Regulacin II

3. Regulacin posttranscripcional:

modificacin(CAPypoliA)y
Gentica I 2do Cuat 2010

escisindeintrones (splicing) transportealcitoplasma vidamedia miRNA

Recordando: gen procariota vs eucariota

Recordando: gen procariota vs eucariota

adicin de CAP al 5

La adicin del CAP es cotranscripcional

Las enzimas son reclutadas por la ARN Pol II fosforilada en CTD

Funciones del CAP

Diferencia mensajeros ARN Pol II de PolI y PolIII Une al CAP BINDING COMPLEX

fosfatasa Es necesario para el procesamiento correcto Guanil transferasa Es necesario para la exportacin al citoplasma

Metil transferasa Tcnica: Aislamiento de mRNAs completos

Splicing Splicing: Requerimientos en cis

transesterificacin

Splicing
El spliceosoma

Mecanismo de Splicing

Tipos de spliceosomas

Intrones autocatalticos

autocataltico

IVS=intrn (intervening sequence)

Resultadoinesperado!

GenesVIII,B.Lewin
Figure 6-36 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

deCech etal.,1981

Procesamiento del 3: seales necesarias

CPSF CstF

Procesamiento del 3

Cmo se compara este proceso en las bacterias?

Procesamiento de ARN Ribosomales Ensamblado de Ribosomas Eucariotas Procariotas

Procesamiento de ARN Ribosomales eucariotas

RNA Pol I Ncleo, Nucleolo snoRNPs RNAs como guas Pseudouridinas Metilaciones 2-OH

RNA Pol citoplasma

Procesamiento de ARN Ribosomales eucariotas

Procesamiento de ARN Ribosomales bacterianos

Los snoRNAs son la guia para las modificaciones

Transporte de mRNAs al citoplasma

Transporte del mRNA: interaccin con el EJC

Control de calidad del mRNA Para ser transportado y traducido: CAP 3 poliA EJC ltima parada: NMD (nonsense mediated decay)

Regulacin Postranscripcional propiamente dicha

Regulacin del Splicing alternativo

Caso: Determinacin del sexo en Drosophila

Regulacin Positiva y Negativa del Splicing

Determinacin del sexo en Drosophila

Drosophila: macho/hembra depende de una maduracin de tra y hay un gen que codifica para 36.016 protenas distintas

tropomiosina de ratas: 14 formas de la protena troponina T muscular: 64 formas de la protena

Atenuacin de la transcripcin Translational Frameshifting (HIV)

Comn en bacterias, Estructura del ARN causa terminacin prematura de la transcripcin Por ejemplo, el opern Trp. Un mecanismo similar no podra producirse en eucariotas, Por qu? Sin embargo, estructura del RNA puede jugar un rol transcripcional!!!

Ejemplo en Eucariotas: HIV

Sitios de poliadenilacin alternativos Riboswitches Comunes en bacterias. Se ubican al inicio del transcripto. Interaccionan con metabolitos cambiando su conformacin CstF

Cmo se compara la atenuacin de la transcripcin?

Edicin de ARN En mitocondrias de tripanosomas: inserciones de Us, utilizando ARNs pequeos como guas (guide RNA) En mamferos: 1) Edicin de A a I dada por ADARs (Adenosine deaminases acting on RNA). Cambia la permeabilidad de un Canal de calcio que se expresa en el sistema nervioso 2) Edicin de C a U: genera formas distintas de apolipoproteina B Hiptesis Surgi para corregir errores Es una ventaja para producir variantes sutiles Surgi como mecanismo de defensa contra virus y retrotransposones (casos de retrovirus y secuencias Alu) Nada de lo anterior explica lo observado en tripanosomas Edicin de ARN Por qu surgi?

Regulacin del transporte del ncleo al citoplasma

Regulacin de la localizacin citoplasmtica

mRNA de Hairy sintetizado in vitro y marcado con fluorocromos

Embrin de drosophila antes de la celularizacin

mRNA de Hairy completo

mRNA de Hairy sin 3 UTR

Control de la estabilidad del mRNA

Control traduccional

Control por RNAs pequeos

miRNAs
Qumica y estructuralmente similares a los siRNAs Transcriptos a partir de genes de miRNAs Endgenos Regulacin de la expresin gnica DESARROLLO

Identidad y mantenimiento de meristemas

Reguladores - mRNAs

FT

Sealizacin celular y hormonal Regulacin del ciclo celular

La conservacin de los microRNAs en distintas especies es evidencia de que son funcionales

Regulacin post-transcripcional por miRNAs

Algunos fenotipos asociados a la sobreexpresin de miRNAs

preprotena: modificacin de la proinsulina a insulina