CURSO

DE GENTICA

Apostila de Gentica Humana

Curso Mdico 3 srie 2004

Disciplina de Gentica Departamento de Morfologia UNIFESP

CURSO DE GENTICA HUMANA CURSO MDICO - 2004

A BASE CROMOSSMICA DA HEREDITARIEDADE O CARITIPO NORMAL Bibliografia: ?? Gentica Mdica. Thompson e col., 2002. Ed. Guanabara Koogan, 5 ed. Cap. 2 e 10 ?? Gentica Medica. Jorde e col., 2000. Ed. Guanabara Koogan. 2 ed. Cap. 1, 2 e 6
QUESTES: 1) Qual o tecido mais utilizado para o estudo do caritipo humano? Como so preparadas as clulas para a obteno de cromossomos? 2) Quais outras clulas e tecidos podem ser utilizados para o estudo citogentico?

3) Quais so os critrios utilizados para a organizao dos cromossomos para a montagem do

caritipo?

4) O que so cromossomos sexuais e cromossomos autossomos? Quanto pares de cada existem

na espcie humana? Quais so eles?

5) Observe a figura na prxima pgina que mostra o resultado de um caritipo masculino normal sob
bandamento G. Como seria esse caritipo se esse fosse de um indivduo do sexo feminino? 6) Foi estabelecido um sistema internacional para padronizar a nomenclatura dos cromossomos (ver figura 1). Pergunta-se: a) O que so bandas cromossmicas ? b) O que significa dizer que o gene que codifica o fator VIII da coagulao (gene que quando mutado acarreta a hemofilia A) est localizado em Xq28? c) O que significa dizer um paciente apresenta deleo 5p14? 7) Qual a relao entre DNA, genes e cromossomos? 8) O que representa a cromatina X (ou cromatina sexual)? De acordo com a Hiptese de Lyon, como ocorre a compensao de dose nos mamferos? 9) Determine o nmero de cromatinas X (ou cromossomos X inativos) observado nas seguintes constituies cromossmicas:
CARITIPO 46,XX 46,XY 45,X 47,XXX 47,XXY 47,XYY 48,XXXX FENTIPO mulher normal homem normal mulher com a sndrome de Turner mulher com a sndrome do triplo X homem com a sndrome de Klinefelter homem com duplo Y mulher com tetrassomia X Cromatina X

Universidade Federal de So Paulo Escola Paulista de Medicina Departamento de Morfologia

Disciplina de Gentica

LABORATRIO DE CITOGENTICA HELENEIDE RESENDE DE SOUZA NAZARETH UNIVERSIDADE FEDERAL DE SO PAULO/EPM

PACIENTE: ______________________________________ AG: ________ MDICO : ______________________

EXAME: CARITIPO
MATERIAL: sangue perifrico NMERO TOTAL DE CLULAS ANALISADAS : SOB COLORAO CONVENCIONAL : SOB BANDAMENTO G : 12 15 3

RESULTADO: 46,XY CONCLUSO: Caritipo normal para o sexo masculino com resoluo
de 400 550 bandas cromossmicas.

Figura2 Representao esquemtica de cromossomos metafsicos humanos mostrando as bandas cromossmicas de acordo com o sistema proposto na Conferncia de Paris (1971): As faixas escuras correspondem s bandas G ou Q; as claras, s bandas R e as faixas hachuradas, s bandas cromossmicas que mostram grande variabilidade de tamanho. Os cromossomos so divididos em braos: (p) braos curtos e (q) braos longos Cada um dos braos dividido em regies cromossmicas a partir do centrmero. Cada regio pode ser subdividida em outras regies menores (bandas cromossmicas).

4 CONCEITOS Citogentica Estudo dos cromossomos humanos e suas anormalidades. Mitose O processo de diviso celular comum, resultando na formao de duas clulas geneticamente idnticas clula-me. Diplide O nmero de cromossomos na maioria das clulas somticas, que o dobro do nmero encontrado nos gametas. No homem, o nmero diplide de cromossomos 46. Haplide O nmero de cromossomos de um gameta normal, com apenas um membro de cada par de cromossomos. No homem, o nmero haplide 23. Cromatina A associao de DNA e protenas da qual os cromossomos so compostos. Cromossomo Organelas constitudas pala cromatina condensada que podem ser visualizadas durante a diviso celular. Cromossomo Autossomo Qualquer cromossomo nuclear que no os cromossomos sexuais; 22 pares no caritipo humano. Cromossomos Sexuais Cromossomos responsveis pela determinao do sexo. Em seres humanos, XX na mulher, XY no homem. Cromossomos homlogos Par de cromossomos de um tipo, cada um herdado de um dos pais, tendo os mesmos lci gnicos na mesma ordem. Caritipo A constituio cromossmica de um indivduo. Tambm se usa o termo para uma fotomicrografia dos cromossomos de um indivduo dispostos numa classificao padro e para o processo de preparao desta fotomicrografia. Cromtides Numa clula em diviso, aps sntese de DNA, v-se que um cromossomo composto de dois filamentos paralelos idnticos, as cromtides-irms, conectados no centrmero. Na anfase, as cromtides se separam, cada uma tornando-se um cromossomo numa clula-irm. Na fase S subseqente, o cromossomo se replica e de novo constitudo de um par de cromtides. Centrmero A constrio primria ao longo do cromossomo, regio na qual as cromtides-irms so mantidas juntas e na qual o cinetcoro formado. Acrocntrico Cromossomo com o centrmero prximo a uma extremidade; no homem, os cromossomos acrocntricos (13, 14, 15, 21 e 22) tm braos curtos com satlite que abrigam genes para RNA ribossmico. Bandeamento Tcnica de colorao de cromossomos num padro tpico de bandas laterais. Banda G As bandas transversais escuras e claras vistas nos cromossomos aps tratamento com tripsina e colorao de Giemsa. Corspsculo de Barr A cromatina sexual, vista em clulas somticas femininas, que representa um cromossomo X inativo. Denominado em homenagem a Murray Barr. Gene Unidade hereditria; em termos moleculares, uma seqncia de DNA cromossmico, necessria produo de um produto funcional. Genoma A seqncia completa de DNA, contendo todas as informaes genticas de um gameta, um indivduo, uma populao ou uma espcie. Gentipo (1) A constituio gentica (genoma). (2) Mais especificamente, os alelos num lcus. Fentipo As caractersticas bioqumicas, fisiolgicas e morfolgicas, observadas de um indivduo, determinadas por seu gentipo e pelo ambiente no qual expressado. Alm disso, num sentido mais limitado, a expresso de um gene ou genes. Lcus A posio de um gene num cromossomo. Formas diferentes do gene (alelos) podem ocupar o lcus. Alelo Uma das verses alternativas de um gene que podem ocupar um determinado lcus.

MEIOSE E MECANISMOS PRODUTORES DE ABERRAES CROMOSSOMICAS NUMRICAS

Bibliografia: ?? Thompson e col., 1993 - Captulos 2 e 9 ?? Jorde e col., 2000. Cap. 2 e 6

1) Quais os tipos de diviso celular que ocorrem na espcie humana? Caracterize-as quanto : (a) clulas nas quais ocorrem (b) quando ocorrem (c) nmero de duplicaes cromossmicas e de divises celulares (d) nmero de cromossomos da clula me e das clulas filhas (e) finalidade 2) Quanto MEIOSE, responda: a) Defina permuta ou crossing-over. b) No esquema a seguir, no foi considerado o processo de permuta ou crossing-over. Levando-se em conta a ocorrncia de uma permuta entre os genes A e B, que tipos de gametas resultariam? c) Quais so os mecanismos envolvidos na variabilidade do material gentico que transmitido de um genitor para o filho? d) O que so genes ligados (LIGAO)?

b b

A B
b
A B
d D

Duplicao dos cromossomos

a
b a

A A B B

Emparelhamento dos homlogos PROFASE

ESQUEMA DE MEIOSE (sem permuta)

INTERFASE
d d

D D

METAFASE I

a b

A B

Sendo n = 2, h 2 possibilidades de disposio dos cromossomos na placa metafsica

a b

A B

d D

a b

a b

METAFASE II
D D

A B

A B

a b

a b

A B

A B

GAMETAS

A B D A B

a b

a b

a b

a b

A B

A B

Tipos de Gametas distintos: 2n

Sendo n = 2, h 4 tipos disintos de gametas

7 3) Com base no esquema anterior, desenhe, na parte da figura esquerda, uma no disjuno cromossmica ocorrendo na meiose I (no separao de um dos pares de cromossomos homlogos) e, na parte direita, uma no disjuno cromossmica ocorrendo na meiose II (no separao das cromtides irms de um dos cromossomos). Em que resulta os diferentes tipos de gametas formados caso haja fertilizao? 4) Suponha que durante a primeira clivagem de um zigoto normal 46,XX tenha ocorrido uma perda anafsica de um dos cromossomos X. Qual ser a constituio cromossmica resultante? 5) Suponha que durante a segunda clivagem de um embrio originado de zigoto normal 46,XY tenha ocorrido uma no disjuno do cromossomo 21. Qual ser a constituio cromossmica resultante? 6) Conceitue: ?? Aberrao cromossmica numrica ?? Aberrao cromossmica estrutural ?? No disjuno ?? Perda anafsica ?? Trissomia ?? Monossomia ?? Triploidia (3n) ?? Tetraploidia (4n) ?? Mosaicismo cromossmico

8 Problema I O emprego da tcnica de banda Q mostrou que algumas regies cromossmicas apresentam fluorescncia varivel. Estas so denominadas de variantes polimrficas ou heteromrficas e so transmitidas de pais para filhos. Estes polimorfismos so encontrados em regies paracentromricas dos cromossomos 3 e 4, braos curtos e satlites dos cromossomos acrocntricos 13, 14, 15, 21 e 22 e brao longo do cromossomo Y. Esta propriedade tem sido utilizada para averiguar o fenmeno da no disjuno (no separao dos cromossomos) em especial na sndrome de Down (trissomia do cromossomo 21). Padres de fluorescncia dos cromossomos 21

Brao curto (p) - satlite e/ou brao curto com fluorescncia varivel Exemplos: fluorescncia brilhante (poro escura) fluorescncia plida (poro clara)

Em uma srie de 20 famlias a anlise das variantes polimrficas dos cromossomos 21 foram estudadas nos pais e na criana com sndrome de Down. Destas, trs (famlias A, B e C) evidenciaramse favorveis para a averiguao do fenmeno e encontram-se resumidas abaixo: Famlia: me pai criana com trissomia 21

A B C

Pergunta-se: a) Em cada famlia, em qual dos pais (pai ou me) ocorreu a no disjuno cromossmica? b) Em qual das divises meiticas ocorreu o fenmeno?

9 CONCEITOS Meiose O tipo especial de diviso celular que ocorre nas clulas germinativas e produz gametas contendo o nmero haplide de cromossomos a partir de clulas diplides. Ocorrem duas divises meiticas: meiose I e meiose II. A reduo do nmero ocorre durante a meiose I. No deve ser confundida com mitose. Gameta Clula reprodutiva (ovcito ou espermatozide) com o nmero haplide de cromossomos. Crossing-over ou permuta Troca recproca de segmentos entre cromtides de cromossomos homlogos, uma caracterstica da prtese da primeira diviso meitica. No-disjuno Falha na separao de dois membros de um par de cromossomos durante a meiose I, ou das duas cromtides de um cromossomo durante a meiose II ou mitose, de modo que ambos seguem para uma clula-filha e a outra clula-filha no recebe nenhum. Perda Anafsica Perda de cromossomo durante a anfase devido a no ligao correta dele s fibras do fuso celular. Aneuplide Qualquer nmero de cromossomos que no seja um mltiplo exato do nmero haplide. Alm disso, um indivduo com nmero aneuplide de cromossomos. As formas comuns de aneuploidia no homem so a trissomia (a presena de um cromossomo extra) ou a monossomia (a ausncia de um nico cromossomo). Monossomia Constituio cromossmica na qual um membro de um par de cromossomos est ausente, como na sndrome de Turner 45,X. Trissomia Constituio cromossmica na qual h trs representantes de um cromossomo. Ex: trissomia do cromossomo 21 na sndrome de Down. Eupide Qualquer nmero de cromossomos que seja um mltiplo exato do nmero num gameta haplide (n). A maioria das clulas somticas diplide (2n). Pode haver aberrao cromossmica numrica do tipo triplide (3n) ou tetraplide (4n). Mosaicismo Num indivduo ou em um ou mais tecidos, a condio na qual h duas ou mais linhagens celulares derivadas de um nico zigoto mas diferentes geneticamente por causa de mutao ou no disjuno ps-zigtica. Mosaico Indivduo ou tecido com pelo menos duas linhagens celulares de gentipo ou caritipo diferentes, derivadas de um nico zigoto. No deve ser confundido com quimera.

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ABERRRAES CROMOSSOMICAS NUMRICAS

Bibliografia: ?? Thompson e col., 2002 - Captulos 9 e 10 ?? Jorde e col., 2000. Cap. 2 e 6 PROBLEMA I Uma criana com a seguinte histria clnica foi atendida pelo Servio de Gentica: 3 anos de idade, sexo feminino, deficincia mental e hipotonia. No exame clnico verificaram-se fendas palpebrais oblquas, epicanto, hipertelorismo, orelhas pequenas, ponte nasal baixa, palato ogival, lngua fissurada, mos pequenas e largas com uma nica prega palmar transversa (prega simiesca). A criana o 2 filho de um casal constitudo por uma mulher de 25 anos e um homem com 27 anos de idade. O pediatra que examinou o paciente solicitou o exame cariotpico cujo resultado voc pode saber atravs do pareamento abaixo. Pergunta-se: a) Qual o caritipo da paciente? b) Qual a sndrome correspondente? c) Que mecanismo est envolvido na produo desse caritipo? d) Qual o risco de recorrncia da doena na prole desse casal? e) Qual o risco de recorrncia e a conduta se a me tivesse 42 anos e o pai 43? f) Qual exame seria indicado no caso de uma outra gestao da me da criana?

PROBLEMA II

11 O mdico berarista encaminhou um recm-nascido que apresentava seguintes malformaes: retardo psico-motor, hipertonia, crnio longo, fendas palpebrais pequenas, hipertelorismo, micrognatia, esterno curto, limitao dos movimentos da articulao coxo-femural, calcneo proeminente e cardiopatia congnita. Na histria da paciente consta que o 10 filho vivo de um casal, que a me tem 40 anos e o pai 41 anos de idade; sendo todos os outros irmos normais. Todos os parentes paternos e maternos so normais. Foi solicitado o caritipo da criana, cujo resultado voc pode obter analisando a clula abaixo. Pergunta-se: a) Qual o caritipo da paciente? b) Qual a sndrome correspondente? Qual o desequilbrio gentico? c) Deveria ser indicado o exame de caritipo nos pais? Justifique. d) Qual o prognstico para essa paciente quanto sobrevida e grau de inteligncia?

12 PROBLEMA III O caritipo a seguir foi obtido a partir de clulas de um paciente com as seguintes caractersticas ao exame fsico: fentipo feminino, 29 anos de idade, estatura de 1,40m, peso 40kg, amenorria primria (ausncia de menstruao), genitlia externa infantil, rgos genitais femininos, seios pequenos, pescoo alado, implantao baixa do cabelo. Pergunta-se: a) Qual o diagnstico clnico e cromossmico da paciente? b) Como pode se originar uma clula desse tipo? c) Sabendo-se que o pai do indivduo afetado daltnico e que o gene para daltonismo recessivo e est ligado ao cromossomo X, pergunta-se: no caso de o indivduo afetado ser normal quanto viso cores, qual ter sido o tipo de erro ocorrido e na meiose de qual dos seus progenitores ocorreu? d) Como deve ser a cromatina X desse indivduo?

13 PROBLEMA IV R.S., 30 anos, sexo feminino, gesta 0, para 0, casada com D.S., 32 anos, procurou o Obstetra no dia 10 de abril, pois sua DUM havia sido dia 3 de maro. O diagnstico clnico da gravidez foi confirmado pelo aumento srico de ? HCG. No dia 22 de abril a paciente retornou ao mdico, com queixa de pequeno sangramento genital e este solicitou uma ultra-sonografia plvica, que revelou tero aumentado de tamanho, contendo saco gestacional, porm sem o embrio. O exame foi repetido uma semana mais tarde, no apresentando modificaes, confirmando o diagnstico de abortamento retido com ovo anembrionado. A paciente foi submetida a uma curetagem e o material enviado ao Laboratrio de Gentica para estudo cariotpico. O caritipo encontrado foi 47,XY,+22. Pergunta-se: a) Qual a causa provvel do abortamento? b) Qual a freqncia estimada de aberraes cromossmicas em abortamentos do primeiro trimestre? c) Apenas as aberraes incompatveis com a vida evoluem para abortamento espontneo? d) Qual o risco de recorrncia para perda fetal na prxima gestao do casal?

PROBLEMA V Uma mulher de 34 anos de idade, com dois filhos normais, foi submetida ao exame de rotina utra-sonogrfico de sua terceira gestao. Foram verificadas alteraes ao ultra-som (fenda orofacial e microftalmia) motivo pelo qual foi solicitado o exame citogentico do feto. O exame foi realizado a partir de material obtido por amniocentese tendo sido efetuada a tcnica de FISH em clulas interfsicas (utilizando uma sonda especfica para o cromossomo 13, alm de sonda para o cromossomo 21) (ver figura). Foi realizada ainda a cultura de clulas para obteno do caritipo das clulas metafsicas. O feto era do sexo feminino Pergunta-se: a) Qual deve ser o caritipo e a sndrome correspondente? b) Quais as caractersticas da sndrome? c) Por que foi realizada a tcnica de FISH com sonda do cromossomo 13? d) No caso da mulher apresentar ameaas de abortamento, qual seria a conduta?

Figura. Ncleo interfsico com FISH com sonda especfica para os cromossomos 13 (vermelha) e 21 (verde).

14 ABERRRAES CROMOSSMICAS ESTRUTURAIS Bibliografia: Thompson e col., 2002 - Captulo 9 e Jorde e col., 2000. Captulo 6 1) Esquematize as seguintes aberraes cromossmicas:
?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? Deleo Cromossomo em anel Duplicao Isocromossomo Inverso Translocao Recproca Translocao Robertsoniana (ou fuso cntrica)

2) O que so aberraes cromossmicas equilibradas (ou balanceadas)? Porque os indivduos que possuem aberraes equilibradas apresentam maior risco de infertilidade, abortamento e prole malformada? 3) Em que situaes devem ser solicitados os exames cariotpicos dos pais de um indivduo portador de uma aberrao cromossmica? PROBLEMA I Um endocrinologista encaminhou ao Servio de Gentica Clnica uma paciente com 19 anos de idade, que apresentava sinais tpicos da sndrome de Turner. O mdico geneticista solicitou um exame de caritipo. O resultado deste exame pode ser interpretado pela anlise do caritipo a seguir. Pergunta-se: a) Qual a constituio cariotpica da paciente? b) Como deve ter se originado este caritipo? c) Come deve ser a cromatina X desse indivduo? d) Como se explica que seu fentipo seja de sndrome de Turner? e) Quais so os cariotipos mais frequentemente encontradas na sndrome de Turner?

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16 PROBLEMA II Um recm-nascido com caractersticas da sndrome de Down foi atendido pelo Servio de Gentica Clnica. A criana o produto da terceira gestao de um casal jovem. O primeiro filho uma menina normal. A segunda gestao terminou em abortamento do primeiro trimestre. O mdico solicitou um exame do caritipo do recm-nascido e, aps, os de seus pais. O pai mostrou caritipo normal 46,XY. Pergunta-se: a) Qual o caritipo da criana e de sua me? Analise a figura a seguir para chegar resposta. Escreva os caritipos encontrados de acordo com as normas internacionais. b) Por que foi solicitado o exame de caritipo dos pais c) Por que a me da criana fenotipicamente normal, apesar de ter 45 cromossomos? c) Faa um esquema da meiose materna indicando a morfologia dos cromossomos envolvidos na translocao e os tipos de gametas possveis (ver livro Thompson fig. 9.13). d) Qual o risco de recorrncia da doena nesta famlia? e) Voc acha que deveria ser indicado o diagnstico pr-natal? Justifique a sua resposta.

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PROBLEMA III Um casal jovem teve uma criana com as seguintes malformaes: retardo neuromotor e mental, microcefalia, fendas palpebrais antimongolides, hipertelorismo, pregas epicnticas, micrognatia, orelhas malformadas, palato ogival, choro muito caracterstico. O caritipo da criana encontra-se abaixo. Pergunta-se: a) Qual o caritipo do paciente? b) Qual a sndrome correspondente? c) Por que a criana anormal, apesar de possuir 46 cromossomos? d) Foi realizado o exame do caritipo do casal e estes foram normais. Neste casos, como se originou a aberrao encontrada? e) Qual o risco de recorrncia desta sndrome na prole do casal? (alto ou baixo?) f) Por que foi realizado o exame do caritipo dos pais da criana?

Um outro casal teve uma filha com a mesma sndrome e caritipo da criana acima descrita (monossomia 5p). Neste caso, o estudo citogentico dos pais revelou que o caritipo do pai era normal e o da me era 46,XX,t(5;10)(p13;q25) - ver figura abaixo . Pergunta-se: f) Qual o tipo de aberrao encontrada na me da criana? g) Sabendo-se agora que o cromossomo deletado da criana foi herdado de uma translocao equilibrada presente na me, como deve ser descrito o caritipo da criana que primeiramente foi referido como 46,XX, del (5)(p13)? h) Faa um esquema da meiose materna (considerando os pares cromossmicos envolvidos na translocao) com os possveis gametas formados. i) Qual o risco de recorrncia da sndrome na prole do casal?

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der(5)

10 der(10)

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FISH: Fluorescent In Situ Hybridization

(Hibridao In Situ Fluorescente)

Tipos de sondas: ?? Sondas centromricas ?? Sondas de sequncia nica ?? Sondas para pintura cromossmica

Fale sobre a importncia da tcnica de FISH e o tipo de sonda que poderia ser utilizado nas seguintes situaes: I. Melhor identificao de aberraes cromossmicas: ?? Mulher com disgenesia gonadal e caritipo 45,X/46,X,mar(X ou Y). Este um caritipo em mosaico no qual a linhagem com 46 cromossomos apresenta um cromossomo marcador pequeno no qual no se sabe se originrio do cromossomo X ou Y. ?? Criana com suspeita de duplicao parcial 10q e caritipo 46,XY,add(1)(q36) - isto , presena de material adicional de origem desconhecida na banda q36 do cromossomo 1. ?? Paciente com caritipo normal que apresenta suspeita de sndrome de Miller Dieker (sndrome de microdeleo 17p13.3). II. Estudo em clulas interfsicas: ?? ?? ?? Feto que ao ultra-som apresentava sinais indicativos de trissomia 18. Sexagem de embries pr-implantao (ex. casos de doenas ligadas ao X). Estudos em material de abortamento.

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CURSO DE GENTICA HUMANA CURSO MDICO - 2004

ESTRUTURA E FUNO DOS GENES

Bibliografia: Thompson e col.,2002. Captulo 3 e Captulo 6 Jorde e col., 2000. Captulo 2. 1 - Qual o "dogma central da biologia molecular"? Descreva o esquema abaixo.

transcrio traduo DNA ????????RNA ???????? Cadeia Polipeptdica

?? ?? ??

replicao

DNA

2- Quanto estrutura dos genes, defina: GENE NTRONS EXONS REGIES FLANQUEADORAS: - em 5' ("upstream flanking region"): CAT box (CCAAT) TATA box (ATAAA) ilhas CpG - em 3' ("downstream flanking region"): seqncia AATAAA

3- Qual o tamanho mdio, em pares de base (pb), de um gene? 4- O que so famlias de genes? Exemplifique.

21 5- Verifique o esquema a seguir (extrado do Thompson, 1993) Com relao transcrio: (a) Porque a cadeia 5' - 3' do DNA denominada de "codante" ou sentido? (b) Qual das cadeias do DNA servir como molde para a transcrio do DNA em RNAm? (c) Em que direo o RNAm vai crescendo quando ocorre a transcrio do DNA? Com relao ao processamento do RNAm: (d) O que ocorre com o RNAm ainda no ncleo?

Com relao traduo: (e) Em qual direo o RNAm ser lido? (f) O que so cdons? (g) O que so cdons iniciadores e finalizadores? Quais so eles (vide quadro da pgina seguinte)?

22 QUADRO DO CDIGO GENTICO

OBS: Os cdons so mostrados em termos de RNA mensageiro os quais so complementares aos cdons dos DNAs correspondentes.

6- O que vem a ser mutao gnica? Com que freqncia ocorrem? 7- Exemplifique os seguintes tipos de mutaes gnicas e descreva o que elas determinam: Substituio de nucleotdeos (mutao de ponto): ? mutao com sentido errado (substituio de amino cidos) ? mutao sem sentido (cdons finalizadore prematuros) ? mutao no processamento do RNAm (stios de emenda dos ntrons) Delees e inseres: ? deleo e insero de cdons ( no. de bases envolvidas mltiplo de 3) ?? mutao de deslocamento do quadro de leitura (no de bases envolvidas no mltiplo de 3) Mutao em seqncias promotoras ( CAT e TATA box ).

23 PADRES DE HERANA (I)

Heredograma Tipos de Herana (Autossmica / ligada ao X - Dominante ou Recessiva) Mutao Nova Penetrncia e Expressividade Varivel de genes

Bibliografia: Thompson e col., 2002 - Captulo 5 Jorde e col., 2000 - Captulo 4 e 5 Problema I
Roberto possui Sindrome de Marfan. o primeiro filho de uma irmandade de 5 indivduos. Os 2, 5 irmos so mulheres normais; o 3 irmo um homem normal e o 4 uma mulher tambm afetada. O pai de Roberto afetado pela mesma anomalia e possui 3 irmos; a mais velha normal, o 2 indivduo da irmandade o pai de Roberto, enquanto que o 3 e 4 indivduos so respectivamente homem e mulher portadores da doena. O av paterno de Roberto normal enquanto que a av apresenta a sndrome de Marfan. Essa senhora possui 3 irmos mais jovens normais. A tia mais nova de Roberto teve 2 filhos homens normais e um abortamento espontneo. a) Construa a genealogia de Roberto, indicando as geraes e o nmero de cada indivduo. b) Qual o padro de herana da sndrome de Marfan? Cite os principais critrios utilizados para identific-la. c) Escreva o gentipo de alguns indivduos (afetados e normais) da famlia. d) A av paterna de Roberto, que apresenta a sndrome de Marfan, refere que seus pais eram normais e no havia nenhum caso na famlia. Nesse caso, como deve ter surgido a doena na famlia?

A figura abaixo mostra os smbolos mais comumente utilizados na construo de heredogramas (outros smbolos: Recommendation for Standartized Human Pedigree Nomenclature. American Journal of Human Genetics, 56: 745-752, 1995).

i
homem mulher

i
afetados casamento casamento consangneo

3
d. 35 y SB 30 w female male

3 homens

sexo ignorado falecido aos 35 a.

natimorto

abortos

interrupo gravidez

P
gmeos monozigticos gmeos dizigticos portadora heterozigota

propsito

gravidez

I II
casal infrtil

1 2

1 3 4 Casal com dois filhos, um abortamento e uma gravidez em curso. Geraes indicadas por algarismos romanos; Indivduos por algarismos arbicos. Ex. I-1, II-3

24 Problema II A sndrome de Pendred um tipo de surdez congnita associada a alteraes da tireide sendo que o bcio aparece em geral na segunda infncia. Essa sndrome resulta de mutaes no gene PSD, lcalizado em 7q, o qual codifica uma protena denominada pendrina que tem sido relacionada ao transporte de ons. O tipo de herana seguido est representado nas 2 genealogias abaixo: Pergunta-se: a) Qual o tipo de herana? Justifique. b) Considerando a genealogia B, qual os gentipos do casal III-6 e III-7 e qual prognstico para o prximo filho? c) Qual a chance de IV-3 ser heterozigoto? (Genealogia B).

Genalogia A
Problema III

Genalogia B

A miodistrofia muscular tipo Duchenne uma afeco que, devido a alteraes no gene que codifica a distrofina, provoca uma degenerao progressiva e irreversvel dos msculos. Os primeiros sintomas, geralmente fraqueza na musculatura da cintura plvica, costumam surgir nos cinco primeiros anos de vida levando o afetado morte ao redor da 2 dcada da vida por comprometimento cardaco ou respiratrio. As genealogias abaixo representam duas famlias onde aparece esta afeco. Pergunta-se: a) Qual o tipo de herana? Justifique. b) Quais os gentipos dos indivduos afetados? c) Considerando a genealogia B, quais os gentipos de IV-9 e III-5? d) Considerando a genealogia B, qual o provvel gentipo de III-7?
GENEALOGIA: A B

2 2 5 2 2 3 4

25

Problema IV A genealogia abaixo refere-se a uma famlia onde ocorre raquitismo resistente vitamina D. Os afetados apresentam defeitos esquelticos e nveis baixos de fosfato no sangue. Os smbolos escuros indicam hipofosfatemia e raquitismo resistente Vitamina D e os smbolos pontilhados apenas hipofosfatemia. Pergunta-se: a) Qual o tipo de herana seguido? Justifique. b) Quais os gentipos dos indivduos I-1, I-2, I I-2, II-3, III-3, III-5, e III-10? c) Tem-se verificado que essa doena mais grave e menos varivel em sua expresso nos homens do que nas mulheres. Como voc explicaria tal fenmeno?

I II III IV
2 3

26 Problema V A osteognese imperfeita caracteriza-se por fragilidade ssea, esclertica azul e otosclerose. Muitos dos afetados manifestam apenas esclertica azul, sendo normais quanto inteligncia e s outras caractersticas da sndrome. O nanismo e as malformaes esquelticas aparecem nos indivduos que apresentam fragilidade ssea. A genealogias A e B abaixo referem-se a famlias onde h vrios indivduos afetados. Os smbolos pontilhados indicam a manifestao de apenas esclertica azul. Os smbolos escuros indicam que o indivduo possui fragilidade ssea, esclertica azul e otosclerose.. Pergunta-se: a) Considerando a genealogia A, qual o tipo de herana nessas famlias? b) Como se explica o fato de alguns indivduos apresentarem as trs caractersticas da sndrome e outros apenas esclertica azul? c) Os indivduos II-5 e III-9 da genealogia B so sadios apesar de possurem um ascendente e um descendente afetado. Como se explica tal fenmeno?

I II
4 2

Genealogia A

III

2 6 2

Genealogia B

27

PADRES DE HERANA (II) Herana Codominante Herana limitada ao sexo e Herana influenciada pelo sexo Herana Multifatorial Heterogeneidade Gentica Bibliografia: Thompson e col., 2002 - Captulos 5 e 15 Jorde e col., 2000 - Captulo 4, 5 e 12 Problema I Quantos alelos determinam o sistema sanguneo ABO? Qual o tipo de herana e a relao entre os alelos? Conceitue: - Multialelismo - Herana Codominante Problema II Conceitue: - Herana limitada ao sexo - Herana influenciada pelo sexo Problema III Um casal saudvel e no consangneo teve, como seu primeiro filho, uma criana do sexo feminino com anencefalia. O casal deseja saber o seu prognstico para uma futura gestao. A anencefalia um defeito do tubo neural (DTN), de herana multifatorial, em que se verifica ausncia de pele, crnio, membranas de revestimento, prosencfalo e mesencfalo. O risco de ocorrncia para a populao brasileira de cerca de 0,3%. J o risco de recorrncia de 3 a 6% em parentes em primeiro grau. O risco de recorrncia aps 2 indivduos afetados, em primeiro grau de parentesco, da ordem de 10%. Observa-se um nmero maior de mulheres afetadas. Pergunta-se: a) Qual o risco de recorrncia para um futuro filho deste casal? b) O que so riscos empricos, como so obtidos e qual a sua utilizao no estudo de caracteres qualitativos? c) O que efeito de limiar? d) Conceitue: - Carter polignico - Herana multifatorial

Problema IV
Comente os seguintes critrios para se identificar uma Herana Multifatorial: (1) O risco de recorrncia maior se mais de um membro da famlia for afetado. (2) Se a expresso da doena no probando mais grave, o risco de recorrncia maior. (3) O risco de recorrncia maior se o probando do sexo menos comumente afetado. (4) O risco de recorrncia para a doena diminui em geral rapidamente nos parentes mais distantes entre si. (5) Se a prevalncia da doena em uma populao f, o risco para a prole e irmos dos probandos de aproximadamente ? f.

28

Problema V A distrofia muscular de Duchenne (DMD) uma doena associada a uma deteriorao muscular progressiva. com incio no 1o ou 2a ano de vida, havendo confinamento cadeira de rodas por volta dos 12 anos de idade e improbabilidade de sobrevivncia aps os 20 anos de idade devido insuficincia respiratria ou cardaca. A distrofia muscular de Becker (BMD) semelhante DMD mas produz um fentipo mais leve podendo os pacientes deambularem aps os 16 anos de idade, havendo uma variabilidade significativa da progresso da doena. O gene de ambas as doenas, de herana recessiva ligada ao X, foram mapeados em Xp21. Hoje sabe-se que ambas as doenas so decorrentes de mutaes em um mesmo gene extremamente grande (de cerca de 2.300 kb) que codifica uma protena denominada distrofina a qual auxilia a manuteno da integridade da fibra muscular. Pergunta-se: a) Como voc explicaria que a DMD e a BMD so decorrentes de mutaes em um mesmo gene? b) Que tipos de mutao voc poderia supor que estariam ocorrendo em cada um desses tipos de distrofia muscular? c) O que vem a ser heterogeneidade gentica? Esse seria um caso de heterogeneidade gentica? No caso afirmativo, seria uma heterogeneidade allica ou no-allica? Justifique. Problema IV De cada 1.000 crianas, uma nasce com surdez. Cerca de 60% dos casos tem causa gentica. Entre os casos genticos, 75% apresenta herana autossmica recessiva, 10-15% herana autossmica dominante e os demais herana ligada ao X, herana mitocondrial ou cromossmica. A grande maioria dos casos de surdez segue o padro de herana apresentado nas genealogias A e B. O casamento entre surdos freqente, da o aparecimento do heredograma do tipo C. Pergunta-se: a) Levando em conta os heredogramas A e B, qual o padro de herana da surdez? Justifique a sua resposta. b) Considerando o padro de herana que voc determinou para os heredogramas A e B, como se explica o aparecimento de indivduos normais na gerao IV da genealogia C? c) Qual o nome deste fenmeno?

Genealogia A Genealogia B

2 Genealogia C

29

AS FERRAMENTAS DA GENTICA MOLECULAR: DIAGNSTICO DAS DOENAS GENTICAS PELO DO DNA Bibliografia: Thompson e col.,2002. Captulo 4 e Captulo 6 (pg. 78-82). Jorde e col., 1999. Captulo 3 Conceitos importantes: ?? Enzimas de restrio ?? Hibridao molecular ?? Sondas ?? Southern blotting ?? DNA fingerprinting ?? PCR ?? Sequenciamento de DNA ?? Northern blotting ?? Western blotting ?? Estudos de ligao para o diagnstico de doenas genticas ao nvel molecular ?? Polimorfismos de DNA: - RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) Polimorfismo de tamanho dos fragmentos de restrio - VNTR (Variable Number of Tandem Repeats) Nmero varivel de repeties em tandem

LIGAO (linkage): Genes demostram ligao, i.e., esto ligados, quando esto em um mesmo cromossomo muito prximo um do outro e portanto, apresentam tendncia a serem transmitidos juntos ao longo da meiose. Os mtodos de mapeamento gentico baseiam-se na segregao observada de cromossomos homlogos (e portanto dos alelos que eles possuem) na meiose em estudos de famlias. A distncia gentica entre genes estimada atravs da frequncia de recombinao entre eles. O principal valor da anlise de ligao na gentica humana e mdica auxiliar na identificao, mapeamento e diagnstico de genes responsveis por doenas hereditrias. Quando diferentes mutaes podem causar uma determinada sndrome e no h mutaes preferenciais (situao na qual eu poderia usar sondas alelo especficas - ASO), posso pesquisar a presena de uma mutao, indiretamente, atravs da avaliao de um marcador ligado ao gene em questo.

30

PROBLEMA I Exemplo de estudo de ligao utilizando VNTR no diagnstico de doenas genticas:

Aa

aa

(1-3)

(2-2)

(3-2)

Aa

(2-2) (1-2)

aa

aa

(1-2) (3-2) (3-2) (3-2)

P P

aa

Aa

aa

Aa

aa

(3-2) (2-2) (3-2) (2-2) (2-2)

Aa

aa

Aa

aa

(3-2) (2-2) (3-2)

Aa

aa

alelo 1 alelo 2 alelo 3

Pergunta-se: a) Considerando-se que o indivduo I-1 afetado e apresenta os alelos 1 - 3 do VNTR, a qual dos marcadores (alelo 1 ou alelo 3) o gene mutado deve estar ligado? b) Atravs do estudo de ligao, podemos prever o fentipos de III-5? Justifique. c) No caso de III-5, em que situao poderia haver um erro na previso do fentipo? d) Podemos prever o fentipo de III-8? Justifique. e) Com base nas respostas anteriores, discuta as limitaes dos estudos de ligao.

31

PROBLEMA II Atualmente, vrios estudos de ligao utilizam polimorfismos de DNA para o diagnstico de doenas genticas. Na figura abaixo, verifica-se o heredograma de uma famlia com hemofilia A e o resultado do estudo de polimorfismos de DNA para o diagnstico pr-natal da ltima gestao do casal. Utilizou-se um marcador de DNA ligado ao gene do fator VIII da coagulao (a uma distncia de recombinao de 1 a 5 %). Observe a figura abaixo e responda: a) Nos meninos afetados II-2 e II-3, qual dos alelos (A ou B) est ligado ao gene mutante? b) O pai tem um alelo distinto (C ) no lcus do marcador ligado. Isso compatvel com os marcadores da famlia? c) Quais os gentipos da me e da filha quanto aos alelos do marcador de DNA? E quanto ao gene da doena? d) Qual o diagnstico do feto quanto hemofilia A? e) Qual a chance de erro quanto a esse diagnstico? E como poderia este ser diminudo?

32

PROBLEMA III A grande maioria das mutaes que geram ? talassemia so mutaes de ponto. No entanto, quando o DNA de indivduos com ? -talassemia oriundos da ndia quebrado com a enzima de restrio Bgl II e hibridado com a sonda do gene ? -globina, encontram-se fragmentos de 4,6 kb, enquanto que em indivduos normais os fragmentos so de 5,2 kb. Analise e interprete os dados da figura abaixo. Pergunta-se: a) Qual a base molecular desse tipo de ? -talassemia? b) Que tipos de fragmentos so esperados no Southern-blot de indivduos heterozigotos? c) Faa um esquema de um Southern blot de um casal heterozigoto para essa mutao (deleo) e que tenha um filho afetado, um filho heterozigoto, e um filho homozigoto para o alelo normal.

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PROBLEMA IV A anemia falciforme ou anemia siclmica um tipo de anemia cujas hemcias dos afetados adquirem in vitro o aspecto de foice, quando mantidas em baixa tenso de oxignio. Este aspecto tambm aparece in vivo quando os pacientes esto sujeitos a fatores precipitantes de hipoxemia, desidratao, acidose e vaso-constrio. Os indivduos heterozigotos, apesar de no apresentarem manifestaes clnicas, tem hemcias que se tornam falciformes quando submetidas a baixas tenses de oxignio. Este estado denominado de estigma ou trao siclmico. Os afetados apresentam apenas hemoglobina S. Nos heterozigotos, isto , nos indivduos com estigma siclmico, encontramse hemoglobina A e hemoglobina S. A anemia falciforme uma hemoglobinopatia que ilustra o tipo mais simples de mutao gnica, isto , a substituio de uma nica base ou mutao de ponto. A mutao responsvel pela anemia siclmica sempre a mesma e no varia de indivduo para indivduo. Observe a figura abaixo e responda: a) Qual a diferena entre as hemoglobinas A e S? b) Qual a diferena entre os genes A S ? Qual deve ser a sequncia de reconhecimento da enzima MstII? (Lembre-se que a seqncia de restrio uma sequncia palindrmica, i.e., pode ser lida igualmente de 5? 3 como de 3? 5). d) Por que o fragmento de restrio (RFLP) produzido por MstII no cromossomo que possui a mutao S diferente do que o encontrado no cromossomo que possui o alelo normal? e) O casal I-1 e I-2 , que possui um filho com anemia falciforme, realizou um exame diagnstico pr-natal atravs de tcnicas moleculares para saber o risco de recorrncia da anemia falciforme de sua quarta gestao. Qual o resultado obtido neste exame?
codons: 5 6 7

Pro Glu Glu ...CCT GAG GAG... Pro Val Glu ...CCT GTG GAG...

?
S
kb

1,35 kb

S A
AS SS AS AA AS

1,35 1,15

1,15 kb
sonda

Figura 3 - Heredograma de uma famlia com anemia falciforme e o resultado do Southern mostrando o efeito da enzima de restrio MstII sobre o gene normal e sobre o gene da anemia falciforme.

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PROBLEMA V A fibrose cstica (FC) do pncreas uma doena de herana autossmica recessiva que resulta de um transporte defeituoso de ons nas clulas excrinas dos pulmes, pncreas e glndulas sudorparas resultando em infeco pulmonar crnica e insuficincia pancretica. O gene da FC localiza-se em 7q31. u gene grande com cerca de 250kb e 27 exons que codifica um m mRNA de 6,5kb que transcrito em uma protena de 1.480 aminocidos denominada CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Condutance Regulator). A CFTR importante como um canal de cloro essencial no transporte ativo de ons atravs da membrana das clulas epiteliais. Mais de 500 diferentes mutaes podem acarretar a doena. No entanto, na maioria das populaes, mais da metade dos afetados so homozigotos para a mutao ? F508. A mutao ? F508 resulta em uma deleo de 3pb a qual resulta na perda de uma fenilalanina na posio 508 da sequncia de aminocidos da protena e est associada com fentipos mais graves da doena.Em populaes de descendncia da Europa Setentrional, 70% dos indivduos com FC so homozigotos para essa mutao. No Brasil essa taxa de 47%. Pergunta-se: a) Qual a primeira abordagem que deve ser realizada para o diagnstico da doena ao nvel molecular? b) No caso de no ser detectada a mutao ? F508 atravs dessa abordagem, o que voc sugeriria para o diagnstico? Comente as seguintes possibilidades: ?? PCR com deteco de alelos especficos para as mutaes mais freqentes
OBS: H o CF(4)m-PCR kit comercial (Johnson & Johnson Clinicas Diagnostics, Amersham, UK) que testa as 4 mutaes mais frequentes na U.K.

?? ASO - Oligonucleotdeos alelo-especficos (hibridao de ASOs aos dot-blots dos produtos de PCR) (ver fig 6.22 livro Thompson) ?? Algumas mutaes podem ser detectadas pela digesto com enzimas de restrio dos produtos do PCR.

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PADRES DE HERANA POUCO USUAIS:

"Imprinting", Dissomia uniparental, Expanso de trinucleotdeos Sndrome dos genes contguos (microdelees) e Herana Mitocondrial

Bibliografia: Thompson e col.,2002 - Cap. 5 (pg. 62-67) Jorde e col., 2000. Cap. 5 e 6 PROBLEMA I A sndrome de Prader-Willi caracterizada por hipotonia na infncia, obesidade com hiperfagia, hipogonadismo hipogonadotrfico, mos e ps pequenos, fcies caracterstico e retardo mental. A maioria dos casos espordica e, atravs de citogentica de alta-resoluo (cromossomos prometafsicos) observa-se que cerca de 60% dos pacientes apresentam uma microdeleo em 15(q11-q13) (ver prancha 3.24) ou um rearranjo cromossmico envolvendo essas bandas. Numa menor porcentagem de pacientes, a deleo s pode ser detectada atravs de anlises moleculares e, curiosamente, o cromossomo 15 deletado sempre de origem paterna. Nos casos em que no eram detectadas delees nem no nvel molecular, verificou-se que havia uma dissomia uniparental materna no havendo contribuio do cromossomo 15 paterno. Pergunta-se: a) A sndrome de Prader-Willi considerada uma sndrome de genes contguos. O que vem a ser essas sndromes? b) O que os dados apresentados no problema sugerem quanto presena do cromossomo paterno (ou pelo menos da parte crtica 15q11-q13) no fentipo da sndrome de Prader-Willi? c) Na sndrome de Angelman (ataxia + fcies caracterstico + convulso), cerca de 50% dos pacientes apresentam deleo 15(q11-q13) semelhante observada na s. de Prader-Willi. Curiosamente, a deleo envolve consistentemente o cromossomo de origem materna. O que voc poderia supor que estaria resultando na sndrome de Angelman? PROBLEMA II Uma das sndromes que determina retardo mental ligado ao X demonstra uma caracterstica citogentica peculiar: algumas clulas podem apresentar uma fragilidade cromossmica no cromossomo X na banda Xq27.3 resultando em quebras cromossmicas (sndrome do stio frgil do X). O padro de herana desse RM que o recessivo ligado ao X apresenta tambm caractersticas pouco usuais para esse padro de herana conforme a seguir:

80%

35%

100%

55%

80%

35%

% de homens e mulheres afetados entre os portadores do gene portadores assintomticos Pergunta-se: a) O que estaria diferente na transmisso dessa doena para se encaixar num padro de herana recessiva ligada ao X? b) Qual a explicao atual para elucidar esse fenmeno? c) Podemos considerar que nessa doena h "imprinting genmico"? Justifique sua resposta.

36 PROBLEMA III A doena de Huntington (coria de Huntington) uma doena neurodegenerativa fatal de herana autossmica dominante caracterizada por movimentos involuntrios e demncia progressiva. O aparecimento da doena se d entre os 30-50 anos de idade sendo 38 anos a idade mdia de aparecimento. Observe o heredograma abaixo que representa uma famlia com a doena (mostrando a idade dos indivduos). Pergunta-se: a) Porque o incio tardio da doena dificulta a interpretao do heredograma? b) Quais os gentipos de I-1, II-1, II-3 e III-3 e III-4? c) Atualmente j possvel, atravs de estudos moleculares, a identificao dos indivduos portadores do gene. Que implicaes ticas poderiam surgir a partir desses exames? d) Apesar de essa doena ter aparecimento tardio, aproximadamente 10% dos casos so caracterizados pelo estabelecimento juvenil e mais grave. interessante o fato que aproximadamente 90% desses casos de aparecimento precoce (com crianas afetadas) vem de famlias nas quais os pais e no as mes so os progenitores afetados. Voc teria alguma sugesto para explicar esse fenmeno? e) O que vem a ser antecipao? Qual sua correlao com a expanso ou repetio de trinucleotdeos que se observa em famlias com Coria de Huntighton?

d.61 y

d.35 y

65 y

d.29 y 29 y 28 y

50 y

47 y

45 y

40 y

35 y

34 y

29 y

27 y

25 y

27 y 25 y

25 y 22 y

10 y

9y

11 y

7y

5y

6y

3y

1y

PROBLEMA IV O heredograma abaixo representa uma famlia com neuropatia ptica de Leber de herana mitocondrial com penetrncia incompleta. Os indivduos afetados demonstram uma perda bilateral da viso geralmente acompanhada por alteraes vasculares da retina. Pergunta-se: a) Como se caracteriza esse tipo de herana? b) Porque a herana mitocondrial tambm conhecida como herana citoplasmtica? c) Qual o risco de II-3 transmitir a doena?

I II III IV
n n

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OS GENES NAS FAMLIAS E NAS POPULAES:

CONSANGUINIDADE EQUILBRIO DE HARDY-WEINBERG AVERIGUAO

Bibliografia:

Thompson e col, 2002 - Cap 7 e Cap. 19 Jorde e col., 2000. Cap. 4

A consanginidade entre os indivduos pode ser medida e expressa de acordo com os coeficientes abaixo: Coeficiente de consanginidade (r): Proporo de todos os genes que foram herdados de um ancestral comum; probabilidade de um consangneo de um heterozigoto ser tambm heterozigoto, tendo ambos os parentes recebido o mesmo gene recessivo de um ancestral comum. Coeficiente de endocruzamento (f): probabilidade de um indivduo ter dois genes idnticos quanto sua origem; ou de um filho de consangneos ser homozigoto por terem os seus alelos idnticos se originado de um mesmo, presente em um ancestral comum. Problema I Um casal de primos em 2 grau deseja casar-se e procura um Servio de Aconselhamento Gentico para informar-se sobre os riscos que a consanginidade pode acarretar para sua futura prole. Pergunta-se: a) qual o coeficiente de consanginidade e o de endocruzamento para primos em 2 grau? b) como fornecer os possveis riscos para o casal? Problema II A sndrome de Hurler uma das mucopolissacaridoses mais graves, de herana autossmica recessiva. Esta sndrome muito rara, com prevalncia de 1:40.000 indivduos. A genealogia abaixo refere-se a uma famlia com um afetado. Pergunta-se: a) Qual o parentesco e o coeficiente de consanginidade entre III-3 e III-4? b) Qual o gentipo dos pais da criana afetada? c) Qual a probabilidade desse casal vir a ter outro filho afetado? d) Quais os possveis gentipos dos irmo da criana afetada? e) Em que situao os irmos sadios da criana afetada correm risco alto de terem filhos afetados?

I II III IV n n

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Em 1908, um matemtico ingls, Georgi Hardy e um mdico alemo, Wilhelm Weinberg, formularam independentemente hiptese que, em sua homenagem, passou a ser conhecida como lei de Hardy-Weinberg: "Em uma populao panmtica (populao em que os casamentos so casuais), em equilbrio, no apresentando nem mutaes, nem seleo, com um nmero elevado de indivduos, a freqncia dos genes e dos gentipos permanece absolutamente constante d uma gerao para e outra. Considerando que p a freqncia do alelo dominante e que q a freqncia do alelo recessivo, teremos:

p+q=1

p2 + 2pq + q2 = 1

p2 : 2pq : q2 (AA : Aa : aa)

Assim, se a frequncia de um gene determinante de uma afeco for 1/200 (0,005, ou 0,5%), a frequncia para o alelo normal de 199/200, e a frequncia da doena na populao 1/200 X 1/200 (aa = p2). PROBLEMA III A incidncia de anemia falciforme, de herana autossmica recessiva, entre as crianas de uma populao negride foi estimada em 0,16% (=16/10.000). a) Qual a freqncia do gene da doena ? b) Qual a % de indivduos heterozigotos nessa populao ? c) Se o pai de uma criana afetada se casar de novo, qual o risco de produzir um filho afetado ? d) Em pases cuja populao apresenta um grande contingente de negrides, seria interessante a deteco de portadores do gene ?. Justifique. PROBLEMA IV Na populao de Porto Alegre, a freqncia de homens com hemofilia A (recessiva, ligada ao X) foi estimada em 1:10.000 (Roisemberg, 1968). Pergunta-se: Qual a freqncia de mulheres heterozigotas e hemoflicas na populao de Porto Alegre?

PROBLEMA V Um indivduo cujo irmo portador de albinismo dirige-se a um Servio de Aconselhamento Gentico para saber o risco de ter filhos ablinos, nas seguintes situaes: a) No caso de se casar com uma prima em 1o grau. b) Em se casando com uma mulher normal no aparentada e sem histria de albinismo na famlia. OBS: Sabe-se que a freqncia de albinismo na populao de 1:20.000

39

40 PROBLEMA VI Um professor pediu a seus 129 alunos, todos do sexo masculino, que determinassem a proporo sexual humana, somando o nmero de homens e separadamente o nmero de mulheres existentes nas irmandades a que eles prprios pertenciam. Os dados esto exemplificados a seguir. Irmos ALUNOS __________________________ Sexo masc. Sexo fem. _______________________________________________________ Alberto 1 1 Andr 1 0 Carlos 3 2 Daniel 2 1 Roberto 2 0 Samuel 1 2 Valente 1 0 _______________________________________________________ TOTAL 228 95 _______________________________________________________ TOTAL GERAL 323

Pergunta-se: a) Qual a proporo sexual observada? b) Esta proporo est de acordo com a proporo esperada? Por qu? Faa a comparao pelo teste do qui-quadrado (? 2). Lembre-se: ? 2 = ? (O E) 2 E Onde: ? = Somatria O = valor Observado E = valor Esperado c) Por que a proporo observada diferiu da esperada? O tipo de averiguao usado foi adequado? d) O que deve ser feito para se atingir a proporo esperada?

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GENTICA DA DIFERENCIAO SEXUAL

Bibliografia: Thompson e col., 2002. Cap.10 Jorde e col., 2000. Cap.6

QUESTO I Quais as etapas da diferenciao sexual? Utilize o esquema a seguir.

ESQUEMA DA DETERMINAO E DIFERENCIAO SEXUAL

Sexo Gentico: Sexo Gonadal: Sexo Fenotpico: ?

Desenvolvimento Ductos de Wolff

46,XY ? Testculos ? ?
Clulas de Leydig Clulas de Sertoli

46,XX ? Ovrios ?
Regresso Ductos Wolff Desenv. Ductos Muller

?
testosterona

?
hormnio anti-Mulleriano

?
Regresso dos Ductos de Muller

di-hidro testosterona

?
Desenvolvimento dos Genitais Externos Masculinos

?
Desenvolvimento dos Genitais Externos Femininos

QUESTO II Como foi reconhecido o gene SRY como sendo o fator determinante testicular?

42

ERROS NA DIFERENCIAO SEXUAL

(I) ERROS NA DETERMINAO DO SEXO GENTICO (CROMOSSMICO):

?? Turner (45,X; 45,X/46,XX; 46,X,i(Xq), delees de Xp e variantes) ?? Disgenesia ovariana com deleo de Xq ?? S.Klinefelter 47,XXY e variantes ?? Disgenesia Gonadal Mista 45,X/46,XY e variantes ?? Aberraes estruturais de Y ?? Hermafroditismo Verdadeiro com aberrao cromossmica (46,XX/46,XY)
(II) ERROS NA DETERMINAO DO SEXO GONADAL:

?? Homens 46,XX ?? Disgenesia Ovariana 46,XY ?? Hermafroditismo Verdadeiro (maioria 46,XX)

(III) ERROS NA DETERMINAO DO SEXO FENOTPICO:

?? Pseudo Hermafroditismo Masculino (46,XY; testculos) ? ? Bloqueio da sntese de andrgenos (ex: deficincia da 17-hidroxilase) ? ? Insensibilidade Andrognica (defeito no receptor andrognico) ? ? Forma Completa (S. Feminizao Testicular) ? ? Forma Parcial ? ? Deficincia da 5-? redutase ? ? Deficincia do Hormnio Anti-Mulleriano (S. Persistncia dos Ductos de Muller) ? ?PHM associado a sndromes dismrficas ? ?PHM indeterminado ? ? ? ? ?? Pseudo Hermafroditismo Feminino (46,XX; ovrios) ? Hiperplasia adrenal congnita virilizante(ex: deficincia da 21-hidroxilase) ?Produo ou ingesto materna de substncia virilizantes (ex: luteoma) ?Associado a malformaes urinrias e intestinais ?Idioptica

43 QUESTO III Voc teria alguma hiptese para explicar alguns raros casos de pacientes do sexo masculino que possuem caritipo 46,XX? QUESTO IV Na disgenesia gonadal pura 46,XY, as pacientes tem sexo fenotpico feminino, trato genital feminino e gnada disgentica ("em fita"). Nestas mulheres, a falta de hormnios femininos leva falta de desenvolvimento puberal normal e amenorria. Pode haver casos de disgenesia gonadal pura XY espordicos e casos familiares (de herana recessiva ligada ao X ou autossmica dominante limitada ao sexo masculino). Voc teria alguma hiptese para explicar o fato dessas mulheres serem 46,XY? QUESTO V O que caracteriza um hermafrodita verdadeiro, um pseudo-hermafrodita masculino e um pseudo-hermafrodita feminino? QUESTO VI Uma senhora procurou um Servio de Aconselhamento Gentico preocupada com o fato se sua filha de 18 anos nunca haver menstruado. Como a moa estava noiva, a famlia estava interessada em saber as possibilidades que a mesma teria de vir a ter filhos. Ao exame clnico, a paciente apresentava genitlia externa feminina, vagina com desenvolvimento incompleto (em fundo cego), mamas desenvolvidas, raros pelos pubianos e axilares,. Ao exame radiolgico verificou-se ausncia de tero e tuba uterina e presena de testculos no canal inguinal. Os nveis sricos de andrgenos eram normais (apesar de no haver virilizao). Foi solicitado o exame do caritipo da paciente o qual revelou um caritipo 46,XY. Pergunta-se: a) Qual a hiptese diagnstica? b) Como voc explicaria a ocorrncia desse caritipo masculino em uma mulher? Qual deve ser o defeito molecular envolvido nessa sndrome? c) A me da paciente possuia 2 irmos normais e 4 irms das quais 2 nunca haviam menstruado. Que tipo de herana pode ser postulado para essa doena lembrando que o gene do receptor andrognico est localizado em Xq ? d) Qual foi a resposta do geneticista com referncia fertilidade da paciente? QUESTO VII A deficincia da 5-alfa-redutase um tipo de PHM que afeta somente crianas do sexo masculino. Como calculado o risco de recorrncia dessa sndrome de herana autossmica recessiva? QUESTO VIII A hiperplasia adrenal congnita (HAC) na maioria das vezes causada por um gene de herana autossmica recessiva localizado no cromossomo 6. O defeito molecular mais frequentemente encontado a deficincia de 21-hidroxilase que causa comprometimento da biosntese do cortisol pela supra-renal. A deficincia de cortisol resulta em um aumento na produo de ACTH (hormnio adreno corticotrfico) pela hipfise acarretando uma hiperplasia da supra-renal. Como consequncia, haver uma superproduo de esterides com atividade andrognica. Em fetos do sexo feminino acarretar virilizao da genitlia externa. Pergunta-se: a) Qual o tipo de pseudo-hermafroditismo encontrado em uma criana com HAC e caritipo 46,XX? b) Como podero ser os genitais externos dessa criana? c) Qual o gentipo de uma criana afetada quanto ao gene HAC e qual o risco de recorrncia na prole de seus pais?

44

GENTICA DO CNCER
Bibliografia: Thompson e col., 2002. - Cap.16 Jorde e col., 2000. Cap. 11 01. O linfoma de Burkitt um tumor das clulas B e a alterao cromossmica mais frequente (80% dos casos) uma translocao entre os braos longos dos cromossomos 8 e 14. O proto-oncogene c-myc, situado originalmente no cromossomo 8, deslocado, nessa translocao, para um novo stio no cromossomo 14, prximo ao gene da cadeia pesada da imunoglobina. Nas clulas tumorais, a proteina produzida pelo oncogene c-myc igual proteina das clulas normais, no entanto sua expresso est aumentada. a) Discuta a relao entre a t(8 ;14) e o linfoma de Burkitt. b) Cite outros mecanismos envolvidos na ativao de proto-oncogenes. Cite exemplos e discuta-os.

02. O retinoblastoma um tumor ocular de origem embrionria, cuja incidncia de 1:20.000 nascimentos. As genealogias abaixo representam famlias com tal afeco. Observe os heredogramas. Quais as informaes que eles fornecem ?

45 . Na genealogia B da figura anterior, verificou-se que o indivduo III-1, portador de retinoblastoma bilateral, apresentava deficincia mental e fcies sindrmico. O estudo citognetico constitucional desse paciente revelou uma deleo que envolve a banda q14 do cromossomo 13(del 13q14) em um dos cromossomos do par 13 (Figura 2a). Aps a retirada do tumor, verificou-se, nas clulas tumorais que os dois cromossomos homlogos possuiam a deleo 13q14 (Figura 2b). Verificou-se tambm, nas clulas tumorais, presena de vrias cpias adicionais do brao curto do cromossomo 6 (amplificao). Pergunta-se: a) Qual o significado dessas observaes? b) As alteraes citogenticas nos permitem sugerir que tipo de gene(s) se localiza em 13q14 e 6p ? c) O gene RB1, que est localizado na banda 13q14 produz uma protena de 110 quilodaltons (p110). Essa protena est ausente nas clulas tumorais. Como podemos relacionar essa observao com os achados acima ? d) Qual a relao e as diferenas observadas entre genes supressores de tumor e protooncogenes ?

Figura 2 - Cromossomos 13 do paciente III-3 da genealogia D. a) par 13 presente nas clulas constitucionais b) par 13 presente nas clulas tumorais.

46 03. A leucemia mielide crnica uma doena clonal da medula ssea caracterizada pela produo excessiva de granulcitos. Aps a fase inicial, relativamente benigna denominada fase crnica, com durao de aproximadamente 3 anos, a doena entra em uma fase mais maligna denominada fase acelerada e eventualmente entra na fase terminal denominada crise blstica. Essa fase caracteriza-se por um aumento do nmero de clulas imaturas na medula ssea e sangue perifrico, anemia progressiva, trambocitopenia, algumas vezes acmulo extramedular de clulas blsticas e marcada reduo da resposta terapia citosttica. A fase crnica da doena caracteriza-se pela presena do cromossomo nomeado de Filadelfia (Ph1), um cromossomo acrocntrico menor que um cromossomo do grupo G.Esse cromossomo resultado de uma translocao entre os braos longos dos cromossomos 9 e 22 t(9;22)(q34;q11) (ver Figura).

Essa aberrao cromossmica a nica presente na maior parte da fase crnica da doena. Quando ocorre progresso da doena, 75 a 80% apresentam outras aberraes cromossmicas associadas a t(9 ;22). Essas alteraes no so casuais, sendo comum a observao de um cromossomo Ph1 extra, trissomia do cromossomo 8 e a presena de um isocromossomo de brao longo do cromossomo 17 na fase blastica da doena. Na t(9 ;22) ocorre o deslocamento do proto-oncogene ABL, de 9q34 para 22q11 e vice versa. A regio de quebra no cromossomo 22 conhecida como BCR ( break point cluster region). Pergunta-se : a) Qual a relao entre as observaes citogenticas, a gnese e progresso do tumor ? b) Qual a funo do gene hbrido ? c) Quais as abordagens laboratoriais possveis nas investigaes em LMC ?