 Y
TTC AAG GGC AAG GCC ACA CTG ACT GTA GAC ACA TCC TCC AGC ACA GCC TAC

M 　 Q 　 L 　 S　 S　 L 　 T　 S　 E 　　D 　 S　 A 　 V 　 Y　 Y　 C 　 T
A TG CAG CTC AGC AGC CTG ACA TCT GAG GAC TCT GCG GTC TA T TAC TGT ACA
1: MW Marker; 2: Supernatant of HB 2151 transformed by ScFv2p CAN T 2
R 　 Y　 Y　 Y　 G　 S　 S　 Y　 Y　 F　 D 　 Y　 W 　 G　 Q 　 G　 T
AGA TA T TAC TAC GGT AGT AGC TAC TAC TTT GAC TAC TGG GGC CAA GGC ACC AB 5 E phagem id; 3: Extract of whole HB 2151 cells transformed by ScFv2
T　 L 　 T　 V 　 S　 S　 E 　 L 　 K　 R 　 A 　 G　 G　 R 　 G　 S　 G p CAN TAB 5 E phagem id; 4: Perip lasm ic extract of HB2151 transformed by
ACT CTC ACA GTC TCC TCA GAA CTT AAG CGC GCT GGT GGT AGA GGG TCT GGA ScFv2pCAN TAB 5 E phagem id.
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　L inker Fig 4 SDS2PAGE electrophoresis of ScFv
G　 G　 G　 S　 G　 G　 G　 G　 S　 G　 G　 G　 G　 S　 G　 G　 G
图 4 　SDS2PAGE电泳
G GA GGT GGG AGT GGG GGA GGT GGA TCC GGC GGG GGA GGT TCA GGG GGA GGC

G　 S　 G　 G　 G　 G　 S　 F　 V 　 Q 　 L 　 V 　 D 　 T　 V 　 M 　 T
GGT AGT GGT GGG GGC GGT TCA GAA GTT CAA CTA GTT GAC A TT GTG A TG ACC 有价值的分子 . 国内已建成的单链抗体多数来自于
[ 5, 6 ]
Q 　 S　 L 　 A 　 S　 L 　 A 　 V 　 S　 L 　 G　 Q 　 R 　 A 　 T　 I　 S
直接从免疫小鼠的 mRNA 建立噬菌体抗体库 ,其
CAG TCT CTT GCT TCC TTA GCT GTA TCT CTG GGG CAG AGG GCC ACC A TC TCA

Y　 R 　 A 　 S　 K　 S　 V 　 S　 T　 S　 G　 Y　 S　 Y　 M 　 H 　 W
优点是在未建立 mAb 的前提下直接构建 , 库容量较
6
TAC AGG GCC AGC AAA AGT GTC AGT ACA TCT GGC TA T AGT TA T A TG CAC TGG 大 ,可达 1 ×10 以上 ,但是筛选的工作量较大 .
N 　 Q 　 Q 　 K　 P　 G　 Q 　 P　 P　 R 　 L 　 L 　 I　 Y　 L 　 V 　 S
抗人 HCD78 分子 M cAb对人肝癌细胞呈现特异
AAC AAA CAG AAA CCA GGA CAG CCA CCC AGA CTC CTC A TC TA T CTT GTA TCC
性结合 , 在扩增其抗体 VL 时 , 对 Gavilondo 2cow ley
[4]
N 　 L 　 E 　 S　 G　 V 　 P　 A 　 R 　 F　 S　 G　 S　 G　 S　 G　 T

等 的抗体引物进行修改 , RT2PCR 扩增成功 . 采用

AAC CTA GAA TCT GGG GTC CCT GCC AGG TTC AGT AGC AGT GGG TCT GGG ACA [7]

D 　 F　 T　 L 　 N 　 T　 H 　 P　 V 　 E 　 E 　 E 　 D 　 A 　 A 　 T　 Y
GAC TTC ACC CTC AAC A TC CA T CCT GTG GAG GAG GAG GA T GCT GCA ACC TA T
他们设计的引物 , 没有扩增出抗体 VH . 通过比较不
Y　 C 　 Q 　 H 　 I　 R 　 E 　 L 　 T　 T　 F　 G　 G　 G　 T　 K　 L 同肿瘤抗体重链可变区结构 , 我们发现抗肿瘤抗体
TAC TGT CAG CAC A TT AGG GAG CTT ACT ACG TTC GGA GGA GGC ACC AAG CTG
重链可变区序列同源性高的区域大约在第 50 个碱基
E 　　 I　 K　 A 　 A 　 A
GAA A TA AAA GCG GCC GCC C 之后约 100 bp 左右 ,重链可变区序列中间有 30 个左
　　　　　　　　　N ot I 右同源性较高的碱基 . 选择在此设计引物 , 以 cDNA
Fig 2 　Sequence of ScFv gene 为模板 ,以该引物和 O ligo dT扩增出目的序列 , 向 3 ′
图 2 　ScFv核苷酸序列
端延伸 . 测序后再设计一条磷酸化的引物 ,以 mRNA
为模板 ,扩增 cDNA ,电泳结果为一条 smear带 . 回收
其中合适长度的 cDNA 进行环化 , 重新设计两对引
物 ,以环化的 cDNA 为模板进行嵌套式 PCR , 获得了
5′
端的序列 . 继而根据目的序列的长度 , 重复数次以
[8]
上过程 ,最后获得目的基因 .
1: H in dⅢ marker; 2 ～16: PCR p roducts of recombinant vectors; 17: DL 2 在构建 ScFv时 ,采用重叠延伸拼接法将 VH , VL
2000 marker. 和 L inker 连 接 . 把 L inker 接 头的 编码 分别 设计 在
Fig 3 　Recombinant insert verified by PCR VH , VL 的引物中 ,并使这两个引物有 15 个碱基互补 ,
图 3 克隆载体转化 JM109 细胞后经筛菌的结果
将 VH , VL 扩增产物混合 ,互为引物及模板 , 合成完整
的 ScFv基因 . 这样 ,避免了构建 ScFv需要多次 PCR
3 　讨论 的繁琐过程
[ 9, 10 ]
, 减少了因 PCR 次数增多而引起的
ScFv是 一 种 由 抗 体 VH 和 VL 通 过 一 段 短 肽 错配 .
(L inker)连接而成的基因工程抗体 . 由于 ScFv结构
HC 2108 是我们自建的人肝癌细胞株 , HCD78 是
相对简单 ,比较容易构建 ,能在细菌中表达 ,还可用基 以其为抗原建立的小鼠杂交瘤细胞株 , 它与 HC 2108
因工程方法构建 ,与其他效应分子连接的抗肿瘤融合 有特异性的结合反应 . 在这些基础上 ,我们成功构建
蛋白 ,已成为将药物 、
毒素 、
放射性毒素导向肿瘤的很 了抗人 HCD78 ScFv基因 ,经过大肠杆菌表达的可溶

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性 ScFv不需要体外进行复性等过程即能自然折叠 , [ 5 ]毕向军 ,杨冬华 ,崔 　俊 ,等 . 抗肝癌单链抗体的构建及其结合特

保持了抗体的活性 ,并与 HepG22, SMMC 27721 和 HC 2
108 肝癌细胞有高特异性的结合反应 , 表明其在肝癌
的临床放射免疫诊断及治疗方面具有实用价值 .
【参考文献 】
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编辑 　王 　睿

・经验交流 ・　文章编号 : 1000 22790 ( 2005 ) 14 21271 201 后 , 40 ℃温热盐水纱布复温 , 使其加速恢复记忆原形状 , 使各

爪枝收缩固定可靠 . 对于粉碎严重者 , 先行髌韧带周围荷包
髌骨骨折内固定方法的比较 缝合 ,使之成为相对完整的上下骨折后再复位固定 ,保持关节
面完整 ,术后 3 d进行股四头肌收缩锻炼 . 对于横断骨折术后
赵振营 　 (广东省中山市坦洲医院外科 ,广东 中山 528467 ) 1 周即可下地活动 ,严重粉碎性骨折术后石膏托外固定 2 ～4
wk,拆除石膏托后负重下地功能锻炼 . 经随访 6 ～32 (平均 9 )
[1 ]
【关键词 】髌骨 ; 骨折 ; 内固定方法 ; 疗效比较 mo. 按高堂成等 疗效评定标准 : 运用环扎固定法 ,优 18 例 ,
【中图号 】R683. 42 　　　【文献标识码 】B 良 7 例 ,中 2 例 ,差 3 例 , 优良率 83. 3% , AO 张力带内固定 ,
优 46 例 ,良 5 例 ,中 3 例 , 差 2 例 , 优良率 91. 1% ; 记忆合金
1 　临床资料 　1992 210 /2004 203 髌骨骨折 106 ( 男 65,女 41 ) 髌骨爪治疗 ,优 17 例 ,良 3 例 ,中 0 例 ,差 0 例 ,优良率 100%.
例 . 右侧 49 例 ,左侧 57 例 . 年龄 16 ～62 ( 平均 32 )岁 . 受伤
原因 : 摔伤 54 例 , 车祸伤 44 例 , 锐器伤 8 例 . 闭合性骨折 90 表 1 　髌骨骨折 106 例的类型及内固定方法
例 ,开放 性 骨 折 16 例 ; 新 鲜 骨 折 例 96, 陈 旧 性 骨 折 10 例 类型 环扎 张力带 髌骨爪 合计
(表 1). 在连续硬膜外或腰麻麻醉下 , 均采用髌前横弧形切 粉碎性 25 48 16 89
口 ,显露骨折部位 ,清除关节腔内积血及碎骨块 ,将折端复位 , 横断 5 7 3 15
复位后大巾钳暂固定 , 然后行内固定 . ① 环扎内固定法 : 采 纵形 0 1 1 2
用直径 0. 8 mm 钢丝或双“10 ”丝线围绕髌骨环行捆扎固定 , 合计 30 56 20 106
其中以“7 ” 号丝线修补扩张部及前断裂组织 . 术后均用长腿
石膏托外固定 6 ～8 wk, 去除石膏后不负重 , 逐渐行膝关节屈
伸功能锻炼 , 4 wk后扶拐负重 . ② AO 张力带内固定法 : 术中 2 　讨论 　环扎内固定法 操作简单 ,缺点是固定欠牢固 ,不能
复位后 ,在屈膝 10 ° 位下 ,自远折端骨折面 , 逆行穿出两根直 早期功能锻炼 . AO 张力带内固定对髌骨横断或纵型骨折的
径 1. 5 cm 的克氏针入近折端 ,自股四头肌键穿出 ,用 18 号钢 疗效已被公认 , 对粉碎性骨折施行张力带内固定有一定难
丝自克氏针近端后面 , 绕过髌骨前面“8 ” 字交叉 ,再经远端克 度 [ 2 ] ,术后有克氏针脱出或钢丝断裂 , 且针尾痛发生率高 , 影
氏针后面 ,在髌下极拧紧打结 , 剪断针尾露出 0. 5 cm , 拧弯后 响治疗效果 . 记忆合金髌骨爪法具有内固定牢固 ,操作简单 ,
靠近骨皮质 , “ 7 ” 号 丝线修补扩张部及髌前断裂组织 . 术后 能早期功能锻炼 ,骨折愈合快 , 膝关节功能恢复好 , 可在各级
不需外固定 ,术后即开始练习膝关节屈伸功能 , 2 ～4 wk 后扶 医院开展 ,尤其是基层医院 , 是一种简单而理想的方法 , 值得
拐负重下地活动 . ③形状记忆合金髌骨爪内固定法 : 选择小 临床推广使用 .
于髌骨直径 10% ～20%的 形状记忆合金髌骨爪于 0 ℃～5 ℃
冰盐水中浸泡 3 ～5 m in,用撑开器撑开一定的宽度 ,以确保髌 【参考文献 】
[ 1 ] 高堂成 ,张春才 . 镍钛 - 聚髌器治疗严重粉碎性髌骨骨折 128 例
骨爪各爪枝纳入腱膜内 ,使髌骨爪紧贴髌骨表面 . 复位满意
[ J ]. 人民军医 , 2003; 5: 269.
收稿日期 : 2005 203 215; 　修回日期 : 2005 204 202 [ 2 ] 王亦璁 . 骨与关节损伤 [M ]. 第 3 版 . 北京 : 人民卫生出版社 ,
作者简介 : 赵振营 ( 1970 2) ,男 (回族 ) ,广东省中山市人 . 学士 , 主治医 2002: 1032.
师 . Tel. ( 0760) 6657198 　Email. huicuizzy@ yahoo. com. cn 编辑 　潘伯荣

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