Variacin de las condiciones de sacarificacin y fermentacin simultanea para mejorar los rendimientos de etanol lignocelulsico.

Tesis de pregrado para optar al titulo profesional de bioingeniero Tutor: Dra. Carolina Parra Tesista: Jonathan Rojas Bioingeniera - Facultad de Cs. Biolgicas - Universidad de Concepcin

Concepcin 20010

Introduccin

Etanol

Hidratacin del etileno Fermentacin de azucares

10% Utilizacin industrial

Etanol

17% bebidas alcohlicas 73% Aditivo de gasolinas

Produccin

Utilizacin

Produccin de etanol por fermentacin

Glucosa Fructosa Sacarosa

Azucarada Amilcea

Inulina Almidn

LIGNOCELULSICA

Fermentacin de materia prima lignocelulsica

M A D E R A C O M P O S I C I N

Celulosa (32 - 54 %) Hemicelulosa (11 37 %)

Lignina (17 - 32 %)
Extraibles (1 - 5%) Ceniza (0 - 2 %)

Celulosa

Monmeros de Glucosa Principal constituyente de la madera

Polisacrido Lineal

CELULOSA

Qu es el etanol lignocelulsico?
Biocombustible de segunda generacin

Se puede obtener a partir de diferentes materias primas

Se produce por fermentacin de glucosa proveniente de celulosa

Etapas para la Produccin de etanol Lignocelulsico

Pretratamiento

Destilacin

Produccin de Bioetanol

Hidrlisis enzimtica

Fermentacin anaerbica

Pretratamiento Organosolv

Utiliza

mezcla de agua y solvente orgnico (Etanol). Hidroliza en forma efectiva la hemicelulosa y la lignina de la madera Permite recuperar una mayor cantidad de lignina.

Hidrlisis enzimtica

Se utiliza para romper los polmeros de celulosa de la madera Libera la glucosa como monmero para ser utilizada como sustrato para la fermentacin.

Fermentacin
Metabolismo de Produccin de etanol.
Se utiliza Principalmente

Saccharomyces cervisiae.
Se realiza a 40 C y en condicin de Hipoxia.

Se obtienen rendimientos de entre 70-80% de produccin de etanol

Fermentacin y Sacarificacin Simultanea

Se realiza la hidrlisis de la celulosa por accin de las enzimas en conjunto con la fermentacin de la glucosa liberada.

Permite aumentar los rendimientos de obtencin de etanol lignocelulsico al evitar la saturacin por producto de las enzimas.

Fermentacin y Sacarificacin Simultanea

Ventajas
Mayores rendimientos Menores costos de operacin

Sacarificacin Y Fermentacin Simultanea SFS

Desventajas
Diferencia en el rango de temperaturas optimas para la hidrlisis enzimtica y la fermentacin.

Fermentacin y Sacarificacin Simultanea

10% p/v material pretratado y medio de fermentacin

% consistencia de material pretratado

Condiciones de SFS

Carga Enzimtica

Celulasas (20 FPU) -Glucosidasa (40 UI)

Concentracin de S. Cerevisae

6 g/L S. Cerevisae

Hiptesis

La variacin de las condiciones de reaccin, en procesos SFS de materiales lignocelulsicos pretratados obtenidos mediante proceso Organolv, resultara fundamental para la obtencin de altos rendimientos de etanol

Objetivo General

Determinar las condiciones ptimas de concentraciones de materia prima, enzimas celulolticas y de Saccharomyces cervisiae IR2-9a en un proceso SFS para tres diferentes tipos de material pretratado.

Objetivos Especficos
Caracterizacin qumica de madera de Eucalyptus glbulus y los

materiales pretratados obtenidos mediante pretratamiento Organosolv

Determinar las actividades enzimticas del preparado enzimtico a utilizar

Realizar cinticas enzimticas durante el proceso de SFS

Optimizar los parmetros de concentracin de material pretratado, enzimas celulolticas e inoculo de S. cervisiae IR2-T9.

Determinar los rendimientos de etanol durante el proceso de SFS

Metodologa

Caracterizacin qumica:

Hidrlisis con H2SO4 72% p/p: - Determinacin de lignina y carbohidratos. - La determinacin de carbohidratos, se realiz por HPLC. - La determinacin de lignina se realiz por gravimetra

Pretratamientos Organosolv
Reactor Parr 1 gal. Solvente: Etanol - Agua. Relacin madera:licor 1:6 p/v. 200g de madera (Base Seca) en 1200 g de Solvente.
Temperatura C % Etanol v/v Tiempo de residencia (min)

Pretramientos

1
2 3

200
200 200

75
50 30

75
45 75

Actividad Enzimtica

Determinacin de la Actividad endonucleasa segn el mtodo de Ghoose (Ghoose, 1986)

Dilucin Enzimtica

[] Glucosa 1 mg/0.5 mL

[] Glucosa 2 mg/0.5 mL

[] Glucosa 3 mg/0.5 mL

[] Glucosa 4 mg/0.5 mL

0,00375 0,005

1 1

1,65 1,65

2,5 2,5

3,35 3,35

0,0075

1,65

2,5

3,35

Sacarificacin material pretratado y fermentacin control

Condiciones de Sacarificacin

Fermentacin Control

Todas las Experiencias se realizaron bajo condiciones similares utilizando 15 mL de medio de fermentacin en matraces de 125 mL

SFS
Las Condiciones de SFS se obtuvieron de combinar las condiciones de sacarificacin con las condiciones de las fermentaciones control
Pretratamiento

Material Pretratado

10% Consistencia

6 g/L S. Cerevisae
Cargas enzimticas

15% Consistencia

12 g/L S. Cerevisae

10 g/L S. Cerevisae

10 FPU/20 UI 20 FPU/40 UI 30 FPU/60 UI

Resultados

Pretratamientos
Factor H
20000
15000 10000 5000 0 Pretratamiento 50% 45 min Pretratamiento 30% 75 min Pretratamiento 70% 75 min 9624 14256 14508

Rendimientos
52 50 48 46 49,5 50,66

46,36

44 Pretratamiento 50% 45 min Pretratamiento 30% 75 min Pretratamiento 70% 75 min

Caracterizacin Qumica
90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 85,32 69,68 79,86 % Glu % Xil % Arabinosa 10,35 8,77 0 Pretratamiento 70% 75 min % Lignina 3,306 3,01 0,465

%Glucosa
23,67 7,69 3,05 0,026 Pretratamiento 50% 45 min 1,17 0 Pretratamiento 30% 75 min 23,687 %Xil-Man-Gal 47,914 % Lignina Insoluble % Lignina Soluble % Extrable

16,908

%Ceniza

Totales

96,08 %

94,52 %

98,98 %

Total

95,29 %

Caracterizacin qumica materiales pretratados

Caracterizacin qumica E. Globulus

Actividad Enzimtica
Determinacion de Actividad enzimatica

1E+8 1E+7 Dilucion de la enzima

1E+6
1E+5 1E+4 1E+3 1E+2

1E+1
1E+0 0 0,5 1 1,5 2 2,5

[ ] Glucosa mg/0,5ml

Sacarificacin
Comparacion de los rendimientos
80,000 [ ] Glucosa g/L 60,000 40,000 20,000 0,000 24 48 Tiempo [Horas] Carga enzimtica 10 FPU/20 UI [ ] Glucosa g/L 24 horas 36,182 46,568 50,618 41,918 56,122 63,202 [ ] Glucosa g/L 48 horas 38,197 49,502 52,802 53,157 73,362 73,375 [ ] Glucosa g/L72 horas 41,832 55,110 57,583 55,688 76,458 75,815 72 32,8 54,6 42,4 43,9 49,4 59,3 41,5 44,8 57,3 58,0 57,3 61,9 43,5

67,5 59,7 64,6 59,2

49,0

15% P/V Carga 10/20 10% P/V Carga 10/20 15% P/V Carga 20/40 10% P/V Carga 20/40 15% P/V carga 30/60

10% P/V carga 30/60

10 % Consistencia

20 FPU/40 UI 30 FPU/60 UI 10 FPU/20 UI

15% Consistencia

20 FPU/40 UI 30 FPU/60 UI

Fermentacin Control
Fermentacin Control con 6 g/L de S. Cerevisae
80
[ ] Etanol g/L

60
40 20 0 -20 0 10 20 30 40 Tiempo [Horas] 50 60 70 80

Etanol
Glucosa Etanol Glucosa Etanol

Glucosa

% Rendimientos Fermentacin Control con 12 g/L de S. Cerevisae

Rendimiento Etanol 74
72 70 68 66 64 72,4 70,6 69,8 72,6 71,471,3 70,5 70,3 69,6

70,2 68,5 67,4

69,5 68,869,1

70,070,0
67,0 % Rendimiento 6 g/L

% Rendimiento 10 g/L
% Rendimiento 12 g/L

12

24

36
Tiempo [Horas]

48

60

72

SFS 10% de consistencia PT1

Rendimientos de etanol a travs de las Horas
80

% Rendimiento en etanol de pulpas PT1

PT1 10/20 6 g/L

70 60 50 40 PT1 20/40 6 g/L

PT1 30/60 6 g/L

PT1 10/20 12 g/L

30
20

PT1 20/40 12 g/L

10
0

PT1 30/60 12 g/L

10

20

30

40
Tiempo (h)

50

60

70

80

SFS 10% de consistencia PT1

Etanol carga pretratamiento enzimtica levadura inoculo % Glucosa [ ] glucosa g/L mximo g/L H g/L H g/L H g/L Etanol Real 24 Real 48 Real 72 mximo Etanol Etanol Rendimiento

10

Pt1 200 70 75
FPU/20UI

6 g/L

79,86

79,86

40,84

15,72

20,35

23,62

57,84

20
6 g/L FPU/40UI 79,86 79,86 40,84 26,44 30,52 25,74 74,72

30
6 g/L FPU/60UI 79,86 79,86 40,84 29,97 31,15 31,40 76,87

10
Pt1 FPU/20UI 12 g/L 79,86 79,86 40,84 17,37 22,42 27,62 67,63

20
12 g/L FPU/40UI 79,86 79,86 40,84 27,22 28,47 28,07 69,71

30
12 g/L FPU/60UI 79,86 79,86 40,84 30,40 32,50 32,70 80,06

La concentracin mxima de etanol se alcanza a la 72 horas y obtiene un valor de 32,70 g/l mientras que el rendimiento alcanzado bajo esa condicin es de 80,06 %

SFS 10% de consistencia PT2

Rendimientos de etanol a travs de las Horas
90 % Rendimiento en etanol de pulpas PT2 80 70 PT2 10/20 6 g/L

PT2 20/40 6 g/L

60
50 40 30 20 10 0 PT2 20/40 12 g/L PT2 30/60 6 g/L

PT2 10/20 12 g/L

PT2 30/60 12 g/L

10

20

30

40
Tiempo (h)

50

60

70

80

SFS 10% de consistencia PT2

Etanol carga pretratamiento enzimtica levadura inoculo % Glucosa [ ] glucosa g/L mximo g/L H g/L H g/L H g/L Etanol Real 24 Real 48 Real 72 mximo Etanol Etanol Rendimiento

10 Pt2 200 50 45 FPU/20UI 6 g/L 85,32 85,32 43,63 30,10 28,70 28,55 68,98

20 6 g/L FPU/40UI 85,32 85,32 43,63 33,80 34,81 27,62 79,78

30
6 g/L FPU/60UI 85,32 85,32 43,63 30,25 28,90 27,47 69,32

10 Pt2 FPU/20UI 12 g/L 85,32 85,32 43,63 28,85 25,32 22,32 66,11

20

12 g/L
FPU/40UI

85,32

85,32

43,63

30,32

22,62

23,47

69,49

30 12 g/L FPU/60UI 85,32 85,32 43,63 30,45 22,50 25,35 69,78

La concentracin mxima de etanol se alcanza a la 48 horas y obtiene un valor de 34,81 g/l mientras que el rendimiento alcanzado bajo esa condicin es de 79,78 %

SFS 10% de consistencia PT3

Rendimientos de etanol a travs de las Horas
100

% Rendimiento en etanol de pulpas PT3

90 80 70 60 50 40 30 20

PT3 10/20 6 g/L

PT3 20/40 6 g/L

PT3 30/60 6 g/L

PT3 10/20 12 g/L

PT3 20/40 12 g/L

10 0
0 10 20 30 40 50 60 70 80

PT3 30/60 12 g/L

Tiempo (h)

SFS 10% de consistencia PT3

Etanol carga pretratamiento enzimtica levadura inoculo % Glucosa [ ] glucosa g/L mximo g/L Etanol Real 24 Real 48 Real 72 mximo Etanol Etanol Rendimiento

H g/L

H g/L

H g/L

10 Pt3 200 30 75 FPU/20UI 20 6 g/L 69,68 69,68 35,63 29,95 19,15 25,20 84,04

6 g/L
FPU/40UI 30 6 g/L FPU/60UI 10 Pt3 FPU/20UI 12 g/L

69,68

69,68

35,63

30,40

29,00

23,20

85,31

69,68

69,68

35,63

28,10

18,35

23,67

78,85

69,68

69,68

35,63

23,50

14,30

18,67

65,94

20
12 g/L FPU/40UI 30 12 g/L FPU/60UI 69,68 69,68 35,63 28,62 17,90 25,47 80,32 69,68 69,68 35,63 29,60 19,80 27,80 83,06

La concentracin mxima de etanol se alcanza a las 24 horas y obtiene un valor de 30,40 g/l mientras que el rendimiento alcanzado bajo esa condicin es de 85,31 %

SFS 15% consistencia PT1

Rendimientos de etanol a travs de las Horas
% Rendimiento en etanol de pulpas PT2 70 PT1 10/20 6 g/L 60 50 PT1 20/40 6 g/L

40
30

PT1 30/60 6 g/L

PT1 10/20 12 g/L

20
10

PT1 20/40 12 g/L

PT1 30/60 12 g/L

0 0 10 20 30 40 Tiempo (h) 50 60 70 80

SFS 15% consistencia

Etanol
carga pretratamiento enzimtica levadura g/L H g/L H g/L H g/L inoculo % Glucosa [ ] glucosa g/L mximo Real 24 Real 48 Real 72 mximo

Etanol

Etanol

Etanol
Rendimiento

Pt1 200 70 75

10 FPU/20UI

6 g/L

79,86

119,79

61,26

28,38

35,20

34,70

57,46

20 FPU/40UI

6 g/L

79,86

119,79

61,26

32,93

36,18

35,10

59,05

30 FPU/60UI

6 g/L

79,86

119,79

61,26

31,58

37,45

34,13

61,13

Pt1

10 FPU/20UI

12 g/L

79,86

119,79

61,26

29,25

33,75

29,75

55,09

20 FPU/40UI

12 g/L

79,86

119,79

61,26

34,60

37,45

35,05

61,13

30 FPU/60UI

12 g/L

79,86

119,79

61,26

31,50

34,08

32,85

55,62

La concentracin mxima de etanol se alcanza a las 48 horas y obtiene un valor de 37,45 g/l mientras que el rendimiento alcanzado bajo esa condicin es de 61,13 %

SFS 15% consistencia PT2

Rendimientos de etanol a travs de las Horas
80 Rendimiento en etanol de pulpas PT1 PT2 10/20 6 g/L 70

60
50 40 30 20 10

PT2 20/40 6 g/L

PT2 30/60 6 g/L

PT2 10/20 12 g/L

PT2 20/40 12 g/L

PT2 30/60 12 g/L

0
0 10 20 30 40 Horas 50 60 70 80

SFS 15% consistencia PT2

Etanol carga pretratamiento enzimtica levadura inoculo % Glucosa [ ] glucosa g/L mximo g/L H g/L 10 Pt2 200 50 45 6 g/L 85,32 85,32 43,63 30,10 28,70 28,55 68,98 H g/L H g/L Etanol Real 24 Real 48 Real 72 mximo Etanol Etanol Rendimiento

FPU/20UI
20 6 g/L FPU/40UI 30 6 g/L FPU/60UI 10 Pt2 FPU/20UI 20 12 g/L FPU/40UI 30 12 g/L FPU/60UI 85,32 85,32 43,63 30,45 22,50 25,35 69,78 85,32 85,32 43,63 30,32 22,62 23,47 69,49 12 g/L 85,32 85,32 43,63 28,85 25,32 22,32 66,11 85,32 85,32 43,63 30,25 28,90 27,47 69,32 85,32 85,32 43,63 33,80 34,81 27,62 79,78

La concentracin mxima de etanol se alcanza a las 24 horas y obtiene un valor de 30,45 g/l mientras que el rendimiento alcanzado bajo esa condicin es de 69,78 %

SFS 15% consistencia PT3

Rendimientos de etanol a travs de las Horas
% Rendimiento en etanol de pulpas PT3 80 70 60 PT3 10/20 6 g/L

PT3 20/40 6 g/L

50
PT3 30/60 6 g/L 40 30 20 10 PT3 30/60 12 g/L PT3 10/20 12 g/L

PT3 20/40 12 g/L

0
0 10 20 30 40 50 60 70 80

Tiempo (h)

SFS 15% consistencia PT3

Etanol carga pretratamiento enzimtica levadura g/L 10 Pt3 200 30 75 FPU/20UI 6 g/L 69,68 104,52 53,46 34,03 32,95 31,00 63,65 H g/L H g/L H g/L inoculo % Glucosa [ ] glucosa g/L mximo Real 24 Real 48 Real 72 mximo Etanol Etanol Etanol Rendimiento

20 6 g/L FPU/40UI 69,68 104,52 53,46 36,28 35,88 36,30 67,91

30 6 g/L 69,68 104,52 53,46 32,50 32,95 31,18 61,64

FPU/60UI

10
Pt3 FPU/20UI 12 g/L 69,68 104,52 53,46 32,28 26,90 20,93 60,38

20 12 g/L FPU/40UI 69,68 104,52 53,46 37,45 33,60 34,93 70,06

30 12 g/L FPU/60UI 69,68 104,52 53,46 39,98 39,90 39,98 74,78

La concentracin mxima de etanol se alcanza a las 24 horas y obtiene un valor de 39,98 g/l mientras que el rendimiento alcanzado bajo esa condicin es de 74.78 %

Conclusiones

Conclusiones
I.- El material obtenido en el proceso de pretratamiento Organosolv bajo condiciones de: 200 C, 50 % v/v etanol y 45 min, presenta el mayor contenido de glucosa y por ende la mayor concentracin de etanol. II.- Al aumentar la concentracin de Saccharomyces cerevisiae del tipo IR2T9 en el proceso SFS se alcanzan los mximos rendimientos en un menor perodo de tiempo independiente de la carga enzimtica y del pretratamiento utilizado.
III.- En la relacin a la obtencin de etanol mediante SFS, no existen grandes diferencias entre aumentar la carga enzimtica desde 20 FPU de celulasa y 40 UI de -glucosidasa a 30 FPU y 60 UI de cellulasa y -glucosidasa respectivamente. IV.- Para consistencias de material pretratado cercanas al 10 % en la SFS de se recomienda un tiempo de reaccin no superior a las 24 horas ya que la mayora de los rendimientos mximos se alcanzan durante este perodo de tiempo. Mientras que para consistencias ms altas se recomienda un perodo no superior a las 48 horas.

V.- En el proceso SFS se recomienda utilizar una consistencia de material pretratado de 15 % p/v ya que se obtiene una mayor concentracin de etanol.

Variacin de las condiciones de sacarificacin y fermentacin simultanea para mejorar los rendimientos de etanol lignocelulsico.
Tesis de pregrado para optar al titulo profesional de bioingeniero Tutor: Dra. Carolina Parra Tesista: Jonathan Rojas Bioingeniera - Facultad de Cs. Biolgicas - Universidad de Concepcin

Concepcin 20010