UNIVERSIDAD LAICA ELOY ALFARO DE MANAB FACULTAD DE INGENIERA INDUSTRIAL MICROBIOLOGA

TEMA: COLIFORMES TOTALES Y FECALES.

PROFESORA: DRA. DOLORES VZQUEZ.

INTEGRANTES: GUANOLUISA PARRALES JORGE PALACIO BALDA PATRICIO TORO CEDEO CAROLINA

CURSO: III SEMESTRE A

2012

INTRODUCCIN

La denominacin genrica Coliformes designa a un grupo de especies bacterianas que tienen ciertas caractersticas bioqumicas en comn e importancia relevante como indicadores de contaminacin del agua y los alimentos. Este grupo incluye una amplia variedad de bacilos aerobios y anaerobios facultativos, gramnegativos y no esporulantes capaces de proliferar en presencia de concentraciones relativamente altas de sales biliares fermentando la lactosa y produciendo cido o aldehdo en 24 h a 3537 C. Por su amplia diversidad se los clasifica en dos grandes grupos que son los Coliformes Totales y Coliformes Fecales. Los Coliformes totales son aquellos que comprenden la totalidad del grupo y se usan para evaluar la calidad de los lcteos y bebidas encontrndolos ampliamente distribuidas en la naturaleza, especialmente en suelos, semillas y vegetales. Mientras que los Coliformes fecales tienen origen intestinal ya se encuentran principalmente en el intestino de los humanos y de los animales de sangre caliente, es decir, homeotermos, siendo usados para evaluar los mariscos frescos. No todos los Coliformes son de origen fecal, por lo que se hizo necesario desarrollar pruebas para diferenciarlos a efectos de emplearlos como indicadores de contaminacin, para ello existen diversos mtodos para cuantificar el nmero de microorganismos Coliformes presentes en muestras lquidas y slidas. Dentro de las tcnicas ms comunes estn la tcnica de tubos mltiples (NMP) y la tcnica de filtrado por membrana. Estos organismos se eliminan fcilmente por tratamiento trmico, por lo cual su presencia en alimentos sometidos al calor sugiere una contaminacin posterior al tratamiento trmico o que ste ha sido deficiente. Esto debera generar la determinacin del punto del proceso donde se produjo la contaminacin. Si se obtiene un recuento elevado en alimentos que han sufrido un proceso trmico, debe considerarse que existieron fallas (ausencia o deficiencia) en la refrigeracin postcoccin.

Objetivos Generales:

 Definir el grupo Coliforme.

Conocer las principales caractersticas, hbitat y las bacterias del grupo Coliformes.

Objetivos especficos:

Establecer las diferencias entre Coliformes totales y Coliformes fecales Explicar las razones por la cual un Coliforme se considera como indicador de contaminacin en agua y alimentos Dar a conocer las pruebas y procedimientos que se realizan para diferenciar microbiolgicamente a un Coliforme total de un Coliforme fecal Mostrar los parmetros permitidos de Coliformes en los alimentos segn las normas INEN

COLIFORMES.
1. Definicin. Se denomina Coliformes a aquel grupo bacterianas entricas que tienen ciertas caractersticas bioqumicas en comn e importancia relevante como indicadores de contaminacin del agua y los alimentos.

1.1. Caractersticas bioqumicas:

El grupo contempla a todas las bacterias entricas que se caracterizan por tener las siguientes propiedades bioqumicas:

Ser aerobias o anaerobias facultativas. Son bacilos cortos Gram negativos. No son esporgenas. Fermentar la lactosa a 37 C en 48 horas, produciendo cido lctico y gas.

1.2. Hbitat del grupo Coliforme.

Las bacterias de este gnero se encuentran principalmente en el intestino de los humanos y de los animales de sangre caliente, es decir, homeotermos, pero tambin ampliamente distribuidas en la naturaleza, especialmente en suelos, semillas y vegetales.

Los coliformes se introducen en gran nmero al medio ambiente por las heces de humanos y animales. Por tal motivo suele deducirse que la mayora de los coliformes que se encuentran en el ambiente son de origen fecal. Sin embargo, existen muchos coliformes de vida libre.

1.3 Bacterias que integran grupo el grupo:

El grupo Coliforme est formado por los siguientes gneros:

2. LOS COLIFORMES COMO INDICADORES.

A los Coliformes tradicionalmente se los ha considerado como indicadores de contaminacin fecal. Para que un microorganismo sea considerado como indicador microbiolgico ha de reunir unas condiciones que son: Debe ser incapaz de desarrollarse en el agua. Debe soportar mejor a los desinfectantes. Debe tener una supervivencia en el agua superior a los organismos patgenos. Deben ser fciles de aislar, identificar y contar. Deben ser muy abundantes en heces y escasos en otros medios.

Por tanto, su ausencia indica que el agua es bacteriolgicamente segura. El uso de los Coliformes como indicador sanitario puede aplicarse para:

La deteccin de prcticas sanitarias deficientes en el manejo y en la fabricacin de los alimentos. La evaluacin de la calidad microbiolgica de un producto, aunque su presencia no necesariamente implica un riesgo sanitario. Evaluacin de la eficiencia de prcticas sanitarias e higinicas del equipo. La calidad sanitaria del agua y hielo utilizados en las diferentes reas del procesamiento de alimentos. La demostracin y la cuenta de microorganismos coliformes, puede realizarse mediante el empleo de medios de cultivos lquidos o slidos con caractersticas selectivas o diferenciales.

Asimismo, su nmero en el agua es proporcional al grado de contaminacin fecal; mientras ms Coliformes se aslan del agua, mayor es la gravedad de la descarga de heces.

3. Coliformes Totales y Coliformes Fecales

No todos los Coliformes son de origen fecal, por lo que se hizo necesario desarrollar pruebas para diferenciarlos a efectos de emplearlos como indicadores de contaminacin. Se distinguen, por lo tanto, los coliformes totales que comprende la totalidad del grupo y los coliformes fecales aquellos de origen intestinal.

Desde el punto de vista de la salud pblica esta diferenciacin es importante puesto que permite asegurar con alto grado de certeza que la contaminacin que presenta el agua es de origen fecal. 3.1 Coliformes fecales Las bacterias Coliformes fecales forman parte del total del grupo coliforme. Son definidas como bacilos gram-negativos, no esporulados que fermentan la lactosa con produccin de cido y gas a 44.5 C +/- 0.2 C dentro de las 24 +/- 2 horas. La mayor especie en el grupo de coliforme fecal es el Escherichia coli. La presencia de Coliformes en el suministro de agua es un indicio de que el suministro de agua puede estar contaminado con aguas negras u otro tipo de desechos en descomposicin. Generalmente, las bacterias Coliformes se encuentran en mayor abundancia en la capa superficial del agua o en los sedimentos del fondo. 4. Mtodos para detectar Coliformes Existen diversos mtodos para cuantificar el nmero de microorganismos presentes en muestras lquidas y slidas. Dentro de las tcnicas ms comunes se encuentra el mtodo de filtrado por membrana (UFC) o la estimacin por el mtodo del Nmero Ms Probable (NMP).

4.1 Tcnica del numero ms probable (NMP) El mtodo del nmero ms probable fue descrito por McCrady en 1915 y actualmente sigue siendo ampliamente utilizado. En un principio este mtodo fue empleado para estimar el nmero de microorganismos en muestras de alimentos y aguas. Sin embargo, se ha demostrado que tambin puede ser aplicado para la determinacin de microorganismos aerobios y anaerobios en lodos, sedimentos marinos y suelos contaminados, por tanto este mtodo es aplicable para estimar el nmero de microorganismos en muestras de suelo y agua, tanto para bacterias aerobias como anaerobias.

4.2 Tcnica de filtrado por membrana La tcnica de filtracin por membrana utiliza un mecanismo mediante el cual se atrapan en la superficie de una membrana microorganismos cuyo tamao es mayor que el tamao del poro (0.45 um); esto gracias a una bomba elctrica que ejerce una presin diferencial sobre la muestra de agua haciendo que se filtre. Los microorganismos de tamao menor que el especfico del poro pasan la membrana o quedan retenidos en su interior, las bacterias quedan en la superficie de la membrana y luego esta es llevada a un medio enriquecido, selectivo o diferencial, quien a travs de intercambio metablico y una incubacin, evidencian el crecimiento de microorganismos y Unidades Formadoras de Colonia. (APHA - AWWA - WPCF, 2000). Esta tcnica es altamente reproducible y proporciona resultados numricos, es una manera rpida y simple de estimar las poblaciones bacterianas en el agua, y especialmente til al evaluar grandes volmenes o al realizar diariamente muchas pruebas de Coliformes (HACH, 2000). El equipo de soporte del filtro (Fabricado en vidrio, plstico resistente a autoclave, porcelana o acero inoxidable) consiste en un embudo, unido a una base por un artefacto de cierre que se mantiene en su lugar mediante una fuerza magntica. El diseo debe permitir que la membrana se mantenga con seguridad sobre la placa porosa, sin que sufra dao mecnico, de manera que todo el lquido pase a travs de la membrana durante la filtracin. (APHA, 1992)

Figura. Trampa de filtracin

Filtros de membrana Se deben utilizar filtros de membrana con un dimetro de poro que permita una completa retencin de las bacterias Coliformes. Solo se emplean filtros en los que se haya comprobado, mediante una adecuada prueba de control de calidad y por garanta del fabricante, que permita una retencin de las bacterias coliformes. (APHA, 1992).

Se debe tener en cuenta, que dichos filtros deben ser libres de qumicos susceptibles de inhibir el crecimiento y desarrollo bacteriano, que posean una velocidad de filtracin satisfactoria, ausencia de influencias significativas sobre el pH del medio (no mas de +/0.2 unidades) y que no produzcan un aumento en el nmero de colonias confluentes o expansivas, en comparacin con los filtros de membrana de control (APHA, 1992). Se recomienda utilizar filtros de membrana preesterilizados cuyos fabricantes garanticen que la tcnica de esterilizacin no ha inducido toxicidad ni alterado las propiedades fsicas o qumicas de la membrana, si estas se esterilizan en el laboratorio se deben someter al autoclave por 10 minutos a 121C. (APHA, 1992). El mecanismo de accin es muy simple: retienen todas las partculas que posean un tamao mayor que los poros, estos poros quedan formados por los espacios que resultan de la superposicin de las fibras de las distintas capas que forman la membrana, as algunas partculas de menor tamao son retenidas por otros mecanismos como las fuerzas de Van der Waals o por la suma de partculas retenidas previamente (PEARCE, 2007)

Volumen de agua analizada

El volumen de muestra a filtrar es generalmente de 100 ml, excepto para aguas envasadas, en las que se recomienda analizar muestras de 250 ml. Sin embargo, en aguas superficiales y en general en aguas naturales sin tratar, el nmero de bacterias en 100 ml puede variar desde pocas decenas hasta cientos de millares. La siguiente tabla proporciona unos datos que pueden servir de orientacin: Tipos de agua Potable de consumo pblico Envasadas Manantiales Lagos, depsitos Acometidas De playas De ros Residuales cloradas Residuales sin tratar Coliformes totales 100 ml 250 ml 15; 60; 100 ml 4; 15; 60; 100 ml 0,08; 0,15; 0,5; 1,4 ml 0,08; 0,15; 0,5; 1,4 ml 0,003; 0,01; 0,02; 0,08 ml 0,003; 0,01; 0,02; 0,08 ml 0,0001; 0,0003; 0,001; 0,003; 0,01 ml

Medio de cultivo selectivo para Coliformes Totales: Caldo Endo, MF Se utiliza el Caldo Endo para el recuento de coliformes totales. Este es un medio para el aislamiento selectivo de los coliformes totales pues lleva inhibidores para el resto de microorganismos. El lauril sulfato y desoxicolato que forman parte de la frmula del medio permite crecer a los coliformes lactosa positivo pero inhibe el crecimiento del resto de bacterias acompaantes. Las colonias lactosa positivo se colorean de rojo por la liberacin de fucsina del sulfato de fucsina. Las colonias de E. Coli y de los coliformes muestran generalmente un brillo metlico.

Procedimiento: 1. 2. Desenvolver el filtro de la envoltura con la que se ha esterilizado. Separar el embudo de la base del filtro.

3. Colocar la membrana filtrante de 0,45 m de tamao de poro sobre el porta filtros de las base del mismo. El manejo de las membranas se debe realizar con pinzas de punta plana o guantes de goma para no lesionarlas. 4. Colocar el embudo sobre la base, teniendo cuidado de no lesionar la membrana y que esta quede bien centrada. La membrana filtrante queda ahora situado entre el embudo y la base-soporte del filtro. 5. Filtrar 100 mL de la muestra de agua a travs del filtro. Poner en marcha el sistema de vaco.

6. Una vez filtrada toda la muestra, parar el sistema de vaco y separar el embudo de la base del filtro. 7. Retirar con pinzas estriles o flameadas la membrana filtrante. 8. Colocar la membrana sobre la placa con la almohadilla absorbente y el caldo Endo, de forma progresiva para evitar que queden burbujas entre la membrana y el medio y que quede asegurado el contacto entre la membrana y el medio. 9. Colocar la tapa de la placa de Petri, invertir la placa e incubar en estufa a 37C durante 24 horas En este medio todos los coliformes crecen formando colonias de color rojo oscuro con el caracterstico brillo metlico de Escherichia coli de color verde-azulado aunque en los gneros Citrobacter, Klebsiella y Enterobacter no es tan intenso como en Escherichia y puede pasar desapercibido. Los resultados se expresan en UFC/100 mL.
10.

Parmetros establecidos para la presencia de Coliformes segn las Normas INEN

Agua potable.

Agua envasada.

Agua Mineral.

Bebida lctea pasteurizada.

Leche fermentada.

Bebidas de malta.

Bebidas energeticas.

Bebidas gaseosas.

Carnes de aves.

Carnes de res cruda.

Conclusin La determinacin de bacterias coliformes totales, pueden estar presentes tanto en los alimentos como en los sistemas de agua potable, ya que estos microorganismos se pueden transmitir a travs de diferentes vas. Los coliformes totales as mismo nos ayudan a determinar si los productos alimenticios y el agua son actos para el debido consumo.

BIBLIOGRAFIA
http://es.wikipedia.org/wiki/Coliforme http://apps.inen.gob.ec/descarga/index.php/buscar http://es.scribd.com/doc/48008396/COLIFORMES http://www.distribucionesbiotecnologicas.com.mx/files/guia_petrifilm_ecoli_coliformes.pdf http://cdigital.dgb.uanl.mx/la/1020082346/1020082346_080.pdf http://www.slideshare.net/lucasburchard/coliformes http://cidbimena.desastres.hn/docum/ops/pdf/ManualBacteriologico/ManualBacteriologicoEs p.pdf http://virus.usal.es/Web/demo_fundacua/demo2/FiltraMembColiT_auto.html http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b06/caldom-endo.htm http://www.javeriana.edu.co/universitas_scientiarum/universitas_docs/Vol%2012%20especial %20II/8-COMPORTAMIENTO%20COLIFORMES.pdf http://www.communitywatercenter.org/files/trainingmaterials/CWC_GFS_ColiformBacteria_Sp anish.pdf http://www.revbiomed.uady.mx/pdf/rb061721.pdf http://www.bvsde.paho.org/bvsacd/scan2/032981-I-II/032981-I-07b.pdf http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis203.pdf http://www.ugr.es/~pomif/pom-ali/ma-i/ma-i-3-nmp_concepto.htm