Laboratorio De Bioqumica II

Prctica No. 6 Produccin de Piruvato y Acetaldehdo a Partir de Glucosa y Determinar su Presencia (Levaduras)
Universidad Autnoma de Ciudad Jurez Instituto de Ciencias Biomdicas Licenciatura en Qumica Laboratorio de Bioqumica II Gabriela Guadalupe Gonzlez Gonzlez

OBJETIVO: Determinar la presencia de piruvato por la fermentacin de la glucosa por levadura.

INTRODUCCIN: La fermentacin es la primera etapa del catabolismo de glucosa es la produccin de piruvato. Este proceso, que se efecta mediante una serie de reacciones que involucran un nmero considerable de intermediarios, se conoce como gluclisis. La reaccin total de una molcula de glucosa produce dos molculas de piruvato, dos molculas de ATP y dos molculas de NADH. Este cofactor se encuentra en cantidades catalticas (es necesario reoxidarlo para que el proceso no se suspenda), y es utilizado por la cadena respiratoria para obtener ATP dando as NAD+. Esto no es posible en condiciones anaerbicas y en este caso la reoxidacin se efecta cuando el piruvato se convierte en acetaldehdo, y luego en alcohol [1] Los intermediarios metablicos son metabolitos como el piruvato y acetaldehdo se encuentran presentes normalmente en muy baja concentracin, por lo tanto, para demostrar su existencia como intermediarios en el camino metablico, es necesario impedir que sean transformados en otros compuestos. Este procedimiento se usa mucho para estudiar caminos metablicos y se puede realizar:
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Bloqueando la enzima que cataliza la conversin del compuesto que se esta investigando mediante inhibidores. Cambiando las condiciones fisiolgicas para que la enzima funcione a una velocidad muy por debajo de su actividad mxima.

Usando un agente que atrape el intermediario y que forme un compuesto que no pueda metabolizarse. La piruvato descarboxilasa no es activa en soluciones ligeramente alcalinas, de manera que el piruvato se acumula y su presencia puede demostrarse por la reaccin con nitroprusiato de sodio o 2,4 dinitrofenilhidrazina [2].

METODOLOGA: En dos tubos de ensaye se colocaron 5 mL de glucosa, al tubo 1 se le agregaron 5 mL de levadura con Na2HPO4 (alcalina) y al tubo 2 se le agregaron 5 mL de levadura con KH2PO4 (cida). Se pusieron a bao mara a 37C durante 1 hr ms 2 mL de ac. triclorocetico, se mezclaron y se centrifugaron por 10 min a 2500 rpm. Se tomaron 2 mL de sobrenadante del tubo de cada tubo y se colocaron en otros tubos y se les agrego 1 gr de sulfato de amonio, se mezclaron y se le agrego por las paredes amoniaco concentrado, se observaron los resultados. Se tomaron 2 mL de sobrenadante del tubo de cada tubo y se colocaron en otros tubos con 1 mL de fenilhidrazina, se mezclaron y se le aadi 1
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Laboratorio De Bioqumica II mL de NaOH, se diluyeron hasta obtener 5 mL con agua, se observaron los resultados.

formando un anillo de color rojo en la superficie, lo cual indica que la prueba fue positiva. La presencia del piruvato se encuentra en muy bajas concentraciones, por lo cual se recomienda recurrir a este tipo de tcnicas para comprobar su presencia.

RESULTADOS: Se pudo observar que en el tubo 1 se formaron dos fases con un anillo en la superficie de la muestra, en el tubo 2 se observo la formacin de un anillo de color rojo en la muestra.

BIBLIOGRAFA: [1]
http://es.scribd.com/doc/49000859/BioquimicaPractica-Plummer-Chp10a

Imagen 1. Observacin de la produccin de piruvato.

http://books.google.com.mx/books?id=GXKf 6ibU5gUC&pg=PA511&lpg=PA511&dq=por que+se+forman+tioles+en+la+produccion+ de+piruvato+y+acetaldehido&source=bl&ot s=BKiUjVSNsU&sig=HK72vYq4W6vD5YIX nzbQAGKGR5Q&hl=es&sa=X&ei=bbtwT6 WdDqWe2AWDq6TjDg&sqi=2&ved=0CCM Q6AEwAQ#v=onepage&q=porque%20se% 20forman%20tioles%20en%20la%20produc cion%20de%20piruvato%20y%20acetaldeh ido&f=false

DISCUSIN Y CONCLUSIN: Para determinar la presencia de piruvato mediante nitroprusiato de sodio, se pudo observar la formacin de interfaces y de un anillo lo cual indico la presencia de grupos tioles en donde se observa en coloracin azul o verdosa la reaccin del piruvato como se puede observar en el primer tubo, en el segundo tubo se pudo observar la formacin de un aro color rojo lo cual indica que si hay presencia de piruvato ya se utilizo un agente que atrapo el intermediario y este form un compuesto que no pudo metabolizarse. La piruvato descarboxilasa no es activa en soluciones ligeramente alcalinas, de manera que el piruvato se acumula y su presencia puede demostrarse por la reaccin con nitroprusiato de sodio o 2,4 dinitrofenilhidrazina
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