METODOLOGAS ANALTICAS Y CALIDAD La Calidad de los resultados depende de: La forma de trabajar metodologa Los medios materiales instrumentos

aparatos materiales reactivos Instrumentos y aparatos: 1- Deben ser capaces de desarrollar el trabajo que de ellos se requiere 2- Deben permanecer en ptimas condiciones de uso 3- Todo el equipamiento del laboratorio debe tener su programa de calibracin definido
TEMA 5

METODOLOGAS ANALTICAS Y CALIDAD

Calibrado: comprobar la respuesta de un instrumento con un material de propiedades conocidas Estandarizacin: caracterizar la respuesta de un instrumento con un material de propiedades conocidas

Instrumentos complejos

Calibrado global

Cromatgrafos Espectrofotmetros de Absorcin Atmica

TEMA 5

Calibrado y frecuencia de calibrado de instrumentos y aparatos

BALANZAS ANALTICAS Comprobacin con pesas homologadas de peso similar al rango en el que se va a pesar Frecuencia: diaria como mnimo Balanzas electrnicas: calibrado despus de encendidas 20 minutos MATERIAL VOLUMTRICO Clase A Calibracin de una muestra representativa del material del laboratorio mediante gravimetra Frecuencia: semestral o anual pH-METROS Comprobacin con disoluciones reguladoras de pH 4.00 y 7.00 (para mediciones de pH alto se utiliza de pH 9.00)

TEMA 5

Calibrado y frecuencia de calibrado de instrumentos y aparatos

ESPECTROFOTOMETRO UV-V Ajuste de la Longitud de Onda: Cristales certificados Frecuencia: Semestral Calibracin: con disoluciones patrn de concentracin conocida Frecuencia: cada vez que se analice una serie de muestras GRANDES EQUIPOS (CROMATOGRAFOS, AAS) Ajuste: de todos los parmetros necesarios por parte de tcnicos Frecuencia: semestral-anual Calibracin: con disoluciones patrn de concentracin conocida Frecuencia: cada vez que se analice una serie de muestras

Mantenimiento

TEMA 5

Calibrado y frecuencia de calibrado de instrumentos y aparatos

CONDUCTIMETROS Comprobacin con disoluciones estndar de KCl o NaCl Frecuencia: semanal ESTUFAS, NEVERAS Y CONGELADORES Comprobacin continua de la temperatura adecuada mediante sondas homologadas. Como mnimo control diario si no se dispone de sondas

Mantenimiento
Toma de tierra Sistemas de Alimentacin Ininterrumpida (SAI) Localizacin y caractersticas especiales

TEMA 5

MATERIALES Patrones primarios secundarios Reactivos purisimo para anlisis para anlisis de residuos para anlisis de ultratrazas para gradiente HPLC Disoluciones etiquetado normas de uso Disolventes idem reactivos Agua destilada, bidestilada desionizada filtrada por membrana smosis inversa esteril (UV) Control mediante medida de conductividad y anlisis de materia orgnica TEMA 5

MTODOS ANALTICOS 1- Deben estar claramente escritos, y recopilados a disposicin de todo el personal 2- Deben estar autorizados por la Direccin 3- Debe informarse al personal que no pueden utilizarse otros mtodos no autorizados Eleccin de mtodos analticos Factores -Disponibilidad de instrumentos y equipos -Rapidez con que se necesitan los resultados -Coste -Conveniencia -Seguridad -Exactitud y precisin Prioridades Mtodos aplicados a la matriz de inters Aplicados en el intervalo de concentraciones adecuado Muy utilizados Sencillos, rpidos y de bajo coste Validados en estudios intercomparacinTEMA 5

MTODOS ANALTICOS Tipos de mtodos analticos Mtodos estndar desarrollados por organizaciones de prestigio Mtodos oficiales exigidos por organismos gubernamentales para satisfacer regulaciones estatales Mtodos en revistas necesitan ser sometidos a validacin previa Mtodos desarrollados en el laboratorio EVALUACIN DE MTODOS ANALTICOS

TEMA 5

MTODOS ANALTICOS
PROCEDIMIENTOS NORMALIZADOS DE TRABAJO PNTs

Ttulo: breve, debe hacer referencia al analito, a la matriz y a la tcnica analtica Ejemplo: Determinacin de Fe en aguas continentales mediante espectrofotometra visible

Portada (Formato P01) Ttulo Cdigo Organizacin emisora Nmero de revisin Nmero de hojas Firmas (redactor, revisin, aprobacin) Conforme Unidad Garanta de Calidad Fecha de entrada en vigor
TEMA 5

MTODOS ANALTICOS Formato P02: Relacin de revisiones Formato P03: ndice y resto del procedimiento -Secciones en MAYSCULA -Subsecciones minscula subrayado OBJETIVO ALCANCE DEFINICIONES DESCRIPCIN RESPONSABLES REFERENCIAS ANEXOS

TEMA 5

LABORATORIO DE ANLISIS DE RESIDUOS DE PLAGUICIDAS UNIVERSITAT JAUME I

PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACIN DE RESIDUOS DE LAMBDA-CIHALOTRIN EN TOMATE DISTRIBUCIN: MODELO 1
Pg.1/8

PNT N: E004/3

AMBITO E - MTODOS

INDICE Objetivo 2. Alcance 3. Resumen 4. Reactivos 5. Seguridad 6. Equipos 7. Procedimiento 8. Validacin 9. Cambios con respecto a la versin anterior 10. Procedimientos relacionados
1.

EMITIDO Roque Serrano (DE)

Firma:

REVISADO / CONFORME Carmen Hidalgo/Francisco Lpez (UGC) (DE)

Firma: Firma:

APROBADO Flix Hernndez (DL)

Firma:

SUSTITUYE A PNT N:

CADUCA EN:

--------

Fecha:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

Este PNT no debe ser fotocopiado. Cualquier otra copia de l ha de ser solicitada al responsable de la Unidad de Garanta de Calidad. Cualquier versin anterior debe ser devuelta al responsable de la Unidad de Garanta de Calidad.

CALIBRACIN NORMA ISO 25 La calibracin se define como el conjunto de operaciones que permiten establecer, en determinadas condiciones experimentales, la relacin que existe entre los valores indicados por el aparato de medida o por el sistema de medida, o los valores representados por una medida materializada, con los valores obtenidos en la medida de un valor conocido

MANTENIMIENTO AJUSTE CALIBRACIN VALORACIN ESTANDARIZACIN

TEMA 5

CALIBRACIN Clasificacin de los mtodos analticos segn el tipo de calibracin -Mtodos absolutos: la medida fsica se relaciona directamente con la cantidad de materia. Gravimetras y Coulombimetras -Mtodos estequiomtricos: se relaciona la cantidad de patrn con la cantidad de analito por un mecanismo qumico. Volumetras -Mtodos comparativos: se relacionan valores obtenidos en las mismas condiciones experimentales para patrones y muestras. Tcnicas Instrumentales

PROGRAMAS DE CALIBRACIN
TEMA 5

PROCEDIMIENTOS DE CALIBRACIN ABSOLUTOS Calibrado de una balanza Calibrado de una pipeta Calibrado de la longitud de onda espectrofotmetro con un patrn adecuado ESTEQUIOMTRICOS Volumetras COMPARATIVOS

de

un

Curva de calibrado a partir de patrones Interpolacin de las muestras

TEMA 5

PROCEDIMIENTOS DE CALIBRACIN COMPARATIVOS Relacin lineal Escalas de ordenada y abcisas Precisin PENDIENTE Ajuste por mnimos cuadrados
12

10
8

respuesta

6 4 2 0 0 2 4 6 8 10

Concentracin en unidades y distancia adecuadas

y=a+bx

r2
TEMA 5

y=a+bx+cx2

PROCEDIMIENTOS DE CALIBRACIN COMPARATIVOS

AJU ST E POR MN IMOS CU AD R AD OS

CLAVE Casillas a rellenar

R e cta de Ca libra do (n <= 10 puntos) Pa trone s

Concentracin Respuesta

y= ax + b

Resultados (no modificar!!) Mue stra s

lmite confianza superior (95%) lmite confianza inferior (95%)

X 1 2 3 4 5 6 7 8

Y 1 2,2 3 4 4,8 6 7 8,2

Respuesta

Concentracin

10 8 6 4 2 0 0 2 4 6 8 10

1 2 3 4

0,983372922 1,980997625 2,978622328 3,976247031

n=

pe ndie nte = 1,00238 corte con y= 0,01429 r= 0,99864

Sy/x= 0,138546 Spte= 0,021378 Scorte= 0,107954

Nivel de significacin Prueba F (<0.05)

TEMA 5

PROCEDIMIENTOS DE CALIBRACIN COMPARATIVOS

12 10 8 6 4 2 0 0 2 4 6 8 10 12

r2 cercana al 1 Nivel de significacin por debajo de 0.05

d +
0

Modelo incorrecto

TEMA 5

PROCEDIMIENTOS DE CALIBRACIN LMITE DE DETECCIN

Distribucin de los valores del blanco

LD=y0+tsy0

LD=3Sy0/pte
LD=3(ruido de fondo)
TEMA 5

PROCEDIMIENTOS DE CALIBRACIN LMITE DE CUANTIFICACIN Desviacin estndar relativa

Precisin requerida

LC

Concentracin

LC=10Sy0/pte LC=10-20(ruido de fondo)

TEMA 5

PROCEDIMIENTOS DE CALIBRACIN

Abundance

clorfenvinfos

360

LD LD
fosmet

240 120
0
Time (min) ->

5.00

10.00

15.00

20.00

25.00

TEMA 5

PROCEDIMIENTOS DE CALIBRACIN
Calibrado Directo Comparacin de patrones en disolvente puro con muestra
Interpolacin directa de la muestra
respuesta

y=a+bx

concentracin de la muestra

concentracin

Calibrado en Matriz: Cuando existe efecto matriz

Patrones en matriz respuesta

Patrones en disolvente y=a+bx

concentracin Cuantificacin incorrecta

TEMA 5

PROCEDIMIENTOS DE CALIBRACIN
Patrn interno Se aade una cantidad conocida de un compuesto similar al analito, que no este presente en la muestra, tanto en patrones como en muestras. Las respuestas del analito se dividen entre las respuestas del patrn interno, corrigiendo posibles variaciones en el detector.

Caso ideal: disponer del analito marcado isotpicamente y deteccin por espectrometra de masas Uso de testigo
Adiciones estndar Cuando no se dispone de matriz en blanco. Comprobacin de la existencia de efecto matriz
Patrones en matriz respuesta

Patrones en disolvente

Concentracin =-a/b

concentracin

Si los calibrados son paralelos no existe efecto matriz TEMA 5

PROCEDIMIENTOS DE CALIBRACIN
Adiciones estndar
Pi = cantidad de estndar adicionado Xi = cantidad de analito presente
respuesta

RE = RI
Resultado extrapolado (RI) Resultado interpolado (RI) Recta P Recta Adiciones 0 Xi+0 P1 P2 Xi+P2 P3
concentracin

Xi+P1

Xi+P3

RE RI

RE RI

RE RI

TEMA 5