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Cintica Enzimtica
DEFINICIONES
LAS ENZIMAS son protenas (RNA) que catalizan reacciones qumicas en las clulas. Cada enzima es altamente especfica para la reaccin que cataliza. Esta especificidad est determinada por el centro activo de la enzima (en donde se hallan los grupos qumicos responsables de la catlisis). Muchas enzimas necesitan co-factores (co-reactivos, cosustratos) para cumplir su funcin cataltica.
Son Protenas de alto peso molecular (macromolculas, 104 a 106 g/mol, 102 a 104 aminocidos) Su actividad depende de la integridad de su conformacin proteica. Metales pueden formar parte de su centro activo, o de otra parte de la enzima (co-factor). Los reactivos de la reacciones catalizadas por enzimas se denominan sustratos. Los enzimas son catalizadores especficos: cada enzima cataliza un solo tipo de reaccin, y casi siempre acta sobre un nico sustrato o sobre un grupo muy reducido de ellos.
CINTICA ENZIMTICA
Estudio de la velocidad de reacciones catalizadas enzimticamente
La velocidad de una reaccin catalizada por un enzima depende de 1. la concentracin de molculas de sustrato [S] 2. la temperatura 3. la presencia de inhibidores 4. pH del medio, que afecta a la conformacin (estructura espacial) de la molcula enzimtica
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Aparentemente:
CINTICA ENZIMTICA
MODELO DE MICHAELIS-MENTEN
Hiptesis bsicas: enzima y sustrato forman un complejo intermedio ES
Etapa rpida
Etapa lenta
MODELO DE MICHAELIS-MENTEN
Modelo matemtico:
Definiciones:
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MODELO DE MICHAELIS-MENTEN
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MODELO DE MICHAELIS-MENTEN
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MODELO DE MICHAELIS-MENTEN
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Representacin de Lineweaver-Burk
Representa 1/v frente a 1/s y permite determinar a partir de medidas experimentales parmetros bsicos de la cintica enzimtica como la constante de Michaelis y la velocidad mxima de reaccin
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Representacin de Eadie-Hofstee
v v=V K max m [S]
Vmax
pendiente=
Representacin de Hanes-Woolf
K [S] 1 m + = [S] v V V max max
Pendiente =
1 Vmax
[S]
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Vmax ([S]o-[S]) t
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Inhibicin enzimtica: molculas diferentes del sustrato pueden unirse al enzima reduciendo total o parcialmente su actividad cataltica. Estas molculas reciben el nombre de inhibidores
Inhibidor competitivo
Inhibidor no competitivo
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Inhibicin competitiva
El inhibidor reduce la velocidad de reaccin, pero la velocidad mxima (concentraciones de sustrato grandes) sigue siendo la misma
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Inhibicin competitiva
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Inhibicin no competitiva
Inhibicin no competitiva
El inhibidor reduce la velocidad mxima pero Km (la afinidad del enzima por el sustrato) sigue siendo el mismo
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Hay enzimas que pueden adoptar 2 conformaciones interconvertibles llamadas R (relajada) y T (tensa). R es la forma ms activa porque se une al sustrato con ms afinidad. Las formas R y T se encuentran en equilibrio
Ciertas sustancias tienden a estabilizar la forma R. Son los llamados moduladores positivos. El propio sustrato es a menudo un modulador positivo. Las sustancias que favorecen la forma T y disminuyen la actividad enzimtica son los moduladores negativos.
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Las molculas que favorecen la forma R pero que actan sobre una regin del enzima distinta del centro activo son los activadores alostricos.
Si los moduladores negativos actan en lugares distintos del centro activo del enzima (inhibicin no competitiva) se llaman inhibidores alostricos.
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