FEDERACION NACIONAL DE CULTIVADORES DE CEREALES FENALCEFONDO NACIONAL CEREALISTA

TECNI FENALCE
BOLETIN INFORMATIVO DE LA SUBGERENCIA TECNICA
Nmero 6 Ao 2 Junio del 2000 COLABORADORES: I.A. REGIONALES

DIRECTOR: FABIO POLANIA FIERRO

ANALISIS FOLIAR: FUNDAMENTOS Y METODOS DE EVALUACION

(Jos Espinosa. Director de la Oficina para el Centro Norte de Amrica Latina. Instituto de la Potasa y el Fsforo).

El anlisis foliar tiene lugar siguiendo una serie de pasos que se inician con el muestreo en el campo, continan con la preparacin de la muestra y el anlisis de laboratorio y terminan con la interpretacin. Cada paso es igualmente importante para que esta tcnica de diagnstico sea exitosa. Muestreo para anlisis foliar

Introduccin El anlisis de tejido vegetal, generalmente conocido como anlisis foliar, determina el contenido elemental de nutrientes de una parte de la planta en particular, que comnmente es la hoja. El anlisis foliar, tiene una considerable historia como tcnica de diagnstico, pero en los ltimos aos se ha utilizado para determinar el estado nutricional del cultivo, e indirectamente el del suelo. El anlisis foliar asume que la parte de la planta muestreada (generalmente la hoja) es el rgano que refleja el estado nutricional de la planta y que existe una relacin estrecha y directa entre el suplemento de nutrientes (suelo y/o fertilizantes) y el rendimiento, entre el suplemento y la concentracin de elementos en las hojas y entre la concentracin en las hojas y el rendimiento. Los resultados de los anlisis foliares pueden utilizarse para cumplir varios objetivos. El ms frecuente de estos objetivos es la verificacin de los sntomas de deficiencia. Sin embargo, el uso ms importante de los resultados del anlisis foliar es el de determinar si el nivel de fertilidad del suelo y las dosis de los fertilizantes aplicados son suficientes para cubrir las necesidades del cultivo. Este ltimo objetivo, a pesar de ser el ms importante, es el menos entendido y utilizado. Las instrucciones para muestreo, en trminos de localizacin de la hoja o de la parte de la planta a muestrearse as como del estado de crecimiento del cultivo, son muy especficas ya que los resultados del anlisis, durante diagnstico, deben ser comparados con niveles crticos o rangos de suficiencia que han sido previamente establecidos por investigacin y que sirven para interpretar el anlisis. Por esta razn, cualquier anlisis hecho en parte diferente de la planta con respecto al estndar, o en diferente etapa de crecimiento del cultivo de la especificada, no puede interpretarse utilizando los niveles crticos establecidos. En la Tabla 1 se presenta el procedimiento de muestreo de caf utilizado en varios pases de Amrica Latina. Cuando no existen instrucciones especficas de muestreo en un cultivo, la regla general reconocida es la de muestrear las hojas que han madurado recientemente y cuyo crecimiento ha terminado pero que no han entrado en senilidad. Tabla 1. Procedimientos de muestreo foliar
Pas o Regin
Brasil

Muestra (1)

Tamao
40

Verano, ramas con frutos de 4 30 o gradientes, para altura, 3 o 4 par paras. de hojas desde la punta.

Colombia,

Costa Alrededor de 1/3 de desarrollo de 60 pares de

2
Rica la fruta, ramas con fruta, 4 par 15 plantas. para N, P, K; 2 par para Ca, B, Fe; 6 par para Mg. 25 pares. Inicio de la floracin 3 o 4 par.

Puerto Rico

Por otro lado, es tambin muy importante el evitar ciertas condiciones durante el muestreo. La persona encargada del muestreo no debe seleccionar plantas que han estado bajo largo perodo de estrs climtico o nutricional, que presenten dao mecnico o por insectos o que estn atacadas por enfermedades. Se debe tambin evitar el muestrear hojas cubiertas de polvo o de aplicaciones foliares de diversos productos, a menos que se pueda remover completamente estos materiales en el laboratorio. Tampoco se deben muestrear plantas de los bordes del campo u hojas que estn continuamente bajo sombra dentro del cultivo. No deben incluirse tejidos muertos en la muestra colectada para anlisis. La precisin del anlisis depende tambin del nmero de submuestras tomadas para formar la muestra compuesta que ir al laboratorio. El coeficiente de variacin de los anlisis se afect ms significativamente con el nmero de rboles muestreados que con el nmero de hojas muestreadas por rbol. La combinacin del nmero de plantas seleccionadas para muestreo con el nmero de hojas por planta determina la varianza o desviacin de la media del resultado final del anlisis de una muestra en particular. El escoger adecuadamente la parte de la planta a analizar es importante debido a que la distribucin de los elementos esenciales dentro de la planta, y aun dentro de una misma parte de la planta, no es homognea. A medida que la planta madura existen cambios debidos a las siguientes condiciones: 1) Movimiento de los elementos mviles de los tejidos viejos a los tejidos en desarrollo. 2) Acumulacin de elementos no mviles. 3) Reduccin en el contenido de materia seca. Por ejemplo, uno de los signos de madurez es el incremento en la concentracin (acumulacin) de Ca y Mg y una reduccin en la concentracin de N

y P. Otro factor de variacin, que afecta a la concentracin de K, es la proporcin relativa de rea de hoja con respecto a la nervadura. De igual manera, la proporcin relativa de rea de hoja con respecto a los mrgenes afecta el contenido de B y Mn ya que estos dos elementos se acumulan en concentraciones apreciablemente altas en los mrgenes de las hojas. Un procedimiento de muestreo que afecte las relaciones descritas arriba alterar el resultado del contenido de nutrientes de la muestra analizada. Por ejemplo, el procedimiento de muestreo que solamente colecte las puntas de las hojas o las partes centrales de las hojas producir una diferente interpretacin de aquel procedimiento que muestree toda la hoja. La Tabla 2 ilustra el efecto de dividir la hoja de maz en cuatro secciones iguales sobre la concentracin de nutrientes.
Tabla 2. Contenido de nutrientes en la hoja completa de maz ubicada bajo la mazorca y de la divisin de la misma hoja en cuatro partes iguales. ELEMENTO SECCIONES IGUALES DE HOJAS
H. ENTERA PUNTA MITAD SUP. MITAD INF. BASE

N* P* K* Ca* Mg* B** Cu** Fe** Mn** Zn**

* En porcentaje. ** En partes por milln.

2.93 0.22 1.22 0.48 0.39 11 9 96 73 22

3.20 0.22 1.26 0.75 0.40 25 12 110 124 30

3.65 0.23 1.19 0.58 0.41 14 10 102 79 22

2.75 0.25 1.44 0.48 0.45 8 10 75 62 22

1.95 0.18 1.23 0.35 0.40 6 8 57 49 18

Los peciolos no son parte de las hojas y no deben incluirse en la muestra, pero en algunos cultivos como la remolacha azucarera y la vid se ha demostrado que la parte de la planta a muestrearse es el peciolo antes que la hoja. Puede ser tambin difcil el muestrear dos diferentes poblaciones de plantas con el propsito de hacer comparaciones, particularmente cuando algn tipo de estrs es el que ha causado las diferencias en el estado de crecimiento. Se debe recordar que la concentracin de elementos se expresa en relacin al peso de materia seca del tejido. Cualquier condicin que afecte el peso de materia seca de la planta afectar la concentracin de elementos. Por esta razn, se debe tener mucho cuidado para asegurarse que se estn tomando muestras representativas para hacer estas comparaciones y que la interpretacin de los

resultados del anlisis tenga en consideracin las condiciones de las plantas cuando fueron muestreadas. Aun cuando es posible el analizar cualquier parte de la planta o an la planta completa, el significado biolgico de este anlisis puede ser muy limitado. Por ejemplo, el anlisis de fruta y grano, el anlisis de toda la planta o el anlisis de cualquier parte de la planta a la madurez o la cosecha generalmente no provee informacin confiable acerca del estado nutricional del cultivo en los estados iniciales de crecimiento. Cuando se hace un anlisis de tejidos vegetales, el objetivo principal debe ser el de muestrear aquella parte de la planta que reporte resultados de anlisis que puedan ser comparados con los estndares obtenidos mediante investigacin en las mismas partes de la planta. De otra forma el resultado del anlisis foliar es una cifra sin valor. Durante el muestreo se debe tener cuidado tambin de que el material no se contamine al entrar en contacto con materiales extraos como herramientas, fundas y cajas. Las condiciones de temperatura y humedad durante el transporte de la muestra al laboratorio tambin pueden afectar la integridad de la muestra y se deben tomar algunas precauciones. Las muestras foliares frescas no deben colocarse en fundas de plstico a menos que la temperatura se mantenga a valores menores de 50 C. El secado de la muestra al aire antes del envo al laboratorio minimiza la prdida de peso seco. En lo posible se debe entregar la muestra al laboratorio dentro de las primeras 24 horas despus del muestreo. Preparacin y anlisis de la muestra La preparacin de la muestra para anlisis de laboratorio envuelve un proceso que modifica las propiedades fsicas y qumicas del tejido muestreado. Se debe tener mucho cuidado para minimizar estos cambios y para esto se deben seguir los procedimientos que se han determinado adecuados para el manejo de muestras en el laboratorio. En el proceso de preparacin de la muestra se logran dos objetivos: 1) Acondicionar la muestra para que pueda ser analizada. 2) Homogenizar la muestra compuesta.

Antes de lograr esto se debe descontaminar y secar la muestra. La descontaminacin remueve el polvo y otras sustancias extraas que pueden afectar el anlisis de laboratorio y el secado preserva el peso seco del tejido. Descontaminacin La descontaminacin es absolutamente necesaria si se est interesado en analizar la muestra por Fe y Al. Se debe lavar la superficie fresca de la hoja con una solucin diluida de detergente (2%) para remover las partculas de polvo y sucio an cuando estas no sean visibles. El lavado con agua o con cido diluido no remueve la mayora de contaminantes y la descontaminacin efectiva depende de la presencia de cera y pubescencias en la superficie de la hoja as como el tipo y concentracin de los contaminantes. Normalmente el lavado no es necesario si la muestra colectada se ha seleccionado cuidadosamente y el Fe y Al no son elementos de inters. Las hojas expuestas a frecuente lluvia o que no han recibido aplicacin de sustancias que contengan nutrientes no necesitan ser lavadas. El proceso de descontaminacin debe ser hecho rpidamente procurando la menor exposicin posible de la solucin de lavado con el tejido, para prevenir la prdida de elementos solubles como el B y el K. En algunos casos, el lavado de las muestras foliares puede presentar peligro de contaminacin al transferirse contaminantes de unas pocas hojas a todas las hojas que estn siendo lavadas por esta razn cuando no se tiene cuidado el lavado no necesariamente reduce la presencia de contaminantes. Despus del anlisis se puede detectar si ha existido contaminacin al observar las concentraciones de Al, Fe y Si presentes en el tejido. Si todos los tres elementos presentan concentraciones relativamente altas, > 100 ppm para Al y Fe y ms 1% para Si, y su concentracin tiende a incrementarse o disminuir en forma conjunta, la contaminacin con polvo o tierra es muy probable. Secado al horno

El secado rpido, inicialmente a temperatura ambiente para remover el agua de la superficie y luego al horno a 80C, remueve toda el agua de los tejidos. El secar la muestra a temperaturas ms bajas no remueve el agua de todos los tejidos mientras que el secado a temperaturas ms altas puede descomponer la muestra reduciendo de esta forma el peso seco. Los tejidos que tienen alto contenido de azcar o almidn no se secan fcilmente al horno y es mejor secarlos al ambiente. El proceso de secado al horno es mejor cuando se conduce en una estufa de aire forzado colocando la muestra en una funda de papel o de tela. Las fundas deben acomodarse en el horno con mucho espacio entre ellas para permitir la circulacin del aire. Diferentes tipos de muestras pueden ser secados en el horno de microondas, si el proceso se lleva a cabo cuidadosamente, volteando las muestras frecuentemente despus de una corta exposicin de las muestras a las microondas. Reduccin del tamao de las partculas Las muestras despus de secadas deben ser molidas para reducir el tamao de las partculas y obtener una muestra lista para ser analizada en el laboratorio. La muestra se puede segregar durante el molido particularmente si no se controla la electricidad esttica. Se debe permitir el suficiente tiempo para que toda la muestra pase por el molino. Tejidos higroscpicos pueden ser muy difciles de moler. De igual manera son difciles de moler aquellos tejidos que tienen considerable pubescencia como la manzana o la soya y se debe tener cuidado con estas muestras durante la operacin para poder tener una muestra homognea. Si la cantidad de muestra necesaria para un anlisis de un elemento no es menor que 1 g es suficiente pasar la muestra por una malla de 20 mesh. Sin embargo, si la cantidad de muestra necesaria para el anlisis es menor que 1 g se requiere reducir ms el tamao de la partcula y por lo tanto se requiere pasar la muestra por una malla de por lo menos 40 mesh. Si el Fe es el elemento de mayor inters debe tenerse cuidado porque puede ocurrir contaminacin significativa si en el molido pone en contacto la muestra con piezas de acero del molino. Para evitar esta contaminacin se

recomienda usar un mortero para moler las muestras. Una vez que la muestra ha sido secada y molida se puede guardar indefinidamente en un ambiente oscuro, seco y fro (4C). Destruccin de la materia orgnica (Digestin) Probablemente ningn otro aspecto de la preparacin de la muestra para el anlisis ha levantado tanta controversia como el de la destruccin de la materia orgnica del tejido, proceso conocido tambin como digestin. Los dos mtodos de uso comn son: combustin a alta temperatura conocida como digestin seca y digestin cida conocida tambin como digestin hmeda. Ambas tcnicas pueden dar resultados comparativos si se conducen adecuadamente. Es necesario indicar sin embargo, que existen excepciones. El B se puede perder por volatilizacin durante el proceso de digestin hmeda. Normalmente se pueden obtener contenidos ms altos de Al, Fe y Zn (particularmente para tejidos altos en Si) cuando la muestra se prepara por digestin hmeda comparado con la digestin seca. Elementos como el As, Pb y Se se pueden perder del tejido por volatilizacin durante la digestin seca. Como se puede ver, se debe escoger el mtodo de digestin de la muestra de acuerdo a los elementos que se van analizar as como al contenido de otros elementos en el tejido. Mtodos para expresar el contenido de nutrientes en los tejidos La concentracin de N, P, K, Ca, Mg y S en los tejidos se expresa como porcentaje (%) en base a peso seco. En forma similar los micronutrientes B, CI, Cu, Fe, Mo, Mn y Zn se expresan en partes por milln (ppm). Usando unidades del sistema internacional, los elementos mayores se expresan en gramos/kilogramo (g/kg) y los cationes en centimoles/kilogramo (cmol/kg). Los micronutrientes se pueden expresar como microgramos/gramos (ug/g) o miligramos/kiIogramos (mg/kg).
Tabla 3. Mtodos para expresar la concentracin de los nutrientes en los tejidos de las plantas (concentraciones expresadas en base a materia seca).

5
ELEMENTO N P K Ca Mg B Cu Fe Mn Zn % 3.15 0.32 1.95 2.00 0.48 ppm 20 12 111 55 33 g/kg 31.50 3.20 19.50 20.00 4.80 mg/kg 20 12 111 55 33 cmol(+)/kg 225 --50 25 10 --0.09 0.66 0.50 0.25 cmol(+)/kg 225 --50 50 20 mmol/kg 1.85 0.19 1.98 1.00 0.50

familiarizada con las relaciones entre la acumulacin de materia seca y la concentracin de elementos.
Tabla 4. Niveles de N, P, K, Ca, Mg y S foliar propuestos en varios pases productores de caf (% en base a materia seca).
NIVEL
Deficiente Bajo Medio Alto Deficiente Bajo Medio Alto Deficiente Bajo Medio Alto Deficiente Bajo Medio Alto Deficiente Bajo Medio Alto Bajo Medio Alto

ELEMENTO
N N N N P P P P K K K K Ca Ca Ca Ca Mg Mg Mg Mg S S S

BRASIL
--2 2.5 2.6 3.0 Mayor de 3.0 --0.05 0.1 0.11 0.15 Mayor de 0.15 --1.5 - 2.0 2.1 2.5 Mayor de 2.5 --1.0 1.2 1.21 1.5 Mayor de 1.5 --0.1 0.2 0.21 0.4 Mayor de 0.4 0.1 0.15 0.16 0.25 Mayor de 0.25

COLOMBIA
Menor de 2.0 2.0 2.5 2.5 3.0 Mayor de 3.0 --Mayor de 0.11 0.11 0.15 Mayor de 0.15 1.1 1.1 1.5 1.5 1.8 Mayor de 1.8 ----0.7 1.3 Mayor de 1.3 Mayor de 0.16 0.16 0.35 Mayor de 3.39 -------

COSTA RICA
2.0 2.0 2.3 2.3 2.8 Mayor de 2.8 Menor de 0.09 0.09 0.12 0.12 0.2 Mayor de 0.2 Menor de 1.0 1.0 1.7 1.7 2.7 Mayor de 2.7 Menor de 0.8 --0.8 1.1 1.1 1.7 Menor de 1.7 0.1 0.2 0.2 0.35 Mayor de 0.35 Menor de 0.2 0.2 ---

Normalmente los elementos mayores se expresan en porcentaje con dos dgitos despus del punto decimal (0.00%). Los micronutrientes se expresan en ppm, concentraciones mayores a 10 ppm se expresan como nmeros enteros, concentraciones mayores que 1 ppm pero menores que 10 ppm se expresan con un lugar despus del punto decimal (0.0) y las concentraciones menores a 1 ppm se expresan con dos lugares despus del punto decimal (0.00). La Tabla 3 compara la presentacin de los nutrientes en diferentes unidades. Interpretacin de los resultados Al inicio, un programa de interpretacin del anlisis foliar busca relacionar los resultados con valores simples como la concentracin crtica o concentracin estndar de cada nutriente para el cultivo en estudio. Cuando se tiene suficiente experiencia es preferible interpretar los resultados dentro de un juego de datos que definen un rango completo de concentraciones que van desde la deficiencia hasta el exceso. Estos datos interpretativos se pueden obtener de curvas de respuesta como la que se presenta en la Figura 1 y en las Tabla 4. La forma de la curva de la parte izquierda de la Figura 1 (secciones A, B y C) se conoce como efecto Steenbjerg. En la seccin A de la curva se observa un incremento en el contenido de nutrientes mientras ms bajo es el crecimiento o rendimiento del cultivo. Este comportamiento confunde fcilmente en la interpretacin. Este fenmeno resulta de la combinacin de efectos producidos por la reduccin de la materia seca en la concentracin de elementos (la pequea cantidad de materia seca concentra los elementos en los tejidos). Se puede fcilmente llegar a una interpretacin errada de los resultados si la persona que interpreta los anlisis no est

El nivel crtico define la concentracin de equilibrio de un nutriente en el tejido. A concentraciones menores del nivel crtico se presenta la deficiencia. Es difcil usar este valor nico cuando el resultado del anlisis es considerablemente ms alto o ms bajo que este valor. Varios investigadores han sugerido utilizar una zona de transicin que designe un rango de concentracin entre la deficiencia y la suficiencia. Varios autores han definido este rango como el "rango crtico de nutrientes". Este rango se localiza en la zona de transicin y define una zona con concentraciones en las cuales se puede trabajar con seguridad. Para utilizar los resultados del anlisis foliar en el diagnstico nutricional, usando los niveles crticos o los rangos de suficiencia, es necesario que la parte de la planta muestreada y el tiempo de muestreo sean idnticos a aquellos que se utilizaron para desarrollar la norma. Se pueden encontrar diferencias en la concentracin de nutrientes en el tejido si existen diferencias en la parte de la planta muestreada, estado de crecimiento, genotipo, etc. Por esta razn estas tcnicas de interpretacin son

Figura 1. Relacin entre el crecimiento de la planta o el rendimiento y el contenido de nutrientes en la planta.

tiles solamente cuando se cumple con estos

C R E C I M I E N T O

que elemento o que balance de elementos no es adecuado. El mtodo es menos til cundo el contenido de nutrientes est en el centro del rango de suficiencia. Se ha observado tambin que la tcnica DRIS no es completamente independiente de la localizacin o el tiempo de muestreo y por esta razn tambin se puede mal interpretar los datos DRIS. Ninguno de los mtodos interpretativos discutidos son infalibles y solamente la experiencia permite una adecuada interpretacin de cualquiera de los mtodos. La persona a cargo de la interpretacin debe utilizar todas las herramientas secundarias disponibles, incluyendo el anlisis de suelo, para determinar el estado de un nutriente en la planta y determinar el tratamiento correctivo adecuado. Utilizacin de los anlisis foliares

requisitos. Un concepto bastante nuevo en la interpretacin del anlisis foliar es el sistema denominado DRIS, siglas en ingls del Sistema Integrado de Diagnosis y Recomendacin (Diagnosis and Recommendation Integrated System). La tcnica de interpretacin DRIS se basa en la comparacin de relaciones entre elementos con normas establecidas. El mtodo DRIS se diseo para: 1) Lograr un diagnstico vlido a pesar de la edad de la planta o el tipo del tejido. 2) Ordenar los nutrientes desde el ms limitante al menos limitante y 3) Enfatizar la nutrientes. importancia del balance de

La mayora de los agricultores y tcnicos utilizan el anlisis foliar principalmente como una herramienta de diagnstico que les permite determinar que elemento(s) se encuentra por debajo o por encima de la concentracin ptima para el crecimiento normal del cultivo. La interpretacin se inicia estableciendo si el nivel de nutrientes es suficiente o no. El siguiente paso consiste en determinar porque existe la insuficiencia y especifica la forma de corregirla. Finalmente determina como prevenir que la insuficiencia aparezca en el siguiente cultivo. Si se espera hacer un buen diagnstico y lograr una recomendacin se necesitan ms herramientas que solamente el simple anlisis foliar. La mayora de los programas de diagnstico y recomendacin solicitan un cuestionario completo de preguntas referentes a la historia del cultivo que debe ser adjuntado a los resultados del anlisis. El cuestionario completo describe las circunstancias en las cuales el cultivo esta creciendo y provee de pistas o guas valiosas para interpretar los resultados y hacer la recomendacin para corregir la insuficiencia. Por ejemplo, si se ha confirmado por medio del anlisis foliar que el Mg es deficiente, la persona encargada del diagnstico debe determinar el porque existe la deficiencia y que pasos se deben tomar para corregirla. Las acciones correctivas debern ser determinadas despus de medir el pH

Se ha comparado el concepto DRIS de interpretacin de anlisis foliar con el mtodo de rango de suficiencia y nivel crtico y se ha observado que muchos casos el mtodo DRIS no fue mejor que las otras tcnicas. Sin embargo, se considera que cada uno de estos mtodos tienen sus desventajas y la mejor forma de utilizarlos es usndolos juntos. Aparentemente el mtodo DRIS trabaja mejor en los extremos del rango de suficiencia, identificando

y el nivel de Mg disponible en el suelo. El aadir Mg al suelo no ser efectivo si el pH es menor que 5.4 o si el cultivo se encuentra bajo un largo perodo de estrs. Ambas condiciones reducen significativamente la absorcin de Mg por las races de las plantas. Factores como: el anlisis de suelo, fertilizante aplicado, condiciones generales del cultivo, etc. son vitales para utilizar eficientemente los resultados del anlisis foliar. La informacin reciente referente al anlisis de suelo es particularmente til. Por esta razn se deben tomar muestras de suelos al mismo tiempo y en la misma rea donde se estn tomando las muestra foliares. Una tcnica muy til pero poco utilizada con el anlisis foliar es el seguimiento o monitoreo del estado nutricional del cultivo. Esta tcnica consiste en seguir la concentracin de nutrientes en el cultivo a travs del tiempo. El objetivo de esta tcnica es el de regular las prcticas culturales para mantener la concentracin de elementos dentro de los rangos de suficiencia. Esto tambin permite determinar cuando se estn desarrollando insuficiencias de modo que se puedan tomar medidas correctivas antes que los problemas nutricionales reduzcan el rendimiento total o la calidad del cultivo.

Seminario de Fertilizacin y Nutricin del Caf. Guatemala, Guatemala. pp. 20-25 Malavolta, E. 1992. Nutricin Mineral del Caf. En: ANACAFE-INPO-FOS. Seminario de Fertilizacin y Nutricin del Caf Guatemala, Guatemala. pp. 2642.

Jones, J. B., B. Wolf, and H. Mills. 1991. Plant Analysis Handbook. Micro-Macro Publishing, Inc. Athens, Georgia. USA.22.

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Bibliografa Bornemizsa, E. 1992. Calibracin y correlacin del anlisis de suelos y plantas con nfasis en el cultivo del caf. En: ANACAFE-INPOFOS.