You are on page 1of 12

INIIEREA DE VITROCULTURI DE CRASSULA OVATA L.

TAXONOMIE
Crassula ovata L. ncreng: Plantae Subncreng: Tracheobionta Diviziunea: Magnoliophyta Clasa: Magnoliopsida Subclasa: Rosidae Ordinea: Rosales Familia: Crassulaceae Genul: Crassula L.- Plant gras Specia: Crassula ovata L. Planta de jad (National Plant Database, 1996.)

ABSOLVENT:

*CRENICEANU Mirela
* Universitatea din Oradea

INTRODUCERE
Crassula ovata L. face parte din familia Crassulaceae. Ea este originar din sudul Africii. Genul Crassula cuprinde cca. 300 de specii (dup Preda M., 1979). Interesul pe care l-a strnit aceast specie ca plant ornamental, ne-a determinat s cercetm posibilitatea iniierii unei vitroculturi la Crassula ovata L. i s studiem posibilitatea micropropagrii acestei specii in vitro.

MATERIAL I METOD
Materialul vegetal cu care s-a experimentat a constat din ser meristeme apicale i bazale, colectate de la plante de Crassula ovata, crescute n ser, n ghivece. Materialul vegetal a fost dimensionat la talia de cca. 1-2,5cm. El a fost inut sub jet de ap rece, timp de cteva ore, dup care acesta a fost sterilizat n camera steril, n condiii aseptice, prin lavarea lui n alcool etilic 96, cca. 1 minut, dup care acesta a fost splat cu ap steril, pentru ndeprtarea alcoolului; apoi, peste fragmente s-a adugat soluie de hipoclorit de sodiu 0,5%, diluat n raport de 1:1 cu ap, compoziia la care s-au adugat 2 picturi de Tween 20/100 ml (Tween-ul fiind adugat n scopul reducerii tensiunii superficiale i facilitarea aderenei agentului dezinfectant la suprafaa materialului vegetal); soluia dezinfectant a acoperit complet materialul biologic. Apoi, dup 5 minute de aciune, soluia dezinfectant a fost decantat i materialul vegetal a fost splat, n 4-5 reprize succesive, cu ap distilat, steril. La finele acestei proceduri fragmentele au fost depuse pe rondele din hrtie de filtru aseptic i introduse n capsule Petri sterile. Dup aceasta a urmat fasonarea viitorilor inoculi. Pentru aceasta, frunzele mari au fost ndeprtate, iar cele mai mici au fost scurtate la jumtate. Totodat, n perimetrul hotei cu flux laminar de aer steril, n condiii aseptice, s-a procedat la ndeprtarea zonelor necrozate n urma asepsizrii materialului vegetal, minibutaii rezultai, au fost inoculai n poziie vertical, n mediul de cultur agarizat afundndu-i uor cu partea caulinar secionat n mediul de cultur (vezi fig. 1).

Fig.1. - Schem reprezentnd modul de colectare, secionare i inoculare (n poziie vertical) a minibutaului de Crassula ovata. Mediul de cultur, de baz (MB), a constat din - macroelemente i Fe EDTA Murashige-Skoog (1962), microelemente Heller, amestec mineral la care au fost adugate vitaminele: piridoxin HCl, tiamin HCl i acid nicotinic (cte 1 mg/l fiecare), plus m inozitol - 100 mg/l, zaharoz - 20 g/l i agar - 7 g/l; pH-ul mediului a fost reglat la valoarea de 5,8, prealabil autoclavrii acestuia. La mediul de baz s-au adugat regulatori de cretere, constituinduse urmtoarele variante experimentale: o V0 mediu martor (lot control) lipsit de regulatori de cretere, o V1 mediu cu adaos de 1mg/l BA; o V2 mediu cu adaos de 1mg/l AIB; o V3 mediu cu adaos de 1mg/l BA i n amestec cu 1mg/l AIB; o V4 mediu cu adaos de 3g/l crbune activ (CA). CA Crbune activ; BA benziladenin; AIB acidul indolilbutiric. Experimentele au constat din inocularea in vitro a explantelor de tip apex, nod apical i nod bazal, pe mediile de cultur mai sus menionate. Sterilizarea mediilor de cultur, porionate fiind n recipiente de 8 x 3 cm, s-a fcut prin autoclavare la 121C, timp de 30 minute. Dup rcirea acestora (n incinta camerei sterile), s-a procedat la inoculare, cte o smn per recipient de cultur. Dup operaiunea de inoculare, recipientele cu explante (obturate cu folie de polietilen, imobilizate la gura flacoanelor cu elastice) au fost
3

trecute pe rafturi, la o temperatur care a variat ntre 20-24C i o fotoperioad de 16 ore lumin / 24 ore, intensitatea luminoas fiind de cca. 1700 luci, lumin emis de tuburi fluorescente albe, poziionate la 33 cm distan de raft. Timp de 1 lun de zile de la inoculare, s-au fcut observaii la nivelul vitroplantulelor regenerate din inoculi, urmrindu-se evoluia acestora, i anume: lungimea plantulelor regenerate din minibutai, formarea de rdcinie, numrul acestora i lungimea lor, formarea de calus, numrului de neotulpinie regenerate, la nivelul inoculului iniial i gradul de ramificare a acestora. Datele au fost prelucrate matematic i valorile nregistrate au fost raportate la rezultatele nregistrate la lotul martor (V0) considerate ca valori de referin 100%, vitroculturi realizate pe mediile fiind lipsite de regulatori de cretere.

Fig. 2. Vitroplantule de Crassula ovata, la 30 (A), 60 (B) i 90 (C) de zile de la iniiere vitroculturii din explante de tip nod apical i nod bazal pe medii de cultur cu coninut variabil de diferii regulatori de cretere, unde: V0 mediu martor (lot control) lipsit de regulatori de cretere, V1 mediu cu 1mg/l BA, V2 mediu cu 1mg/l AIB, V3 mediu cu 1mg/l BA i 1mg/l AIB, V4 mediu cu 3g/l crbune activ.

1. Lungimea medie a tulpiniei

%
200

%
150

2. Numrul mediu de ramificaii pe tulpin

100
150 100 100 70 50 95 103

100

50 0 0 0 V2 V3 V4 0

var.

V1

V2

V3

V4

1
3. Lungimea medie a ramificaiilor tulpinielor

var.

V1

2
4. Numr de frunzulie

%
100

%
600 550 500 450 400 350 300 250 200 150 100 50 0 433

525 400

533

50 30 0 0 0 V2 V3 0 V4

var.

V1

3
5. Lungimea medie a frunzulielor
90

var.

V1

V2

V3

V4

4
6. Numrul mediu de rdcinie

%
100

%
800 700 600 500 400 300 200 100 0

800 533 200 225

73

87

76

50

0 var. V1 V2 V3 V4

5 %
300 250 200 150 100 50 0 16 V1 V2 40 100

var.

V1

V2

V3

V4

7. Lungimea medie a rdcinielor

228

var.

V3

V4

Fig. 3. Evoluia comparativ a vitroplantulelor de Crassula ovata, la 30 de zile de iniiere in vitro pe medii de cultur cu diferii regulatori de cretere, unde: V0 mediu martor (lot control) lipsit de regulatori de cretere, V1 mediu cu 1mg/l BA, V2 mediu cu 1mg/l AIB, V3 mediu cu 1mg/l BA i 1mg/l AIB, V4 mediu cu 3g/l crbune activ, exprimate n valori procentuale obinute n raport cu valorile biometrizate la vitroplantulele lotului martor (V0), valori considerate ca 100%.

%
200

1. Lungimea medie a tulpiniei

%
800 700 600 500 400 300 200 100 0

2. Numrul mediu de ramificaii pe tulpinie

150 150 103 100 50 0 90 128

0 0 V1 V2 0 V3 0 V4

var.

V1

V2

V3

V4

1
3. Lungimea medie a ramificaiilor tulpinielor

var.

2
4. Numr de frunzulie

%
100

%
800 700 600 500 400 300 200 100 0

783 666 466 500

50

0 0

0 V2

0 V3

0 V4

var.

V1

3
5. Lungimea medie a frunzulielor

var.

V1

V2

V3

V4

4
6. Numrul mediu de rdcinie

%
150 100 50 0 var.

%
1000 900 800 700 600 500 400 300 200 100 0

1033

110 83

103

113

290 233

400

V1

V2

V3

V4

5 %
350 300 250 200 150 100 50 0 V1 V2 V3 53 130 123

var.

V1

V2

V3

V4

7. Lungimea medie a rdcinielor


331

var.

V4

Fig. 4. Evoluia comparativ a vitroplantulelor de Crassula ovata, la 60 de zile de iniiere in vitro pe medii de cultur cu diferii regulatori de cretere, unde: V0 mediu martor (lot control) lipsit de regulatori de cretere, V1 mediu cu 1mg/l BA, V2 mediu cu 1mg/l AIB, V3 mediu cu 1mg/l BA i 1mg/l AIB, V4 mediu cu 3g/l crbune activ, exprimate n valori procentuale obinute n raport cu valorile biometrizate la vitroplantulele lotului martor (V0), valori considerate ca 100%.
7

%
200

1. Lungimea medie a tulpiniei


178 150 150 100 50 0 100 113

%
800 700 600 500 400 300 200 100 0

2. Numrul mediu de ramificaii pe tulpin

0 0 V1 V2 0 V3 0 V4

var.

V1

V2

V3

V4

1
3. Lungimea medie a ramificaiilor tulpinielor

var.

2
4. Numrul mediu de frunzulie

%
100

%
1050 950 850 750 650 550 450 350 250 150 50 -50

1010 733 466 550

50

0 0

0 V2

0 V3

0 V4

var.

V1

3
5. Lungimea medie a frunzulielor

var.

V1

V2

V3

V4

4
6. Numrul mediu de rdcinie
2050

%
150 100 50 0 var.

%
2000 1900 1800 1700 1600 1500 1400 1300 1200 1100 1000 900 800 700 600 500 400 300 200 100 0

120 96

133 113

2000

266

400

V1

V2

V3

V4

5 %
600 550 500 450 400 350 300 250 200 150 100 50 0

var.

V1

V2

V3

V4

7. Lungimea medie a rdcinielor


563

150 156 70

var.

V1

V2

V3

V4

Fig. 5. Evoluia comparativ a vitroplantulelor de Crassula ovata, la 90 de zile de iniiere in vitro pe medii de cultur cu diferii regulatori de cretere, unde: V0 mediu martor (lot control) lipsit de regulatori de cretere, V1 mediu cu 1mg/l BA, V2 mediu cu 1mg/l AIB, V3 mediu cu 1mg/l BA i 1mg/l AIB, V4 mediu cu 3g/l crbune activ, exprimate n valori procentuale obinute n raport cu valorile biometrizate la vitroplantulele lotului martor (V0), valori considerate ca 100%

Fig. 2. Vitroplantule de Crassula ovata, la 30 (A), 60 (B) i 90 (C) de zile de la iniiere vitroculturii din explante de tip nod apical i nod bazal pe medii de cultur cu coninut variabil de diferii regulatori de cretere, unde: V0 mediu martor (lot control) lipsit de regulatori de cretere, V1 mediu cu 1mg/l BA, V2 mediu cu 1mg/l AIB, V3 mediu cu 1mg/l BA i 1mg/l AIB, V4 mediu cu 3g/l crbune activ.

10

REZULTATE I DISCUII
Din observaiile fcute n decursul evoluiei in vitro a inoculilor de tip nod apical i nod bazal, s-a constatat c, n cadrul tuturor variantelor experimentale, creterile lstarilor regenerai din plantele vitrocultivate au fost inegale, remarcndu-se o diferen de reactivitate a inoculilor i a morfogenezei la nivelul acestora n funcie de concentraia i natura regulatorilor de cretere din mediile de cultur. Conform biometrizrilor efectuate n acest experiment, la 30 de zile de la iniierea vitroculturilor de Crassula ovata, din explante de tip nod apical i nod bazal, s-a remarcat o bun evoluie a vitroculturilor, procentul de supravieuire a acestora fiind de 100% pe toate variantele experimentale. n fig. 2 se poate analiza aspectul vitroculturilor realizate din explante de tip nod apical i nod bazal.

CONCLUZII
n acest experiment am prezentat iniierea de vitroculturi la o specie de plant ornamental de Crassula ovata L. 1. Conform cercetrilor noastre, a rezultat c iniierea vitroculturilor la aceste specii de plante ornamentale este posibil. 2. La 60 de zile de vitrocultur, s-a remarcat o bun dezvoltare a vitroplantulelor de pe varianta de cultur V4 (mediu cu 3g/l crbune activ) comparativ cu celelalte variante experimentale. 3. La 90 de zile de la iniierea culturii de Crassula ovata, s-a remarcat faptul c, n ceea ce privete rizogeneza i caulogeneza vitroplantulelor, cele mai lungi tulpinie, rdcinie i frunzulie s-au obinut doar pe mediul martor V0 i pe varianta V4 V4 (mediu cu 3g/l crbune activ), acesta dovedindu-se a fi cel mai favorabil mediu de cultur pentru dezvoltarea vitroplantulelor de Crassula ovata.

12

You might also like