LABORATORIO DE QUMICA ANALTICA III PRACTICA 3. SEPARACIN DE PIGMENTOS VEGETALES POR CROMATOGRAFIA EN COLUMNA. 3.

1 OBJETIVO Aprender la tcnica de cromatografa de columna y separar los pigmentos contenidos en un vegetal. 3.2 INFORMACIN GENERAL La cromatografa del griego kromatos =color y graphos = escritura, fue introducida por el botnico ruso Tsweet en 1906, quien la aplic en la separacin de los pigmentos contenidos en las plantas. 3.3 MATERIALES Y REACTIVOS Materiales 1 columna cromatografca 1 embudo de separacin 2 vasos de precipitado de 250 ml. 1 probeta de 100 ml. 1 matraz Erlenmeyer de 100 ml. 1 bomba de vaco 2 tapones horados 1 pinza de 3 dedos 1 tubo de hule 1 varilla de vidrio de 60 cm Reactivos 100 ml de metanol 110 ml de ter de petrleo 20 gr de NaCl 10 g de almina 5 g de CaCO3 30 g de sacarosa 0.5 ml de n-propanol 10 ml de acetona 3.4 PROCEDIMIENTO Se pesan de 8 a 10 gramos de vegetal fresco por examinar, de preferencia alfalfa, acelga. Se corta el vegetal en pequeos trozos y se tritura en un mortero, se le agregan 100 ml de metanol. Se deja reposar durante 30 min. Se agregan 50 ml de ter de petrleo a 50C y se transfiere el extracto a un embudo de separacin de 250 ml. Y enseguida y sin agitar, resbalar por las paredes, con la finalidad de evitar emulsiones 50 ml de agua saturada con NaCl,. La capa inferior contienen una mezcla de agua-metanol, con un poco de clorofila que no paso a la fase etrea, y la capa superior contiene ter y extracto. Se elimina la capa inferior y se repite la adicin de salmuera 50 ml 2 o 3 veces ms. Si la capa superior se muestra turbia hay que reposar la mezcla algunos minutos ms, hasta que los glbulos se sedimenten.

Se colocan 20 ml de extracto purificado en una columna cromatogrfica de 2-2.5 cm de dimetro y 30 o 40 cm de altura. Previamente empacada de la siguiente forma; almina 5 cm aproximadamente de altura, CaCO3 5 cm y 15 cm de sacarosa.. Se comprime el contenido y se conecta a un sistema de vaco. Se aplica el vaco y se permite que el extracto sea absorbido en la columna. Se eluye el extracto con una solucin al 0.5% de n-propanol en ter de petrleo y se observa la coloracin y el numero de bandas que se forman. 3.5 CALCULOS Y RESULTADOS Entregar un diagrama que muestre las coloraciones y el nmero de bandas observadas, adems indicar que tipos de compuestos fueron absorbidos en cada material, resulta til ayudarse de las coloraciones y polaridades. Indicacin: Los pigmentos de las plantas se clasifican generalmente en carotenos xantofilas y Clorofilas. INVESTIGAR 1. Con que fin se agreg la salmuera? 2. Como se identifican los diferentes pigmentos. 3. Indica la secuencia de separacin de los pigmentos. 4. Cual es la estabilidad de los pigmentos vegetales a la luz y al calor. Explicar