UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE TABASCO DIVISIN DE QUMICA: AREA TECNOLOGIA AMBIENTAL

NOMBRE DEL PROYECTO BIOFERTILIZANTE A BASE DE EXCREMENTO BOVINO ASIGNATURA BIOTECNOLOGA AMBIENTAL FACILITADOR: ING. JOS FERNANDO CORDOVA GMEZ ELABORADO POR: ESPINOZA ROMERO DAVID GONZALO MIRANDA VIDAL JOS FRANCISCO SOLIS AVALOS LUIS ERNESTO ALVARADO LOPEZ FLAVIO PEREZ MENDEZ DALIA

PARRILLA, CENTRO, TABASCO, AGOSTO DE 2012

NDICE
Lista de figuras Lista de fotografas i ii

Introduccin Captulo I marco metodolgico 1.1 Antecedentes del proyecto 1.2 Justificacin 1.3 Objeto general y especfico 1.3.1 Objetivo general 1.3.2 Objetivos especficos 1.4 Alcance del proyecto 1.5 Impacto del proyecto 1.6 Metodologa para el desarrollo del proyecto 1.6.1 Trabajo de investigacin documental 1.6.1.1 Recopilacin de informacin 1.6.2 Trabajo de campo 1.6.2.1 Preparacin de la mezcla para el crecimiento de la bacteria fermentadora Bacillus Subtilis 1.6.2.2 Adiccin de nutrientes 1.6.2.3 Filtracin de Bio-Fertilizante 1.6.3 Trabajo de Laboratorio 1.6.3.1 Identificacin de la Bacteria Bacillus Subtilis

1 3 3 6 7 7 7 8 8 9 9 9 9

10 10 10 11 11

1.6.3.2 Monitoreo de parmetros de PH y Temperatura 1.6.3.3 Evaluacin del funcionamiento del Biofertilizante 1.7 Cronograma de Actividades II Marco Terico 2.1 Biofertilizante 2.2 Componentes de un Biofertilizante 2.2.1 Leche o suero de vaca 2.2.1.1 Funcin de la Leche en el Biofertilizante 2.2.2 Melaza o jugo de Caa 2.2.2.1 Funcin de la Melaza o jugo de caa en el Biofertilizante 2.2.3 Ceniza 2.2.3.1 Funcin de la Ceniza en el Biofertilizante 2.2.4 Excremento 2.2.4.1 Funcin del Excremento en el Biofertilizante 2.2.5 Agua sin tratar no contaminada (De pozo profundo) 2.2.5.1 Funcin del Agua en el Biofertilizante 2.3 Utilidad de los Biofertilizantes 2.4 Funcionamiento de los Biofertilizantes 2.5 Verificacin de la calidad de los Biofertilizantes 2.6 Aplicacin de los Biofertilizantes en cultivos y suelo 2.7 Gnero Bacillus 2.7.1 Bacillus Subtillis 2.8 Medio de Cultivo 21

12 13 15 16 16 16 16 17 17 17 18 18 18 19 19 20 20 20 21

22 23 23

2.8.1 Tipos de Medios de Cultivo 2.9 Frijol 2.9.1 Frijol Comn (Phaseolus vulgaris L.) 2.9.1.1 Adaptacin en clima y suelo III MARCO APLICATIVO 3.1 Trabajo de Campo 3.1.1 Preparacin de la mezcla para el crecimiento de la bacteria fermentadora Bacillus Subtillis. 3.1.2 Adicin de nutrientes 3.1.3 Filtracin del Biofertilizante 3.2 Trabajo de Laboratorio. 3.2.1 Identificacin de la Bacteria Bacillus Subtillis 3.2.2 Monitoreo de parmetros de PH y Temperatura 3.2.3 Evaluacin del funcionamiento del Biofertilizante 3.3 Anlisis e interpretacin de resultados. Conclusin Recomendaciones Anexos Bibliografa

23 26 27 27 28 28

28 29 29 30 30 33 34 35 37 38 39 40

LISTA DE FIGURAS

Figura 1. Estructura de la metodologa propuesta14

LISTA DE FOTOGRAFAS

Foto 1. Agregacin de ingredientes y Mezclado26 Foto 2. Adicin de nutrientes.27 Foto 3. Filtrado del biofertilizante..27 Foto 4. Mezcla del agar soya triptona con agua destilada...28 Foto 5. Disolucin del agar de soya triptona..28 Foto 6. Matraz sellado con el tapn elaborado a base de algodn y papel estraza29 Foto 7. Esterilizacin de matraces29 Foto 8. Segregacin de la muestra del Biofertilizante...29 Foto 9. Monitoreo de pH del Biofertilizante.30 Foto 10. Monitoreo de temperatura del Biofertilizante..30 Foto 11. Medicin de longitud y ancho de la hoja de frijol comn..31 Foto 12. Medicin de longitud del tallo de la planta del frijol comn..31 Foto 13. Clculo de los datos por medio de la tcnica deT-student...32

ii

INTRODUCCIN
Los biofertilizantes como biotecnologa ambiental ofrecen una nueva forma de disminuir la contaminacin en los suelos, los cuales son daados por el uso excesivo de fertilizantes qumicos, los cuales son utilizados para mejorar la produccin del cultivo.

Los biofertilizantes o abonos lquidos fermentados (ALF) son el producto que se origina a partir de la fermentacin de materiales orgnicos. Popularmente se cree que los abonos lquidos fermentados contienen sustancias que favorecen al crecimiento vegetal a la vez que contribuyen a mejorar la vida microbiana del suelo. (Galindo et al. 2007).

Los fertilizantes biolgicos, con base en bacterias y hongos benficos tienen las siguientes funciones principales: Fijadores de nitrgeno del medio ambiente para la alimentacin de la planta, protectores de la plantas ante microorganismos patgenos del suelo y estimulan el crecimiento del sistema radicular de la planta, mejorando y regenerado el Suelo (www.biofabrica.com.mx).

Con el uso de los biofertilizantes se aspira a mejorar la productividad agrcola y disminuir los costos de produccin, al mismo tiempo que se pretende reducir la degradacin de los sistemas agrcolas, causado por el uso de agroqumicos y por las prcticas agrcolas que causan la erosin del suelo. Asegurando as la vida productiva de las parcelas.

En el ao 2007 Ingenieros Qumicos de

Colombia demostraron

que la bacteria Bacillus Subtilis

proveniente del estircol bovino, la cual es el primordial microorganismos que se encarga de digerir, fermentar y colocar los elementos nutritivos que se encuentran en un Bio-fertilizante a base de estircol bovino (Restrepo, 2007).

La bacteria Bacillus Subtillis es un factor importante en la fabricacin de biofertilizantes, evitando enfermedades, ayudando al crecimiento de los cultivos y controlando plagas que puedan afectar a las plantas.

Bacillus subtilis es una bacteria Gram positiva, Catalasa-positiva, aerobio facultativo1 comnmente encontrada en el suelo. Miembro del Gnero Bacillus, B. subtilis tiene la habilidad para formar una

resistente endospora protectora, que permite al organismo tolerar condiciones ambientalmente. (www.bacillus8.blogspot.mx) Es importante mencionar que este documento est conformado por tres captulos; los cuales estn organizados de la siguiente manera:

Captulo I, Marco Metodolgico, en el cual se presenta las directrices para la elaboracin del trabajo, los antecedentes, los objetivos, la justificacin, el impacto, el alcance, y la metodologa que se desarrollo para cumplir los objetivos establecidos al inicio de este captulo.

En el captulo II, Marco Terico, se conforma el apoyo bibliogrfico de este proyecto. Ah se encuentra toda la herramienta bibliogrfica que respalda a este trabajo de investigacin, teora relacionada con el proyecto como: que es un Biofertilizante, sus componentes, la bacteria que interviene en la fermentacin del Biofertilizante, la manera de como identificar la presencia de la bacteria, as como informacin de la planta que se utilizar como muestra para la evaluacin del Biofertilizante, etc.

El captulo III Marco Aplicativo. Aqu se describen los pasos expuestos en la metodologa para la elaboracin y evaluacin del Biofertilizante, as como una conclusin en donde se exponen los resultados obtenidos en el marco aplicativo en base a los objetivos expuestos en el marco metodolgico, y las recomendaciones en las que se describen sugerencias para la optimizacin de estudios futuros relacionados al presente.

Por ltimo, se presenta las referencias bibliogrficas en donde se presenta un listado bibliogrfico donde se consulto toda la informacin necesaria para sustentar este trabajo tericamente. As como tambin, se presentan los anexos en donde se incluyen material relevante del proyecto para mayor claridad y profundidad de la investigacin.

CAPTULO I MARCO METODOLOGICO

1.1 ANTECEDENTES DEL PROYECTO
Se conoce que desde la antigedad es necesario el uso de los fertilizantes orgnicos para mantener y mejorar la disponibilidad de nutrimientos en el suelo y obtener mayores rendimientos en el cultivo de las cosechas (Trinidad, 2006).

Estos conocimientos fueron adquiridos de manera emprica en los tiempos primitivos, desarrollados y descritos en la poca clsica (Grecia y Roma). En el ao 1800 en Europa se recogieron y desarrollaron muchas de las experiencias de fertilizacin que aparecan en la literatura romana. Pero a pesar de todos los esfuerzos, las cosechas permanecan bajas. La prdida total de las cosechas causaba frecuentemente empobrecimientos masivos y crisis de hambre.

Despus de la primera guerra mundial el abono, experimenta un impulso considerable en Europa y pronto ocurre lo mismo en otras muchas regiones del mundo. Las dcadas de los 20 y 30 son en cierto sentido la gran poca de aprendizaje del abono. Se analiza y comprueba la eficacia de diferentes abonos en muchos cultivos, sobre diversos suelos e incluso en relacin con el clima. (Fink, 1998)

En la segunda guerra mundial empresas inglesas y alemanas desarrollaron los primeros fertilizantes qumicos, habiendo contado con el apoyo de empresas qumicas, y petroleras norteamericanas, as como la colaboracin de las compaas qumicas suizas y sus banqueros. (www.qcentro.org)

El uso excesivo de estos fertilizantes qumicos junto a la quema de los rastrojos, mala rotacin de cultivos, uso inadecuado de las pendientes ha trado consigo la acidificacin de estos suelos, as como aumento del contenido de sales, a la vez que han disminuido los niveles de materia orgnica. Ante esta situacin disminuye drsticamente la microflora del suelo, haciendo difcil la concrecin de los ciclos de los principales elementos en el suelo, as como las asociaciones beneficiosas planta-microorganismo.

Este deterioro de las propiedades fsicas y qumicas del suelo, conjuntamente con la disminucin de la riqueza de la microflora han posibilitado la disminucin de la diversidad biolgica tanto de plantas cultivadas como las no cultivadas de la zona. Muchos cultivos que antes eran tradicionales de la zona ahora son solo recuerdo de los ms viejos. Algunas especies tradicionales, e incluso endmicas estn casi desaparecidas como el bano carbonero y algunas especies de orqudeas por tan solo citar dos ejemplos.

La aplicacin de biofertilizantes a partir de Hongos de Micorrizas Arbusculares en agroecosistemas degradados como el Valle de San Andrs ha de conducir a una disminucin significativa de los niveles de fertilizantes qumicos aplicados en los diferentes cultivos, lo cual redundar en la disminucin de los costos de produccin de los mismos, a la vez que traer efectos beneficiosos sobre el ecosistema local al disminuir los procesos degradativos relacionados con la acidificacin y salinizacin, y disminuir la contaminacin de las aguas. (Toledo et al. 2010).

El uso indiscriminado de agroqumicos, en particular de los fertilizantes, como base de la produccin agrcola, ha resultado altamente costoso, ineficiente, depredador y contaminante del medio ambiente.

El uso y abuso de los fertilizantes qumicos, ha significado deterioro de la capacidad productiva de los suelos agrcolas, la contaminacin de mantos freticos y aguas superficiales, adems de la atmsfera y mares.

Hay que destacar que el insumo ms caro de la produccin agrcola en general, son los fertilizantes, que cubren entre el 30 y 35% de los costos totales, con una tendencia creciente en el ltimo periodo. Sin embargo, ste es el insumo ms desperdiciado, ya que su nivel de aprovechamiento es mximo del 40%; es decir, de cada 100 kilos que se aplica al suelo, la planta aprovecha 40 kilos, el 60% restante se destina a la contaminacin.

Por lo anterior, a nivel internacional se ha iniciado una bsqueda de alternativas para la produccin agrcola, que sean econmicas, productivas y ecolgicamente viables y deseables. Y es aqu donde se inscriben los Biofertilizantes.

La Universidad Nacional Autnoma de Mxico (UNAM), cuenta con el Centro de Ciencia Genmicas (Anteriormente, Centro de Investigacin Sobre Fijacin de Nitrgeno), que tiene ms de 30 aos trabajando con bacterias fijadoras de nitrgeno: Azospirillum brasilense y Rhizobium etli, siendo pionera en estos trabajos de investigacin, y cuenta con un amplio reconocimiento a nivel mundial.

Los trabajos realizados por la UNAM han incluido evaluaciones en campo respecto a su uso agronmico en la nutricin vegetal.

En el ao de 1999 y 2000, la Secretara de Agricultura, Ganadera, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentacin (SAGARPA), estableci un convenio con la UNAM para difundir el uso de los biofertilizantes en base a estas bacterias. En los dos aos se difundi el uso de estos productos en una superficie cercana a los dos millones de hectreas, en diversas regiones y cultivos. De manera conjunta, la UNAM y el Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias (INIFAP), le dieron seguimiento a una muestra de esta superficie para evaluar los resultados, siendo su impacto bastante significativo.

Con el cambio de gobierno, a finales del ao 2000, desapareci el programa de difusin de los biofertilizantes, y estos productos tambin desaparecieron, ya que no entraron al mercado, siendo su produccin exclusivamente para el programa oficial.

A finales del 2003, Biofabrica Siglo XXI, establece un convenio con la UNAM para adquirir la licencia tecnolgica para el uso de las bacterias (Azospirillum b. y Rhizobium e.), para la elaboracin y comercializacin de biofertilizantes.

Una vez firmado el convenio con la UNAM, Biofabrica establece una serie de parcelas de validacin en diferentes cultivos y regiones; asimismo, se llevaron a cabo trabajos de investigacin aplicada para contar con ms elementos sobre el impacto de estos microorganismos para su uso agronmica. (Morales, 2011).

Actualmente en el estado de Tabasco no existe proyecto realizado o en curso con respecto a la elaboracin de biofertilizantes a base de componentes orgnicos, por lo tanto podemos decir que con la realizacin de este proyecto se contribuira como pioneros en la implementacin de la metodologa para realizacin de Biofertilizantes y comprobar su funcionamiento y evaluacin con respecto a su desarrollo en las condiciones climatolgicas y caractersticas del suelo del estado de Tabasco.

1.2 JUSTIFICACIN
Los biofertilizantes como metodologa biotecnolgica ambiental son una alternativa que permiten en gran medida disminuir los impactos ambientales generados al suelo por el uso de fertilizantes qumicos, el cual utiliza residuos orgnicos para su elaboracin, Reduciendo as la contaminacin por estos residuos, el uso de fertilizantes qumicos y la inversin en el cuidado de los cultivos, De tal manera que los

agricultores mejoren en la produccin de sus cultivos, con una baja inversin econmica y la conservacin de los nutrientes en el suelo.

El proyecto tiene como premisa la elaboracin de un Biofertilizante a base de excremento bovino ya que esta representa numerosos beneficios ambientales, econmicos y sociales para nuestro pas y particular para nuestro estado ya que es importante recalcar que en

aunque no existen datos de

elaboracin de Biofertilizantes a base de ingredientes orgnicos en el Estado de Tabasco resulta aun ms relevante la ejecucin del presente proyecto, siendo este el vinculo que formar parte de los primeros antecedentes en la historia del Estado sobre el estudio, experimentacin, desarrollo y aplicacin de esta novedosa Biotecnologa que de ser llevada a gran escala ser de gran utilidad principalmente para contribuir a reducir la demanda de los Fertilizantes qumicos que ocasionan un dao severo a los suelos de la entidad. Aunado a esto resulta atractivo mencionar los beneficios que otorgar el proyecto en los siguientes estratos: social, econmico y ambiental.

Beneficio social: la elaboracin de un Biofertilizante a base de excremento bovino en particular para la poblacin del Estado de Tabasco que actualmente es de 2 238 603 habitantes, correspondientes al 2.0% del total del pas, resulta benfico por que ampliar el conocimiento y la cultura ambiental en la sociedad sobre todo en el uso responsable de una nueva tecnologa considerablemente menos contaminante que la utilizada para los fertilizantes qumicos comunes; En cierta manera la poblacin mas beneficiada podra resultar ser los agricultores y en general la gente dedicada al trabajo del campo, ya que pueden obtener un recurso que es necesario utilizar en sus actividades y para mayor aporte, el obtenerlo con residuos propios de sus actividades.

Beneficio econmico: Elaborar un biofertilizante a base de excremento bovino en el Estado de Tabasco contribuir en el sector agrcola ya que en comparacin con la produccin convencional de fertilizantes qumicos resulta considerable el gasto en mano de obra y recursos. Bsicamente beneficiara al sector agrcola de la regin al adquirir un fertilizante Orgnico de igual eficiencia a los qumicos comercializados y a un bajo costo con respecto a los materiales necesarios.

Ambiental: Los Biofertilizantes aseguran que los suelos cultivados permanecern frtiles por cientos de aos, aumentan la fauna bacteriana en el suelo, mejoran la cantidad de Materia Orgnica y caractersticas del suelo, disponibles para las plantas que lo requieren para su desarrollo, y aunado a la contribucin de disminuir las concentraciones de contaminantes qumicos presentes en los suelos del Estado de Tabasco causada por el uso de fertilizantes qumicos comunes, debido a que su elaboracin requiere elementos orgnicos renovables.

Por ltimo cabe mencionar que este proyecto aportar conocimientos slidos a la comunidad estudiantil de Ingeniera en Tecnologa Ambiental interesados en desarrollar una tcnica o metodologa para la produccin de un Biofertilizante a base de excremento bovino siendo til tambin como gua de apoyo o referencia para futuros proyectos similares.

1.3 Objetivo general y especfico 1.3.1 Objetivo general

Elaborar un Bio-Fertilizante a partir de estircol bovino, para comprobar su funcionamiento en plantas de Frijol Comn (Phaseolus vulgaris), en la Universidad Tecnolgica de Tabasco.

1.3.2 Objetivos especficos

Preparar la mezcla para el crecimiento de la bacteria fermentadora Bacillus Subtilis. Identificar la bacteria Bacillus Subtillis durante la etapa de fermentacin. Monitorear las propiedades fsicas de la mezcla. (pH y temperatura). Evaluar el funcionamiento del biofertilizante mediante la aplicacin foliar a plantas de frijol

comn (Phaseolus vulgaris).

1.4 Alcance del proyecto

A continuacin se presentan los aspectos de costo, tiempo y caractersticas que el proyecto contempla.

Tiempo: Del 20 de Mayo al 17 de agosto de 2012 (13 semanas).

Costo: El material que se utilizara ser proporcionado por los alumnos y algunos sern proporcionados por el laboratorio de microbiologa de la Universidad Tecnolgica de Tabasco, el costo total del proyecto que incluye la compra de materiales y reactivos en general, el cual ascendi a un valor de: $ 3305.00 M/N financiado por los interesados, mismos gastos que se encuentran reflejados en la tabla de gastos en materiales e ingredientes (Ver tabla en anexos)

Caractersticas: Las actividades que el proyecto contempla son actividades de campo y de laboratorio principalmente.

1.5 Impacto del proyecto

Ante la necesidad de erradicar el conocimiento emprico acerca de los abonos orgnicos y establecer una metodologa biotecnolgica ambiental para la elaboracin de un Bio-fertilizante, el proyecto tendr como impacto inmediato el conocimiento sobre las ventajas que puede ocasionar el uso de un Biofertilizante elaborado a base de estircol bovino en cultivos perennes (frutales) o de temporada (maz y frijol). De igual manera se pretende observar si es viable adoptar esta metodologa como alternativa para la disminucin en el consumo de fertilizantes qumicos en la agricultura del estado de Tabasco.

1.6 Metodologa para el desarrollo del proyecto

La metodologa que se utilizar para desarrollar el proyecto ser la manejada por (Restrepo, 2009) en combinacin con (Gonzales, 2010) las cuales nos aportaron un gran apoyo para desarrollar el proyecto, dicha metodologa se divide en tres etapas:

1.6.1 Trabajo de investigacin documental

Consiste en investigaciones que nos permitan obtener una gama ms amplia de los temas relacionado con biofertilizantes e identificacin de la Bacteria B. subtilis, todo esto con la finalidad de obtener

informacin que enriquezca el marco terico del proyecto y obtener ms conocimiento acerca del tema.

1.6.1.1_Recopilacin de informacin
En este punto se investiga en buscadores de artculos cientficos como Directory of Open Access Journals (DOAJ), Red de Revistas Cientficas de Amrica Latina y el Caribe (REDALYC) informacin acerca de Biofertilizante a base de estircol bovino, la

as como tambin Bio-fertilizantes

lquidos (BFL), tambin fue necesaria la informacin acerca de las generalidades de la bacteria Bacillus Subtillis y de cmo identificarlas.

1.6.2_Trabajo de campo
En este punto se recolectan los materiales para elaborar la mezcla, tambin se ubican los materiales a utilizar para comprobar que el producto final funciona y los materiales para identificacin de la bacteria Bacillus Subtilis.

1.6.2.1_Preparacin de la mezcla para el crecimiento de la bacteria fermentadora Bacillus Subtillis

Para la preparacin de la mescla para iniciar, es necesario agregar en el tanque con capacidad de 50 lts solamente 10.5 kg de estircol fresco de vaca y tambin agregar solamente 25 lts de agua no

contaminada (agua de pozo) en el mismo tanque, despus mezclar con un bastn de madera hasta obtener una mezcla homognea. Despus agregar los siguientes reactivos en el tanque de 50 lts: 350 ml de leche de vaca fresca 350 ml de melaza 220 g de ceniza de lea 500 g de cal hidratada (Ca(OH)2) 220 g de harina de cascar de huevo

Una vez de haber terminado de disolver y mezclar los elementos agregados en el tanque de 50 lts, se procede a resguardar el tanque, como el proceso de fermentacin es aerobio, el tanque se deja entreabierto para que tenga circulacin de aire fresco y empiece el proceso de fermentacin.

1.6.2.2 Adicin de nutrientes

En este punto se adicionaran despus de que se preparo la mezcla cada tercer da, los mismos elementos agregados al momento de la preparacin de la mezcla hasta completar la novena postura de nutrimentos y se deja reposar por 10 das para completar el proceso de fermentacin.

1.6.2.3 Filtracin del Bio-fertilizante

En esta fase la mezcla terminada se filtra mediante un tamiz, para que el Biofertilizante quede libre de cualquier tipo de solido (estircol de vaca) y poder aplicarlo de manera foliar a las plantas de frijoles comn (Phaseolus vulgaris).

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1.6.3Trabajo de Laboratorio
En este apartado es necesario tomar una muestra del biofertilizante para identificar que existe la

presencia de la bacteria fermentadora Bacillus Subtilis mediante el crecimiento en un medio especfico.

Para ello son necesarios los siguientes materiales y equipos:

Material
mecheros. 1 agitador. 1 matraz de 500 mL. 1 balanza. 1 esptula. 1 probeta de 250 mL. 6 cajas de Petri estriles desechables. Masking tape Papel aluminio Plumn indeleble Trapo o franela Reactivos para el medio de cultivo

Equipo Autoclave

1.6.3.1 Identificacin de la Bacteria Bacillus Subtillis

Para cerciorarse de la presencia de la bacteria Bacillus Subtillis en estircol bovino se identificara implementando su crecimiento en un medio especifico, y con esto estar seguros de que la bacteria tendr intervencin en el proceso de fermentacin, a continuacin se describen las instrucciones para las acciones. Preparacin del Medio de Cultivo

11

Colocar el medio de cultivo en un Matraz Erlenmeyer y agregar 40 g de medio en 950 ml de agua destilada. Calentar en la parrilla de agitacin a 37c y agitar hasta disolucin total. Tapar el matraz con un tapn elaborado a base de algodn y gasas. (debe quedar fijo pero no apretado) Distribuir en el autoclave y esterilizar a 121C durante 15 minutos. Dejar enfriar a 50C u 60C . Distribuir en las cajas Petri dentro de un campo esteril, vaciar aproximadamente 30ml.

Empleo de la Muestra

Cuando se deje enfriar a 50C u 60C . (Parte de la preparacin). Distribuir la muestra en un campo estril con una asa de metal, la cual se calentara en un mechero de bunsen el cual se introducir en la muestra y luego en las cajas Petri donde ira la muestra (repetir este paso en todas las cajas Petri).

Dejar reposar en una cmara de incubacin.

1.6.3.2 Monitoreo de parmetros de PH y Temperatura

Para el buen desarrollo del biofertilizante es necesario tomar en cuenta estos parmetros teniendo en cuenta los rangos que debe tener la mezcla con respecto a la temperatura el rango oscila entre los 15C y los 70C y el PH debe estar en el rango de 3 hasta un pH de 11.

El monitoreo del pH se realizara con el uso de tiras reactivas, cotejando con la tabla de colores como indicativo, y la temperatura se obtendr sumergiendo un termmetro dentro de la mezcla.

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1.6.3.3 Evaluacin del funcionamiento del Biofertilizante

En este punto se utilizara una poblacin de semillas de frijol comn (Phaseolus vulgaris) sembradas en vasos de plsticos transparentes de 10 onzas, con algodn, dicha poblacin se dividir en 2 muestras cada una con 15 semillas (muestra A y B).

En la muestra A de 15 semillas se comenzar a suministrar el Biofertilizante en la Etapa 0 (Germinacin) hasta llegar a la etapa 3 (Primera hoja Trifoliada), Esta aplicacin de Biofertilizante se efectuara cada 2 das. Y la muestra B de 15 semillas ser nuestro blanco y solamente se regara con 15 ml de agua no contaminada (agua de pozo) cada 2 das desde la etapa de 0 (germinacin) hasta la etapa 3 (primera trifoliada). Todo lo anterior con el fin de observar si hay varianza en las muestras de las plantas con respecto a la aplicacin del biofertilizante.

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A continuacin se presenta la metodologa de manera esquemtica.

METODOLOGA PARA DESARROLLAR ELABORAR EL BIOFERTILIZANTE A BASE DE ESTIERCOL BOVINO.

Trabajo de investigacin documental

Trabajo de campo

Trabajo de laboratorio

Recopilacin de informacin

Preparacin de la mezcla para el crecimiento de la bacteria fermentadora B. Subtilis.

Identificacin de la bacteria B. subtilis.

Adicin de nutrimentos

Medicin de parmetros de PH y temperatura.

Evaluacin del funcionamiento del biofertilizante.

Figura 1: Estructura de la metodologa propuesta

14

1.7 Cronograma de Actividades

A continuacin se presenta el cronograma propuesto para la realizacin de las actividades, Mediante un diagrama de Gantt, donde se le asigna un periodo de tiempo para la realizacin de cada actividad, para poder llevar a cabo el Biofertilizante.

CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES PARA DESARROLLAR EL PROYECTO ELABORACION DE UN BIOFERTILIZANTE A BASE DE ESTIERCOL DE VACA JUNIO

MES DIA FECHA ACTIVIDADES

etodologabiotecnolgica 1 Presentacindelam R ecopilacindem aterilaes 2 E laboracindelam ezcla 3 Adiciondenutrientes 4 M onitoreodeP yT peratura h em 5 F entadodelam erm ezcla 6 F del biofertilizante iltrado 7 8 IdentificacindelabacteriaB. Subtilis S bradesem defrijol iem illas 9 Aplicacindel biofertilizante 10 E valuacindel biofertilizante 11 E deresultados ntrega 12

MAYO

JULIO

AGOSTO

D L M M J V S D L M M J V S D L M M J V S D L M M J V S D L M M J V S D L M M J V S D L M M J V S D L M M J V S D L M M J V S D L M M J V S D L M M J V S D L M M J V S D L M M J V S 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

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II MARCO TERICO
En este apartado se presenta la informacin tcnica desde un punto de vista terico para entender el desarrollo del marco aplicativo, ya que este tiene como funcin sustentar tericamente el marco de aplicacin. A continuacin se mencionaran temas de vital importancia relacionados con el tema del proyecto Biofertilizante a base de estiercol Bovino.

2.1 Biofertilizante
Los biofertilizantes son sper abonos lquidos con mucha energa equilibrada y en armona mineral, preparados a base de estircol de vaca muy fresca, disuelta en agua y enriquecida con leche, melaza y ceniza, que se ha colocado a fermentar por varios das en toneles o tanques de plstico, bajo un sistema aerbico (con la presencia de oxgeno) y muchas veces enriquecidos con harina de rocas molidas o algunas sales minerales como son los sulfatos de magnesio, zinc, cobre, etc. (Restrepo, 2001)

Los Biofertilizantes, en su mayora, son fabricados a partir de estircol, melaza, microorganismos y agua, para despus ser sometidos a un proceso de fermentacin antes de aplicarlos, va foliar, en los cultivos (Uribe et al., 2004). Por lo general, al preparar los ALF, se mezcla agua con alguna fuente de nitrgeno como estircol o leguminosas y una fuente energtica como melaza o jugo de caa (Restrepo, 1996). Dicha mezcla puede ser enriquecida con harinas de rocas molidas y sales minerales (Restrepo, 2001; Restrepo 2002). Finalmente, para la fabricacin de ALF es necesario adicionar alguna fuente de microorganismos (levaduras, leche, suero) que se encargarn de la transformacin de los materiales orgnicos (Restrepo, 2001).

2.2 Componentes de un Biofertilizante 2.2.1 Leche o suero de vaca

La leche es una secrecin nutritiva de color blanquecino opaco producida por las glndulas mamarias de las hembras. Esta capacidad es una de las caractersticas que definen a los mamferos. La principal funcin de la leche es la de nutrir a los hijos hasta que son capaces de digerir otros alimentos. Adems cumple las funciones de proteger el tracto gastrointestinal de las cras

contra patgenos, toxinas e inflamacin y contribuye a la salud metablica regulando los procesos de obtencin de energa, en especial el metabolismo de la glucosa y la insulina.

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Es el nico fluido que ingieren las cras de los mamferos hasta el destete. La leche de los mamferos domsticos forma parte de la alimentacin humana corriente en la inmensa mayora de las civilizaciones: de vaca, principalmente.

2.2.1.1 Funcin de la Leche en el Biofertilizante

Principalmente tiene la funcin de reavivar el biopreparado, de la misma forma que lo hace la melaza; aporta protenas, vitaminas, grasas y aminocidos para la formacin de otros compuestos orgnicos que se generan durante el periodo dela fermentacin del biofertilizante, al mismo tiempo les permite al medio propicio para la reproduccin de la microbiologa de la fermentacin.

2.2.2 Melaza o jugo de Caa

La melaza o miel de caa es un producto lquido espeso derivado de la caa de azcar y en menor medida de la remolacha azucarera, obtenido del residuo restante en las cubas de extraccin de los azcares. Su aspecto es similar al de la miel aunque de color parduzco muy oscuro, prcticamente negro. El sabor es dulce, ligeramente similar al del regaliz, con un pequeo regusto amargo. Nutricionalmente presenta un altsimo contenido en hidratos de carbono adems de vitaminas del grupo B y abundantes minerales, entre los que destacan el hierro, cobre y magnesio. Su contenido de agua es bajo.

Se elabora mediante la coccin del jugo de la caa de azcar hasta la evaporacin parcial del agua que ste contiene, formndose un producto meloso semicristalizado.

2.2.2.1 Funcin de la Melaza o jugo de caa en el Biofertilizante:

La principal funcin es aportar la energa necesaria para activar el metabolismo microbiolgico, para que el proceso de fermentacin se potencialice, a dems de aportar elementos en menor escala como son algunos minerales, entre ellos: calcio, potasio, fsforo, boro, hierro, azufre, manganeso, zinc y magnesio.

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2.2.3 Ceniza
La ceniza es el producto de la combustin de algn material, compuesto por sustancias inorgnicas no combustibles, como sales minerales. Parte queda como residuo en forma de polvo depositado en el lugar donde se ha quemado el combustible (madera, basura, etc.) y parte puede ser expulsada al aire como parte del humo.

La ceniza de plantas (madera, rastrojos, etc.) tiene un alto contenido de potasio, calcio, magnesio y otros minerales esenciales para ellas. Puede utilizarse como fertilizante si no contiene metales pesados u otros contaminantes. Como suele ser muy alcalina, se puede mezclar con agua y dejarla un tiempo al aire para que se neutralice en parte combinndose con el CO2 ambiental. Tambin se puede mezclar con otro abono ms cido, como el humus. La descomposicin en el humus, adems hace a los minerales ms biodisponibles.

Las cenizas de animales contienen ms sodio y principalmente el fosfato clcico de los huesos. Las cenizas de incineraciones humanas pueden contener restos de metales de empastes y otros implantes.

2.2.3.1 Funcin de la Ceniza en el Biofertilizante

Su principal funcin es proporcionar minerales y elementos trazas al biofertilizante para activar y enriquecer la fermentacin, las mejores cenizas son las que se originan a partir de las gramneas, cascara de arroz o maz.

2.2.4 Excremento
Excrementos, heces o materia fecal son el conjunto de los desperdicios generalmente slidos o lquidos producto final del proceso de la digestin. Las heces son los restos de los alimentos no absorbidos por el aparato digestivo (como fibras y otros componentes que no son tiles para el ser en cuestin), y tambin clulas del epitelio intestinal que se descaman en el proceso de absorcin de nutrientes, microorganismos, y otras sustancias que no logran atravesar el epitelio intestinal.

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2.2.4.1 Funcin del Excremento en el Biofertilizante

Tiene principalmente la funcin de aportar los ingredientes vivos (microorganismos) para que ocurra la fermentacin del biofertilizante. Aporta especialmente inculos o semillas de levadura, hongos, protozoos y bacterias; los cuales son directamente los responsables de digerir, metabolizar y colocar de forma disponible para las plantas y el suelo, todos los elementos nutritivos que se encuentran en el caldo vivo que se esta fermentando en el tanque. Por otro lado, el excremento contiene una gran cantidad diversificada de microorganismos muy importantes para dar inicio a la fermentacin biopreparado, entre los cuales se destaca el Bacillus subtilis.

Finalmente, otra gran ventaja que se presenta al trabajar los biofertilizantes con excremento es que su microbiologa tiene la caracterstica facultativa de poder desarrollarse tanto anaerbicamente (sin presencia de oxigeno) como de forma aerbica (en presencia de oxigeno), lo que facilita el manejo de la fermentacin por parte de los agricultores. (Restrepo, 2007).

2.2.5 Agua sin tratar no contaminada (De pozo profundo)

El agua de los pozos artesianos o fuentes naturales es normalmente fra y libre de contaminantes orgnicos, lo cual la hace ideal para beber. La naturaleza geolgica del suelo determina la composicin qumica de las aguas subterrneas. El agua esta en constante movimiento con el suelo donde se estanca y recircula, y as se desarrolla un equilibrio entre la composicin del suelo y la del agua.

El agua subterrnea en circulacin puede ser de gran variacin en la composicin con la apariencia de contaminantes y varios contaminantes. Adicionalmente, las aguas subterrneas son bastante puras desde un punto microbiolgico.

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2.2.5.1 Funcin del Agua en el Biofertilizante

Tiene la funcin de facilitar el medio lquido donde se multiplican todas las reacciones bioenergticas y qumicas de la fermentacin anaerbica del biofertilizante. Es importante resaltar que muchos microorganismos presentes en la fermentacin, tales como levadura y bacterias, viven mas uniformemente en la masa liquida, donde al mismo tiempo, los productos sintetizados como enzimas, vitaminas, pptidos, promotores de crecimiento, etc., se transfieren ms fcilmente.

2.3 Utilidad de los Biofertilizantes

Los Biofertilizantes sirven para nutrir, recuperar y reactivar la vida del suelo, fortalecer la fertilidad de las plantas y la salud de los animales, al mismo tiempo que sirven para estimular la proteccin de los cultivos contra el ataque de insectos y enfermedades. Por otro lado, sirven para sustituir los fertilizantes qumicos altamente solubles de la industria, los cuales son muy caros y vuelven dependientes a los campesinos, hacindolos cada vez ms pobres (Restrepo, 2007).

2.4 Funcionamiento de los Biofertilizantes

Funcionan principalmente al interior de las plantas, activando el fortalecimiento del equilibrio nutricional como un mecanismo de defensa de las mismas, a travs de los cidos orgnicos, las hormonas de crecimiento, antibiticos, vitaminas, minerales,enzimas y co-enzimas, carbohidratos, aminocidos y azcares complejas, entre otros,presentes en la complejidad de las relaciones biolgicas, qumicas, fsicas y energticasque se establecen entre las plantas y la vida del suelo.

Los biofertilizantes enriquecidos con cenizas o sales minerales, o con harina de rocas molidas, despus de su periodo de fermentacin (30 a 90 das), estarn listos y equilibrados en una solucin tampn y coloidal, donde sus efectos pueden ser superiores de 10 a 100.000 veces las cantidades de los micronutrientes tcnicamente recomendados porla agroindustria para ser aplicados foliarmente al suelo y a los cultivos. (Restrepo, 2007)

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2.5 Verificacin de la calidad de los Biofertilizantes

Hay varios aspectos o parmetros que vale la pena observar para verificar la calidad de los biofertilizantes fermentados a base de excremento fresco de vaca:

El olor: Al abrir el tanque fermentador no debe haber malos olores (putrefaccin)

. La tendencia es que entre ms dejemos fermentar y aejar el biofertilizante, ste ser de mejor calidad y desprender un olor agradable de fermentacin alcohlica y se conservar por ms tiempo.

El color: Al abrir el tanque fermentador, el biofertilizante puede presentar las siguientes caractersticas o una de ellas:

Formacin de una nata blanca en la superficie, entre ms aejo el biofertilizante, ms blanca ser la nata, el contenido lquido ser de un color mbar brillante y traslcido y en el fondo se debe encontrar algn sedimento. Cuando los biofertilizantes no estn bien maduros o sea, que no se han dejado aejar por mucho tiempo, la nata superficial, regularmente es de color verde espuma y el lquido es de color verde turbio, esto no quiere decir que el biopreparado no sirva, sino que cuando lo comparamos con el ms aejo, este ltimo (el aejo) es de mejor calidad, inclusive siendo ms estable para su almacenamiento.

Los biofertilizantes sern de mala calidad cuando tengan un olor a putrefacto y la espuma que se forma en la superficie tienda hacia un color verde azulado y oscuro, entonces es mejor descartarlo. (Restrepo, 2007).

2.6 Aplicacin de los Biofertilizantes en cultivos y suelo

La aplicacin de los biofertilizantes en los cultivos es foliar y los mejores horarios para hacer esta tarea son las primeras horas de la maana hasta ms o menos las diez de la maana y en las tardes, despus de las cuatro, para aprovechar que en estos horarios hay una mayor asimilacin de los biofertilizantes por que hay una mayor apertura de estmatos (es por donde las plantas comen va foliar, equivale a nuestra boca) en las hojas de las plantas. Se recomienda que su aplicacin sea realizada preferiblemente de la parte de abajo de las hojas, hacia arriba.

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Otra recomendacin importante para la aplicacin de los biofertilizantes, es la de poderles agregar un adherente para maximizar su aplicacin. Como adherentes recomendamos sbila, tuna, goma laca o cola pez de madera, ceniza, jabn y harina de trigo, entre otros. Las aplicaciones de los biofertilizantes sobre el suelo, se deben hacer sobre la cobertura verde del mismo o sobre la propia superficie del suelo despus de haber realizado una limpieza o chapia de las buenazas (mal llamadas malezas) lo que estimular la ecoevolucin mineral y biolgica de la formacin de suelos frtiles, nutritivamente diversificados y ms profundos. La aplicacin del biofertilizante sobre la superficie de los suelos se debe hacer de forma simultnea, cuando se estn tratando los cultivos. (Restrepo, 2007).

2.7 Gnero Bacillus

El gnero Bacillus pertenece a la familia Bacilliaceae, es un gnero que hoy en da incluye ms de 60 especies de bacilos. Este gnero est formado por microorganismos bacilares Gram positivos, formadores de endosporas, quimiheterotrofos que normalmente son mviles y rodeados de flagelos periticos. Son anaerobios o aerobios facultativos son catalasa positivos. Las clulas bacterianas de este gnero tienen un amplio tamao que varia 0,5 a 2,5 m x 1,2-10 m. Este gnero se encuentra comnmente en suelos y plantas donde tienen un papel importante en ciclo del carbono y el nitrgeno. Son habitantes comunes de aguas frescas y estancadas, son particularmente activos en sedimentos. (Koneman, 2001). El gnero Bacillus pertenece a la familia I Bacilliaceae, del orden I Bacillales de clase tres Bacilli, del fillum BXIII firmicutes del Dominio bacteria. En la primera edicin del gnero es claramente diverso desde el punto de vista fenotpico y genotpico. La diferenciacin entre especies del gnero Bacillus se centro en los resultados en la fermentacin de lactosa, sorbitol, manitol, melobiosis, hidrlisis de la urea, y descarboxilacion de la lisina.(Anderson et al.,2003).

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2.7.1 Bacillus Subtillis

Es una bacteria Gram positiva, produce endospora las que son termorresistentes y tambin resiste factores fsicos perjudiciales como la desecacin la radiacin los cidos y los desinfectantes qumicos, produce enzimas hidrofilicas extracelulares que descomponen polisacridos, cidos nucleicos permitiendo que el organismo emplee estos productos como fuente de carbono y electrones, producen antibiticos como la bacitricina, polimixina, gramicidina y circulina, fermentan la casena y el almidn, vive dentro de los limites de 55 a 70C.

Es un gran controlador biolgico, Bacillus subtilis promueve el desarrollo de las plantas y previene las enfermedades del suelo.

2.8 Medio de Cultivo

Un medio de cultivo consiste en un gel o una solucin que cuenta con los nutrientes necesarios para permitir (bajo condiciones favorables de pH y temperatura) el crecimiento

de virus, microorganismos, clulas, tejidos vegetales o incluso pequeas plantas. Segn qu se quiera hacer crecer, el medio requerir unas u otras condiciones. Generalmente se presentan desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados, al prepararse podemos encontrarlos en estado slido, semislido y lquido. El objetivo ltimo del cultivo es variado: antibiograma, identificacin, multiplicacin.

Los Virus, por ejemplo, son obligados parsitos intracelulares por eso necesitan de un medio que contenga clulas vivas.

2.8.1 Tipos de Medios de Cultivo

Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mnimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos especiales. El medio ms conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar comn, que resulta de la adicin de agar al caldo nutritivo. Otros representantes de este grupo son el agar tripticase de soja, el agar Columbia, etc.

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Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, adems de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adicin de sangre u otros productos biolgicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichos factores. En ocasiones es posible aadir suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo (p. ej. Polivitex, Isovitalex, etc) El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cistena para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate).

Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una poblacin polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una poblacin microbiana especfica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.

Medios inhibidores: Cuando las sustancias aadidas a un medio selectivo impiden totalmente el crecimiento de una poblacin microbiana, se denomina inhibidor. Los medios inhibidores podran considerarse como una variante ms restrictiva de los medios selectivos. Los medios inhibidores se consiguen habitualmente por adicin de sustancias antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba completamente el desarrollo de una poblacin determinada. Un medio inhibidor es el MacConkey que permite el crecimiento de los grmenes Gram negativos e impide el crecimiento de los Gram positivos.

Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia caractersticas bioqumicas que ayuden a diferenciar gneros o especies. La adicin de un azcar fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para este fin. El medio MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los grmenes que fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen. Tambin lo son el C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -), el agar sangre (tipo de hemlisis), el SS (que es doblemente diferencial), etc.

Medios de identificacin: Son los destinados a comprobar alguna cualidad especfica que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo. Estos medios han de poseer los elementos necesarios para asegurar el crecimiento de los microorganismos, el sustrato especfico que vaya a ser metabolizado y el indicador que nos muestre el resultado.

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El agar Kligler, el medio de Simmons y en general, cualquier medio al que se le haya aadido un elemento diferencial de un microorganismo, son medios utilizados en identificacin. Actualmente estn apareciendo en el mercado una gran cantidad de medios especficos de identificacin para ciertos microorganismos, con lo cual se consigue simultneamente abaratar el costo y reducir el tiempo de identificacin. Son ejemplos de esto ltimo los medios CPS ID3 o Uriline ID(Biomerieux), utilizados para identificar los grmenes urinarios ms importantes a partir de la placa de cultivo gracias a la utilizacin de sustratos cromognicos especficos.

Medios de multiplicacin: Sirven para obtener una gran cantidad de clulas a partir de un microorganismo ya aislado. Seemplean en la obtencin de vacunas, en la investigacin y en la industria. Los medios ms adecuados para la multiplicacin suelen ser lquidos. El caldo-infusin cerebro-corazn (BHI), es un ejemplo tpico de estos medios.

Medios de conservacin: Se utilizan para conservar una cepa que, por diversas razones nos interese mantener. Fundamentalmente se utilizan como controles de calidad de las pruebas y reactivos utilizados en el Laboratorio de Microbiologa. En el laboratorio se pueden conservar las cepas de tres formas: haciendo pases peridicos de placa a placa, mediante liofilizacin de una suspensin bacteriana, y congelando las cepas en leche descremada estril al 0,1%.

Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras clnicas que no pueden sembrarse inmediatamente. Su utilizacin debe hacerse introduciendo la torunda con la que se obtuvo la muestra en el interior delmedio (generalmente en un tubo). Son ejemplos tpicos de este grupo los medios de StuartAmies,Cary-Blair, etc.

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2.9 Frijol

El frijol es una planta originaria de Mesoamrica (que incluye Mxico), la cual se viene cultivando desde hace alrededor de 8 mil aos, desarrollndose durante ese tiempo una diversidad de tipos y calidades de frijoles. Se considera que en total existen alrededor de 150 especies, aunque en Mxico estas ascienden a 50, destacando las cuatro especies que el hombre ha domesticado, como son el Phaseolus vulgaris L. (frijol comn), Phaseolus coccineus L. (frijol ayocote), Phaseolus lunatus L. (frijol comba) y Phaseolus acutifolius Gray (frijol tepari). En nuestro pas las especies ms importantes en cuanto a superficie sembrada y produccin son las dos primeras.

Actualmente las variedades ms comunes de frijoles y las regiones donde se utilizan, se describen a continuacin: Blanco 157 (Bajo), Canocel (Bajo), Pinto 133 y Durango 225 (Bajo y regiones semiridas), Durango 664 (Durango, Zacatecas y Chihuahua), Durango 222 (Regiones semiridas), Canario 72 (Sinaloa, Nayarit, Jalisco y Bajo),Ojo de Cabra 73 (Chihuahua, Zacatecas, Durango), Ro Grande (Durango y Zacatecas), Bayo Calera (Zacatecas), Bayo Durango (Durango, Chihuahua, Zacatecas, Aguascalientes), Negro Perla, Bayo Macentral, Flor de Mayo M38, Flor de Junio Marcela, Flor de Mayo RMC, Flor de Mayo Bajo, Negro 150, Bayo INIFAP, Negro 8025, Flor de Durazno; stas para zonas con clima templado subhmedo. Pinto Mestizo, Pinto Bayacora, Negro Altiplano, Negro Sahuatoba, Pinto Villa, Bayo Victoria, Negro Durango, Negro Quertaro, Negro San Luis, (Altiplano Semirido).

Por su gran importancia econmica y social, el frijol es un producto estratgico dentro del desarrollo rural de Mxico, ya que ocupa el segundo lugar en cuanto a superficie sembrada nacional y representa adems la segunda actividad agrcola ms importante en el pas por el nmero de productores dedicados al cultivo. Es as, que como generador de empleo es relevante dentro de la economa del sector rural.

As mismo, es un alimento fundamental en la dieta de la poblacin mexicana, sobre todo para las clases ms desprotegidas del pas, ya que constituye la fuente principal de protenas para dicho sector, siendo un alimento que no puede sustituirse con el consumo de algn otro. Adicionalmente, la importancia ancestral de su cultivo en el campo mexicano radica tambin en que forma parte de la cultura gastronmica de Mxico, de ah la amplia aceptacin del producto en la cocina mexicana, por lo que posee una gran demanda a nivel nacional.

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Actualmente esta leguminosa se enfrenta a modificaciones importantes ante una sociedad cambiante, incluidos los hbitos alimenticios, a consecuencia del urbanismo, la migracin y el empleo; as como el paso de una economa cerrada a una economa global, todo lo cual est ejerciendo presiones en diversas etapas de la cadena de produccin, comercializacin, transformacin y consumo.

2.9.1 Frijol Comn (Phaseolus vulgaris L.)

Dentro del grupo de las especies leguminosas, el frijol comn es una de las ms importantes. Es una planta anual, herbcea intensamente cultivada desde la zona tropical hasta las templadas. Es originario de Amrica y se le conoce con diferentes nombres: poroto, haricot, caraota, juda, aluvia, habichuela y otros.

El frijol es uno de los alimentos bsicos en la dieta del ser humano y es la principal fuente de protena; es rico en lisina pero deficiente en los aminocidos azufrados metionina, cistina y triptfano; por lo cual una dieta adecuada en aminocidos esenciales se logra al combinar frijol con cereales (arroz, maz, otros).

2.9.1.1 Adaptacin en clima y suelo

El frijol comn (Phaseolus vulgaris L.) se adapta bien desde 200 hasta 1.500 msnm. El cultivo necesita entre 300 a 400 mm de lluvia. La falta de agua durante las etapas de floracin, formacin y llenado de vainas afecta seriamente el rendimiento. El exceso de humedad afecta el desarrollo de la planta y favorece el ataque de gran nmero de enfermedades.

Se recomienda que los suelos para el cultivo de frijol sean profundos, frtiles, preferiblemente de origen volcnico con no menos de 1,5% de materia orgnica en la capa arable y de textura liviana con no ms de 40% de arcilla como los de textura franco, franco limosos y franco arcilloso ya que el buen drenaje y la aereacin son fundamentales para un buen rendimiento de este cultivo.

Se debe evitar sembrar en suelos cidos, con contenidos altos en manganeso y aluminio y bajos en elementos menores. El pH ptimo para frijol est comprendido entre 6,5 y 7,5 aunque es tolerante a pH entre 4,5 y 8,2.

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III MARCO APLICATIVO

En este capitulo se concluye con la presentacin de resultados sobre la metodologa propuesta para la realizacin de un Biofertilizante a base de excremento Bovino, se detalla paso a paso la obtencin de resultados para el trabajo de campo y laboratorio.

3.1 Trabajo de Campo

.

3.1.1 Preparacin de la mezcla para el crecimiento de la bacteria fermentadora Bacillus Subtillis.

Para iniciar con la creacin del Biofertilizante fue necesario que se vertieran todos los ingredientes como lo son: el estircol fresco de vaca, melaza, cal hidratada, cenizas, leche fresca de vaca, cascara de huevo molida y 25 litros de agua no contaminada sin tratamiento (de Pozo) en el tanque con capacidad para 50 litros, posteriormente agregados, se mezclaron hasta homogenizar con la ayuda de la paleta de Madera, al finalizar se dejo reposar el tanque sin taparlo por completo.

Foto 1. Agregacin de ingredientes y mezclado

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3.1.2 Adicin de nutrientes

Una vez agregada la primera dosis de ingredientes por primera vez, se continuaron agregando, las mismas cantidades de los mismos ingredientes exceptuando el estircol y el agua no contaminada sin tratamiento (de Pozo), cada tercer da durante un periodo de 31 das, alcanzando un total de nueve agregados de nutrimentos, una vez que se concluy la etapa de adicin de nutrientes se dej reposar el tanque con la mezcla durante diez das sin taparlo completamente.

Foto 2. Adicin de nutrientes

3.1.3 Filtracin del Biofertilizante

Una vez cumplido el periodo de reposo y fermentacin de la mezcla preparada, se procedi a filtrar la mezcla con la ayuda de tamices con diferente espesor de malla, con el fin de eliminar los restos slidos no degradados y obtener nicamente el lquido de la mezcla, para poder almacenarlo en el aspersor que se utiliz para su prueba y evaluacin.

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Foto 3. Filtrado del Biofertilizante

3.2 Trabajo de Laboratorio.

A continuacin se describen los procedimientos que se llevaron a cabo en el laboratorio para la identificacin de la Bacteria Bacillus Subtillis, la cual se encuentra en el excremento bovino y se encarg de la fermentacin del biofertilizante.

3.2.1 Identificacin de la Bacteria Bacillus Subtillis

De acuerdo a la metodologa del biofertilizante a base de excremento bovino, se realiz el medio de cultivo selectivo Agar de Soya Triptona para la identificacin de la bacteria Bacillus Subtillis. A

continuacin se describen los pasos para la preparacin del medio selectivo.

Preparacin del Medio de Cultivo Se coloc el medio de cultivo en un vaso de precipitado con 40 g de medio y 950 ml de agua destilada.

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Foto 4. Mezcla del Agar de soya triptona con Agua destilada

El medio de cultivo se calent y agito en la parrilla de agitacin a 37c hasta una disolucin total.

Foto 5. Disolucin del Agar de soya triptona.

Para evitar la contaminacin en el cultivo se elabor un tapn a base de algodn y gasas para el matraz donde se deposit el medio de cultivo selectivo.

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Foto En Esterilizacin de matraces.matraz con el medio de cultivo y los materiales de laboratorio a 7. este punto se esteriliz el utilizar a 121C durante 15 minutos en el autoclave.

Foto 6. Matraz sellado con el Tapn elaborado a base de algodn y papel estraza.

Se procedi a insertar la muestra de Biofertilizante en las cajas Petri con los medios de cultivo.

Foto 8. Segregacin de la muestra del Biofertilizante.

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Se dej reposar las cajas Petri en la incubadora a una temperatura de 36C durante 48 horas y se procedi a verificar el medio de cultivo

3.2.2 Monitoreo de parmetros de PH y Temperatura

Para el buen desarrollo del Biofertilizante se realiz un monitoreo de pH y temperatura como parmetros fsico-qumicos, esto con el objetivo de mantener un estado ptimo en el biofertilizante para el adecuado crecimiento de la bacteria Bacillus Subtillis, El procesos realizado para el monitoreo de los parmetros fsico-qumicos son descritos a continuacin:

PH: Se realiz el monitoreo con tiras reactivas, dando este un pH promedio de 9.25, lo cual quiere decir que nuestro Biofertilizante est en un rango apropiado para el crecimiento de Bacterias.

Foto 9. Monitoreo de PH del Biofertilizante.

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Temperatura: Se realiz el monitoreo con un termmetro de mercurio, obteniendo un dato promedio de 29.6C, apropiado para la fermentacin y la elaboracin del Biofertilizante.

Foto 10. Monitoreo de temperatura del Biofertilizante.

3.2.3 Evaluacin del funcionamiento del Biofertilizante

Se evalu la eficiencia de Biofertilizante obtenido, el cual fue suministrado a plantas germinadas de frijol comn (Phaseolus vulgaris) que fueron sembradas en vasos. A continuacin se describe los pasos que se realizaron para dicha evaluacin.

rea foliar del (Phaseolus vulgaris): Se tomaron 15 plantas de frijol a las cual se le aplico el Biofertilizante y 15 ms a las cuales no se les aplico Biofertilizante (blanco), los datos obtenidos donde fueron medidos longitud y ancho de la hoja de la planta, se calcularon segn la metodologa, dando como resultado que las plantas con biofertilizante obtuvieron un crecimiento significativo en el rea foliar.

Foto 11. Medicin de longitud y ancho de la hoja de frijol comn (Phaseolus vulgaris).

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Altura de la planta: De las plantas anteriormente medidas, Tambin se obtuvieron datos de longitud del tamao del tallo de la planta. En la cual se obtuvieron datos de mayo crecimiento de las plantas de frijol.

Foto 12. Medicin de longitud del tallo de la planta de frijol comn (Phaseolus vulgaris).

Clculos estadsticos: Con los datos obtenidos se procedi

realizar las tcnicas

estadsticas, en este caso se utiliz T-student para 2 muestras independientes, en el cual ayudo a interpretacin de los resultados.

Foto 13. Clculo de los datos por medio de la tcnica T-student.

3.3 Anlisis e interpretacin de resultados.

La eficiencia del Biofertilizante fue evaluada mediante los datos obtenidos en el laboratorio, los

parmetro anteriormente mencionados arrojaron los siguientes resultados.

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T-Student Area foliar. El crecimiento de las plantas con Biofertilizante obtuvo un valor de 0.1553 de diferencia, al respecto con las plantas a las que no se le agrego Biofertilizante. Lo cual nos indica que el biopreparado acelero el crecimiento de la planta significativamente.

T-student Longitud del tallo: El valor obtenido fue de 3.2974 de diferencia, al respecto con las plantas a las que no se le agrego Biofertilizante. Lo cual nos indica el acelerado crecimiento de las plantas de frijol.

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CONCLUSIN

Una vez que se realiz el Biofertilizante y su estudio para determinar su efectividad como nutriente para las plantas, Se utiliz la metodologa implementada anteriormente mencionada la cual permiti controlar las variables de manera exitosa, para realizar del Biopreparado y as poder evaluarlo.

Posteriormente el biofertilizante obtenido fue evaluado mediante las medidas de las plantas de frijol, obteniendo as variables que sealaron un incremento en el crecimiento en las plantas a comparacin con las plantas a las cuales no se les suministro el Biopreparado.

Es importante mencionar que el Biofertilizante es una buena alternativa para reducir el uso de fertilizantes qumicos, ya que sus caractersticas le permiten tener un buen rendimiento como nutriente para las plantas, adquiriendo as un producto sustentable que contribuye con el sector agrcola del Estado de Tabasco.

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RECOMENDACIONES

Antes de iniciar con todo el proceso de preparacin o adicin de nutrientes a la mezcla es necesario contar con todos los ingredientes a la mano, ya que se requieren frescos para su aplicacin, siendo el caso del excremento y leche de vaca.

El biopreparado se debe almacenar y resguardar en un rea donde no reciba un impacto directo del sol o lluvia, de igual manera libre de insectos que puedan caer dentro de la mezcla al encontrarse destapado.

Se recomienda filtrar el biofertilizante de dos a tres veces antes de aspersarse en las plantas como muestras, con el fin de eliminar todo slido presente, y nicamente evaluar el lquido preparado.

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ANEXOS

Como contribucin para mayor claridad y profundidad de la investigacin, se anexan los artculos consultados, para la conformacin del Captulo II, Marco terico.

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