Dra.

Natalia Izurieta Cergneux

PRCTICA No. 4 LABORATORIO DE BACTERIOLOGIA Y MICOLOGIA

Replicacin bacteriana: fisin binaria o biparticin.

De

una

clula dos

madre

se hijas

originan idnticas.

clulas

Crecimiento ordenado de todos los constituyentes y estructuras celulares.

Aumento exponencial en el nmero de clulas.

CRECIMIENTO INDIVIDUAL

La bacteria alcanza un tamao y peso fijo. Constituye el paso previo a la divisin celular.

CRECIMIENTO POBLACIONAL

Es el incremento en el nmero de clulas como consecuencia del

crecimiento y divisin celular.

ALIMENTO

MICROSCOPIO

CAJA PETRI

La clula viable es aquella capaz de dividirse y formar una colonia en el

medio de cultivo.

Se basa en que cada colonia surge de una simple clula. Cada colonia contiene una sola especie bacteriana.

El nmero de bacterias viables por muestra se expresa en:

UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS (UFC)

Representa cada colonia contada y su nmero total representa el nmero total de bacterias viables en la muestra.

DETERMINACIN No. UFC

Mtodo de vertido en placa

Mtodo de extensin en placa

MTODO DE EXTENDIDO EN PLACA

Es el mtodo de eleccin para anaerobios facultativos y cultivo de microaerfilos.

MTODO DE VERTIDO EN PLACA.

Esta tcnica se usa generalmente para bacterias aerobias obligatorias.

til para la tcnica de vertido en placa o extensin en placa.

Se

siembran

volmenes

conocidos de cada dilucin

Luego se incuba a 35 37 0C durante 24 48 horas.

Finalizado el tiempo de incubacin, se realiza el recuento. Se toman en cuenta nicamente aquellas cajas Petri que tengan entre 30 y 300 colonias.

Este nmero de colonias es estadsticamente representativo. Aquellas placas que tengan ms de 300 colonias se reportan como INCONTABLES.

Para el recuento bacteriano se puede usar cuentacolonias.

Puede ser contada toda la placa o por cuadrantes.

Cuando la carga bacteriana es alta, se toma en cuenta un cuadrante con

carga alta, un cuadrante con carga media y un cuadrante con carga baja.

Se realiza la sumatoria de los tres cuadrantes y se saca el promedio. Finalmente el promedio se multiplica por 65

No. Colonias = (CA + CM + CB /3) * 65

CA = 32
CM = 19 CB = 10

Sumatoria
= 61

Promedio 61/3 = 20.33

Factor = 20.33*65 = 1322

Terminado el conteo por cualquier mtodo, se debe aplicar la siguiente frmula para obtener el No. de UFC/ ml o UFC/g.

UFC/ml UFC/g = No. de colonias por placa X el factor de dilucin *

ml de la muestra sembrada

*Factor de dilucin: inversa de la dilucin.

EJEMPLO 1

EJEMPLO 2

No. de colonias: 280

Dilucin: 10 -3 Volumen de siembra: 1 ml UFC/ ml = 280 X 1000 /1 UFC/ ml= 280.000

No. de colonias: 56 Dilucin: 10 -4 Volumen de siembra: 0.2 ml UFC/ ml = 56 X 10000 /0.2

UFC/ ml= 2 800.000

Cuando se realiza ms de una dilucin para cada uno de los parmetros se garantiza los resultados obtenidos.

Este mtodo disminuye el margen de error y abaliza la calidad de las pruebas.

Para obtener los resultados por duplicado se aplica la siguiente frmula:

UFC / ml parmetro = UFC / ml dilucin A + UFC / ml dilucin B 2

Ejemplo 1 Dilucin A: 5 600.0000 Dilucin B: 6 000.000 Resultado : 5 600.000 + 6 000.000 / 2 = 5 800.000 UFC / ml FLORA TOTAL

Ejemplo 2 Dilucin A: 1 245.647 Dilucin B: 2 340.500 Resultado: 1 245.647 + 2 340.500 / 2 = 1 793.074 UFC / ml FLORA COLIFORME