CUARTA PARTE

ENSAYO DE LAMINILLA DE CONTACTO

LA TECNICA DE LA LAMINILLA en contacto de Cholodny y Rossi es una manera sencilla de cualitativamente evaluar relaciones espaciales entre microorganismos del suelo. Aunque esta tcnica no es confiable para enumerar organismos del suelo, es til para ilustrar la orientacin de unos microorganismos con otros en las partculas de suelo. La tcnica envuelve el enterramiento de laminillas de cristal en el suelo por un periodo de tiempo definido. Luego de incubada, la laminilla se fija con cido actico y seguido de una tincin que proveer suficiente contraste para ser examinadas por microscopa (usualmente los microorganismos no tienen color por lo que no seran visible bajo el microscopio). Bajo el microscopio podr observar bacterias de suelo, actinomicetos, hongos, algas, y otros. Materiales: Muestras de diferentes tipos de suelo (600 g/suelo) glucosa NH4NO3 Cuatro vasos de foam por suelo 40% (v/v) de cido actico Laminillas de cristal Medios de TSA Pitetas estriles de 1 ml Tubos de dilucin

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Bengal rosado (para 100 ml, 5% de la solucin acuasa de fenol aada 1 g de bengal rosado y 0.03 g CaCl2)

METODOLOGIA

1. Llene cuatro vasos de foam con aproximadamente 150 g de suelo. Rotule uno como Experimental 1, Experimental 2 , Experimental 3 y el cuarto como Control. Modifique cada sistema de la siguiente manera: Exp. I Suelo (-150 g) Glucosa (1% w/w) NH4NO3 (200 mg) H2O (inundado) 2. Diluya 1 gramo de suelo en tubo de dilucin, resuspenda y diluya en serie hasta una dilucin final de 10 -7. Transfiera y distribuya una alcuota de 0.1 ml sobre medio de TSA; incube a temperatura ambiente por 48 horas y enumere los diferentes tipos de colonia. Determine el contenido de humedad (ver seccin Determinacion del Contenido de Humedad en Suelos). 3. Sumerja tres laminillas en cada envase. Cubra cada sistema con papel de aluminio e incube a temperatura de saln (Figura 1). Figura 1: Preparacin y posicin de las laminillas en el envase. Exp. II Exp. III Control

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4. Examine una laminilla de cada sistema por las siguientes tres semanas de la siguiente manera: i. Figura 2: remueva una laminilla de cada sistema (Figura 2) Muestreo semanal de las laminillas. Cuidadosamente empuje una laminilla hacia uno de los lados antes de removerla verticalmente.

Lado de la laminilla a examinarse

ii. Lave y remueva partculas mayores de suelo de la superficie de la laminilla. Sumerja la laminilla en 40% (v/v) de cido actico por 1-3 Use sus GAFAS PROTEC-

minutos. CUIDADO con el cido actico. TORAS.

iii. Tia la laminilla de 5 a 10 minutos con una solucin de Bengal Rosado. No permita que la laminilla se seque completamente durante la tincin. Enjuague lijeramente el exceso de tinte en el lavadero. CUIDADO con el manejo del tinte. iv. Seque la laminilla y observe cuidadosamente bajo el microscopio usuando el objetivo de inmersin en aceite. semanalmente. v. Enumere semanalmente de cada sistema en medio de TSA repitiendo PASO #2. Anote y compare sus resultados

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Datos & Anlisis:

Observaciones:

Tipo de Suelo: Contenido de Humedad: Fecha coleccin de muestras: Anote los resultados de contos en placas: Tiempo (Semanas) 0 Exp. I UFC/g de suelo Exp. II Exp. III Control

3 *incluya tipos de colonias y su descripcin

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Anote las observaciones de las laminillas: Tiempo (Semanas) Exp. I Descripcin cualitativa de cada laminilla Exp. II Exp. III Control

*incluya tipos de colonias.

PREGUNTAS...
1. Describa la abundancia y tipos de colonia que obutva por enumeracin de TSA. Cmo comparan estos organismos con los observados directamente en las laminillas? Qu tipos de morfologa colonizan tempranamente las laminillas? Quines predominan sobre las laminillas al final del experimento? Cmo comparan los resultados observados en los diferentes tratamientos?