REDVET. Revista electrnica de Veterinaria 1695-7504 2010 Volumen 12 Nmero 5B REDVET Rev. electrn. vet. http://www.veterinaria.org/revistas/redvet Vol.

12, N 5B Mayo/2011 http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n0505411B.html

Universidad Autnoma de Zacatecas. Mxico. Francisco Garca Salinas.

ANIVERSARIO DEL VETERINARIO

La habilidad para sujetar y manejar laboratorio no se adquiere fcilmente

animales

de

*M. en C. Jos Jess Muoz Escobedo. **MVZ Sergio Saldivar Elas. **Dra. en C. Claudia Maldonado Tapia. Est. Claudia Yadira Muoz Moreno. **Dra. en C. Mara Alejandra Moreno Garca. *Unidad Acadmica de Odontologa.**Unidad Acadmica de Ciencias Biolgicas. Cuerpo Acadmico de Biologa Celular y Microbiologa. Universidad Autnoma de Zacatecas. Mxico.

Email: amoreno_29@ hotmail.com

Los modelos experimentales son herramientas biolgicas que han permitido el estudio de procariotes (bacterias y otros microorganismos) y eucariotes (animales y vegetales), facilitando el conocimiento de los procesos de la vida tanto naturales como patolgicos, por lo cual, es adecuado conocer su manejo, respetando los derechos de los animales de acuerdo a los tratados de Helsinki. La investigacin en el rea biomdica demanda gran cantidad de animales de laboratorio con caractersticas biolgicas especficas y en la oportunidad solicitada por el investigador. Para lograr el cumplimiento de esta tarea, el Mdico Veterinario especialista en animales de laboratorio, disea y opera mtodos reproductivos acordes con las necesidades propias de la comunidad investigadora. Los resultados de un experimento dependen en gran parte del manejo de los animales, siendo vital la participacin del mdico veterinario, al grado que un mal manejo puede invalidar un experimento. Tambin es importante sealar que existen otros factores que pueden alterar el resultado de un experimento entre ellos destacan la constitucin fsica y el estado inmunolgico del animal, de tal forma que el manejo adecuado de los reactivos biolgicos (frmacos) depende de factores subjetivos y objetivos que actan en forma diferente en cada sujeto de experimentacin. Entre los animales ms utilizados en una investigacin y por ende los mayormente reproducidos en los bioterios, son el ratn, rata, conejo,

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hamster, cuyo y chimpancs. Otros animales que se usan en menor medida como modelos experimentales son: gato, perro, peces, tortugas, cerdos, aves en general, ranas hurones, cabras, ovejas, bovinos, equinos, chinchilla y armadillo. Para comenzar a hablar de tcnicas del manejo adecuado de los animales de laboratorio, debemos considerar el manejo de stos, con la finalidad de respetar el derecho a buen trato de los animales (Tratado de Helsinki). Principios de los tratados de Helsinki. Diseo cientfico y experiencias previas en animales. Principio de la proporcionalidad beneficios posibles. entre riesgos predecibles y

Respeto a los derechos del sujeto, prevaleciendo su inters por sobre los de la ciencia y la sociedad. Consentimiento informado y respeto por la libertad del individuo que los riesgos sean razonables frente a los beneficios previstos. que el diseo de la investigacin sea acertado. que los investigadores sean competentes. Es la obligacin tica de lograr los mximos beneficios y de reducir al mnimo el dao y la equivocacin. Desde tiempos antiguos los griegos y romanos colocaban seales o marcas en los animales para su fcil identificacin. Todos los mtodos utilizados deben gozar de selectividad, aplicacin rpida y ser preferentemente indoloros. En ocasiones cuando lo requiere se debe aplicar anestesia local. MTODOS DE MARCAJE. Los mtodos de marcaje generalmente utilizados son: Fsicos: Directo: Corte de pelo, perforaciones y muescas en orejas, mutilacin, tatuaje elctrico. Indirecto: Libretas, tarjetas, aretes, collares, pulseras, chips. Qumicos: Tatuaje, colorantes, fotografas. Biolgicos: Especie, marcas naturales, sexo, color edad. Las tarjetas se utilizan principalmente para colocarlas en las jaulas o cajas. Como marcas naturales se consideran las caractersticas fenotpicas que sean fcilmente detectables.

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CUADRO No. 1. Tipos de marcas usadas en animales para su identificacin.

ESPECIE TIPO DE MARCA Colorantes Tatuaje (tipo pinzas o elctrico) Perforaciones y muescas auriculares Implantacin de chips Collares con fichas Tatuaje (tipo pinzas o elctrico) Collares con fichas Bandas plsticas Cintas Tatuaje Perforaciones Muescas auriculares Marcas naturales Aretes Pintura Perforaciones Colorantes Aretes numerados Muescas auriculares Perforaciones Marcas naturales Abrazaderas Tatuaje Aretes Abrazaderas Perforaciones Colorantes Aretes Abrazaderas Bandas Abrazaderas Bandas Cuentas Perforaciones Colorantes Perforaciones Tatuaje Tatuajes Perforaciones Aretes Perforaciones Muescas Tatuajes Collares Marcas naturales Aretes ZONA DONDE SE APLICA Pelaje Orejas Cuello Orejas Cuello

Ratn y Rata

Perro Gato

Hamster Peces Tortugas

Orejas Aletas Cola Caparazn Patas Pelaje Orejas

Cobayo

Cerdos

Orejas Pelaje Orejas Patas Alas Patas Dorso Membranas interdigitales Orejas Pelaje Orejas Cuello Orejas Cuello Lomo Labios Lengua

Conejo

Aves en general Ranas

Hurones Cabras y ovejas

Bovinos y equinos

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Las sustancias colorantes o tinturas solo se recomienda utilizarlas cuando se trate de identificaciones temporales. Las sustancias que se pueden utilizar son: solucin saturada de cido pcrico, fuscina fenicada, azul de metileno, violeta de genciana, etc. Para practicar las perforaciones se necesitan pinchas o ponchadores, las combinaciones numricas obtenidas por este mtodo, puede ser ilimitado. Los pendientes o aretes se colocan en las orejas y se prefieren los tipo tornillo, en ellos se insertan letras o nmeros. Las bandas y abrazaderas se prefieren para aves, son fabricadas en plstico. Los collares y bandas para cuello se prefieren para perro y monos, deben ser cmodos y seguros: las ranas necesitan un tipo especial de identificacin, el cual se lleva a cabo en cuentas de diversos colores y formas que se colocan mediante hilo nylon (Cuadro 1). Dentro de ste grupo de animales, los ratones y las ratas son los ms utilizados en la investigacin y control de calidad biolgica. Estas especies representan el 90% de todos los mamferos utilizados en investigacin cientfica y el nmero utilizado de estas dos especies es casi 14 veces mayor que todas las dems especies usadas en investigacin experimental, en nuestro espacio de trabajo los modelos ms utilizados son: Ratn Balb/C, Rata Long/Evans y Wistar, Conejo Nueva Zelanda y en menor frecuencia el Cerdo York, el perro y gato domestico. Las reas en que se utiliza ms la rata como sujeto experimental son: fisiologa gentica, inmunologa, microbiologa, conducta y todos los aspectos relacionados con enfermedades. Debido a la gran experiencia que se tiene con estos roedores, existen bases de datos que contienen las caractersticas de cada una de las cepas y lneas que existen con base en las necesidades o su uso como modelo para el estudio de enfermedades humanas. Nuestro cuerpo acadmico trabaja 3 lneas: 1.-Relacin husped-parasito de Trichinella spiralis y de cavidad oral, 2.- Estudio del estado nutricional en modelo experimental murino y humano y 3.- Educacin Ambiental. Las 2 primeras son bsicamente en modelo experimentales siendo primordial la participacin de los compaeros Veterinarios en la reproduccin, manejo y el seguimiento del estado de salud de los modelos experimentales. TCNICAS DE SUJECIN Y DE PROCEDIMIENTOS La habilidad para sujetar animales de laboratorio no se adquiere fcilmente. Puede tomar varias horas de prctica en solamente una especie para convertirse en un profesional. Los siguientes puntos pueden ayudar a conseguir este propsito: Buscar informacin acerca de las tcnicas de sujecin de las especies de inters en libros, filmes u otra documentacin. Observar personal con experiencia en el desarrollo del procedimiento.

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Intentar vencer el miedo y la ansiedad, ya que es casi imposible trabajar bajo estas condiciones. Si el sujetador no est tranquilo, tampoco lo estar el animal. Nunca se intente llevar a cabo un procedimiento en un animal hasta que ste se encuentre completamente sujetado y relajado. La sujecin impropia de un animal puede causar heridas a ste o al que lo sujeta. Los animales que han sido sujetados incorrectamente tienden a tener ms miedo del contacto humano. As mismo, el sujetador que ha sido herido por un animal por que no saba cmo sujetar al animal propiamente, probablemente ser ms temeroso del animal la prxima vez que lo intente sujetar, lo que podra aumentar las posibilidades de ser mordido o rasguado de nuevo. Los animales sienten el miedo y son ms difciles de sujetar cuando esto sucede. Tambin, la sujecin impropia del animal podra resultar en el escape del mismo, lo que aumentara an ms las oportunidades de sufrir heridas. Aunque a veces se piensa que el agarrar y sujetar a los animales propiamente se puede aprender leyendo, el nico mtodo satisfactorio es por observacin de personas con experiencia y practicar tcnicas aprobadas para la especie en cuestin. En nuestro equipo de trabajo el Dr. Sergio Saldivar Elas es quien habilita a los compaeros estudiantes y docentes en el manejo de los modelos experimentales, el tiene una experiencia en el bioterio de la Unidad de 25 aos. El sujetador debe de acercarse al animal en una forma confiada y hablarle pausadamente; el tratar de someter a los animales bruscamente solo trae problemas. Una de las cosas que se deben de aprender cuando se sujeten diferentes especies es el observar seales de peligro de ataque por el animal. Nadie debe de correr el riesgo de ser herido, y se deber buscar ayuda tan pronto como se necesite. Los aparatos de sujecin debern de ser usados solo cuando sea necesario, ya que pueden causar dao fsico al animal. Debe de evitarse poner a los animales sobre superficies resbaladizas por la posibilidad de que se atemorizan y se hieran a s mismos. Aunque sea una tentacin el usar frceps o guantes de cuero cuando se trate de sujetar un animal extrao para el sujetador, estos deberan de ser usados solamente cuando haya peligro de ser mordido. Esto es porque el sujetador debe ser muy sensitivo de la fuerza usada para sujetar un animal y es difcil de sentir esta fuerza cuando se usan guantes o frceps, particularmente cuando se sujetan animales pequeos. La mayora de los animales pequeos se tranquilizan rpidamente facilitndose la sujecin cuando sta se hace de una manera firme sin apretar demasiado. Esto les da una sensacin de seguridad. Si un animal
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se siente inseguro, incmodo o atemorizado, es casi seguro que luchar para librarse, lo que usualmente puede causar heridas al animal o al que lo sujeta. Manejo del modelo experimental murino. Ratn. Es acertadamente establecido que uno de los ms infortunados problemas en la sujecin de ratones es que ellos siempre tratan de morder al sujetador. Despus de varias sujeciones, el animal se convierte en un poco ms dcil, pero an as uno no debe de confiarse. Algunas razas son ms temperamentales que otras. Siendo el ratn una de las pocas especies de laboratorio que no se est tranquilo cuando se le sujeta, mucha atencin se debe de tomar con el mtodo, con una de las manos se debe de tomar al ratn por la cola, aproximadamente a una pulgada del comienzo de la misma, colocndolo en una superficie donde el ratn pueda asirse con sus cuatro patas, pero siempre sujetndolo de la cola. La mejor superficie para esta funcin sera la tapa de alambre de una caja de las jaulas. Con esta accin el animal se quedar lo suficientemente tranquilo para que pueda sujetarse de la piel suelta de la nuca con los dedos ndice y pulgar de la otra mano, siendo esta accin rpida y deliberada en un solo movimiento. Se debe de tener cuidado de tomar suficiente de la piel del animal o ste podra voltearse y morder. Una vez sujetado de la nuca, la cola del animal puede sujetarse sobre la palma de la mano con los dedos restantes. Este mtodo es recomendable para inyecciones intraperitoneales (IP) y para intubacin oral. El absoluto control de los movimientos de la rata durante un procedimiento experimental, es importante no solo para el bienestar y seguridad del animal, sino tambin para la seguridad del experimentador. Un animal que se mueve repentina y bruscamente puede ocasionar la inyeccin accidental del operador y producir dao al animal. En la sujecin de animales de laboratorio deben tomarse en cuenta las siguientes sugerencias: METODOS DE INMOVILIZACIN. Ratn: Para su manejo hay que considerar que es un animal muy sensitivo, nervioso y rpido. Para sacarlo de su jaula hay que introducir la mano y tomarlo de la cola o colocar los dedos por debajo de su cuerpo para que suba a la palma de la mano. Posteriormente para sujetarlo, se pone al animal en una superficie rugosa para permitir que se estire con sus patas superiores, se levanta de la cola y se toma la mayor cantidad de piel de la nuca con los dedos ndice y pulgar, sosteniendo la cola con el dedo
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meique, apoyado en la palma de la mano, sujeto de esta manera se le puede aplicar cualquier tipo de administracin (Fotografa 1).

Fotografa 1.- Procedimiento de toma, sujecin y manejo de Ratn Balb/C. Rata. Es un animal dcil y menos nervioso el macho que la hembra, para extraerlo de la jaula, se debe abrir previamente la rejilla, dejar que los animales tomen confianza y posteriormente se realiza una sujecin de todo el cuerpo, con los 5 dedos, en forma gentil (Fotografa 2).

Fotografa 2.- Rata Long/Evans. Tcnica de agarre y sujecin. Una de las tcnicas ms recomendadas para su sujecin consiste en apoyar la nuca del animal en el borde interno del dedo ndice, si se sujeta con la mano derecha, el dedo pulgar pondr el miembro anterior izquierdo del animal frente a su hocico, el miembro anterior izquierdo quedar sujeto
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entre el dedo ndice y medial, de manera que la cabeza quede inmvil (Fotografa.3). La forma de sujecin en las fotografa 2 y 3 es til para el sexado de animales.

Fotografa 3. Tcnica recomendada para la sujecin de la rata y sexado. VIAS DE ADMINISTRACIN PARA RATA Y RATN: Las vas ms frecuentes para estos animales son: intramuscular (IM), intraperitoneal (IP), subcutnea (SC), intravenosa (IV), y esofgica (PO). Intramuscular: Se realiza en los miembros posteriores, previa sujecin del ratn o rata, introduciendo la aguja en forma paralela al fmur. Las agujas de eleccin son la de calibre 25 o 27 (Fotografa 4). Fotografa 4.- Aplicacin intramuscular en ratn Balb/C. Intraperitoneal: Consiste en aplicar por va abdominal el medicamento o inculo, para lo cual la cavidad abdominal se divide imaginariamente en cuatro secciones, aplicndose la inyeccin en cualquiera de las dos regiones posteriores, inclinando al animal hacia el crneo e introduciendo la aguja en un ngulo de 35 aproximadamente para no tocar las vsceras y causar una peritonitis mortal (Fotografa.5). Fotografa 5.- Aplicacin Intraperitoneal en rata Long/Evans. Subcutnea: Se jala la piel del dorso o abdomen del animal y se introduce la aguja para realizar la administracin (Fotografa.6).
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Fotografa 6.- Va de administracin subcutnea en ratn Balb/C. Intravenosa: Se dilatan las venas de la cola (son tres) con xilol o un poco de agua caliente. Se localiza una de estas venas y se introduce la aguja. Para esta va se puede uno auxiliar de contenedores mecnicos, los cuales permiten una buena sujecin y permiten trabajar ampliamente con la cola del animal. Esofgica: Se mantiene al animal en forma vertical, sujetando todo el cuerpo, se pone la sonda en el hocico y con movimientos suaves y firmes se introduce la sonda, viendo el movimiento de deglucin por parte del animal (Se puede comprobar el paso de la sonda al sentirlo con el dedo ndice de la mano que est sujetando al animal). Se le puede administrar el volumen requerido para cada especie, posteriormente, se extrae la sonda con un movimiento firme y suave (Fotografa 7).

Fotografa 7.- Va de administracin esofgica en ratn Balb/C.

CONEJO:
a) MANEJO Y TRANSPORTE: La mejor sujecin se consigue tomndolo con la mano derecha por la piel del dorso, a nivel de la regin lumbar y con la izquierda inmovilizando las patas traseras, que en ningn caso, deben quedar libres por la facilidad de poder herir con ellas a las personas que tratan de sujetarlos (Fotografa.8). Fotografa 8.- Sujecin adecuada del conejo Nueva Zelanda. No es conveniente sujetarlo por las orejas, ya que estn formadas principalmente de cartlago, se pueden provocar fracturas y dejar al animal intil para experimentacin. Para transportar adecuadamente en distancias
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cortas al conejo, es conveniente sujetarlo con una sola mano, abarcando la mayor cantidad de piel inmediatamente atrs de la cabeza y con la otra mano, sostener el peso del animal, otra forma de transportarlo es apoyarlo en la parte del brazo con la cabeza hacia el cuerpo de uno, de forma que se imposibilite la visin del conejo (Fotografa. 9).

Fotografa 9.- Forma adecuada de sujecin del conejo Nueva Zelanda para su traslado a distancias cortas. b) VIAS DE ADMINISTRACION:

Va intravenosa: Una vez que se tiene preparada la jeringa para inyectar, se coloca al conejo en una caja de contencin se toma una de sus orejas y se desinfecta el rea de la vena marginal. Las venas marginales son dos una en cada oreja, se encuentran en la orilla externa de la misma. Va intramuscular Sujecin del inmovilizando su (fotografa 10) conejo cuerpo

Fotografa 10.- Aplicacin Intramuscular en conejo Nueva Zelanda. Va intraperitoneal, semejante a la fotografa 8 pero se retrae el cuerpo para bloquear su visin y este ms tranquilo, siempre hay que tener cuidado con sus extremidades posteriores (fotografa 10).

Fotografa 10.Posicin para aplicacin intraperitoneal en conejo Nueva Zelanda.

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Los modelos que habitualmente trabajos en el laboratorio son el ratn Balb/C y la Rata Long/Evans (Fotografa 11).

Fotografa 11.- A) Ratn Balb/C y Rata Long/Evans. En el manejo de animales de laboratorio es indispensable la experiencia y la habilidad para sujetarlos, el Mdico Veterinario es indispensable, gracias a su apoyo el trabajo de investigacin se facilita y en la docencia a los alumnos permite que estos tengan las herramientas para un adecuado manejo de estos sin miedo y con respeto. Bibliografa. 1. Flor de Mara Fuentes Paredes, Rosa Amelia Mendoza Yanavilca, Arturo Lorenzo Rosales Fernndez, Rosario Alberto Cisneros Tarmeo. 2008. Gua de manejo y cuidado de animales de laboratorio: Ratn. Centro Nacional de Productos Biolgico. Per. Pgs. 1-54. 2. Declaracin de Helsinki de la (Asociacin Mdica Mundial, 1964). 3. Declaracin de Helsinki 2000. Asociacin Mdica Mundial (Edimburgo). 4. Jess Muoz E. Sergio Saldivar E. Gabriela Reveles H. Yersinia Muoz M. El uso de animales en el laboratorio de experimentacin. REDVET Vol VII, No. 2. Pgs. 1-29. http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n020207/010711.pdf 5. Senz Medina, Asuero de lis, Correa Gorospe, Cuevas B, Gmez Dos Santos, Linares Quevedo, Pez Borda, Castilln Vela, Marcn Letosa, Pascual Santos, Burgos Revilla. 2008. Modelos experimentales para la investigacin y el entrenamiento en trasplante renal. Actas urolgicas espaolas. Vol 32(1): Pgs. 83-90.

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